厄贝沙坦对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡与细胞外信号调节激酶通路的影响

目的观察厄贝沙坦对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,并探讨其与细胞外信号调节激酶(ERK)通路的关系。方法健康雄性SD大鼠72只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组、厄贝沙坦组、厄贝沙坦+PD-98059组(PD组)。厄贝沙坦灌胃1周后制作大鼠心肌缺血再灌注模型,PD-98059于缺血前15 min尾静脉注射。实验结束后用TTC染色测定心肌梗死面积;免疫组织化学法检测心肌组织BcI-2、Bax表达;Western blot法测定磷酸化ERK的活性;TUNEL检测凋亡细胞指数。结果与假手术组比较,缺血再灌注组、缺血预处理组、厄贝沙坦组、PD组心肌细胞凋亡指数、磷酸化ERK活性及Bcl-2、Bax表达明显增加(P<0.01);与缺血再灌注组比较,缺血预处理组、厄贝沙坦组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数和Bax表达明显降低,磷酸化ERK活性及Bcl-2表达明显增加(P<0.01);与厄贝沙坦组比较,缺血再灌注组、PD组心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数和Bax表达明显增加,磷酸化ERK活性及Bcl-2表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论厄贝沙坦能够激活ERK通路,进一步调控Bcl-2、Bax蛋白的表达,抑制再灌注心肌细胞的凋亡。     

葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞的影响

目的观察葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、葛根素后处理组,每组8只。制备大鼠心肌缺血再灌注模型,假手术组只穿线,不结扎左冠状动脉;缺血再灌注组缺血45 min,后再灌注120 min;葛根素后处理组,结扎左冠状动脉45 min,后再灌注120 min。再灌注前3 min和再灌注后2min内静脉注入葛根素1.25 mg/kg。应用免疫组化SP法观察Bcl-2和Bax蛋白表达率,采用TUNEL法观察各组心肌细胞的凋亡率,并在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果与心肌缺血再灌注组相比,假手术组和葛根素后处理组心肌凋亡细胞数较低(P0.05),Bax表达较低(P0.05),Bcl-2表达较高(P0.05)。结论葛根素后处理可以影响心肌细胞Bcl-2、Bax的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用。     

大鼠急性心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的实验研究

目的:观察心肌缺血再灌注(IR)损伤与心肌细胞凋亡关系及凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达情况。方法:选用健康雄性SD大鼠29只,随机分为:假手术组(n=8),缺血组(n=12),缺血再灌注组(n=9),分别取上述大鼠心肌组织。(1)观察心肌组织及线粒体的形态结构,并进行体视学分析。(2)采用缺口末端标记法(TUNEL)原位检测凋亡细胞。(3)用免疫组化SP法检测心肌细胞Bcl-2、Bax表达。结果:(1)假手术组心肌纤维排列整齐,细胞间质血管未见明显异常,细胞核膜完整,缺血组及缺血再灌注组可见心肌嗜酸性变、空泡变性、心肌纤维紊乱及收缩带形成,心肌纤维间出血及灶性心肌坏死。心肌细胞线粒体体视学分析,与假手术组比较,心肌缺血组形状因子显著降低(P<0.05),面密度显著增加(P<0.05),缺血再灌注组形状因子显著降低(P<0.01),面密度及周密度均显著增加(均P<0.05)。(2)与假手术组比较,缺血组细胞凋亡率明显升高(P<0.001),缺血再灌注组细胞凋亡率明显升高(P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。(3)与假手术组比较,缺血再灌注组凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(P<0.01,P<0.001)。缺血再灌注组与缺血组比较凋亡调控基因Bcl-2、Bax表达明显升高(均P<0.01)。结论:心肌缺血及再灌注在导致细胞形态、线粒体超微结构改变的同时,诱导心肌细胞的凋亡,Bcl-2、Bax蛋白表达在心肌细胞凋亡的发生中起重要作用,细胞凋亡加重了缺血再灌注损伤。     

