原位杂交检测同源框基因HoxAll在人月经周期子宫内膜的表达

了解HoxAll基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化，探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的RNA探针进行原位杂交。HoxAll基因主要在内膜间质细胞中表达，增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中HoxAll基因的表达量虽较间质细胞少，但有明显的周期性变化，以增生殖期腺上皮细胞表达量较高，分泌早期开始下降，到分泌中晚期表达量极低或不表达。HoxAll基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体(PR)非常相似，提示HoxAll基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系，HoxAll在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。     

MMP-26和TIMP-4在人正常月经周期中的表达

目的:观测MMP-26、TIMP-4和ER-α在正常月经周期不同时相子宫内膜组织中的表达及其调节机制。方法:正常子宫内膜组织(n=76)按月经周期时相分为增生早期、增生中期、增生晚期、分泌早期、分泌中期、分泌晚期和月经期。所有标本应用免疫组化和RT-PCR检测MMP-26、TIMP-4和ER-α。结果:MMP-26和TIMP-4蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮细胞。增生晚期和分泌早期子宫内膜MMP-26表达高于增生早、中期和分泌中、晚期及月经期子宫内膜。TIMP-4与MMP-26同步表达,月经周期中TIMP-4在增生晚期和分泌早期表达最强。MMP-26mRNA/TIMP-4mRNA表达于增生期开始增强,分泌早期达到高峰,而后下降,至月经期达到最低点。MMP-26启动区-130~-116位点和TIMP-4启动区-930~-916位点间序列与ERE高度同源。结论:人类子宫内膜腺上皮中存在MMP-26和TIMP-4蛋白表达,并呈周期性变化,其表达与子宫内膜功能相关。MMP-26和TIMP-4启动区相关区段与ERE同源,提示ER-α参与MMP-26和TIMP-4基因调节。     

人子宫内膜组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因和蛋白的表达

目的:探讨人子宫内膜组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)的表达。方法:30例人子宫内膜组织石蜡标本,分为增生早期组(n=7),增生中-晚期组(n=8),分泌早期组(n=6)和分泌中-晚期组(n=9),应用免疫组织化学方法检测子宫内膜HIF-1α蛋白的表达。15例子宫内膜组织,分为增生期组(n=7)和分泌期组(n=8),采用逆转录聚合酶链反应法和Western blot-ting法检测HIF-1α基因和蛋白的表达及其变化。结果:子宫内膜上皮(包括腺上皮与腔上皮)细胞和间质细胞的胞质可见HIF-1α蛋白表达。在月经周期中,增生中-晚期组HIF-1α蛋白表达水平最高,分泌中-晚期组的表达水平最低(P<0.05);但增生早期组与增生中-晚期组的比较、分泌早期组与分泌中-晚期组比较,HIF-1α蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05)。增生期上皮组织中HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著高于分泌期(P<0.01;P<0.05)。结论:人子宫内膜HIF-1αmRNA和蛋白在增生期的表达较高,其表达水平升高可能与子宫内膜的修复再生有关。     

原位杂交检测同源框基因HoxA11在人月经周期子宫内膜的表达

了解 Hox A1 1基因在人月经周期子宫内膜的表达及变化 ,探索该基因对正常内膜周期的调节功能。应用地高辛标记的 RNA探针进行原位杂交。 Hox A1 1基因主要在内膜间质细胞中表达 ,增殖期与分泌期比较未见明显差异。腺上皮细胞中 Hox A1 1基因的表达量虽较间质细胞少 ,但有明显的周期性变化 ,以增生殖期腺上皮细胞表达量较高 ,分泌早期开始下降 ,到分泌中晚期表达量极低或不表达。Hox A1 1基因在月经周期人子宫内膜中的这种表达时空的变化与孕酮受体 (PR)非常相似 ,提示 Hox A1 1基因的表达与卵巢激素及其受体的调控有着密切的关系 ,Hox A1 1在分泌中期内膜腺上皮中表达下降是内膜分化的重要指标志。     

