海风藤提取物对脑缺血再灌注模型大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位变化的干预作用

目的观察脑缺血再灌注2h后大鼠神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化及海风藤提取物的干预作用。方法应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,流式细胞术分别观察假手术组、模型组、二甲基亚砜组和海风藤组缺血灶周神经细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果与模型组神经细胞凋亡率(72.7%±6.5%)和线粒体膜电位(0.117±0.011)比较,海风藤组神经细胞凋亡率(47.0%±3.8%)明显下降(P<0.01),线粒体膜电位(0.182±0.023)明显升高(P<0.01);而假手术组神经细胞凋亡率(5.8%±1.8%)和线粒体膜电位(0.331±0.016)与模型组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论海风藤可以减轻脑缺血再灌注后早期神经细胞凋亡,并对线粒体膜电位有稳定作用,可以保护缺血脑组织。     

三七总皂苷保护海马区神经元线粒体膜电位的实验研究

目的 研究三七总皂苷对缺血再灌注后海马区神经元线粒体膜电位的保护作用.方法 36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷组,每组12只.建立大鼠脑缺血再灌注模型,荧光染色流式细胞仪检测各组海马区神经元内游离Ca2+浓度和线粒体膜电位的变化.结果 与假手术组比较,模型组海马区神经元内游离Ca2+浓度明显升高,线粒体膜电位明显降低(P＜0.01);与模型组比较,三七总皂苷组海马区神经元内游离Ca2+浓度明显降低(P＜0.01),线粒体膜电位明显升高(P＜0.05).结论 三七总皂苷能抑制缺血再灌注引起的海马区神经元内Ca2+浓度升高,抑制线粒体膜电位下降,保护海马区神经元线粒体功能,这可能是其抗脑缺血再灌注损伤的作用机制之一.     

促红细胞生成素对内毒素所致大鼠肾脏线粒体损伤的保护作用

目的利用建立脂多糖(LPS)大鼠内毒素血症导致肾脏损伤模型观察促红细胞生成素(EPO)防治脂多糖对肾脏造成损害的机制。方法随机选取成年Wistar大鼠30只,采用等组实验法分为空白对照组、脂多糖(LPS)组以及联合(LPS+EPO)组。除空白对照组以外,其余两组分别注射LPS 10 mg/ml,采取尾静脉注射建立肾脏损伤模型,空白对照组给予同等量生理盐水,30 min后,LPS+EPO组给予rh EPO(5 000 U/kg)经尾静脉注射。其余2组大鼠给予生理盐水。在LPS注射后24 h处死大鼠,分离提取肾脏组织线粒体,用Clark氧电极法检测线粒体呼吸功能,线粒体内、外膜试剂盒测定线粒体膜完整性,一氧化氮(NO)试剂盒测定线粒体NO含量,电镜扫描观察线粒体形态变化。结果 LPS组和LPS+EPO组的线粒体外膜完整率、内膜膜电位、呼吸控制率均较空白对照组明显降低(P0.01),LPS+EPO组上述结果均高于LPS组(P0.05);LPS组线粒体NO含量明显高于空白对照组(P0.01),LPS+EPO组低于LPS组(P0.01),电镜扫描见LPS组线粒体结构受损明显,EPO减轻线粒体结构损伤。结论 EPO对内毒素导致的肾脏线粒体损伤有保护作用,可能与EPO抑制NO生成有关。     

氯化钆对重症急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的防护作用及机制

目的 通过观察FasL在肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,探讨氯化钆(GdCl3)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠所致肺损伤的防护机制.方法 将48只成年SD大鼠随机分为三组各16只.对照组不予任何处理.模型组和治疗组逆行性胰胆管注射5%牛磺酸钠建立SAP大鼠模型,治疗组造模后即刻由阴茎背静脉注入2%GdCl3 15 mg/kg.6 h后处死大鼠,经支气管肺泡灌洗液(BALF)获取肺泡AM,检测BALF中TNFα、IL-1β水平及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,肺、胰腺组织行HE染色检查,透射电镜观察和流式细胞仪检测肺泡AM凋亡情况,同时行免疫组化法检测肺泡AM的FasL表达.结果 与对照组、模型组比较,治疗组透射电镜可见肺泡AM典型凋亡形态学特征,肺组织中MPO活性、BALF中TNFα和IL-1β水平均较模型组降低,肺泡AM凋亡率明显增高,FasL阳性表达率亦明显增高(P均<0.05).结论 GdCl3对SAP所致肺损伤具有防护作用,其机制可能通过激活FasL通路诱导SAP大鼠肺泡AM发生凋亡发挥作用.     

