大鼠自发性高血压致病相关基因的初步筛选

目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)肠系膜动脉和肾脏组织中基因表达的差异.方法:提取成年SHR和WKY的二级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用高通量RNA阵列技术(RNA array)检测SHR和WKY二级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,再用RT-PCR证实部分基因表达的改变.结果:芯片筛选出38条基因,其中上调基因19条,下调基因19条.经RT-PCR验证胰岛素样生长因子结合蛋白5和原肌凝蛋白6基因上调,锌指蛋白10和硬脂酰辅酶去饱和酶1基因下调.结论:筛选出的差异基因可能是高血压的相关基因,深入研究筛选出的相关基因及其功能,将为进一步探讨高血压病相关的致病基因打下良好的基础.     

新的高血压相关基因-SLC7A8的实验研究

目的采用SHR和WKY为动物模型用基因芯片技术对比SHR和WKY的肠系膜二级动脉和肾脏中基因表达谱的改变,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和定量RT-PCR证实,筛选出的基因为高血压的发病机制提供新的理论依据。方法提取13周龄SHR和WKY的二级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10 000个基因大鼠表达谱芯片检测两组二级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用逆转录-聚合酶链式反应和定量逆转录-聚合酶链式反应方法排除假阳性候选基因。结果芯片发现19个基因在SHR中上调,其中涉及分子伴侣、转运体、生长因子、细胞信号转导的蛋白和核转录因子、脂蛋白等基因。SLC7A8基因的表达水平在SHR组中比WKY组上调9．3倍。SLC7A8(solute carrier family 7,member 8)基因编码的蛋白为2型左旋氨基酸转运体(type 2 L-type amino acid transporter, LAT2),LATl和LAT2均属于SLC7家族。是氨基酸转运体的构成轻链部分。SLC7A8表达在肾、肠、视网膜上皮和牙蕾。近20年来发现多巴胺及其受体和影响其信号传导均和高血压密切相关。肾近端小管缺乏参与多巴胺合成的酪氨酸羟化酶,但能通过重吸收循环滤过的左旋多巴通过芳香族氨基酸脱羧而合成多巴胺。钠离子依赖和PH敏感的LAT2参与左旋多巴的转运。SHR肾小管上皮细胞通过LAT2使左旋多巴重吸收增加,这是肾脏合成多巴胺的关键步骤。在WKY和SHR的肾近球小管上皮中左旋多巴的摄取SHR多于WKY,在WKY几乎全部通过LAT2,而SHR 25％通过LAT2、25％通过钠通道依赖的转运系统B(0)、50％通过LAT1,且LAT1和LAT2蛋白在SHR中明显上调。LAT2在SHR组表达上调,且在4-12周最明显。结论通过基因芯片技术对肠系膜动脉和肾脏组织中基因表达的初步研究,发现部分表达有差异的基因,通过定量逆转录-聚合酶链式反应筛选出SLC7A8基因在SHR组中上调,深入研究SLC7A8基因及其功能,将进一步明确高血压病的分子机制,并可能筛选出特异性的调控基因,发展相应的干预措施,为高血压的临床治疗带来新的突破。     

新的高血压相关基因-HSP70．2的实验研究

目的探讨自发性高血压大鼠新的致病相关基因。方法使用基因芯片技术初步筛选自发性高血压大鼠SHR和正常血压大鼠WKY二级肠系膜动脉和肾脏组织中表达水平不同的基因,再用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和定量RT-PCR排除假阳性候选基因。结果在SHR组中基因芯片发现19个上调基因,另外发现19个基因表达下调。RT-PCR和定量RT-PCR证实HSP70．2基因在SHR组中表达上调2．1倍(P<0．01),而内参照GAPDH在两组的差异无统计学意义(P>0．05)。结论HSP70．2基因和高血压相关,深入研究HSP70．2基因及其功能为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。     

