蛋白激酶Cδ对燃煤污染型砷中毒肝损伤的调控机制

目的 探讨蛋白激酶Cδ(protein kinase C8,PKCδ) mRNA转录和蛋白表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用.方法 人群研究:选取符合条件的贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者纳入砷暴露组,包括病区非病例组(25例)、无明显肝病组(38例)、轻度(43例)和中重度(27例)肝病组;选取非砷污染村34名健康居民纳入对照组.采集上述研究对象的尿液和外周血,测定尿砷含量及外周血PKCδ mRNA表达水平.动物实验:采用随机数字表法将30只Wistar大鼠分为对照组、饮水型砷中毒组和燃煤污染型砷中毒组(即低、中、高砷粮食污染组),每组6只.对照组常规喂养,饮水型砷中毒组给予10 mg/kg As2O3水溶液,燃煤污染型砷中毒组喂饲用病区高砷煤烘烤的玉米粉所配制的饲料(砷含量分别为25、50和100 mg/kg),均喂养3个月.测定其尿砷含量、外周血和肝组织PKCδ mRNA表达水平及肝组织磷酸化蛋白激酶C8 (phosphorylated protein kinase C8,pPKCδ)表达水平.结果 非病例组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组尿砷含量中位数(四分位数)分别为25.58(18.62 ～ 40.73)、56.66(38.93 ～ 76.77)、64.90(39.55 ～98.37)和75.47(41.30～109.70) μg/g肌酐,除病区非病例组外,其余组均高于对照组[23.34(17.84～37.45) μg/g肌酐](P值均＜0.05).大鼠饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组尿砷含量分别为2223.61(472.98～3976.73)、701.16(194.01～1300.27)、1060.94(246.33～2585.47)和3101.11 (1919.97～5407.07) μg/g肌酐,均高于对照组[94.32(22.65 ～ 195.25) μg/g肌酐](P值均＜0.05);肝组织中pPKCδ蛋白表达水平分别为324.83±25.06、278.50±30.57、308.83±34.67、326.33±35.09,均高于对照组(240.17±28.07)(P值均＜0.05);肝组织细胞膜中pPKCδ蛋白表达水平分别为0.49±0.06、0.33±0.05、0.37±0.06、0.50±0.08,均高于对照组(0.28±0.04)(P值均＜0.05);细胞浆中pPKCδ蛋白表达水平分别为0.38±0.06、0.31±0.05、0.35±0.05、0.36±0.05,均高于对照组(0.24±0.05)(P值均＜0.05).结论 砷可能通过调控pPKCδ蛋白表达,诱导其膜转位活化,导致燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展.     

HDAC1在燃煤污染型砷中毒患者血液及皮肤组织中的转录及表达

[目的]了解组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）在燃煤污染型砷中毒患者血液及皮肤组织中的转录及表达,探讨其在砷中毒发生、发展乃至癌变中的作用。[方法]在贵州省燃煤污染型地方性砷中毒病区,选择68例地方性砷中毒（以下简称“砷中毒”）确诊患者（轻度24例、中度28例、重度16例）为研究对象,其中40例经过皮肤病理学诊断,分为一般病变组（20例）、癌前病变组（14例）及癌变组（6例）。在距病区约12km的非砷暴露村,选择23例居民作为对照组。在知情同意的原则下,采集上述被调查者的外周血,采用实时荧光定量PCR（FQ．PCR）检测血中HDAC1 mRNA的表达。另收集自愿接受手术治疗的61例砷中毒患者皮肤组织标本（一般病变34例、癌前病变21例,癌变6例）和15例正常皮肤组织标本,采用免疫组织化学（IHC）法检测砷中毒患者皮肤及对照皮肤组织中HDAC1蛋白的表达。[结果]HDAC1 mRNA在对照组及轻、中、重度砷中毒患者外周血中表达的平均值分别为0．44457（0．37093—0．63904）、0．49286（0．08018～1．12747）、0．45185（0．24413～0．87641）和0．56676（0．30678～0．84471）,差异无统计学意义（χ^2=1．099,P〉0．05）;HDAC1 mRNA在一般病变组、癌前病变组和癌变组患者外周血中表达的平均值分别为0．32081（0．16723～0．83972）、0．50552（0．28280～1．43397）和0．80479（0．92123～1．89946）,差异无统计学意义（,=1．982,P〉0．05）。HDAC1蛋白在一般病变组、癌前病变组以及癌变组阳性表达率分别为100％、100％和83．33％,与对照组（46．67％）比较表达增强（P〈0．01）。[结论]HDAC1参与了砷中毒的发生发展,其蛋白表达增强可能是砷中毒发生的早期事件。     

燃煤污染型地方性砷中毒患者病情与血脂异常的关联分析

目的:了解燃煤污染型地方性砷中毒（简称燃煤型砷中毒）患者病情与血清脂代谢指标的关系。方法:采用病例-对照研究方法,在贵州省黔西南州雨樟镇燃煤型砷中毒病区村,将依据《地方性砷中毒诊断》（WS/T 211-2015）标准确诊的204例砷中毒患者纳入病例组,其中男性87例、女性117例,年龄为（53.37 ± 8.06）岁;...     

