磷酸化p38MAPK在退变和正常腰椎间盘髓核组织中的作用

目的观察随腰椎间盘退变（NP）程度的加重,NP中磷酸化p38MAPK的定位及表达情况,探讨其与椎间盘退变程度间的关系。方法用腰椎间盘MRI退变分级系统评定留取的MRI资料的退变程度,免疫组化法检测NP组织中磷酸化p38MAPK的表达,光镜下观察磷酸化p38MAPK的表达定位及表达程度。结果随着髓核退变程度的加重,其表达量明显提高、增强,不同退变等级颈椎间盘髓核中磷酸化p38MAPK的表达有显著差异;退变腰椎间盘髓核中磷酸化p38MAPK的含量随着椎间盘退变程度的加重逐渐增加,二者之间符合以椎间盘MRI退变等级为自变量,磷酸化p38MAPK相对含量为因变量的直线关系：Y=0．423X-0．675,p38MAPK信号转导通路参与髓核退变过程。结论磷酸化p38MAPK的含量随着椎间盘退变程度的加重逐渐增加。     

退变颈椎椎间盘髓核中磷酸化p38 MAPK的表达

目的观察不同退变程度颈椎病患者椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)的病理改变及磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38mitogen activated protein kinase,p-p38MAPK)的表达差异,探讨颈椎椎间盘退变可能的分子机制。方法收集2008年10月至2009年5月在我院行手术治疗的35例颈椎病患者的NP组织,获取术前相应颈椎MRI(T2像正中矢状位)资料。其中男性25例,女性10例,年龄27~82岁,5例来自单间隙,18例来自两间隙,12例来自三间隙;4例为C3/4、12例为C4/5、14例为C5/6、5例为C6/7。19例NP组织用于普通病理和免疫组织化学染色,16例用于蛋白质印迹分析。采用颈椎椎间盘MRI退变分级系统评定术前NP组织标本相应MRI退变程度。观察不同退变程度时NP组织的病理改变及p-p38MAPK在NP组织中的定位;分析退变椎间盘中p-p38MAPK含量与其MRI退变程度间的关系。结果随着颈椎椎间盘退变程度加重,NP内胶原纤维逐渐增多、增粗、变性,甚至聚合成团,NP逐渐纤维化;p-p38MAPK定位于NP细胞胞核;NP细胞p-p38...     

终板软骨细胞衰老在腰椎间盘退变中的研究进展

腰椎间盘退变(lumbar intervertebral disc degeneration, LIDD)是多种脊柱疾病的主要原因,临床常诱发下腰痛、肢体麻木等症状,如何防治LIDD是亟待解决的医学难题。多项研究表明,终板软骨细胞(endplate chondrocytes, EPCs)衰老促进软骨终板钙化损伤,阻碍椎间盘营养供应,最终加速LIDD。EPCs衰老机制主要与DNA损伤、端粒缩短、氧化应激、衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype, SASP)紊乱和自噬抑制等有关,通过减轻DNA损伤、激活端粒酶活性、抗氧化损伤、维持SASP稳态和激活细胞自噬等途径可以减轻EPCs衰老,保护软骨终板生理结构和功能,保障椎间盘的结构支撑和营养供应,从而延缓LIDD进程。     

基于大鼠OVX模型研究雌激素缺乏对终板软骨细胞退变的影响

目的 探究雌激素缺乏对终板软骨细胞退变的影响。方法 选取6月龄大鼠40只,分为两组：双侧卵巢切除实验组(OVX)和假手术对照组(SHAM)。术后9周取材,分别进行软骨终板组织的提取和原代终板软骨细胞的培养。免疫组化实验对比SHAM组和OVX组的软骨终板组织II型胶原(COL-II)的表达情况。倒置相差显微镜和甲苯胺蓝细胞染色观察细胞形态来鉴定终板软骨细胞。CCK-8法对比两组终板软骨细胞的活力情况。罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色观察OVX后终板软骨细胞F-actin的改变情况。细胞免疫荧光检测终板软骨细胞在雌激素缺乏后COL-II的改变情况。RT-qPCR法对比两组的SOX9、ACAN、ADAMTS-5、MMP13和COL-X的表达有无差异。结果 与对照组相比较,OVX组的软骨终板的COL-II蛋白表达减低。终板软骨细胞的形态大多呈多角形和梭形,铺路石样排列。OVX的终板软骨细胞活力降低,细胞骨架更加紊乱,应力纤维增多,迁移能力下降,COL-II表达降低。与对照组相比,OVX组的终板软骨细胞SOX9和ACAN表达降低,MMP13、ADAMTS-5和COL-X表达升高。结论 雌激素缺乏会使...     

