大鼠成骨细胞的体外培养研究

目的:改良大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法。方法:采用改良的胰蛋白酶和I型胶原酶联合的二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养、扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过成骨细胞形态学、茜素红矿化结节染色法观测,确定其增殖与成骨活性。结果:改良的二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。形态学、茜素红染色均呈阳性结果。结论:改良的二次酶消化法能够在更短时间内获得大量的高纯度的成骨细胞,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究模型。     

人松质骨成骨细胞的培养

以成年老年人股骨颈部松质骨为材料,采用酶法建立人成骨细胞体外模型,结果示：（１）来源于松质骨的成骨细胞早期以多角形、梭形为主,后期以梭形为主;（２）成骨细胞早期有黑色颗粒分泌,２ 周后出现黑色结节;（３）骨钙素的分泌以第１４ 天左右达到最高,以后则递减。本法有取材方便,可得到大量、纯化的成骨细胞的优点。     

杜仲叶提取物对体外培养的成骨细胞代谢功能调节研究

目的：研究杜仲叶提取物对体外培养成骨细胞（Osteoblast OB)代谢功能的调节作用,从而进一步明确杜仲补肾,强筋健骨的作用机理以及筛选杜仲叶防治骨质疏松药效成分,方法：用杜仲叶三个提取部位（Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ）不同浓度对体外培养的成骨细胞作用,由新生SD大鼠头盖骺作原代培养,用传代的第一代细胞做药效试验,测定指标：（1）细胞增殖情况,用MTT计数法[1,2];（2）碱性磷酸酶（ALP）活性测定,对硝基磷酸盐法。结果：Ⅱ,Ⅲ提取部位对细胞增殖作用与对照组比较,P＜0．001,ALP的活性与对照组比较,三个部位均为P＜0．001,结论：表明Ⅱ,Ⅲ提取部位的10^-5mg/L浓度组具有明显的调节骨代谢功能的药效作用。     

接骨药对体外培养成骨细胞增殖影响的研究

目的：观察接骨药对人成骨细胞增殖的影响。方法：从成人骨髓来源的成骨细胞在含不同浓度接骨药的RPMI1640培养液中培养1、3、5、7天，用细胞计数法和MTT比色法观察接骨药对其增殖的影响，结果：本实验条件下不同浓度的接骨药能促进成骨细胞的增殖，且促进作用与浓度、时间呈正相关。     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的：观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法：利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞，倒置相差显微镜观察其形态，碱性磷酸酶（ALP）染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞，使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析、骨钙素（BGP）含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果：增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达，促进成骨细胞的增殖及骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论：增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖，促进骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响1

目的：研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：取SD大鼠48只，随机将大鼠分为A组（空白组）、B组（倍美力组）、C组（普拉固组）、D、E、F组（红曲高、中、低剂量组）六组，按10ml／kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液（6.25μg／ml）、普拉固水溶液（0．2mg／m1）及红曲水提液（1．25g／ml、0．625g／ml、0．125g／ml）灌胃。灌骨10天后，制备含药血清；将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中，然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果：经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量（P〈0．01或P〈0．05）、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成，作用随红曲剂量的增加而增加。结论：成功地运用血清药理学的方法，模拟了体内的药理环境；证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

体外冲击波在骨科中的应用及作用机理

体外冲击波作为一种非侵入性的治疗方法,除治疗尿路结石、涎腺结石和胆囊、胰管结石外,近年来在国内外还广泛用于骨科领域,并且在治疗一些肌肉骨骼疾病方面取得较好的疗效.但是,这些疾病只占骨科疾病的一小部分,体外冲击波在骨科领域的应用还需大力扩展,并且,体外冲击波对一些软组织疾病的作用机理和生物学效应尚未阐明.笔者查阅国内外有参考价值的文献,今就体外冲击波在骨科领域的应用情况和作用机理,以及目前冲击波治疗中存在的问题发表自己的粗浅看法,希望引出同行更高的见解. 1 体外冲击波在骨科领域中的应用     

接骨药对体外培养成骨细胞增殖影响的研究

目的观察接骨药对人成骨细胞增殖的影响.方法从成人骨髓来源的成骨细胞在含不同浓度接骨药的RPMI1640培养液中培养1、3、5、7天,用细胞计数法和MTT比色法观察接骨药对其增殖的影响.结果本实验条件下不同浓度的接骨药能促进成骨细胞的增殖,且促进作用与浓度、时间呈正相关.     

骨髓间充质干细胞在骨科中的应用

骨髓间充质干细胞(BMSC)是一种来自中胚层发育的早期干细胞,具有多向分化潜能的特性,可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。临床上还运用BMSC治疗骨科疾病大量的体外实验已获成功。     

当归四逆汤在骨科疾病中的应用概况

当归四逆汤为桂枝类方,该方原治厥阴伤寒。《伤寒论》第351条云：“手足厥寒,脉细欲绝者,当归四逆汤主之。”第352条云：“若其人久有内寒者,宜当归四逆加吴茱萸生姜汤。”厥阴主肝,肝主藏血,肝血充盈,则可内灌脏腑,外注经络,四肢经脉皆得充盈温养,故四肢温和而     

易筋经锻炼在骨科疾病治疗中的应用

<正>由于不良生活习惯及错误的锻炼方式,导致现代人骨伤科疾病高发,且许多常见骨伤科疾病目前仍无有效的治疗药物和手段。功法锻炼在现代临床骨科疾病的治疗中不断地被应用于临床。易筋经是一种传统导引术,已有千余年历史。近年来国家推广全民健身气功,易筋经作为源于中国传统文化的功法,受到广大群众的认可。现将易筋经锻炼在骨伤科临床应用现状综述如下。1颈型及神经根型颈椎病目前,仅有采用易筋经锻炼结合其他方法治     