缺血后适应对大鼠移植心脏心肌细胞凋亡的影响

目的:观察缺血后适应对大鼠移植心脏缺血再灌注时心肌细胞凋亡及对抗凋亡基因Bcl-2(简称Bcl-2)、凋亡基因Bax(简称Bax)蛋白表达的影响。方法:30只Lewis大鼠随机分成3组,每组10只,供体、受体各5只。假手术组:仅行腹部开关手术,不行心脏移植;模型组:行心脏移植术;后适应组:行心脏移植手术,心脏复灌前进行缺血后适应,即再灌注10 s、关闭10 s,循环3次。实验结束后取心肌标本行生物素切口末端标记法(TUNEL)检测,并采用蛋白免疫印迹(Western Blot)方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:假手术组无心肌细胞凋亡,后适应组心肌细胞凋亡指数明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot显示:模型组Bcl-2、Bax蛋白表达水平与假手术组比升高(P<0.05);后适应组Bcl-2蛋白表达水平与模型组相比明显升高(P<0.01),而Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:缺血后适应对大鼠移植心脏缺血再灌注心肌能够上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达,并可减少缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡。     

蛋白酶激活受体-2对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、I／R组和SLIGRL—NH2组,结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120min制作心肌缺血再灌注模型;以缺口末端标记法和免疫组织化学法分别检测心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。发现与假手术组相比,I／R组的AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显增加;与I／R组比较,SLIGRL—NH2组的AI、Bax蛋白表达水平下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高。提示蛋白酶激活受体-2（PAR-2）对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达水平,抑制心肌细胞凋亡有关。     

PRE-084预处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察Sigma-1受体激动剂PRE-084对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将15只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PRE-084组,每组5只。PRE-084组手术前1 h给予1 mg/kg PRE-084,假手术组和缺血再灌注组给予等体积的生理盐水,结扎前降支半小时再灌注24 h。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌凋亡指数,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Sigma-1受体、Bcl-2、Bax mRNA表达情况。结果与缺血再灌注组比较,PRE-084组凋亡指数下降,Sigma-1受体、Bcl-2 mRNA上升,Bax mRNA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论PRE-084预处理可减少大鼠心肌缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡,其机制可能为通过Sigma-1受体增加Bcl-2表达、降低Bax表达。     

他汀类药物对心肌缺血再灌注心肌细胞Bax和Bcl-2表达的调控

目的探讨他汀类药物对心肌缺血再灌注心肌细胞基因Bax和Bcl-2的调控作用。方法选取30只清洁级SD大鼠为研究对象,将该组大鼠用计算机软件编制的随机分配表随机分为三组,假手术组、缺血再灌注组、缺血性再灌注组+阿托伐他汀干预组,每组10只。假手术组每日给予2 ml的0.9%的氯化钠溶液;治疗组每日给予2 ml的0.9%的氯化钠溶液;干预组为缺血性再灌注组+阿托伐他汀干预组每日给予阿托伐他汀。以上大鼠灌胃3d后制作心肌缺血再灌注模型,模型成功后处死。采用免疫组化测定Bcl-2和Bax蛋白的表达、TUNEL法测定心肌细胞凋亡、RTPCR检测Bcl-2和Bax mRNA的表达情况。结果治疗组和干预组大鼠的心肌细胞均呈现不同程度的心肌细胞凋亡现象,AI明显升高,均高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05)。但干预组大鼠的心肌凋亡指数AI低于治疗组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组和干预组的Bcl-2和Bax mRNA的表达以及相关蛋白的表达显著高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05)。但干预组的Bcl-2 mRNA的表达以及相关蛋白的表达显著高于治疗组,Bax mRNA及相关蛋白的表达显著低于治疗组,差异有统计学意义(P0.05)。结论他汀类药物对心肌缺血再灌注的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与上调Bcl-2的水平和下调Bax的水平有关。     