自发性高血压大鼠心血管重塑及其机制探讨

目的 :探讨自发性高血压大鼠 (SHR)左心室与肠系膜动脉重塑的发生与机制。方法 :选用 13周龄的SHR 10只、Wistar Kyoto大鼠 (WKY大鼠 ) 10只分为两组 :SHR组、WKY组。实验期 13周。观察指标 :血压、LVW BW、左室厚度 体重、中膜厚度 管腔半径、中膜面积 管腔面积、管腔半径 血管半径、心肌及肠系膜动脉的形态学 (光镜、电镜 )、血浆、心肌、肠系膜动脉血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )浓度及血浆、心肌心钠素 (ANF)浓度。结果 :SHR组大鼠左室重量 体重 (LVW BW)、左室厚度 体重、中膜厚度 管腔半径、中膜面积 管腔面积、血浆及心肌ANF均比WKY组大鼠高 ,SHR组管腔半径 血管半径、心肌及肠系膜动脉AngⅡ浓度比WKY组低 (P均 <0 .0 5 ) ;心肌HE染色WKY组心肌纤维排列整齐、致密 ,心肌纤维无断裂 ,SHR组心肌纤维排列稀疏 ,中间可见断裂 ;心肌及肠系膜动脉电镜观察SHR组超微结构有明显损伤性改变 ,胶原纤维明显增生。结论 :2 6周龄SHR左心室与肠系膜动脉有明显的重塑现象 ;SHR血浆、心肌、肠系膜动脉的AngⅡ无明显增高 ,AngⅡ水平升高不是SHR高血压及其心血管重塑的原因 ;肠系膜动脉重塑的主要原因可能系血管壁的细胞外基质 (ECM)堆积 ,而不是平滑肌细胞增殖。     

N-ras在自发性高血压和两肾一夹型高血压大鼠肾脏动脉丛表达的比较研究

目的比较观察N-ras在自发性高血压大鼠(SHR)和两肾一夹型高血压大鼠(2K1C)肾脏血管平滑肌细胞中的表达,探讨N-ras与高血压肾脏血管重构的关系及高血压血管重构发生的机制。方法用免疫组织化学和Western blot方法检测16周龄和24周龄SHR大鼠和2K1C大鼠肾脏血管丛平滑肌细胞以及肾小球内皮细胞中N-ras的表达,同周龄正常血压WKY大鼠作为对照。结果 N-ras在SHR组和2K1C组表达高于WKY组(P<0.05)。N-ras在16周龄和24周龄2K1C组各级肾脏血管丛,包括小叶间动脉、弓形动脉、叶间动脉和入球小动脉的血管平滑肌细胞,以及肾小球内皮细胞的表达均高于SHR组(P<0.05)。结论癌基因N-ras的高表达可能参与了高血压大鼠肾脏的血管重构,两肾一夹型高血压大鼠肾脏中的N-ras表达高于自发性高血压大鼠。     

厄贝沙坦和咪哒普利抑制自发性高血压大鼠左心室与阻力血管重塑的实验研究

目的 探讨咪哒普利、厄贝沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）左心室与阻力血管重塑的抑制作用并比较二者的作用效果。方法 选用13周龄的SHR30只、WKY大鼠10只分为4组：SHR组，厄贝沙坦组，咪哒普利组，WKY组。实验期15周。观察心血管重塑珠有关指标。结果 咪哒普利组、厄贝沙坦组血压控制良好，左心室有和肠系膜动脉重塑的各项指标改善，在这些指标上二者无显著性差异；心肌和肠系膜动脉结构改变尤其是纤维化均减轻，咪哒普利组减轻更明显。结论 咪哒普利、厄贝沙坦不仅能良好地控制血压而且可以抑制自发性高血压大鼠左心室与阻力血管重塑；在防止心肌和肠系膜动脉结构改变尤其是纤维化方面，咪哒普利作用优越于厄贝沙坦。     