月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达的差异

目的:探讨HOXA11在月经周期人子宫内膜腺上皮和基质细胞中的表达规律及其生理意义。方法:免疫组织化学方法观察38例子宫内膜腺上皮和基质细胞HOXA11蛋白质的表达;用细胞分离筛选法,分离出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,采用半定量RT-PCR和Dot-blot方法分别观察HOXA11在腺上皮和基质细胞中的表达。结果:腺上皮细胞HOXA11在分泌中晚期表达量较增生期和分泌早期显著降低;基质细胞HOXA11的表达从增生期到分泌期逐渐增加,以分泌中晚期表达量最高。结论:内膜腺上皮和基质细胞HOXA11表达在分泌中晚期变化最显著,而且其表达量呈反相变化,即腺上皮表达量下降,基质细胞表达量增加。提示HOXA11基因与着床期子宫内膜的分化、成熟密切相关;其对内膜腺上皮和基质细胞的调控机制可能不尽相同。     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

HOXA-11基因与不孕及妊娠失败关系的研究

目的 :研究HOXA 11基因与不孕及妊娠失败的关系。方法 :选择 4 1例不明原因不孕症患者及 30例难免流产患者 ,同时选择 2 8例正常未孕者及 18例正常早期妊娠者分别作为对照组 ,留取子宫内膜或蜕膜组织。子宫内膜标本通过组织学检查分为增生期或分泌期。难免流产及正常妊娠组均妊娠 6～ 9周。采用原位杂交方法检测所有子宫内膜或蜕膜组织中的HOXA 11基因mRNA的表达。结果 :整个月经周期子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞中均有HOXA 11基因mRNA表达 ,并因月经周期不同而有所波动。HOXA 11基因mRNA在分泌中晚期子宫内膜间质细胞中阳性表达率为 10 0 % ,在增生期子宫内膜间质细胞中的阳性表达率为 6 3.6 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在不明原因不孕症患者中HOXA 11基因失去了它在正常子宫内膜表达的周期性变化 ,而且基因表达缺失明显。HOX A 11基因在正常增生期及分泌期子宫内膜腺上皮细胞或间质细胞中的阳性表达率分别为90 .9%、82 .4 %和 6 3.6 %、10 0 % ,在不孕症增生期及分泌期子宫内膜两种细胞的阳性表达率分别为 38.9%、4 7.8%和 2 2 .2 %、39.1% ,两组分别比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;HOXA 11基因在正常早期妊娠蜕膜细胞中持续表达 ,其阳性表达率均为 10 0 % ,在难免流产蜕膜细胞中的阳性表达     

TGFβI及其受体在子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及意义

目的　探讨转化生长因子 β1 (transforminggrowthfactorβ1 ,TGFβ1 )及受体Ⅰ、Ⅱ型 (TβRⅠ、TβRⅡ )在子宫内膜及早孕 (孕 3个月以内 )蜕膜组织的表达规律 ,了解其对子宫内膜生物学作用。 方法　应用免疫组织化学法 (SP法 )检测 2 5例增生期、 2 9例分泌期子宫内膜及 1 2例早孕蜕膜中TGFβ1及其受体的蛋白表达。结果　TGFβ1、TβRⅠ、TβRⅡ在早、中增生期腺体及间质细胞大多无表达或弱阳性 ,晚增生期三者染色强度明显增加 ,与早、中增生期相比 ,在腺上皮细胞染色有统计学意义 (P <0 0 1 )。TGFβ1及受体在中分泌期腺体和间质细胞表达丰富 ,与早分泌期比较TGFβ1均有统计学意义 (P <0 0 1 ) ,TβRⅠ、TβRⅡ仅在腺上皮细胞有统计学意义。晚分泌期三者表达强度较中分泌期相比下降 ,无统计学意义。三者在早孕蜕蟆腺体及蜕膜细胞均有强染色。结论　TGFβ1调节子宫内膜生长、分化 ,可能参与胚胎的着床过程 ,同时调节胚胎生长、发育。     