磷酸化p38 MAPK在皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）在皮肤鳞状细胞癌（SCC）中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测60例皮肤SCC中p-p38 MAPK的表达。结果p-p38 MAPK的表达主要定位于胞核,在皮肤SCC的阳性表达率明显高于正常皮肤。p-p38 MAPK的表达与年龄、性别无关,与病理分级、肿瘤大小、淋巴结转移有关。结论p38丝裂原活化蛋白激酶的过表达可能与皮肤SCC的发生发展有关。     

大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型的建立

目的：建立大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型，为椎间盘退变的机制研究提供载体。方法：酶消化及自然传代法分离培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞，观察其形态学变化。采用MTT法测定第Ⅲ代软骨细胞的生长曲线。采用免疫细胞化学法检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况，对该模型进行鉴定。结果：大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞表达特征性Ⅱ型胶原。第Ⅲ代细胞培养在生长第13天后，细胞分裂能力明显下降，核仁不清，细胞变形明显，以梭形为主，折、旋光性弱，细胞间隙变大，轮廓增强，胞浆内可见空泡、脂滴；Ⅱ型胶原合成明显下降，细胞增殖率显著降低；呈现自然退变过程。结论：建立椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型，为椎间盘退变机制研究提供较好的细胞学基础。     

吗啡耐受大鼠背根神经节磷酸化p38 MAPK的表达

 【目的】 观察鞘内慢性注射吗啡是否激活背根神经节(DRG)神经元,使其p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平发生改变&#65377; 【方法】 通过对成年雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射吗啡15 μg而建立吗啡耐受的动物模型,或连续7 d在吗啡注射前30 min预先鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580 10 μg,用50 ℃热水甩尾法观察吗啡的镇痛效果,并用免疫组织化学法观察DRG 磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达变化&#65377;【结果】 慢性鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用明显下降(P < 0.001),吗啡耐受形成;而SB203580预处理可明显抑制吗啡耐受的形成(P < 0.001);免疫组织化学染色显示脊髓DRG p-p38 MAPK表达明显上调(P < 0.01),且以小&#65380;中型神经元增加为主&#65377; 【结论】 鞘内慢性注射吗啡可激活脊髓DRG小型和中型神经元,使其p38 MAPK磷酸化水平增加,这可能是吗啡耐受的机制之一&#65377;     

阻断软骨终板营养对终板软骨细胞影响的实验研究

目的:观察阻断新西兰白兔椎体软骨终板营养途径对终板内软骨细胞的影响。方法:30只新西兰白兔平均分为实验组、假手术组和对照组。实验组采用颈前路显露椎体,使用0.5mm钻头分别在C4、C5椎体上、下缘,C3椎体下缘,C6椎体上缘靠近软骨终板处钻孔,孔外缘位于终板软骨下缘,深度至椎体后缘(术中X线机透视确定),孔中用Stryker骨水泥填塞(0.5ml),假手术组仅切开皮肤后缝合,对照组不做处理。术后4周及8周切取软骨终板标本,用HE染色和原位脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),观察终板软骨细胞密度和软骨细胞凋亡。结果:术后4周,实验组终板软骨细胞密度较假手术组及对照组下降明显,细胞凋亡增加(P<0.05);术后8周,实验组细胞密度下降及细胞凋亡增加较术后4周更为明显(P<0.05);实验组4周及8周细胞密度和细胞凋亡数比较,差别有显著意义(P<0.05)。结论:阻断软骨终板营养途径可导致终板软骨细胞密度下降,细胞凋亡增加。     