不同遗传背景及增龄对大鼠高血压胰岛素抵抗相关基因表达谱的影响

目的：探讨不同遗传背景以及增龄对大鼠高血压胰岛素抵抗相关基因表达谱的影响,筛选高血压胰岛素抵抗相关基因.方法：以自发性高血压（SHR）大鼠和Wistar-Kyoto（WKY）大鼠为动物模型,用S4000点基因表达谱芯片分别检测不同遗传背景（14wk SHR大鼠和14wk WKY大鼠）的大鼠肾组织差异表达基因、增龄（SHR大鼠从5wk增龄至14wk）对SHR大鼠肾组织基因表达谱的影响,并从中随机选取2个差异表达基因,用RT-PCR方法进行验证.结果：①SHR大鼠增龄后肾组织中差异表达基因209个;14wk SHR大鼠与14wk WKY大鼠相比较肾组织差异表达基因有166个;②根据SHR大鼠增龄及不同遗传背景大鼠肾组织2种基因表达谱芯片检测结果显示,两者共同差异表达基因11个,其中免疫相关基因2个、代谢相关基因4个、其他类型基因5个.结论：代谢、免疫相关基因表达差异可能在高血压胰岛素抵抗发病中起重要作用.     

p-MEK1/2与原发性高血压大鼠左心室肥厚关系的研究

目的动态观察p-MEK1/2在原发性高血压大鼠(SHR)左心室表达,进一步探讨MEK1/2-ERK1/2通路在高血压左心室重构中的作用。方法对比观察各周龄SHR大鼠与WKY大鼠血压,心脏/体重比值变化;免疫组织化学方法检测左心室p-MEK1/2的表达。结果整个实验过程中,WKY血压保持在正常水平,SHR16、SHR24组动脉收缩压均明显高于同周龄WKY组(P<0.05);与同周龄WKY相比SHR24组的心脏/体重比值增加明显(P<0.05);SHR24左心室相对壁厚度明显高于SHR8和WKY24大鼠(P<0.05);WKY和SHR大鼠左心室p-MEK1/2蛋白表达量均随着周龄的增加而增加,但SHR16、SHR24明显高于同周龄WKY(P<0.05)。结论 MEK1/2-ERK1/2通路可能有促进高血压左心室心肌肥厚发展的作用。     

自发性高血压大鼠心肾交感神经的分布状况

目的探讨自发性高血压大鼠心脏及肾脏交感神经的分布状况。方法选取6及12周龄的自发性高血压大鼠（SHR）和相应周龄的同源正常血压大鼠（WKY），以儿茶酚胺合成限速酶酪氨酸羟化酶（TH）的表达作为交感神经分布的标志，采用免疫组织化学检测TH，尾套法检测大鼠血压及心率。结果6及12周龄的SHR血压及心率高于相应周龄的WKY 鼠。6 及12 周龄的SHR心脏及肾脏TH 的表达高于相应周龄的WKY 鼠。SHR12 周龄时肾脏TH的表达高于6 周龄，心脏TH的表达在2 个周龄组差异无统计学意义。结论SHR心及肾脏交感神经纤维分布密度增加，并且随着高血压的进展，肾脏交感神经纤维分布密度有增加的趋势。     

5-LO在SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞中的表达及意义

【摘要】 目的 探讨5脂氧合酶（5-LO）在自发性高血压大鼠(SHR)脑动脉平滑肌细胞中的表达及意义。方法 选取16周龄雄性SHR和WKY大鼠,各15只,WKY大鼠作为正常对照。采用免疫荧光法检测5-LO在脑动脉血管中的表达,透射电镜观察动脉内膜表现,ELISA检测血清及动脉5-LO表达。结果 WKY大鼠动脉内膜光滑,平滑肌细胞排列整齐无增生,SHR大鼠内皮细胞肿胀,平滑肌细胞肥大变形排列紊乱;SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞5-LO荧光强度为（110.93±5.92）,明显强于WKY大鼠（P＜0.05）;SHR大鼠血清和脑动脉5-LO水平分别为（2671.04±30.18）ng/l和（1950.04±30.08）ng/l,明显高于WKY大鼠,差异比较有统计学意义（P＜0.05）。结论 5-LO在SHR大鼠脑动脉平滑肌细胞和血液中表达异常增高,可能在高血压脑血管损害过程中起作用。     

自发性高血压大鼠颈动脉血管平滑肌中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的研究

目的探讨自发性高血压大鼠颈动脉中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA的表达.方法用逆转录聚合酶链式反应检测两种基因的表达水平.正常雄性大鼠作为对照组.结果 SHR颈动脉中,抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,较WKY差异有显著性(P<0.05).结论自发性高血压大鼠颈动脉组织中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,癌基因的活化可能与自发性高血压大鼠颈动脉血管重构有关.     

