建立分泌抗猪精液抑制素杂交瘤细胞株及其McAb的研究

用猪精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗猪精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｄ、５Ｄ和６Ｇ，其分泌的抗体均为ＩｇＧ１型，不与大鼠ＬＨ、ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应。杂交瘤细胞染色体平均为８５～１００条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定分泌特异性抗体。     

建立分泌抗人精液抑制素杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的研究

用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ—１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。其分泌抗元体均为ＩｇＧ１型，均不与大鼠ＬＨ，ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８６～１０３条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定的分泌特异性抗体。     

建立分泌抗人精液抑制素杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的研究

用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ－１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。     

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检查中。     

人抑制素α亚基单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗人抑制素α亚基３７ － ６５ 片段单克隆抗体（ 单抗） 细胞株,并对单抗进行免疫学鉴定。方法：以猪卵泡液粗提物为免疫原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取其脾细胞与ＮＳ１ 小鼠骨髓瘤细胞融合。杂交瘤细胞用人工合成的人抑制素α亚基３７ －６５ 片段包被,间接ＥＬＩＳＡ法筛选。结果：获得稳定分泌抗人抑制素α亚基３７ － ６５ 片段单抗细胞３ 株,ＥＬＩＳＡ 检测腹水效价为１×１０－ ５～１×１０ －３ ,与α亚基１ －３２ 及其他多肽激素无交叉反应,３ 株识别同一抗原位点。相对亲和力为ⅠＡ５ ＞ Ⅳ３Ｃ＞ Ⅴ５Ｇ。腹水中的抗体能明显地被人卵泡液和猪卵泡液和α（３７ － ６４）中和。结论：３ 株细胞有特异性、敏感性和实用性。抗体可用于人的正常组织及部分肿瘤组织免疫组化研究     

抗HSV—1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７￣１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３，腹水抗体效价在１０＾－５￣１０＾－７之间免疫沉淀。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３     

分泌抗——HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬＩＳＡ效价的分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染     

分泌抗—HBe单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＨＢｅＡｇ阳性血清纯化ＨＢｅＡｇ，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，反复克隆化培养，最终获得４株分泌抗－ＨＢｅ单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中两株进行了鉴定。其细胞培养上清中的ＥＬ／ＩＳＡ效价分别为１：８００和１：５００，诱生同属小鼠腹水中的ＥＬＩＳＡ效价均为１：１０００，特异性试验表明，两株杂交瘤分泌的抗体为特异性抗体，小鼠Ｉｇ亚类鉴定，两株抗体均为ＩｇＧ１亚类球蛋白。细胞染色体数为９５～１１０条。结果证明，此细胞株为特异性分泌抗—Ｈｋｅ单克隆抗体细胞株。     

一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株,其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４）,并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价,分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆,传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。     

抗人粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术，用重组人Ｇ－ＣＳＦ（ｒｈＧ－ＣＳＦ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，然后将其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地获得了多种能够分泌抗ｒｈＧ－ＣＳＦ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交癌细胞。对其中的２株杂交瘤细胞２Ａ６和２Ｃ２分泌ＭｃＡｂ的研究表明，它们能够特异性地和ｒｈＧ－ＣＳＦ结合，而与重组的人ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－ＣＳＦ、ＩＬ－２、ＩＬ－２α和ＴＮＦ细胞因子无交叉反应，为抗Ｇ－ＣＳＦ特异性ＭｃＡｂ。这些杂交瘤细胞经反复冻存和复苏后，仍能稳定地分泌ＭｃＡｂ。     

分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾脏与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞在ＰＥＧ作用下融合，经３次克隆化后获得五株抗人ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞，用被动血凝法和ＥＬＩＳＡ检测培养上清滴度为２￣４，用琼脂双扩散法证明此单克隆抗体只与人ＩｇＧ发生反应，产生透明沉淀线。经ＩｇＧ亚类血清鉴定，其单克隆抗体均属ＩｇＧ－Ｇ１亚类抗体。五株杂交瘤细胞在液氮保存数月，经反复复苏培养，不改变其分泌抗体的性能。     

抗HSV－1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７～１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＬｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ｇ）、ＩｇＧ＿３，腹水抗体效价在１０￣（－５）～１０￣（－７）之间免疫沉淀。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３株与１２０～１２８Ｋ多肽，２株与６０Ｋ多肽发生特异性反应，具有ＨＳＶ型共同抗原特异性。７株ＭｃＡｂ与ＣＭＶ均不发生特异反应。这些杂交瘤细胞系的建立对于ＨＳＶ的临床早期、快速诊断有重要的应用价值。     