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。     

燃煤污染型砷中毒患者MGMT基因启动区甲基化及MGMT mRNA的表达

[目的]了解燃煤污染型砷中毒患者血中O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因（MGMT基因）启动区甲基化及患者皮肤组织中MGMT mRNA转录表达的情况，探讨两者间关系及其在砷中毒发生发展乃至癌变中的作用。[方法]采用甲基化特异性PCR法（MSP）检测99例砷中毒患者和103例正常对照MGMT基因启动区甲基化情况；同时采用原位杂交技术检测其中61例砷中毒患者皮肤组织中MGMT mRNA的表达情况。[结果]①砷中毒组MGMT基因启动区甲基化阳性率为40．4％，对照组为2．91％；随病情加重砷中毒患者甲基化阳性率逐渐升高，轻、中、重度砷中毒组甲基化阳性率分别为22．73％、39．02％和52．78％，非癌变组与癌变组甲基化阳性率分别为27．78％和65．00％，均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）。②随着砷中毒患者皮肤病变的加重，MGMT mRNA阳性表达率逐渐降低，其表达率在非癌变组与癌变组分别为71．05％和30．43％，两组间差异有统计学意义（P〈0．01）。③MGMT基因启动区甲基化阳性率升高与该基因mRNA表达降低有关联（r=0．456，P=0．01）。[结论]MGMT基因启动区高甲基化是砷中毒发生发展乃至癌变发生的早期事件；MGMT基因启动区高甲基化可导致MGMT mRNA转录水平下降并可能是进一步导致蛋白活性降低的重要原因之一。     

Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中作用

目的探讨Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用。方法选择贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者为砷暴露组(包括病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组),以非砷污染村34名健康居民为对照组;实时荧光定量PCR检测外周血Nrf2和Keapl mRNA表达,化学法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活力和丙二醛(MDA)含量。结果对照组、病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达量分别为0.650 5、0.690 4、0.877 8、1.283 4和1.393 5,Keapl mRNA表达量分别为1.569 1、1.451 0、1.395 4、1.048 9和0.882 0;与对照组、病区非病人组和无明显肝病组比较,轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达上调,Keapl mRNA表达下调,SOD活力降低(P<0.05);中重度肝病组GSH-Px和TrxR活力降低,MDA含量升高(P<0.05)。Nrf2 mRNA表达与酶活力呈负相关、与MDA含量呈正相关,Keapl mRNA表达与酶活力呈正相关(P<0.05)。结论燃煤砷可能通过调控Nrf2和Keapl mRNA表达量,调节机体氧化应激水平,参与砷中毒肝损伤的发生发展。     

燃煤型地方性砷中毒患者外周血淋巴细胞亚群的改变及意义

[目的]了解燃煤污染型地方性砷中毒患者外周血淋巴细胞亚群的变化,探讨其在砷中毒发生发展中的意义。[方法]中毒组为53名燃煤型砷中毒患者,暴露组为7名砷暴露者,对照组为32名健康者。从中毒组选取22例患者（一般病变组11例,癌前病变和癌变组11例）,采用流式细胞分析技术检测其外周血T淋巴细胞（CD3^＋）、辅助性T淋巴细胞（Th细胞,CD3^＋CD4^＋）、抑制性T淋巴细胞（Ts细胞,CD3^＋CD8^＋）、Th／Ts比值（CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋）、B淋巴细胞（CD3^-CD19^＋）和自然杀伤细胞[NK细胞,CD3^-CD（16＋56）^＋]的改变情况,并比较不同临床分度砷中毒患者和不同皮肤病损患者上述指标的差异。[结果]与对照组比较,轻、中、重度中毒组患者外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋和CD3^-CD19^＋淋巴细胞百分比均降低（P〈0.01或P〈0.05）,暴露组CD3^＋CD4^＋和CD3^-CD19^＋淋巴细胞百分比降低（P〈0.05）;重度中毒组CD3^-CD（16＋56）^＋细胞百分比高于对照组和暴露组（P〈0.05）;与一般病变组比较,癌前病变和癌变组外周血CD3^＋、CD3^＋CD4^＋和CD3^-CD19^＋淋巴细胞百分比均降低（P〈0.05）;[结论]Th细胞和B淋巴细胞可能是燃煤型砷污染致人体免疫损伤的早期靶点。燃煤型砷中毒患者外周血中Th细胞和B淋巴细胞百分比的降低可能在砷中毒的发生发展过程中起一定作用。     