Notch3的表达与高血压肾纤维化

目的：检测Notch3在原发性高血压病人和自发性高血压大鼠肾中的表达,探讨Notch3与高血压肾纤维化的关系。方法：13例原发性高血压病人为高血压病人组（HP组）,15例肾肿瘤病人为对照组（CP组）。6只自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat,SHR）为高血压组（SHR组）,6只同龄WKY大鼠为对照组（WKY组）。Masson三色染色法检测SHR组和WKY组肾胶原纤维的表达;免疫组织化学染色法检测Notch3在病人和大鼠肾组织中的表达;实时PCR检测锌指转录因子（snail） mRNA在SHR组和WKY组肾中的表达。结果：SHR组肾间质胶原纤维较WKY组明显增多（P〈0.05）;HP组Notch3的表达高于CP组（分别为6.741±0.231和0.763±0.358,P〈0.001）,SHR组Notch3的表达高于WKY组（分别为5.487±0.774和0.421±0.163,P〈0.001）;SHR组肾中snail mRNA的表达多于WKY组,差异有统计学意义（分别为0.996±0.120和0.208±0.090,P〈0.01）。结论：Notch3可能与高血压肾纤维化的发生有关。     

厄贝沙坦抑制肾皮质JAKs-STATs信号通路的实验研究

目的 探讨肾脏Janus激酶/信号转导子/转录激活子(JAKs-STATs)基因表达在高血压肾损害中的作用和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)的肾脏保护作用.方法 应用病理检查、放射免疫、逆转录-聚合酶链式反应和蛋白印迹杂交等方法,检测自发性高血压大鼠(SHR)应用厄贝沙坦(SHR-Ⅰ组)对肾脏局部血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平、肾皮质组织JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达.同时设SHR组及对照Wistar-Kyoto(WKY)组.结果 SHR-Ⅰ组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平为(79.4±14.8)pg/mg,SHR组为(83.4±8.2)PS/mg,WKY组为(43.2±13.6)pg/mg(P＞0.05).SHR-Ⅰ组和SHR组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平均比WKY组显著增加(均P＜0.01).SHR-Ⅰ组肾皮质JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达含量明显比SHR组下降(均P＜0.01),与WKY组相比,差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 JAKs-STATs信号通路可能参与了高血压肾脏损害过程,厄贝沙坦肾脏保护作用部分是通过减少肾脏内的JAKs-STATs表达,使JAKs-STATs信号通路受到抑制有关.     

Endothelium-dependent inhibition of the contractile response is decreased in aorta from aged and spontaneously hypertensive rats

BACKGROUND: Stimulation of vascular 5-hydroxytryptamine-2C (5-HT(2c)) receptors produces contraction in rat aorta. We investigated the effect of aging on endothelium-dependent inhibition of contractile responses in thoracic aorta from normotensive Wistar Kyoto (WKY) and spontaneously hypertensive rats (SHR). METHODS: Endothelium-intact and denuded aortic rings were prepared from young (7-9 weeks old) and senescent (65-70 weeks old) WKY and SHR rats. Changes in isometric tension elicited by 5-HT, in the absence or in the presence of N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) or indomethacin were recorded. RESULTS: In aorta from WKY and SHR, 5-HT elicited concentration-dependent contractions, which were increased by endothelium removal. The ability of endothelium to depress contractile response to 5-HT was found to be reduced in vessels from senescent animals, mainly in SHR. L-NAME increased the sensitivity and maximal effect to 5-HT in endothelium-intact but not in denuded aortic rings from young WKY rats. The effect of L-NAME was lower in young SHR compared with age-matched WKY rats, but it did not modify the response to 5-HT in senescent rats. Indomethacin did not affect contraction in arteries from young WKY or in denuded aortic rings from young SHR and aged WKY. In contrast, the inhibitor attenuated the response in endothelium-intact vessels from young SHR and aged WKY, and this effect was more marked in arteries with and without endothelium from senescent SHR. Thus, inhibition of cyclooxygenases by indomethacin revealed an enhanced endothelium-dependent modulation of contraction in senescent and hypertensive rats. CONCLUSIONS: Results indicate that hypertension and aging decrease the negative modulator role of endothelium, in 5-HT-induced vasoconstriction in aorta from WKY and SHR. Data also point out that endothelial dysfunction involves an increased formation of vasoconstrictor prostanoids, which counteract nitric oxide effects. In addition, SHR endothelium releases contractile prostanoids at an early stage of hypertension, whereas in old SHR vascular smooth muscle also releases prostanoids, which contribute to 5-HT-induced contraction.     

