EB病毒编码的BARF1基因在人上皮细胞恶性转化中的作用

背景与目的:EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)的BamHⅠA区域的早期基因BARF1能使猴肾上皮细胞永生化,使人淋巴细胞和呲类动物的成纤维细胞发生恶性转化,但有关该基因在人上皮细胞肿瘤发生发展中的作用未见报道。本研究的目的是观察EBV-BARF1基因对人上皮细胞生长特性的影响及能否使之发生恶性转化。方法:构建真核重组表达载体pcDNA3-BARF1,转染人支气管上皮细胞(HBE),建立稳定表达BARF1基因的HBE细胞株;观察细胞生长状况、生长速度、在软琼脂中集落形成能力及对裸鼠的致瘤能力。结果:EBV-BARF1基因转染细胞生长旺盛,失去接触抑制能力,生长速度增快,并在裸鼠体内成瘤。结论:EBV的早期基因BARF1作为病毒的癌基因,在支气管上皮细胞的恶性转化中可能起着重要作用。     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体研究进展

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Hu GM-CSF)是一种由127个氨基酸组成的22 kD的糖蛋白。它可刺激早期多能造血干细胞和粒-单系祖细胞(GM-CFC)的增殖与分化；增强成熟中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核-巨噬细胞功……     

巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体与儿童血液病关系初探

目的：探讨儿童血液病患者血清M-CSF可溶性受体(M-CSFsR)水平的异常表达及其临床意义。方法：通过特异性检测M-CSFsR的双抗体夹心ELISA检测了正常儿童26例、急性淋巴细胞白血病(ALL)92例、急性非淋巴细胞白血病(ANLL)31例、再生障碍性贫血(AA)43例、特发性血小板减少性紫癜(ITP)42例患儿的M-CSFsR。用免疫沉淀及Western-blot测定阳性血清的M-CSFsR。结果：急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病患儿血清M-CSFsR表达水平低于正常对照组[ALL：(0.15±0.21)ng／mL，P=0.001；ANLL：(0.19±0.19)ng／mL，P=0.009]。特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿的血清M-CSFsR水平显著高于正常对照组(P=0.016)。Western-blot显示阳性血清中的M-CSFsR分子量约90kD。结论：血液病患儿中息性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病及特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿的血清M-CSFsR水平均异常，为深入研究M-CSFsR的病理意义奠定了基础。     

EB病毒BHRF1基因慢病毒载体的构建及功能鉴定

目的:构建并制备能够有效表达EB病毒BHRF1基因的重组慢病毒载体,观察BHRF1表达对人胚肺成纤维细胞(KMB17)凋亡的影响。方法:采用RT-PCR法,从B95-8细胞扩增EBV BHRF1基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒。将纯化后的重组慢病毒直接感染293T和KMB17细胞,荧光显微镜、实时定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测BHRF1在细胞中的表达水平。流式细胞仪检测BHRF1表达对凋亡诱导剂或无血清培养诱发KMB17细胞凋亡的影响。结果:重组慢病毒介导BHRF1在293T和KMB17细胞内获得表达,能有效地抑制KMB17细胞的凋亡。结论:成功构建了表达BHRF1基因的重组慢病毒载体。     

肺癌组织中EB病毒致癌相关基因BNLF1检测意义初探

许多研究表明Ｅｐｓｔｅｉｎ-ｂａｒｒ病毒 (ＥＢＶ)感染与鼻咽癌、非洲Ｂｕｉｋｉｔｔ淋巴瘤、霍奇金病等恶性肿瘤的发生密切相关。近年来 ,国内外对ＥＢＶ与肺癌相关性研究渐多 ,但仍无定论。笔者采用独立设计引物的ＰＣＲ方法、限制性酶切分析法等检测肺癌中ＥＢＶ -ＢＮＬＦ１基因 ,从基因水平上对ＥＢＶ与肺癌关系进行初步探讨。１材料与方法１．１标本来源收集河南省人民医院和河南省胸科医院４０例肺癌手术切除标本。经病理诊断鳞癌２６例 ,其中高分化２例 ,中分化１２例 ,低分化１２例。腺癌１４例 ,其中高分化２例 ,中分化４例 ,低…     