氯化镉对大鼠肾细胞内MAPK基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氯化镉(CdCl2)对大鼠肾(NRK)细胞MAPK基因mRNA表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)染毒24 h后对NRK细胞存活率的影响;应用带有SYBR Green Ⅰ的实时荧光定量PCR技术观察不同浓度CdCl2(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)对NRK细胞内MAPK基因(ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2)mRNA表达的影响.结果 以阴性对照组(CdCl2 0μmol/L)NRK细胞存活率为100%,各染毒组(CdCl25.0、10.0、20.0和40.0μmol/L)NRK细胞存活率分别为72.28%、39.95%、15.66%、10.39%,且与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),并存在剂量-效应关系,经CdCl2染毒后,各实验组(CdCl2 2.5、5.0和10.0μmol/L)NRK细胞的ERK1/2、p38MAPK、JNK1/2基因的mRNA的相对表达量均低于阴性对照组(P<0.05或P<0.01).结论 CdCl2可能引起NRK细胞内MAPK基因mRNA的表达水平发生改变.     

p53基因甲基化和突变与燃煤污染型砷中毒关系研究

目的 探讨燃煤砷污染对人体p53基因甲基化(启动子区及第5外显子)和突变(第5外显子)的影响,分析其与燃煤型砷中毒的关系.方法 在贵州省兴仁县燃煤型砷中毒病区选择112例砷中毒患者,根据病情将其分为轻度中毒组(38例)、中度中毒组(43例)和重度中毒组(31例);根据有皮肤病理学诊断患者(43例)的病理结果,将其分为非癌变组(24例)和癌变组(19例).选择条件相似的非砷暴露村90名居民作为对照组.在知情同意原则下,采集上述观察对象的外周血,应用限制性内切酶-PCR法检测p53基因启动子区及第5外显子甲基化情况,应用PCR-单链构象多态性技术及PCR产物克隆测序技术检测p53基因第5外显子突变情况.结果 p53基因启动子区甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为13.16%(5/38)、27.91%(12/43)、45.16%(14/31),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为8.679、23.690、41.199,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为25.00%(6/24)和63.16%(12/19),与对照组[1.11%(1/90)]比较差异均有统计学意义(χ2值分别为18.762、57.497,P值均＜0.025).p53基因第5外显子甲基化阳性率在轻、中、重度组分别为55.26%(21/38)、51.16%(22/43)、48.39%(15/31),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为18.151、23.168、22.420,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为54.17%(13/24)和42.11%(8/19),与对照组[88.88%(80/90)]比较差异有统计学意义(χ2值分别为15.201、22.075,P值均＜0.025).p53基因第5外显子突变率在轻、中、重度组分别为5.26%(2/38)、16.28%(7/43)、25.81%(8/31),中、重度组与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.465、24.870,P值均＜0.017);在非癌变组和癌变组分别为16.67%(4/24)、31.58%(6/19),与对照组(0.00%)比较差异均有统计学意义(χ2值分别为15.545、30.077,P值均＜0.025).启动子区高甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.294,P＜0.05);第5外显子低甲基化与第5外显子突变相关(列联系数为0.410,P＜0.05).结论 燃煤砷污染可致人体p53基因启动子区高甲基化、第5外显子低甲基化和突变,上述甲基化改变均与p53基因突变相关联;p53基因甲基化改变可能是砷致p53基因突变以及砷致病或致癌的重要原因之一.