自噬在骨关节炎软骨细胞退变中的表达变化

目的：探讨自噬在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达及意义。方法收集临床 OA 及正常骨关节软骨标本各6例,分为 OA 组和对照组。免疫组化法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和 Beclin-1在软骨组织中表达情况。分离关节软骨细胞并在低氧环境下培养,采用瞬时转染绿色荧光蛋白 LC3(GFP-LC3)在激光共聚焦显微镜下观察各组软骨细胞自噬变化,并用 Western blot 法检测软骨细胞中 LC3蛋白表达情况。结果 OA 组软骨组织中 LC3蛋白和Beclin-1蛋白的表达显著高于对照组(P <0．05);在 OA 组发现大量自噬颗粒形成,OA 组 GFP-LC3细胞阳性率显著高于对照组;OA 组软骨细胞中 LC3蛋白从 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转换表达显著高于对照组。结论自噬在 OA 软骨细胞退变的过程中起着重要作用,为 OA 发病机制的研究提供新的方向。     

p38 MAPK在心肌肥厚中的作用机制

左室重量增加是心脏病死亡率的独立危险因子,持续超工作负荷使心肌肥厚代偿机制崩溃,并导致心衰.p38MAPK是细胞信号传递的交汇点,越来越多的证据表明p38丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路参与了动脉粥样硬化、心肌缺血及心肌肥厚等病理过程[1].本文旨在对p38MAPK在心肌肥厚中的作用机制作一综述.     

p38MAPK和TNF-α mRNA在冠心病患者冬眠心肌中的表达和意义

目的探讨冬眠心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA的变化和意义。方法10例行冠状动脉搭桥术的冠心病患者，术前1周内用多巴酚丁胺超声负荷试验结合多普勒组织成像确定冬眠心肌及正常心肌的位置，搭桥术中根据检测结果进行取材（分别取正常心肌和冬眠心肌），并经电镜证实。Western-blot法检测p38MAPK蛋白表达情况，原位杂交法检测TNF-α mRNA的活性。结果冬眠心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA的表达较正常细胞高；冬眠心肌p38MAPK与TNF-α mRNA表达相关（r=0．849，P〈0．05）。结论慢性缺血缺氧时，心肌细胞内p38MAPK、TNF-α mRNA表达增加。TNF-α mRNA促进p38MAPK的活化，p38MAPK、TNF-α是冬眠心肌形成的重要分子生物学因子。     

p38MAPK通路在急性坏死性胰腺炎中的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内主要的信号转导系统之一。p38MAPK是MAPK家族中的重要成员,其介导的信号转导通路在炎性反应中具有重要作用。p38MAPK与急性坏死性胰腺炎关系密切,不仅参与了急性坏死性胰腺炎胰腺的局部损伤,还参与了胰外并发症的发生。本文对p38MAPK信号通路在炎症中的作用及其在急性坏死性胰腺炎中的研究进展予以综述,旨在为急性坏死性胰腺炎的治疗提供新的思路。     

p38蛋白激酶(p38 MAPK)在癫疒间大鼠脑内的表达

 目的  观察p38蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)在癫疒间大鼠脑内的表达情况。方法  健康雄性SD大鼠随机分成正常对照组(n=8)和癫疒间组(n=8)。采用戊四氮腹腔注射建立癫疒间模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine的标准进行观察评分,采用Western blot和免疫荧光法比较两组大鼠脑内p38 MAPK的表达情况。结果  癫疒间组大鼠脑内p38 MAPK在皮层和海马的表达均显著高于正常对照组(P<0.01)。结论  p38 MAPK在癫疒间大鼠脑内表达上调。     