去窦弓神经对大鼠神经细胞线粒体Ca~(2+)和膜电位的影响

目的探讨去窦弓神经(SAD)对大鼠神经细胞线粒体Ca2+和膜电位的影响。方法选取SD大鼠50只随机分为对照组,假手术组,SAD30d组、SAD60d组、SAD90d组,采用火焰原子吸收法测线粒体Ca2+浓度,激光共聚焦显微镜检测膜电位。结果假手术组血压与对照组比较差异无统计学意义,SAD组与对照组比较24h舒张压和收缩压波动明显(P0.01);SAD30d组、SAD60d组、SAD90d组与对照组及假手术组比较Ca2+浓度明显升高(P0.01),膜电位明显降低(P0.01);而且SAD组随时间延长Ca2+浓度逐渐升高(P0.01),膜电位逐渐降低(P0.01)。结论去窦弓神经后导致的血压波动,对脑细胞线粒体造成明显损害,且随时间延长日益严重,因此维持血压稳定至关重要。     

sRAGE对缺氧/复氧大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响

目的观察可溶性糖基化终产物受体(sRAGE)对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌细胞线粒体凋亡途径的影响。方法取大鼠心肌细胞培养72 h,以缺氧3 h、复氧2 h复制H/R模型,实验分为4组:对照组、对照+sRAGE组、H/R组、H/R+sRAGE组。以荧光探针JC-1方法检测线粒体膜电位,酯化钙黄绿素和氯化钴共孵育测定线粒体通透性转换孔(mPTP)开放,Western blot方法检测心肌细胞凋亡。结果与对照组比较,H/R组mPTP开放增多,线粒体膜电位去极化程度增加,凋亡率升高(P均<0.05);与H/R组比较,H/R+sRAGE组mPTP开放减少,线粒体膜电位去极化程度减轻,凋亡率下降(P均<0.05)。结论 sRAGE可通过抑制线粒体凋亡途径,拮抗心肌H/R损伤。     

参麦注射液对心肌缺血再灌注损伤大鼠钙调神经磷酸酶活性的影响

目的探讨参麦注射液(SMI)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中钙调神经磷酸酶(CaN)活性变化的影响。方法 30只大鼠随机分为假手术组、模型组和SMI组各10只,检测各组心肌CaN变化,并测定其心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腺苷三磷酸(ATP)、CaN活性。结果与假手术组比较,模型组CaN活性、心肌细胞凋亡率、MDA含量明显升高(P<0.01),SOD含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显下降(P<0.01);与模型组比较,SMI组CaN活性、心肌细胞凋亡率、MDA含量明显下降(P<0.05),SOD含量、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显升高(P<0.05)。结论 SMI能够抑制大鼠心肌细胞CaN活性,对缺血再灌注心肌有一定保护作用。     

西罗莫司经利阿诺定受体2途径诱导血管内皮细胞钙超载

目的观察西罗莫司造成血管内皮钙超载引起细胞损伤并探讨其相关机制。方法在西罗莫司处理和利阿诺定稳定利阿诺定受体通道的情况下,采用MTT法检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞存活率,HE染色观察细胞形态,一氧化氮(NO)检测试剂盒测定培养液NO含量,Ca2+敏感的荧光染料Fluo-3 AM标记胞质Ca2+,分别采用流式细胞仪分析和激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Annexin VFITC/PI染色法检测细胞凋亡率。结果西罗莫司能降低细胞存活率(P0.01)。西罗莫司500 nmol/L刺激24 h后,HE染色发现细胞肿胀,核固缩、核碎裂及胞浆空泡;NO含量降低,细胞内Ca2+含量增高,线粒体膜电位降低,细胞凋亡率增加(P均0.01)。与西罗莫司500 nmol/L组相比,利阿诺定50μmol/L干预组细胞存活率明显增加(P0.01),细胞内Ca2+含量降低(P0.05),细胞培养液NO含量由28.33±4.18μmol/L增至47.03±3.87μmol/L(P0.01),线粒体膜电位水平由0.24±0.03增至0.45±0.04(P0.01),细胞凋亡率由43.3%±2.0%降至30.7%±0.9%(P0.01)。结论西罗莫司可能通过内质网利阿诺定受体途径增加细胞内Ca2+水平,造成钙超载和线粒体损害,继而引起细胞凋亡。     