EB病毒潜伏膜蛋白1在鼻咽癌细胞中调节表皮生长因子受体磷酸化的研究

目的 阐明EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌(NPC）中调节表皮生长因子受体9EGFR）磷酸化水平。方法 采用已建立的、受四环素调控的、LMP1表达的NPC细胞系（pTet-on-LMP1 HNE2),定量诱导pTet-on-LMP1 HNE2细胞LMP1动态表达水平,并观察EGFR表达和磷酸化水平,采用瞬间转染方法,将EGFR显性负性突变体和LMP1antisense表达质粒分别导入pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,采用免疫共沉淀和Western blot检测EGFR磷酸化;同时观察EGF刺激后对EGFR磷酸化前后的影响。结果 在pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMP1能诱导EGFR的表达和磷酸化,并随LMP1表达增加而增加。pTet-on-LMP1 HNE2细胞在导入EGFR显性负性突变体后,不但完全阻断EGFR磷酸化,而且完全抑制EGF所引起的EGFR磷酸化;而导入LMP1 antisense后,可显著地抑制GFR磷酸化水平。结论 LMP1能同时诱导EGFR表达和上调EGFR磷酸化,并呈剂量相关效应,提示EGFR磷酸化可能在NPC发生发展过程中起着重要作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白1介导鼻咽癌细胞中转录因子Ets-1表达的实验研究

目的 探讨鼻咽癌(NPC)细胞中EB病毒潜伏膜蛋白1(EMP1)是否可介导转录因子Ets-1的表达。方法 采用受四环素(Dox)调控的、LMP1表达的NPC细胞系(pTet-on-LMP1 HNE2),用Dox诱导LMP1表达,并检测Ets-1的表达。采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测Ets-1 RNA水平的变化;应用Western blot方法检测Ets-1蛋白质表达情况;应用免疫共沉淀和Western blot方法检测Ets-1磷酸化水平;应用EMSA方法检测Ets-1的DNA结合活性。结果 在不同诱导时间、不同浓度Dox诱导的pTet-on-LMP1 HNE2细胞中,LMPl表达与Ets-1 RNA表达、蛋白质表达、苏氨酸磷酸化水平及DNA结合活性在一定范围内呈正相关。结论 IMP1可介导NPC细胞中Ets-1的转录活化和表达,可能是LMP1致瘤的新机制。     

腹腔注射分泌粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子的重组痘苗病毒的…

通过体内途径直接注射各种载体进行细胞因子基因治疗，具有重要的临床意义，作观察了表达小鼠粒细胞－巨噬细胞落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重组痘苗病毒９ＶＶＧＭ－ＣＳＦ）对肺转移荷瘤小鼠模型的治疗作用。给Ｃ５７ＢＬ／６小鼠尾静脉注射２×１０＾５Ｂ１６Ｆ１０细胞３天后开始腹 内注射ＶＶＧＭ－ＣＳＦ１０＾８ＰＦＵ／０．１ｍｌ，２粗埽瘟疲仓堋＝峁允荆郑郑牵停茫樱颇芄幌灾跎俸闪鲂∈笙赴纳鄙恕     