Abstract：

Objective To explore the influence of arsenic pollution caused by coal-burning on methylation(promoter and exon 5 ) and mutation (exon 5 ) of human p53 gene, and to analyze the relationship between methylation, mutation and arsenism. Methods According to the diagnostic criteria of endemic arsenism, 112 patients with arsenism (including 38 mild cases,43 moderate cases and 31 severe cases) were selected in the areas with endemic arsenism from Xingren, Guizhou province. Among the subjects ,43 cases were diagnosed by dermatopathological methods, and they were divided into non-cancerous group (24 cases) and cancerous group ( 19 cases ). 90 controls were selected from the non-arsenic polluted areas. Under the principle of informed consent, blood samples were collected from individuals. The methylation of p53 gene in promoter region and exon 5 were detected by extinction enzyme-PCR,the mutation of p53 gene (exon 5 ) was detected by PCR-SSCP,PCR products cloning and sequencing technology. Results The positive rates of methylation of p53 gene in promoter region were 13. 16% ( 5/38 ), 27.91% ( 12/43 )and 45. 16% (14/31) respectively among mild, moderate and severe arsenism group, which were obviously higher than the rates in the control group (1.11% (1/90), χ2 values were 8.679,23.690, 41. 199,respectively,both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene were 25.00% (6/24)and 63. 16% (12/19)in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously higher than those in the control group ( 1. 11% (1/90) ,χ2 values were 18. 762,57. 497,respectively,both P values ＜0. 025 ). The positive rates of methylation of p53 gene ( exon 5 ) were 55.26% ( 21/38 ), 51. 16% ( 22/43 )and 48. 39% (15/31)respectively among mild, moderate and severe arsenism group,which were obviously lower than the rates in the control group ( 88. 88% ( 80/90 ), χ2 values were 18. 151 , 23. 168,22. 420,respectively, both P values ＜ 0. 017 ). The positive rates of methylation of p53 gene (exon 5 ) were 54. 17%(13/24) and 42. 11% (8/19) in non-cancerous and cancerous group respectively, which were obviously lower than those in the control group ( 88. 88% (80/90), χ2 values were 15. 201,22. 075, respectively, both P values ＜ 0. 025 ). The mutation rates of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 5. 26% ( 2/38 ), 16. 28%(7/43) and 25.81% (8/31 )among mild, moderate and severe arsenism group; while the results in moderate and severe arsenism group were obviously higher than in the control group (0. 00% ,χ2 values were 15.465,24. 870,respectively,both P values ＜ 0. 017). The positive rate of mutation of p53 gene ( exon 5 ) were respectively 16. 67% (4/24) and 31.58% ( 6/19 ) in non-cancerous and cancerous group, which were obviously higher than it in the control group (0. 00%, χ2 values were 15. 545,30. 077, both P values ＜0. 025). The hypermethylation of p53 gene in promoter region was related with the mutation of p53 gene ( exon 5) ( coefficient of association was 0. 294, P value ＜ 0. 05 ); and the hypomethylation of p53 gene (exon 5 ) was related with the its mutation ( coefficient of association was 0. 410, P value ＜ 0. 05 ).Conclusion Arsenic pollution caused by coal-burning can cause the hypermethylation of p53 gene in promoter region, hypomethylation and mutation of p53 gene ( exon 5 ), and the changes of methylation of p53 gene are related with its mutation and might be one of the important etiological factors of arsenic pathogenicity or carcinogenesis.     

基于DNA损伤与修复抑制初探银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者肝损伤的影响

目的:探讨DNA损伤和修复抑制在银杏叶片对燃煤污染型砷中毒患者肝损伤影响中的作用。方法:2017年3月在贵州省兴仁县雨樟镇交乐村砷中毒病区,按照《地方性砷中毒诊断》（WS/T 211-2015）标准和《职业性中毒性肝病诊断标准》（GBZ 59-2010）,筛选出52例砷中毒患者作为银杏叶片干预组,49例砷中毒患者作为干...     