阿尔茨海默大鼠嗅球p38MAPK的表达

目的 观察阿尔茨海默(AD)大鼠嗅球p38MAPK的表达,探讨p38MAPK在AD病理改变发生中的作用机制.方法 采用大鼠侧脑室注射Aβ25-35建立AD动物模型,Y迷宫实验测定行为学变化,免疫组化染色法检测建模后4 d、7 d和14 d时AD组、生理盐水组、抑制剂组和抑制剂对照组p38MAPK在大鼠嗅球中的表达.结果 ①建模后7 d、14 d AD组大鼠行为学测试出现明显改变,学会训练次数(N)、完成所有反应中错误反应的次数(EN)及全天总反应时间(TRT)均较生理盐水组增加(P<0.05),抑制剂组较AD组N、EN和TRT均有明显改善.②AD组在建模后4 d,嗅球出现明显的p38MAPK表达,且随时间的延长表达增加(P<0.05),与生理盐水组比较,AD组p38MAPK阳性细胞数明显升高(P<0.01).抑制效组p38MAPK的表达在3个时间点,较AD组、抑制剂对照组均明显下降(P<0.01).结论 Aβ25-35可激活痴呆大鼠嗅觉中枢p38MAPK信号转导通路,p38MAPK可能参与了AD早期嗅觉障碍的形成过程.p38MAPK抑制剂SB203580能部分减弱A1325-35的神经毒性作用.     

p38MAPK在体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化中的作用

目的 观察体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程中p38MAPK活性、TNF-Ot、NO水平及NOS活性的变化,探讨p38MAPK活性变化与脊髓星形胶质细胞活化的关系.方法 分离培养的SPF大鼠脊髓星形胶质细胞设正常对照组(止常组)、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SB203580阻断p38MAPK组(SB组,10 umol/L)和sP刺激+SB203580阻断p38MAPK组(SP+SB组).WB法、RT-PCR法、ELISA法检测1,3,12,24 h和36 h时p38MAPK、p-p38(磷酸化p38MAPK)含量及GFAP mRNA、TNF-0、NO水平和NOS活性的变化.结果 脊髓星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于95%.SP组脊髓星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,1 h后p-p38开始升高,3 h后GFAP mRNA水平显著增高,同时NO、NOS和TNF-a水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,sP+sB组较sP组p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平显著降低.SB组总p38MAPK、p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与r脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程,阻断p38MAPK信号通路可有效降低炎性因子水平.     

5/6肾切除大鼠早期模型中p38MAPK的动态变化

目的：研究5/6肾切除大鼠模型中p38MAPK磷酸化的动态表达情况。方法：82只雄性SD大鼠分为两组：5/6肾切除模型组72只,假手术对照组10只。模型组造模完成后,分别于肾切除早期（术后1/2h、1h、3h、6h、12h、1d、2d、4d）相应时间点处死,每组9只,假手术组于术后12h处死,称量各组体重及残余肾重,计算肥大指数;下腔静脉取血留取血清测定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;以Western blotting免疫印迹法检测肾皮质磷酸化p38MAPK活性的表达情况;以病理光镜和电镜观察肾小球、肾小管及肾间质组织形态学及超微结构的变化。结果：模型组与对照组相比,肾脏呈代偿性肥大,肥大指数增高（P〈0.05）,Scr和BUN升高（P均〈0.01）。免疫印迹法显示5/6肾切除术后1/2h、1h、3h、6h、12h磷酸化p38信号呈递增趋势,尤以12h信号最强,之后信号减弱,2d时几乎不可见,4d有较弱的信号,假手术组未见明显信号。光镜下,发现肾小球有轻度系膜细胞增生,基质增宽不明显,肾小管偶有轻度变性,间质偶有炎性细胞浸润。电镜下,偶见足突局灶融合。结论：5/6肾切除大鼠在造模完成后12h时磷酸化p38MAPK表达最强。     