成人骨髓基质成骨细胞体外培养及鉴定

目的：观察成人骨髓基质成骨细胞(Bone Marrow Stromal Osteoblasts，BMSO)在体外的培养条件，为研制骨组织工程材料选择种子细胞奠定实验基础。方法：抽取成年男性髂骨骨髓5ml，离心分离出骨髓基质细胞，DMEM条件培养基培养，并诱导其向成骨细胞分化。观察原代及传代细胞的生长特性和生长曲线，测定培养细胞分裂指数和贴壁率。第2代细胞持续培养20天，观察钙化结节形成情况。结果：成人骨髓基质细胞可以诱导生成BMSO。第2代细胞持续培养20天，可以观察到钙化结节。生成的BMSO生长至第7代，性状稳定，生长曲线与第二代相似；第5天分裂指数最高，为87．1％；传代后12小时贴壁率最高。结论：成人骨髓基质成骨细胞在体外培养条件下，早期生长性状稳定，增殖速度快，适应性强，成骨作用确切，可作为骨组织工程学的种子细胞。     

人成骨细胞的离体培养和鉴定

目的:建立人成骨细胞离体培养技术。方法:取健康儿童骨科手术时髂骨松质骨,采用蛋白酶分次消化法分离成骨细胞,采用形态学和碱性磷酸酶染色和定量测定鉴定。结果:实验中得到的人成骨细胞纯度高,性状良好。结论:蛋白酶分次消化法处理人髂骨松质骨可以得到纯度高、性状好的成骨细胞。     

漏芦黄酮对成骨细胞的体外毒性实验研究

目的:考察中药漏芦黄酮对体外培养成骨细胞的细胞毒性。方法:用M TT比色法,通过测定各药物组活细胞OD值(optica l dens ity,OD)间接计算出不同浓度药物对细胞生长的抑制率,进而考察细胞毒性大小。结果:在0.09%到1.92%的浓度范围内,药物浓度与细胞抑制率呈负相关。结论:漏芦黄酮对体外培养成骨细胞有一定细胞毒性。     

健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞增殖作用的研究

目的:探讨健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法:采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙丸提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果:在培养24h后,健骨二仙丸提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论:健骨二仙丸提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

红曲提取物对体外培养成骨细胞的作用研究

目的：研究红曲不同提取物对体外培养大鼠成骨细胞（ROB）增殖、分化的影响。方法：采用新生大鼠颅骨分离培养ROB,MTT法测定细胞增殖,碱性磷酸酶（ALP）试剂盒法测定ALP活性,观察红曲提取物对ROB增殖、分化的作用,同时考察了MTT法和ALP试剂盒法中细胞数和吸收值之间的线性关系。结果：10^-2和10^-3mg/ml的水提物能刺激ROB的增殖（P〈0.05）,10^-3mg/ml的水提物还能提高ROB的ALP活性（P〈0.05）;10^-2和10^-3mg/ml的95%乙醇提取物对ROB的增殖与分化均有明显的促进作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论：红曲水提物和95%乙醇提取物均能促进ROB骨形成过程中增殖、分化,95%乙醇提取物作用效果显著。     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞,倒置相差显微镜观察其形态,碱性磷酸酶(ALP)染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞,使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析、骨钙素(BGP)含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达,促进成骨细胞的增殖及骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖,促进骨形成,增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。     

不同中药含药血清对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的:研究中药骨康及其中补肾、健脾、活血各成分吸收后不同血清对离体大鼠成骨细胞增殖的影响及其对成骨细胞分泌白介素-6(1L-6)的影响。方法:采用胶原-胰蛋白酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,然后以中药骨康及其中补肾、健脾、活血成分吸收后血清,加入体外培养成骨细胞中进行培养,MTT法测成骨细胞增殖,ELISA法测培养上清中IL-6含量。结果:发现中药骨康吸收后血清能促进成骨细胞的增殖和分化,补肾成分吸收后血清亦能促进成骨细胞的增殖和分化,健脾、活血各成分吸收后血清对成骨细胞无明显影响,同时,中药骨康及其中补肾成分含药血清可作用于成骨细胞,使分泌其IL-6的能力下降。而中药骨康含药血清的作用明显优于补肾成分含药血清的作用。结论:中药骨康及其中补肾成分含药血清能够促进成骨细胞的增殖与分化从而促进骨形成,同时可抑制成骨细胞分泌IL-6,健脾、活血二法是补肾法的良好补充。     

乌头汤在骨科杂病中的应用与研究进展

目的:为乌头汤在骨科杂病中进一步研究和开发利用提供依据。方法:通过查阅近5 a的相关文献,综述乌头汤在骨伤科杂病中的临床应用、药理研究近况。结果:乌头汤对类风湿性关节炎、腰椎间盘突出症、强直性脊柱炎、膝骨关节炎等疗效确切。结论:可遵循辨证论治的原则,扩大古方的临床应用和实验研究范围。     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)六组,按10 ml/kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液(6.25μg/ml)、普拉固水溶液(0.2 mg/ml)及红曲水提液(1.25g/ml、0.625 g/ml、0.125 g/ml)灌胃。灌胃10天后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P<0.01或P<0.05)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成,作用随红曲剂量的增加而增加。结论:成功地运用血清药理学的方法,模拟了体内的药理环境;证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。