刺梨制剂对燃煤型砷中毒患者免疫功能的调节作用

目的 探讨刺梨制剂对燃煤型砷中毒患者免疫功能的影响.方法 依据地方性砷中毒诊断标准(WS/T 211-2001)选择贵州省燃煤型砷中毒病区患者62例,采用分层随机化分组法将其分为两组:刺梨汁组和强化超氧化物歧化酶(SOD)刺梨汁组,各31例,分别给予刺梨汁和强化SOD刺梨汁口服干预,剂量为120 ml/d,连续服用1个月;另选择12 km以外非燃用高砷煤的30名健康居民为对照组.采集研究对象的尿液50 ml及外周血2ml,并对其尿砷含量、外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞的变异情况及血清中的IgG、IgM、IgA、补体C3和C4含量进行检测.对以上指标各组间的差异进行比较;分析尿砷含量与各项免疫指标的相关性.结果 刺梨汁、强化SOD刺梨汁组干预前及对照组尿砷含量分别为(76.55±23.02)、(72.60±25.91)、(26.33±11.30)μg/g肌酐,IgG分别为(11.31±1.68)、(11.35±1.94)、(9.23±1.75)g/L,差异均有统计学意义(F值分别为82.01、13.82,P值均＜0.05),二干预组干预后尿砷含量分别为(53.21±16.51)、(51.72±17.70) μg/g肌酐,均低于干预前(t值分别为5.80、3.78,P值均＜0.05);二干预组干预前及对照组的T淋巴细胞CD3+阳性率分别为(44.47±7.14)％、(43.44±6.61)％、(70.78±5.26)％,CD4+阳性率分别为(29.87±5.67)％、(29.42±5.87)％、(46.08±5.87)％,CD4+与CD8+比值分别为(1.25±0.42),(1.22±0.39)、(1.79±0.26),补体C4分别为(0.13±0.08)、(0.13±0.09)、(0.20±0.ll)g/L,差异均有统计学意义(F值分别为178.04、76.71、23.13、5.26,P值均＜0.05),干预后二干预组CD3+的阳性率分别为(59.73±7.38)％、(66.31±7.57)％,CD4+阳性率分别为(34.00±7.97)％、(39.11±5.81)％,CD4+与CD8+比值分别为(1.41±0.37)、(1.58±0.26),均高于干预前(t值分别为12.47、25.18、5.41、10.47、3.22、5.05,P值均＜0.05).尿砷与CD3+、CD4+阳性率、CD4+与CD8+比值、C4含量呈负相关,与IgG呈正相关(r值分别为-0.68、-0.56、-0.51、-0.43、0.36,P值均＜0.01).结论 燃煤型砷中毒患者尿砷水平与免疫功能抑制密切相关,刺梨制剂可有效提升燃煤型砷中毒患者免疫功能.     

高砷煤烘玉米粉致大鼠砷中毒模型的建立

目的 采用高砷煤烘烤的玉米粉为主要原料配制饲料喂饲大鼠,建立燃煤型砷中毒大鼠模型.方法 采用健康断乳Wistar大鼠50只,按体重用随机数字法分为5组(正常对照组,饮水型砷中毒组,低砷、中砷和高砷粮食污染组),每组10只.正常组和饮水型砷中毒组喂饲不含砷的标准饲料,饮水型砷中毒大鼠饮用100 mg/L的As2O3水溶液,各粮食砷污染组分别喂饲含砷25、50、100 mg/kg的饲料,染毒时间3个月.观察大鼠一般情况,检测其尿砷、毛发砷、肝砷和肾砷含量;观察肝、肾常规病理学改变及肝脏超微结构改变;测定检测肝肾功能指标.结果 饮水型砷中毒组、低砷、中砷和高砷粮食污染组尿砷[中位数(最大值～最小值)分别为3055.59 (722.43～ 6389.05)、635.96(367.85 ～1551.31)、1453.84(593.27～5302.94)、3101.11 (666.64～6858.61) μg/g肌酐]、毛发砷[分别为(23.07±10.38)、(8.87±3.31)、(12.43±6.65)和(25.68±7.16)μg/g]、肝脏中砷[分别为(5.68±3.13)、(2.64±1.52)、(3.89±1.76)和(5.34±2.78)μg/g]、肾脏中砷[分别为(6.90±1.94)、(3.48±1.96)、(5.03±2.08)和(7.02±1.62) μg/g]含量均高于正常对照组[分别为86.70(49.71～ 106.104) μg/g肌酐、(1.28±0.37) μg/g、(1.01 ±0.34)μg/g和(1.82±1.09) μg/g],差异有统计学意义(P＜0.05).电镜下可见染砷组大鼠肝细胞质线粒体减少、嵴模糊、部分嵴消失,粗面内质网减少,核形态不规则、凹凸不平.中、高砷粮食污染组天冬氨酸氨基转移酶(AST)[(196.17±46.18)、(212.40±35.14) U/L]和总胆汁酸(TBA)[(11.74±4.07)、(19.19±4.68) μmol/L],均高于对照组[分别为(143.10±29.13) U/L、(6.23±2.95)μmol/L];高砷粮食污染组谷胱甘肽硫转移酶(GST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和尿素氮(BUN)[分别为(196.21±47.38)U/L、(1.71±0.66) U/L、(9.54±1.95) mmol/L]高于正常对照组[分别为(134.93±24.80)U/L、(0.75±0.36) U/L、(7.67±1.02) mmol/L];低、中、高砷粮食污染组胆碱酯酶(CHE)[分别为(259.90±52.71) U/L、(263.44±66.06) U/L、(244.90±36.14) U/L],高砷粮食污染组总蛋白(TP) [(62.64±5.50) g/L]均低于正常对照组[分别为(448.33±59.67) U/L、(69.38 ±4.24) g/L];高砷粮食污染组TBA[(19.19±4.68) μmol/L]高于饮水型砷中毒组[(15.15±2.64) μmol/L],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 成功建立燃煤污染型砷中毒大鼠模型.     