金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用细胞凋亡测试盒(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspsase-3表达的变化。结果模型组细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2及Caspsase-3的蛋白表达显著高于假手术组,金香丹组细胞凋亡指数、Bax及Caspsase-3的蛋白表达均显著低于模型组,Bcl-2的蛋白表达显著高于模型组。结论金香丹可以抑制缺血再灌注心肌细胞的凋亡,其作用可能与上调Bcl-2蛋白的表达同时下调Bax、Casperse-3蛋白的表达有关。     

菟丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察菟丝子黄酮对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min,再灌注2 h建立心肌缺血再灌注模型。将50只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及菟丝子黄酮低、高剂量组和消心痛组。再灌注结束后检测血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶,DNA末端标记法计算凋亡指数,免疫组织化学法和Western Blotting法检测心肌Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值。结果与假手术组比较,缺血再灌注组心肌酶肌酸激酶、乳酸脱氢酶和凋亡指数显著增高(P<0.01),Bcl-2和Bax蛋白表达增强(P<0.01);与缺血再灌注组比较,菟丝子黄酮低、高剂量组及消心痛组能降低血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量和凋亡指数(P<0.01),增加Bcl-2而减少Bax的表达(P<0.01)。结论菟丝子黄酮能够抑制缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡,与消心痛效果相近。     

银杏叶提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨银杏叶提取物(EGB)对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)30 min,再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注模型,分别以缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞Bcl-2、Bax基因的蛋白表达的变化.结果 缺血再灌注(IR)组心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P<0.01),EGB组心肌细胞凋亡明显受到抑制(P<0.01).IR组和EGB组Bax、Bcl-2、P53基因蛋白表达均明显增加(P<0.01);EGB明显促进Bcl-2基因表达,同时抑制Bax、P53基因表达(P<0.01),Bcl-2和Bax的比值也随之升高.结论 EGB可明显下调Bax和P53基因的蛋白表达,上调Bcl-2基因的蛋白表达,从而显著抑制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)后心肌细胞凋亡.     

依达拉奉对大鼠心肌再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨自由基清除剂依达拉奉对大鼠心肌再灌注损伤的保护作用及机制。方法将造模成功的24只Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组(再灌注组)、保护组,每组8只。实验结束后检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛水平;光学显微镜观察心肌形态;采用TUNEL和免疫组织化学法分别检测心肌细胞凋亡及心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果与对照组比较,再灌注组大鼠CK MB、丙二醛水平明显升高,GSH-PX活性明显降低,Bcl-2、Bax、Bax/Bcl-2明显升高(P0.01);与再灌注组比较,保护组大鼠CK-MB、丙二醛水平明显降低,GSH-PX活性明显升高,Bcl-2明显升高,Bax、Bax/Bcl-2明显降低(P0.01)。与保护组比较,再灌注组大鼠可见大面积心肌梗死,凋亡细胞数明显增加(P0.01)。结论依达拉奉能够减轻大鼠心肌损伤程度,其机制与减少自由基损伤、抑制心肌细胞凋亡有关。     

红花注射液对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2和Bax基因的影响

目的探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及红花注射液的干预及机制。方法健康日本大耳白兔84只,随机分为对照组、缺血再灌注1、3、5h组和红花干预1、3、5h组。复制在体肺缺血再灌注损伤模型。采用电镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡情况,并计算凋亡指数;免疫组织化学和原位杂交技术检测各组肺组织Bcl-2和Bax基因表达的变化。结果缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数和Bcl-2、Bax蛋白及mRNA均显著高于对照组(P<0.01)。红花干预组肺组织凋亡指数、Bax蛋白及Bax mRNA低于缺血再灌注组,而Bcl-2蛋白、Bcl-2mRNA以及Bcl-2与Bax的比值较缺血再灌注组上调(P<0.01或P<0.05)。电镜观察发现,缺血再灌注组肺毛细血管内皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构损伤明显,红花干预组损伤明显减轻。肺组织凋亡指数与Bax蛋白、Bax mRNA呈显著正相关(r分别=0.926,0.913;均P<0.01),与Bcl-2/Bax蛋白、Bcl-2/Bax mRNA的比值呈负相关(r分别=-0.367,-0.375;均P<0.01)。结论肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,红花注射液可能通过下调Bax基因的表达,提高Bcl-2/Bax的比值抑制肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