p38MAPK基因RNAi慢病毒载体的构建及在MC3T3-E1细胞的表达

目的 构建小鼠p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,观察其对MC3T3-E1成骨细胞p38MAPK表达及细胞凋亡的影响.方法 设计并合成3对互补的针对小鼠p38MAPK mRNA的oligoDNA片段,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ酶切后的载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.重组质粒与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,流式细胞仪检测病毒滴度,p38MAPK-shRNA慢病毒载体转染体外培养MC3T3-E1细胞,荧光定量PCR 检测MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达,进行p38MAPK干扰有效靶点的筛选.22.2 mol/L葡萄糖刺激培养MC3T3-E1细胞7 d,Western blot检测MC3T3-E1细胞p38MAPK蛋白的表达,流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡.结果 酶切和测序均证实各重组质粒核苷酸序列插入正确,所得质粒分别命名为p38MAPK-shRNA1、p38MAPK-shRNA2、p38MAPK-shRNA3,流式细胞仪测定病毒滴度分别为2.4×108、2.8×108、2.5×108 TU/ml. p38MAPK-shRNA转染MC3T3-E1细胞效率达到74%以上,RT-PCR检测结果显示,各p38MAPK-shRNA转染组MC3T3-E1细胞p38MAPK mRNA表达较正常对照组分别下降了78.8%、84.3%和60.2%(P<0.01),其中以p38MAPK-shRNA2的干扰效率最高.Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组、空载体转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01).p38MAPK-shRNA慢病毒转染组MC3T3-E1细胞p-p38MAPK蛋白表达水平较高糖组明显下调(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率显著增加(P<0.01);p38MAPK-shRNA慢病毒转染组以及p38MAPK信号转导阻断剂组较高糖组MC3T3-E1细胞凋亡率明显减少(P<0.05,P<0.01).结论 成功构建了靶向p38MAPK基因RNAi慢病毒载体,其能有效抑制MC3T3-E1细胞p38MAPK基因表达,减少高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡.     

川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠p38MAPK和TNF-α表达的影响

目的:探讨川芎嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法:30只Wistar大鼠被随机分为3组:假手术组、缺血再灌注损伤(IR)组、川芎嗪预处理组(LI).建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,应用酶联免疫吸附法,测定心肌TNF-α和IL-6水平;用免疫组化S-P法,检测p38MAPK蛋白的表达.结果:LI组与IR组比较,TNF-α、IL-6均显著降低(P＜0.01),p38MAPK蛋白阳性表达显著减弱(P＜0.01).结论:川芎嗪可降低p38MAPK的活性,抑制TNF-α和IL-6的表达而发挥心肌保护作用.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号级联在炎症反应中的作用

在急、慢性疾病中，细胞释放的炎症介质可以活化多种信号转导级联反应，丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通道在招募白细胞于炎症部位聚集起着重要的作用。同时，p38MAPK异构体的活化可以激活致炎细胞因子，而后刺激白细胞活化。然而，p38MAPK引起的白细胞招募这一系列的功能过程包括：粘附、游走和效应器的功能如氧化爆发以及p38MAPK介导的复杂细胞因子网络在炎症中的作用仍有待研究。针对减少炎症介质产生和以p38MAPK为治疗靶点的研究正在进行中，不远的将来可能会成为治疗炎症疾病的新策略。     

p38MAPK通路在健骨颗粒促成骨细胞早期分化中的作用

目的观察p38MAPK信号转导通路在健骨颗粒促进体外培养成骨细胞早期分化过程中的作用。方法采用酶消化法分离、培养SD大鼠成骨细胞,分4组进行干预:对照组(加入生理盐水血清)、阻断剂组(加入p38MAPK的阻断剂SB202190)、中药组(加入健骨颗粒含药血清)和中药加阻断剂组(加入健骨颗粒含药血清和SB202190),运用化学比色法检测上清液中碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸(HYP)含量,实时荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测成骨细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达。结果在AKP活性、HYP含量及ColⅠmRNA表达3项指标上,中药组>中药加阻断剂组>对照组>阻断剂组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外培养大鼠成骨细胞的早期分化与p38MAPK信号转导通路有关;健骨颗粒含药血清能促进成骨细胞的早期分化,但这一作用仅部分通过p38MAPK信号通路实现。