燃煤型砷中毒患者皮肤P53mt蛋白的表达

目的研究P53mt蛋白在燃煤型砷中毒患者皮肤中的表达情况。方法根据病理学诊断结果将患者分为癌变组（A组,18例）、癌前组（B组,11例）和一般病变组（C组,39例）,P53mt蛋白的检测用免疫组化两步法。结果A、B、C3组P53mt蛋白阳性细胞密度分别为38.07±29.00、17.16±15.00和4.05±8.24,3组间差异有显著性（A和CP<0.01,A和BP<0.01,B和CP<0.05）,而正常组未发现阳性表达;A、B、C3组的阳性率分别为88.89%、72.73%和25.64%（A和CP<0.01,B和CP<0.05）;3组间阳性分级构成差异有显著性（P<0.01）,A组Ⅱ、Ⅲ级占38.89%,而B、C两组仅分别为9.09%和2.56%。结论燃煤型砷中毒致皮肤癌变过程中,P53mt基因起一定作用。P53mt蛋白的检测可用于燃煤型砷中毒病变皮肤的良、恶性鉴别。     

氯化镉对大鼠肾上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶表达及其磷酸化的影响

目的 探讨氯化镉染毒大鼠正常肾上皮(normal rat kidney epithelial,NRK)细胞对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达及其磷酸化水平的影响.方法 应用不同剂量(0、1、5、10、20、40 μmol/L)氯化镉染毒NRK细胞24 h和同一剂量氯化镉(10 μmol/L)于不同时间(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h)染毒NRK肾细胞.采用蛋白免疫印迹法检测氯化镉染毒后NRK细胞中MAPK表达水平,并用磷酸化抗体检测MAPK磷酸化水平.结果 不同氯化镉剂量和不同染毒时间染毒NRK细胞,发现MAPK表达无明显改变,但MAPK磷酸化蛋白表达量较对照组升高.氯化镉浓度在10 μmol/L时p-ERK1/2表达明显,表达量为1. 00±0.06;20 μmol/L和40 μmol/L剂量组表达量分别为2.58±0.11、2.76±0.23,比10 μmol/L组高1.58倍和1.76倍,差异有统计学意义(F=827.70,P＜0.01);氯化镉浓度为20 μmol/L(2.47±0.20)和40 μmol/L(3.73±0.25)时p-p38MAPK表达量比对照组(1.00±0.02)高1.47倍和2.73倍,差异有统计学意义(F=280.06,P＜0.01).p-ERK1/2和p-p38MAPK表达量与氯化镉浓度存在剂量-效应关系(p-ERK1/2相关系数为r=0.919,t=4.69,P=0.009;p-p38MAPK相关系数为r=0.945,t=5.79,P=0.004).MAPK磷酸化蛋白表达水平也与染毒时间相关,p-ERK1/2在染毒1 h(1.26±0.11)时表达明显,染毒4 h(1.51±0.07)和8 h(3.53±0.23)时表达量是对照组(1.00±0.02)的1.5倍和3.5倍,差异有统计学意义(F=427.82,P＜0.001);p-p38MAPK在染毒1 h(1.31±0.07)时表达也明显增加,染毒4 h(3.53±0.32)和8 h(4.41±0.38)时表达水平是对照组(1.00±0.03)的3.5倍和4.4倍,差异有统计学意义(F=280.06,P＜0.001).结论 氯化镉染毒NRK细胞可引起MAPK蛋白磷酸化水平明显升高,可能与MAPK的激活有关.     