右美托咪定联合远隔缺血预处理对心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究右美托咪定联合远隔缺血预处理对心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）的影响以及探讨其对细胞凋亡的影响 方法 选取80例择期体外循环下行心脏瓣膜术病患，随机分成4组(n = 20)；对照组（C组）, 远隔缺血预处理组（R组），右美托咪定组（D组），右美托咪定联合远隔缺血预处理组(DR组)；R组于麻醉诱导后行上肢缺血预处理，D组将盐酸右美托咪定以1 μg/kg负荷剂量泵注10 min后以0.41 μg/ (kg·h)注入至手术结束，DR组联合应用D组和R组两种方法；测主动脉阻断前（T₀）、体外循环结束时（T₁）和结束手术后（T₂）血浆肌钙蛋白I(cTnI)浓度。检测T₀和T₁ 时Bcl-2和Bax蛋白含量及计数心肌细胞凋亡指数（AI）。 结果 T₁和T₂时，与对照组比较，各组血浆cTnI均降低(P<0.05)。与阻断主动脉前相比，体外循环结束后4组心肌组织Bcl-2、Bax蛋白值含量和AI均升高，Bcl-2/Bax下降（P<0.05）；与C组比较，D组、R组和DR组Bcl-2、Bcl-2/Bax均增高，Bax和AI降低（P<0.05）；与R组、D组比较，DR组Bcl-2、Bcl-2/Bax升高，Bax和AI降低（P<0.05）。 结论 右美托咪定与远隔缺血预处理均能减轻MI/RI，二者联合作用优于单独使用，其机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

丙酮酸乙酯对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对缺血再灌注（I／R）心肌细胞凋亡的可能机制。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、I／R组和EP组各8只，均建立Langendorff离体心脏模型，对照组K-H液持续灌流180min；I／R组平衡灌流30min，全心停灌30min，再灌120min；EP组试验程序与I／R组相同，平衡15min后和再灌注期间使用含2mmol／L EP的K-H液。分别以缺口末端标记法及免疫组化法检测各组心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果 I／R组AI和Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平均明显高于对照组；与I／R组相比，EP组AI和Bax、caspase-3表达水平明显降低，而Bcl-2表达水平明显升高。结论 EP可抑制离体大鼠I／R损伤过程中的心肌细胞凋亡，其机制可能为下调Bax、caspase-3表达，上调Bcl-2表达。     

Study on protecting effects of Baicalin and Octreotide on hepatic injury in rats with severe acute pancreatitis

AIM： To investigate the protective effects and mechanisms of Baicalin and Octreotide on hepatic injury in rats with severe acute pancreatitis （SAP）. METHODS： The SAP rat models were prepared and randomly assigned to the model control group, Baicalin treated group, and Octreotide treated group while other healthy rats were assigned to the shamoperated group. Rat mortality, levels of ALT, AST, liver and pancreas pathological changes in all groups were observed at 3, 6 and 12 h after operation. Tissue microarray （TMA） sections of hepatic tissue were prepared to observe expression levels of Bax, Bcl-2 protein and Caspase-3, and changes of apoptotic indexes.RESULTS： Rat survival at 12 h, expression levels of Bax, Caspase-3 protein and apoptotic indexes of liver were all significantly higher in treated groups than in model control group. While the liver and pancreas pathological scores, contents of ALT, AST, and expression levels of Bcl-2 protein were all lower in treated groups than in the model control group. CONCLUSION： Both Baicalin and Octreotide can protect rats with SAP by decreasing the contents of ALT, AST and expression levels of Bcl-2 protein and improving the expression levels of Bax protein, Caspase-3 protein, and inducing apoptosis.     