黄芪多糖和水蛭素联合干预对巨噬细胞脂质积聚的影响及其机制

目的]明确黄芪多糖和水蛭素联合干预对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞内脂质积聚、线粒体膜电位和细胞凋亡相关蛋白的影响。 [方法]采用100 mg/L ox-LDL孵育RAW264.7细胞24 h建立泡沫细胞模型,采用优化浓度的黄芪多糖和水蛭素联合干预,设立对照组、模型组、黄芪多糖组、水蛭素组和二者联合干预组。采用油红O染色和氧化酶法检测ox-LDL诱导的巨噬细胞内胆固醇含量,流式细胞仪检测巨噬细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化,Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达水平。 [结果]与水蛭素组、黄芪多糖组相比,黄芪多糖和水蛭素联合干预组细胞内胆固醇含量降低更明显(P＜0.05)。与模型组相比,黄芪多糖＋水蛭素联合干预组可显著降低ox-LDL诱导的巨噬细胞早期凋亡率和总凋亡率(P＜0.01)、上调巨噬细胞线粒体膜电位(P＜0.01),并显著降低Caspase-3和Bax蛋白表达量,升高Bcl-2蛋白表达量(P＜0.05)。 [结论]黄芪多糖和水蛭素联合干预可降低巨噬细胞内脂质积聚,且优于单独用药干预,两者联合干预可降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡率,其作用机制可能与调控线粒体膜电位和改善促凋亡蛋白Caspase-3、Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

线粒体钙激活钾通道参与远距缺血预处理心肌保护机制研究

目的:研究线粒体钙激活钾通道在大鼠肢体远距缺血预处理(RPC)对缺血再灌注心肌损伤保护中的作用机制。方法:分离大鼠右下肢股动脉,结扎5min,松开复灌5min,共4个循环。取出心脏悬挂于Langen-dorff灌流装置,全心停灌30min,复灌120min。分离心肌细胞线粒体,电镜观察心肌线粒体结构变化;检测不同处理组线粒体膜电位、线粒体内NOS、Mn-SOD、Ca2+含量的变化。结果:与单纯缺血复灌组相比,RPC组和钙激活钾通道开放剂NS1619组心脏复灌后心肌线粒体损伤减轻,内外膜结构较完整;心肌细胞线粒体膜电位增加(P0.01)、Mn-SOD含量增高(P0.01),NOS含量降低(P0.01)、Ca2+含量下降(P0.01);与RPC组相比,RPC与钙激活钾通道开放阻断剂Paxilline联合组各指标有明显差异(P0.01)。结论:心肌线粒体钙激活钾通道可能通过维持线粒体膜电位,减少心肌复灌期线粒体NO生成和Ca2+含量升高,提高线粒体抗氧化能力而在肢体RPC心肌保护发挥作用。     

过量氟对大鼠肝细胞内钙水平和肝细胞凋亡的影响

目的 研究在大鼠过量摄氟后体内对肝细胞中游离钙([Ca~(2+)]i)水平和肝细胞凋亡的影响。方法 应用饮水加入氟化钠进行大鼠染毒实验,采用Fura-2/AM荧光指示剂测定慢性氟中毒大鼠肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度的变化,同时利用流式细胞术测定肝细胞凋亡率。结果 过量氟可刺激肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度增高,常食(高钙饮食)投氟组与常食对照组相比差异显著(P<0.05),偏食低钙投氟组高于低钙对照组,差异显著(P<0.05);肝细胞凋亡率在正常饮食加氟组与对照组相比差异无显著性(P>0.05),低钙饮食加氟组肝细胞凋亡率明显增高,与低钙对照组相比,差异显著(P<0.05);相关分析显示,低钙饮食投氟组肝细胞内[Ca~(2+)]i浓度增高与细胞凋亡率有相关性趋势(r=0.576)。结论(1)过量氟所致的大鼠肝细胞内[Ca~(2+)]i持续增高对肝细胞凋亡有不同程度的影响,可能在氟骨症病理过程中起重要作用;(2)投氟伴随低钙可加重细胞内[Ca~(2+)]i超负荷和细胞凋亡,提示钙营养与氟中毒发病有着重要联系;(3)肝细胞内[Ca~(2+)]i增高与肝细胞凋亡率之间有无相关性有待于进一步研究证实。     

MCU介导的线粒体Ca2+稳态失调参与模拟失重引起的大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡

目的 观察线粒体钙单向转运体（mitochondrial Ca2+ uniporter, MCU）在模拟失重引起大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡中的作用。 方法 采用尾吊大鼠方法建立模拟失重模型,实验大鼠分为对照（Control, CON）组和尾吊（tail suspension, SUS）组。造模成功后,分离脑动脉血管,取病理切片行TUNEL染色及细胞色素C免疫荧光染色检测平滑肌细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白及MCU蛋白表达水平,最后急性分离脑动脉平滑肌细胞,分别采用Rhod-2 AM、mitoSOX染色检测细胞线粒体内Ca2+水平和活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平。 结果 与对照组比较,尾吊组模拟失重大鼠基底动脉平滑肌细胞TUNEL阳性率显著增加（P < 0.05）,细胞色素C入核率显著增加（P < 0.05）,促凋亡蛋白cleaved caspas-9、cleaved caspas-3、Bax表达显著增加（P < 0.05）,抑制凋亡蛋白Bcl-2显著降低（P < 0.05）;同时,MCU蛋白表达水平下调（P < 0.05）;此外,尾吊组大鼠脑动脉平滑肌细胞线粒体内Ca2+浓度下降（P < 0.05）及ROS水平增加（P < 0.05）。 结论 模拟失重引起大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡,同时MCU表达降低,提示MCU可能参与了模拟失重引起的脑动脉平滑肌细胞凋亡这一病理过程。     

脂多糖对大鼠肺泡巨噬细胞分泌一氧化氮和氧化应激的影响

目的探讨细菌内毒素脂多糖（LPS）对SD大鼠肺泡巨噬细胞产生一氧化氮（NO）和氧化应激的影响。方法采用支气管肺泡灌洗和细胞差速贴壁的方法分离大鼠肺泡巨噬细胞（AM）,分别测定AM培养上清液NO含量、一氧化氮合酶（NOS）活性、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果在5,10,20,50mg/LLPS分别干预下,大鼠AM培养上清液NO含量、NOS活性和MDA含量均显著升高,SOD活性显著降低,并且具有浓度依赖性。结论LPS促进大鼠AM分泌NO,并诱导AM脂质过氧化损伤,这可能是内毒素诱发肺部炎症反应不易控制和急性肺损伤的机制之一。     

解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体氧化损伤的影响

目的:观察解毒化瘀方对内毒素血症( endotoxemia,ETM)大鼠肝细胞线粒体氧化损伤的影响.方法:将56只大鼠随机分为正常对照组及内毒素注射后6小时、12小时、24小时组和解毒化瘀方6小时、12小时、24小时组.眼眶取血,检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,同时取肝组织分离线粒体,测定其丙二醛(MDA)的含量及超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.结果:在注射内毒素6小时后,大鼠血清TNF-α水平及线粒体MDA的含量升高,线粒体SOD、GSH-Px活性下降,随着时间的延长,TNF-α水平及MDA的含量进一步升高,SOD、GSH-Px活性明显下降.与对应的内毒素组比较,经解毒化瘀方处理后,TNF-α水平及MDA的含量均降低,SOD、GSH-Px活性均升高.结论:解毒化瘀方对内毒素刺激Kupffer细胞释放TNF-α有抑制作用,同时减少内源性自由基的生成,提高机体的抗氧化损伤能力,具有保护肝细胞的作用.     

Role of mitochondria in cell apoptosis during hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effect of ischemic postconditioning

AIM: To investigate the role of mitochondria in cell apoptosis during hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effect of ischemic postconditioning (IPC). METHODS: A rat model of acute hepatic ischemia-reperfusion was established, 24 healthy male Wistar rats were randomly divided into sham-operated group, ischemia-reperfusion group (IR) and IPC group. IPC was achieved by several brief pre-reperfusions followed by a persistent reperfusion. Concentration of malondialdehyde (MDA) and activity of several antioxidant enzymes in hepatic tissue were measured respectively. Apoptotic cells were detected by TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) and expression of Bcl-2 protein was measured by immunohistochemical techniques. Moreover, mitochondrial ultrastructure and parameters of morphology of the above groups were observed by electron microscope. RESULTS: Compared with IR group, the concentration of MDA and the hepatocellular apoptotic index in IPC group was significantly reduced (P<0.05), while the activity of antioxidant enzymes and OD value of Bcl-2 protein were markedly enhanced (P<0.05). Moreover, the injury of mitochondrial ultrastructure in IPC group was also obviously relieved. CONCLUSION: IPC can depress the synthesis of oxygen free radicals to protect the mitochondrial ultrastructure and increase the expression of Bcl-2 protein that lies across the mitochondrial membrane. Consequently, IPC can reduce hepatocellular apoptosis after reperfusion and has a protective effect on hepatic ischemia-reperfusion injury.     