MAPKs信号通路在光气吸入性肺损伤中的表达及作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)的亚通路信号蛋白-细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)、P38和c-氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在大鼠光气吸入肺损伤组织中的表达及各通路在光气吸入性肺损伤中的作用.方法 选取30只雄性Wistar大鼠随机分成空气对照组、光气吸入组、PD98059(ERK1/2特异性阻断剂)、SB203580(P38特异性阻断剂)和SP600125(JNK特异性阻断剂)干预组,每组6只,应用定向流动光气吸入装置,复制大鼠光气(8.33 L/mg)吸入性肺损伤的模型,空气对照组吸入空气,3个干预组均在光气(8.33 L/mg)吸入前给予PD98059、SB203580、SP600125.分别采用免疫组化及蛋白质印迹( Western blot)法检测肺组织MAPKs(ERK1/2、P38、JNK)蛋白及磷酸化蛋白p-MAPKs (p-ERK 1/2、p-P38、p-JNK)的定性定量表达.观察肺组织病理学改变、计数支气管灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、测定肺湿干比.结果 空气对照组仅肺泡上皮细胞及气道上皮细胞见少量p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性表达;光气吸入组p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性细胞数明显增多,广泛分布于肺内细胞:肺泡上皮细胞、气道上皮细胞、胸膜间皮细胞、浸润炎细胞及间质纤维细胞;干预组p-ERK1/2、p-P38、p-JNK阳性细胞数减少.各组ERK、P38、JNK的表达无明显变化;光气吸入组较空气对照组p-P38、p-JNK蛋白表达增强,3个干预组的p-ERK1/2、p-P38、p-JNK的蛋白表达水平均低于光气吸入组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与空气对照组[中性粒细胞计数:(2.05±0.75)×104,肺湿干比:(3.64％±0.72％)]比较,光气吸入组肺损伤程度严重,表现出肺损伤的典型病理学特征,且BALF中中性粒细胞数[(10.78±2.16)×104]增多,肺湿干比(7.65％±0.58％)升高,SP600125干预组和SB203580干预组BALF中中性粒细胞数[SP600125组:(7.86±2.12)×104,SB203580组:(8.43±1.51)×104]和肺湿干比[SP600125组:(6.10％±0.97％),SB203580组:(6.09％±1.43％)]降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 光气吸入可能激活MAPK信号通路,通过p-MAPKs表达增加在光气吸入后的肺损伤中发挥作用,其中以p-P38、p-JNK活性变化为主.     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用

目的研究P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用。方法采用大鼠内毒素ALI模型,48只Wistar大鼠随机分为假手术对照组（A组）、内毒素组（B组）、SB203580组（C组）,16只／组。观察肺组织中p38MAPK、肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、血清NO浓度、肺组织MDA含量的变化,于LPS滴注后6h取动脉血行血气分析,同时观察肺组织病理形态学改变。结果与A组比较,B组、c组p38MAPK显著升高（P〈0．01）;与B组相比,C组p38MAPK显著降低（P〈0．05）;与A组比较,B组、C组肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、血清NO浓度、肺组织MDA显著增加,而PaO2和HCO3^-明显降低（P〈0．01）;与B组比较,C组以上指标显著降低而PaO2和HCO3^-明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。病理学检查显示C组肺组织损伤程度较B组明显减轻。结论p38MAPK信号转导通路的活化可能是内毒素性急性肺损伤的重要发病机制之一。     

Urinary porphyrins in patients with endemic chronic arsenic poisoning caused by burning coal in China

Objective  To evaluate the effect of arsenic (As) on the porphyrin biosynthetic pathway, urine samples from patients with endemic chronic arsenic poisoning were examined. Subjects and Methods  The subjects were 16 patients, who had been exposed to As from burning coal for 8 to 25 years, and 16 controls living in the same region in Guizhou Province in southwest China. Concentrations of urinary As, porphyrins and ALA were determined by induced coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS), high performance liquid chromatography (HPLC) with a reversed-phase column and fluorescence detector, and colorimetric spectrophotometry, respectively. Results  Concentrations of As in patients and controls, 184.40±200.04 and 86.82±64.20μ g/g creatinine (mean ±SD) respectively, were significantly different (p<0.05). The concentrations of various kinds of urinary porphyrins, including isomers I and III of coproporphyrin and pentacarboxylporphyrin, were determined. Positive correlations were observed between As and porphyrins (e.g. total porphyrins, hexacarboxylporphyrin and coproporphyrin III) or between As and ALA in male and female patients. However, porphyrin and ALA concentrations were not significantly different between the patients and the controls. Urinary porphyrin concentrations in females were higher than those in males. Conclusion  Exposure to As from burning coal may influence porphyrin biosynthesis.     

姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中VEGF和HIF-1α表达通过PI3K／AKT／FRAP信号传导通路

目的探讨MAPK和PI3K信号传导通路在姜黄素调节VEGF和HIF-1α表达中的作用。方法分别加入LY29400225μmol／L、50μmol／L，U012610μmol／L、20μmol／L，rapamycin 5ng／ml、10ng／ml处理人肝癌细胞BEL-7402，30min后加入姜黄素10μmol／L，对照组单独加入0、10μmol／L姜黄素，缺氧环境中培养6h后，行RT—PCR和Western Blot检测VEGF蛋白、mRNA和HIF-1α蛋白表达；分别加入不同浓度的的姜黄素以及LY294002 25 μmol／L处理人肝癌细胞BEL-7402，缺氧环境中培养6h后，行Western Blot检测磷酸化AKT和总AKT蛋白表达。结果姜黄素10μmol／L＋LY29400225μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋LY294002 50 μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋rapamycin 5 ng／ml组、姜黄素10μmol／L＋rapamycin 10 ng／na组HIF-1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10μmol／L组相比降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；而姜黄素10μmol／L＋U012610μmol／L组、姜黄素10μmol／L＋U0126 20 μmol／L组HIF—1α蛋白、VEGF蛋白、mRNA表达分别与姜黄素10μmol／L组相比差异无统计学意义（P〉0.05）；不同浓度的姜黄素、LY294002 25 μmol／L处理的人肝癌细胞BEL-7402缺氧6h后磷酸化AKT蛋白表达逐渐降低，LY294002 25 μmol／L可以基本阻断磷酸化AKT蛋白的表达，而对总AKT蛋白表达无明显变化。结论姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α蛋白和VEGF的表达通过P13K／AKT／FRAP信号传导通路。     

亚慢性镉暴露BALB/c小鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路蛋白在肾损伤中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）和细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinases,ERK）在亚慢性镉染毒小鼠肾脏损害发生后表达的变化及其意义。方法 21只雌性BALB/c小鼠随机分成3组,高、低剂量染镉组分别腹腔注射CdCl2溶液10.0、2.5 μmol/kg,对照组腹腔注射等量生理盐水,每周3次连续染毒14周。对肾脏进行苏木精-伊红(HE)染色、碘酸雪夫(PAS)染色和胶原纤维染色（Masson染色）,观察肾组织病理变化;免疫印迹(Western blot)法检测肾脏中ERK、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白及其磷酸化蛋白的表达差异。结果 高剂量染镉组pERK、pp38和pJNK蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),低剂量染镉组pJNK蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。镉染毒组的bcl-2、bax蛋白表达水平降低,且bcl-2/bax比值低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。镉染毒组肾小球和肾小管均有损害。结论 CdCl2可能通过调节ERK、JNK和p38蛋白激酶信号相关蛋白表达水平的变化,引发肾脏损害。     

PM2.5通过p38MAPK信号通路对HBE细胞癌基因表达的影响

目的 探讨大气细颗粒物PM_2.5通过p38MAPK信号通路对人支气管上皮（human bronchial epithelial,HBE）细胞癌基因表达的影响。方法 设立空白对照组、PM_2.5组、SB203580组、PM_2.5+SB203580组。以10 µmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580预先处理HBE细胞30 min,接着用无血清DMEM培养基培养24 h作为SB203580组;用50 µg/mL PM_2.5染毒24 h作为PM_2.5组;用10 µmol/L的SB203580预先处理HBE细胞30 min,然后用50 µg/mL的PM_2.5染毒24 h作为PM_2.5+SB203580组;应用荧光定量PCR和Western blot检测C-MYC、C-FOS、K-RAS、P53、p38MAPK基因的mRNA和蛋白质表达水平变化。结果 与对照组比较,PM_2.5组C-MYC、C-FOS、K-RAS、p38MAPK基因表达分别升高54.0%、49.2%、96.1%、74.1%,P53基因表达下降49.1%（均P<0.01）。与PM_2.5组比较,PM_2.5+SB203580组C-MYC、C-FOS、K-RAS和p38MAPK基因表达分别下降21.4%、20.8%、39.3%和21.4%,P53基因表达升高43.1%（P<0.01或P<0.05）。Western blot结果显示,与对照组相比,PM_2.5组C-MYC、C-FOS、K-RAS、p38MAPK蛋白表达分别升高110.6%、46.7%、35.5%、82.8%,P53蛋白表达下降42.7%（均P<0.01）。与PM_2.5组比较,PM_2.5+SB203580组C-MYC、C-FOS、K-RAS和p38MAPK蛋白表达分别下降37.7%、16.2%、19.6%和25.9%,P53蛋白表达上升43.5%（P<0.01或P<0.05）。结论 p38MAPK抑制剂明显影响PM_2.5对癌基因表达的作用,提示p38MAPK信号通路在PM_2.5致癌基因表达作用中发挥重要作用。