细胞穿透肽PEP-1介导人铜,锌-超氧化物歧化酶转导入大鼠离体心脏及其对缺血再灌注损伤的保护作用

目的 采用离体心脏灌注模型,研究细胞穿透肽PEP-1介导入铜,锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD,SOD1)穿透心肌组织能力及其对心脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建的原核表达载体pET15b-SOD1和pET15b-PEP-1-SOD1,分别转化大肠杆菌,表达和纯化SOD1和PEP-1-SOD1融合蛋白.采用Langendorff灌流系统,大鼠离体心脏停灌30 min后复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型.大鼠随机分为对照组,100μmol/L SOD1蛋白预处理组,25、50、100μmol/L PEP-1-SOD1蛋白预处理组.免疫荧光及Western blot检测PEP-1-SOD1的转导效果,超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测转导的目的 蛋白的SOD活性.测定心肌组织丙二醛(MDA)含量和复灌后15 min内冠状动脉流出液肌酸激酶(CK)活性.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,复灌60 min时红四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积.结果 免疫荧光及Western blot检测均显示PEP-1-SOD1以剂量依赖性方式转导入离体灌注的心肌组织内,SOD1蛋白预处理组心肌组织内未见到目的 蛋白.对照组,SOD1组和25、50、100 μmol/L PEP-1-SOD1处理组的SOD活性分别为(10.06±0.77),(10.59±0.71)和(32.29±1.42)、(43.16±1.16)、(55.14±1.59)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.48±0.19),(1.39±0.11)和(1.01±0.14)、(0.73±0.13)、(0.50±0.06)nmol/mg蛋白,CK活性分别为(1.73±0.58),(1.68±0.14)和(1.40±0.28)、(0.97±0.39)、(0.61±0.56)U/mg蛋白,心肌细胞凋亡率(AI)分别为(17.25±0.75)%,(16.63±1.07)%和(11.50±0.57)%、(6.50±0.63)%、(4.13±0.52)%,心肌梗死面积百分比分别为(55.13±2.18)%,(52.13±2.59)%和(33.88±2.06)%、(25.50±2.16)%、(15.38±1.14)%.与对照组和SOD1组比较,PEP-1-SOD13种剂量组的SOD活性、MDA含量、CK活性、心肌细胞凋亡率及心肌梗死面积百分比指标差异均有统计学意义(均P<0.01).说明PEP-1-SOD1蛋白预处理组SOD活性以剂量依赖性方式显著高于SOD1组,MDA含量、CK活性及心肌细胞凋亡率均明显低于SOD1组,心肌梗死面积小于SOD1组.结论 PEP-1肽介导SOD1蛋白能直接以天然活性的形式高效穿透进入离体心肌组织,转导的PEP-1-SOD1融合蛋白对心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用.     

通心络对家兔动脉粥样硬化合并急性心肌梗死的保护作用及其机制

目的研究通心络对家兔实验性动脉粥样硬化合并急性心肌梗死的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法采用高脂饮食建立家兔动脉粥样硬化模型。27只造模成功的家兔随机分成3组,每组9只,分别为安慰剂组（A组）、通心络组（B组）和阳性对照组（c组）。A组予以安慰剂,B组予以通心络0．5g-kg-1d。＋阿司匹林10mg·kg-1·d-1＋阿托伐他汀5mg·kg＋d-1;c组予以阿司匹林10mg·kg-1·d-1＋给药期间普通饮食。各组在常规剂量药物干预1周后以3倍常规剂量的负荷剂量药物干预3h,建立急性心肌梗死模型。急性心肌梗死模型造模成功4h后处死家兔,取心脏标本制作病理切片,观察病理形态学改变。应用免疫组化方法检测缺血心肌组织细胞凋亡相关蛋白Bcl一2、Bax的表达水平;应用TUNEL技术检测心肌细胞凋亡指数。结果与A组比较,B组和c组Bax蛋白的表达水平均显著降低（RO．05）,B组Bax蛋白的表达水平最低,Bcl-2蛋白的表达则反之,B组和c组Bcl-2蛋白的表达水平均显著升高（P〈0．05）,B组Bcl-2蛋白的表达水平最高;与A组比较,B组和c组心肌细胞凋亡指数下降,但B组心肌细胞凋亡水平明显减轻（P〈0．05）。结论通心络可以通过调节凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达,减少缺血心肌组织心肌细胞凋亡,对心肌梗死有保护作用。     