AgNOR用于区别增生期与分泌期宫内膜的价值探讨

应用ＡｇＮＯＲ技术探讨正常子宫内膜增生期和分泌期中ＡｇＮＯＲ的分布及其用于区别增生期和分泌期宫内膜的可能性。方法：选择末次月经日期记载清楚的各期宫内膜标本共１２０例进行ＡｇＮＯＲ染色、计数。结果：在子宫内膜功能层腺上皮细胞的ＡｇＮＯＲ均数在增生晚期表达最高,增生期（３．５２±０．２４）与分泌期（１．４１±０．２８）相比差异具有极显著性（Ｐ＜０．００１）;间质细胞ＡｇＮＯＲ均数表现出两个高峰,一个为增生中期,一个为分泌晚期。结论：ＡｇＮＯＲ是判断子宫内膜分期的良好标志物。根据功能层腺上皮细胞和间质细胞ＡｇＮＯＲ计数,可以作为判断子宫内膜分期的重要指标。     

人子宫内膜LewisY寡糖抗原的表达和调控

目的 :探讨雌、孕激素对月经周期中 Ley寡糖抗原表达的影响。方法 :取 32例子宫肌瘤术后患者的内膜 ,经病理检测 ,分为四组 :增生期、分泌期、分泌期服用米非司酮 ( Mifepristone)及增生期服用妇康片 (炔诺酮 ) ,每组 8例 ,每例均重复实验。应用免疫组化及 Westhern免疫印迹法 ,观察了Ley寡糖抗原的表达。结果 :( 1 )各组样品的 Ley寡糖抗原均分布于宫腔上皮细胞和腺腔上皮细胞表面 ;( 2 )每组样品中 Ley糖蛋白均有四种分子量 :68k D、60 k D、5 2 k D、2 7k D表达 ;( 3)两种分析方法结果均显示 :Ley糖蛋白在分泌期高表达 ,增生期低表达 ,两组间差异显著 ( P<0 .0 0 1 ) ;分泌期服用孕激素拮抗剂米非司酮则表达明显减少 ( P<0 .0 0 1 ) ;增生期服用妇康片 (主要含孕激素 )的表达较增生期明显增多 ( P<0 .0 0 1 ) ,其中以 68k D组分的变化最为显著。结论 :人子宫内膜 Ley寡糖抗原的表达受孕激素上调 ,其中以 68k D组分对孕激素最敏感     

月经周期中子宫内膜内皮素及其受体的研究

评价内皮素在内膜生殖生理中的作用,方法利用免疫组织化学和分子原位杂交交结合计算机辅助图象分析技术,检测２３例因良性疾病而行子宫切除术的子宫内膜ＥＴ肽、ＥＴ受体及其两种亚型（ＥＴａＲ、ＥＴｂＲ）的ｍＲＮＡ表达定位、周期性变化。结果在整个月经周期中子宫内膜ＥＴ肽和ＥＴｍＲＮＡ表达有明显的周期性变化,分泌期表达强于增殖期,分泌晚期腺上皮表达最高。基质表达弱于腺上皮,并无明显的周期性变化。ＥＴａＲ和ＥＴｂ     

TWEAK在子宫内膜异位症在位和异位内膜上的表达

目的:探讨肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)在子宫内膜异位症(EMs)发病的关系。方法:采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)和免疫组化、Western Blot方法检测EMs患者在位内膜、异位病灶中TWEAK mRNA和蛋白的表达,并与正常对照子宫内膜比较。结果:TWEAK蛋白表达于子宫内膜的腺上皮细胞和间质细胞的胞浆内。与正常对照组内膜和在位组内膜相比,TWEAK mRNA和蛋白在异位内膜上表达量下调(P<0.05),且无论是EMs在位内膜还是对照组内膜,其增生期TWEAK mRNA表达明显低于分泌期(P<0.05)。结论:TWEAK在子宫内膜中表达,表达量在分泌期明显升高。EMs患者异位子宫内膜TWEAK表达降低,可能导致子宫内膜细胞的凋亡水平下降,参与EMs的发生发展过程。     

The expression of fractalkine in the endometrium during the menstrual cycle.

OBJECTIVE: The objective of the study was to evaluate the presence of fractalkine in the endometrium of the uterus and the change of fractalkine protein levels during menstrual cycle. METHODS: Twelve samples of endometrium of the uterus were obtained from gynecological patients who underwent total hysterectomy. Western blotting, RT-PCR and immunohistochemistry were performed. RESULTS: Fractalkine protein was detected in the endometrium of the uterus. Positive staining was confirmed in the epithelial cells and grandular cells in the endometrium. Expression levels of fractalkine protein and mRNA in the endometrium during secretory phase were significantly higher than those during proliferative phase. Immunohistochemical analysis using an anti-CX3CR1 antibody demonstrated positive staining in the glandular cells of the endometrium of the uterus. CONCLUSION: Fractalkine was expressed in the endometrium and its production was up-regulated during secretory phase.     