Toll样受体2基因多态性与胃癌及EB病毒相关胃癌易感性的关系

目的:探讨Toll样受体2(TLR2) rs3804099和rs3804100基因多态性与胃癌和EB病毒相关胃癌(EBVaGC)易感性的关系。方法:选用185例EBV阴性胃癌(EBVnGC)组织、41例EBVaGC组织以及100位健康人群外周血标本作为研究对象,采用PCR结合限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测TLR2 rs3804099与rs3804100的基因多态性。结果:TLR2 rs3804099基因型和等位基因频率在胃癌组与健康对照组间的差异均有统计学意义(χ²=5.617,P=0.018;χ²=6.467,P=0.011),胃癌组C等位基因频率及C等位基因携带者频率均明显高于健康对照组(χ²=6.467,P=0.011;χ²=4.444,P=0.035),且与野生TT型相比,CC基因型可增加胃癌的发病风险(OR=3.554, 95%CI=1.179~10.715)。TLR2 rs3804100位点的各基因型频率、C等位基因及C等位基因携带者的频率在胃癌组和健康对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。TLR2 rs3804099与rs3804100位点的各基因型频率、C等位基因频率及C等位基因携带者频率在EBVaGC和EBVnGC两组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:TLR2 rs3804099基因多态性可能与胃癌发病风险有关,C等位基因可能为胃癌的危险因子,携带C等位基因可能增加胃癌的发病风险。TLR2 rs3804099与rs3804100基因的多态性与EBVaGC的易感性无明显相关性。     

rhG-CSF对Ara-C杀伤急性髓性白血病细胞影响的实验研究

目的探讨ｒｈＧ－ＣＳＦ对２１例急性髓性白血病（ＡＭＬ）细胞体外对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）敏感性的影响。方法采用ＭＴＴ法检测Ａｒａ－Ｃ的细胞毒作用。结果ｒｈＧ－ＣＳＦ可显著增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性,与对照组相比Ｐ＜０．０５;结论ｒｈＧ－ＣＳＦ可能通过促进耐药ＡＭＬ细胞进入增殖周期,而增强Ａｒａ－Ｃ对耐药ＡＭＬ细胞的毒性,从而具有耐药的逆转效应,预示着ｒｈＧ－ＣＳＦ与Ａｒａ－Ｃ联合运用治疗耐药ＡＭＬ的潜在价值     

鼻咽癌细胞系SUNE中EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响

目的研究鼻咽癌细胞系ＳＵＮＥ中ＥＢＶ┐ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响,探索ＬＭＰ１在鼻咽癌发生中所起的作用。方法用ＬＭＰ１基因真核表达质粒转染人胚肾上皮细胞,检测ＬＭＰ１的表达,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力,ＭＴＴ吸收能力以及ＰＣＮＡ的表达情况。结果被ＬＭＰ１基因转染的细胞生长旺盛,能在软琼脂中形成多个集落,ＭＴＴ吸收能力增强,ＰＣＮＡ的表达水平增高。结论ＬＭＰ１基因能明显改变上皮细胞的生物学行为,促进细胞的生长、增殖和转化,使转染的上皮细胞获得肿瘤细胞的生长特征。     

CHARACTERIZATION OF A HUMAN HERPES VIRUS－6（HHV－6） AND EPSTEIN－BARR VIRUS（EBV） ASSOCIATED LEUKEMIC CELL LINE，J6－1

ＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＺＡＴＩＯＮＯＦＡＨＵＭＡＮＨＥＲＰＥＳＶＩＲＵＳ－６（ＨＨＶ－６）ＡＮＤＥＰＳＴＥＩＮ－ＢＡＲＲＶＩＲＵＳ（ＥＢＶ）ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤＬＥＵＫＥＭＩＣＣＥＬＬＬＩＮＥ，Ｊ６－１ＷｕＫｅｆｕ吴克复；ＪａｎｏｓＬｕｋａ；Ｓｈａｎｔ...     

SILENCING OF Bc1-2 GENE BY SMALL HAIRPIN RNA INHIBITS GROWTH OF NB4 CELLS

Double-stranded RNA-dependent posttrans- criptional silencing, also known as RNA interference (RNAi), is a phenomenon in which double-stranded small interfering RNA (shRNA) complexes can target specific genes of homology for silencing. RNAi allows genes in human cells to be silenced by introducing shorter synthetic duplex RNAs (i.e., 20 bp) through transfection. A 20-nt shRNA is long enough to induce gene-specific silencing but short enough to evade host response[1-3]. Stable gene rep…