糖尿病大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠缺血/再灌注(I/R)模型心肌细胞凋亡及相关基因的表达。方法采用STZ(45 mg/kg)诱导大鼠糖尿病4周后制备心肌缺血30 min再灌注120 min模型,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测定心肌梗死面积,用TUNEI法检测细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关基因的表达,透射电镜观察心肌组织超微结构的凋亡改变。结果与非糖尿病组相比,糖尿病组大鼠由I/R损伤引起的心肌梗死面积并没有增加,但是细胞凋亡指数增加(17%±3%比26%±3%,P<0.001)、Bcl-2表达降低(11.0%±3.8%比3.8%±2.5%,P<0.001)、Bax表达升高(26%±3%比36%±7%,P<0.001)、超微结构观察心肌凋亡损伤更为严重。结论糖尿病大鼠I/R心肌细胞凋亡增加,这可能与凋亡相关基因Bcl-2表达降低、Bax表达升高有关。     

Alanyl-glutamine dipeptide inhibits hepatic ischemia-reperfusion injury in rats

AIM: To investigate the protective effect and mechanism of alanyl-glutamine dipeptide (Ala-Gln) against hepatic ischemia-reperfusion injury in rats. METHODS: Rats were divided into group C as normal control Group (n=16) and group G as alanyl-glutamine pretreatment (n=16). Rats were intravenously infused with 0.9% saline solution in group C and Ala-Gln -enriched (2% glutamine) 0.9% saline solution in group G via central venous catheter for three days. Then all rats underwent hepatic warm ischemia for 30 min followed by different periods of reperfusion. Changes in biochemical parameters, the content of glutathione (GSH) and the activity of superoxide dismutase (SOD) in liver tissue, Bcl-2 and Bax protein expression and morphological changes of liver tissue were compared between both groups. RESULTS: One hour after reperfusion, the levels of liver enzymes in group G were significantly lower than those in group C (P<0.05). Twenty-four hours after reperfusion, the levels of liver enzymes in both groups were markedly recovered and the levels of liver enzyme in group G were also significantly lower than those in group C (P<0.01). One and 24 h after reperfusion, GSH content in group G was significantly higher than that in group C (P <0.05). There was no statistical difference in activities of SOD between the two groups. One and 24 h after reperfusion, the positive expression rate of Bcl-2 protein was higher in group G than in group C (p<0.05) and the positive expression rate of Bax protein was lower in group G than in group C (P<0.05). Histological and ultrastructural changes of liver tissue were inhibited in group C compared to group G. CONCLUSION: Our results suggest that Ala-Gln pre-treatment provides the rat liver with significant tolerance to warm ischemia-reperfusion injury, which may be mediated partially by enhancing GSH content and regulating the expression of Bcl-2 and Bax proteins in the liver tissue.     

缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞凋亡的影响

目的 观察缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其调控心肌细胞凋亡的机制.方法 构建大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、缺氧/复氧纽(缺氧3h后复氧6h)、缺氧后处理组(缺氧3h后行复氧5min、缺氧5 min,反复3次,再复氧6 h).应用荧光酶标仪测定线粒体活性氧量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Western blot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞线粒体活性氧量较对照组显著升高(P＜0.01).缺氧后处理组心肌细胞线粒体平均荧光强度为30.74±1.88a.u./μg,显著低于缺氧/复氧组(63.17±2.75a.u./μg,P＜0.01),仍高于对照组(14.41±2.15a.u./μg).缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞凋亡率较对照组显著升高(45.86％±3.29％和26.99％±3.35％比5.72％±1.63％,P＜0.01),缺氧后处理组低于缺氧/复氧组(P＜0.01).细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白在缺氧后处理组显著上调,在缺氧/复氧组显著下调;Bax蛋白在缺氧后处理组显著下调,在缺氧/复氧组显著上调.结论 缺氧后处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与线粒体和细胞膜Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关.