卵巢癌抗独特型单克隆抗体的制备与检测

用卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９作为免疫原，经过同系动物免疫和单克隆抗体技术制备出两株分泌抗ＣＯＣ１６６－９Ｉｄ抗体的杂交瘤细胞，分别命名为６Ｂ１１和１Ｈ１２。用卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９进行ＥＬＩＳＡ双抗夹心法检测，二者均呈阳性反应。体外竞争抑制实验证明，６Ｂ１１和１Ｈ１２均能有效抑制卵巢癌抗原体的特异性结合。６Ｂ１１和１Ｈ１２杂交瘤细胞染色体计数和ＤＮＡ含量分析均符合杂交瘤细胞特点。这一研究对开辟     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

卵巢癌抗独特型单克隆抗体的制备与检测

用卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９作为免疫原，经过同系动物免疫和单克隆抗体技术制备出两株分泌抗ＣＯＣ１６６－９Ｉｄ抗体的杂交瘤细胞，分别命名为６Ｂ１１和１Ｈ１２。用卵巢癌单抗ＣＯＣ１６６－９进行ＥＬＩＳＡ双抗夹心法检测，二者均呈阳性反应。体外竞争抑制实验证明，６Ｂ１１和１Ｈ１２均能有效抑制卵巢癌抗原抗体的特异性结合。６Ｂ１１和１Ｈ１２杂交瘤细胞染色体计数和ＤＮＡ含量分析均符合杂交瘤细胞特点。这一研究对开辟卵巢癌防治的新途径有重要意义。     

脂蛋白脂肪酶单克隆抗体的制备及特征分析

用牛奶纯化的脂蛋白脂肪酶（ＬＰＬ）一分子量为５６ＫＤ，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠利用杂交瘤技术，建立了３０余株分泌抗朱ＬＰＬ单克隆抗体的杂交瘤细胞，对其中２Ｅ５，２Ｇ１０，６Ｄ７，８Ｄ２，７Ｆ４进行特征分析表明：（１）其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ１，ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ２ｈ，ＩｇＧ１，ＩｇＧ１；（２）抗体效价（细胞培养上清）５×１０＾－２－２×１０＾－３；（３）５种单抗可认为识别三个不同的抗原表     

抗血管内皮细胞生长因子受体单抗的制备及鉴定

目的：制备血管内皮细胞生长因子受体（ｋｉｎａｓｅｉｎｓｅｒｔｄｏｍａｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＫＤＲ）的单克隆抗体并鉴定其特异性。方法：在大肠杆菌中表达重组ＫＤＲ融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞，用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ＥＬＩＳＡ双筛和ＳＰ免疫组化筛选并鉴定其亚类。结果：经ＥＬＩＳＡ双筛和组化筛选获得了一株能稳定分泌人ＫＤＲ单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为ＳＳＷ２），其分泌抗体亚类为ＩｇＧ１，产生的腹水效价可达１×１０－６。结论：ＳＳＷ２同血管内皮细胞尤其是肿瘤组织的血管内皮细胞有较强的阳性反应。     

人胰磷脂酶A2纯化及单克隆抗体的制备

为建立磷脂酶Ａ２免疫检测法，纯化ＰＩ２Ａ２，将胰组织匀浆加热、离心去除沉积，上清过ＣＭ－ｓｅｐｈａｄｅｘＣ－２５ｓｙｇｇ，ｎｈ ｗｙｓ ｅ ＰＬＡ２的部分，纯化ＰＬＡ２样品经ＳＤＳ－ＦＡＤＥ电 一条区带。纯分的ＰＬＡ２作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，抗体产生后与骨髓瘤细胞融合，在ＰＧＥ－４０００促融下，融合为杂交瘤细胞株经ＥＬＩＳＡ法鉴定筛选出分泌抗ＰＬＡ２的细胞株，扩大培养后将杂交瘤细胞注射小鼠腹     

甲状腺球蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与经人甲状腺球蛋白免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞进行融合，融合率９０．３％，抗体阳性率３．１％，经３～４次克隆化，筛出４株稳定分泌甲状腺球蛋白（ＴＧ）ＭｃＡｂ的细胞株，用放射免疫分析方法（ＲＩＡ）检测小鼠腹水，抗体效价在１０－４时，抗体结合率为４３．２％。用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法检测小鼠腹水，抗体效价达１０－５。琼脂糖免疫双扩试验，均显示为ＩｇＧ１亚型。染色体计数证明为杂交瘤细胞。