三种降压药对自发性高血压大鼠肠系膜动脉细胞凋亡的影响

目的：比较血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂——氯沙坦（科素亚）、二氢吡啶类钙拮抗剂——苯磺酸氨氯地平（络活喜）、血管紧张素转换酶抑制剂——培哚普利（雅施达）三种不同作用机制的降压药对自发性高血压大鼠肠系膜动脉细胞凋亡的影响。方法：将11周龄雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hy-pertensive rat,SHR）随机分成氯沙坦组（SHR-los组）、苯磺酸氨氯地平给药组（SHR-nor组）、培哚普利给药组（SHR-per组）与空白对照组（SHR对照组）,各10只,另设11周龄雄性正常血压大鼠（Wistar-Kyoto rat,WKY）作正常对照组（WKY组）。实验前及实验开始后每4周测一次大鼠尾动脉收缩压。饲养8周后,检测bax、bcl-2和P53基因表达及caspase-3酶活性以了解肠系膜二、三级动脉细胞凋亡情况。结果：氯沙坦、苯磺酸氨氯地平、培哚普利能显著降低SHR动脉收缩压,三组间降压效果差异无统计学意义（P〉0.05）。bax、bcl-2和P53基因在各组肠系膜动脉中均有表达,各给药组较SHR对照组在基因表达上显示出抑制细胞凋亡作用,尤以苯磺酸氨氯地平最明显（P〈0.05）。caspase-3活性SHR对照组最高,WKY组最低（P〈0.01）,三个给药组介于两者之间（P〈0.01）,其中氯沙坦组和培哚普利组差异无统计学意义,苯磺酸氨氯地平组caspase-3活性较前两组低（P〈0.01）。结论：氯沙坦、苯磺酸氨氯地平和培哚普利除了有降压作用外,还有抑制阻力血管细胞凋亡的作用,在抑制大鼠肠系膜动脉细胞凋亡方面苯磺酸氨氯地平更优。     

高血压发生、发展过程中动脉神经肽Y-Y1受体数量变化的实验研究

目的 探讨动脉壁上的神经肽Y(NPY)-Y1受体在高血压发生、发展过程中的变化。方法 实验用SHR和WKY大鼠(每组各5只)。采用免疫荧光法检测分离血管的NPY-Y1受体，应用荧光显微镜观察、取像。结果 从形态学的角度证实NPY-Y1受体存在，并发现其在小动脉上的分布特点为间隔条带状分布。在脑部动脉中，随着血管直径的减小，NPY-Y1受体表达量增加。在发生高血压前，SHR大鼠的NPY-Y1受体已高于WKY大鼠，出现高血压后，其表达量反而下降，但仍高于WKY大鼠。结论 高血压的靶血管损害主要在阻力血管，而NPY-Y1受体主要分布于小血管，NPY-Y1受体的这种分布特点可能是高血压形成并损害血管的一种机制。     

内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响

目的 观察糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体的改变以及内皮素受体阻断剂波生坦的影响。方法 将自发性高血压大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型（SHR－DM）,设柳平舒组、波生坦＋氨氯地平（络活喜）组、络活喜组和非治疗组,4 一采用免疫组织化学、Western印迹法及逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）方法检测肾脏AT1受体基因和蛋白表达。结果 与WKY大鼠对照组相比,SHR－DM大鼠存在明显的蛋白尿和肾功能减退,肾脏AngⅡ水平明显升高,ＡＴ１受体的mRNA和蛋白表达则显著下降。波生坦能使上述异常显著减轻。结论 糖尿病高血压大鼠肾脏ＡＴ１受体表达明显下调;波生坦可减轻ＳＨＲ－ＤＭ大鼠肾脏损害并防止ＡＴ１受体表达下调。