阿奇霉素对肺间质纤维化大鼠干预作用的研究

目的 探讨阿奇霉素对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的干预作用及机制。方法 雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠４２只,分为３组。博莱霉素模型组：１８只,大鼠气管内一次性注入博莱霉素５ｍｇ／ｋｇ,制成肺间质纤维化模型,阿奇霉素治疗组：１８只,模型制备同博莱霉素模型组,模型制备２小时后,顷胃管注入阿奇霉素８０ｍｇ／ｋｇ,每日１次,每周连续３日。两组动物于１、２和４周处死。对照组：６只,大鼠气管内注入生理盐水０．５ｍｌ,     

小檗碱对2型糖尿病大鼠肺泡和腹腔巨噬细胞氧化低密度脂蛋白及脂蛋白脂酶的影响

目的探讨小檗碱对2型糖尿病大鼠血脂及肺泡和腹腔巨噬细胞氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)表达的影响。方法SD大鼠分4组,正常对照组、高脂组、糖尿病组、小檗碱治疗组,治疗结束后测定各组大鼠血清葡萄糖、胰岛素和血脂含量,并检测肺泡巨噬细胞和腹腔巨噬细胞ox-LDL含量和LPL mRNA的表达水平。结果(1)小檗碱对糖尿病大鼠具有降低血糖、胰岛素水平和调节脂代谢紊乱等作用;(2)经小檗碱治疗后糖尿病大鼠肺泡和腹腔巨噬细胞ox-LDL含量下降,LPL mRNA表达降低。结论推测小檗碱对糖尿病大鼠的治疗作用可能与提高胰岛素敏感性,降低巨噬细胞ox-LDL、LPL表达有关。     

慢性阻塞性肺疾病肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡的实验研究

目的 研究COPD患者及烟雾暴露COPD大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡的相互关系及其与肺功能和肺气肿的相关性.方法 采用烟雾暴露法建立COPD大鼠模型.分别采集COPD患者(13例)和对照患者(12例)及烟雾暴露80 d大鼠(11只)和对照大鼠(12只)的肺组织标本,用HE染色评估肺部病理改变,用平均内衬间隔(MLI)与平均肺泡数(MAN)评估大鼠肺气肿程度;用原位末端标记法对肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡进行定量检测,分析这两种细胞凋亡的相关性,及其与肺功能和肺气肿指标的相关性.正态分布的计量资料以x±s表示,采用两独立样本的t检验进行分析;非正态分布的计量资料以中位数(四分位间距)表示,采用两个独立样本比较的Wilcoxon秩和检验;采用Spearman秩相关进行相关分析.结果 COPD患者和大鼠均出现明显肺气肿病理改变.COPD患者肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡指数[(13.2±2.6)%和(28.9±3.1)%]明显高于对照患者[(5.6±1.5)%和(5.8±1.2)%].COPD患者肺泡上皮细胞凋亡指数[(28.9±3.1)%]明显高于肺血管内皮细胞凋亡指数[(13.2±2.6)%],二者间呈正相关(r=0.60,P<0.05);COPD患者肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞的凋亡指数与FEV.占预计值%呈负相关(r值分别为-0.83和-0.69,均P<0.05),与FEV1/FVC呈负相关(r值分别为-0.95和-0.71,均P<0.05),与残气容积/肺总量呈正相关(r值分别为0.93和0.70,均P<0.05).COPD大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡指数[(4.1±0.4)%和(10.0±1.0)%]明显高于对照大鼠[(0.2±0.1)%和(2.1±0.4)%],COPD大鼠肺组织MLI与肺泡上皮细胞凋亡指数呈正相关(r=0.59,P<0.05),MAN与肺泡上皮细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.81,P<0.05).结论 COPD患者和大鼠肺内存在异常的细胞凋亡现象,其肺泡上皮细胞凋亡较肺血管内皮细胞凋亡更为明显,且二者呈正相关;COPD患者和大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞的凋亡与其肺功能及肺气肿的改变明显相关,推测肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡可能参与COPD的发病过程.