The role of c-jun protein in proliferation and apoptosis of the endometrium throughout the menstrual cycle

Proliferation and apoptosis of the endometrium throughout the menstrual cycle were evaluated. Sections from 30 premenopausal women were examined using antibodies of c-jun protein, c-fos protein, estrogen receptors alpha and beta (ER-alpha and ER-beta), progesterone receptor (PR), and Ki-67. Apoptotic cells were identified using a modified terminal deoxynucleotidyl-transferase-mediated biotinylated deoxyuridine triphosphate nick-end labeling (TUNEL) method. The cyclic changes of c-jun protein, c-fos protein, ER-alpha, PR, and Ki-67 were shown in glandular epithelial cells. Although the stromal expression of ER-alpha decreased during the secretory phase, a high stromal expression of c-jun protein and PR was still observed during the late secretory phase. The expression of ER-beta appeared lower as compared with that of ER-alpha, without a cyclic change. The apoptotic index was significantly elevated in the glandular epithelial cells of the late secretory phase, whereas a few apoptotic cells were detected in the stromal cells at any stage of the cycle. The cyclic change of c-jun protein probably plays an important role in proliferation and apoptosis of glandular epithelial cells. The persistent stromal expression of c-jun protein and PR is thus considered to prevent stromal cells from entering into apoptosis during the late secretory phase.     

正常人子宫内膜Fas、FasL协同表达与细胞凋亡相关性的研究

目的 :探讨正常人月经周期子宫内膜细胞凋亡及其与Fas基因家族的关系。方法 :应用TUNEL法检测细胞凋亡的时空分布 ,用原位杂交和免疫组化法检测Fas、FasL的表达。结果 :( 1)月经增殖晚期内膜无明显凋亡发生 ,Fas、FasLmRNA及蛋白的表达量极低 ;( 2 )月经分泌晚期内膜凋亡细胞比率高 ,Fas、FasLmRNA及蛋白的表达显著提高。结论 :Fas、FasL在人子宫内膜协同表达 ,且与子宫内膜凋亡的周期性变化一致 ,子宫内膜凋亡与Fas、FasL的高表达相关。内膜脱落、月经来潮可能是通过细胞凋亡实现的。     

HOXA10基因在子宫内膜组织中的表达及与不孕的关系

目的　探讨HOXA10基因在正常育龄妇女及不明原因不孕患者子宫内膜中的表达 ,在着床过程中的作用及与不孕的关系。方法　采用原位杂交和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 2例正常育龄妇女及 38例不明原因不孕患者子宫内膜组织中HOXA10基因mRNA的表达。其中 ,正常育龄妇女子宫内膜周期为 10例增殖早期、10例增殖晚期、9例分泌早期、16例分泌中期、7例分泌晚期 ,不明原因不孕患者子宫内膜周期为增殖早期 7例、增殖晚期 8例、分泌早期 6例、分泌中期 11例、分泌晚期 6例。结果　 (1)HOXA10基因mRNA在正常育龄妇女子宫内膜腺体及间质中均有表达。原位杂交法检测 (以显色区灰度阳性单位表示 )显示 ,分泌中期腺体为 5 6 9± 0 5 7、间质为 7 48± 0 6 7,分泌晚期腺体为 5 99± 0 40、间质为 7 98± 1 0 8,显著高于增殖早期 (腺体 3 0 4± 0 30 ,间质3 2 5± 0 31)、晚期 (腺体 3 35± 0 2 0 ,间质 3 2 0± 0 37)和分泌早期 (腺体 3 0 7± 0 2 6 ,间质 3 18± 0 2 7)(P <0 0 1) ;分泌中、晚期间质表达高于腺体 (P <0 0 1)。RT PCR法检测显示 ,HOXA10基因mRNA表达 ,分泌中期为 (5 7 0± 3 4) %、晚期为 (5 6 2± 2 9) % ,显著高于增殖早期的 (31 8± 2 6 ) %、晚期的(32 2± 2 3) %和