香菇多糖对HL—60细菌酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

目的：研究香菇多糖对人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响。方法：以不同浓度的药物处理体外培养的ＨＬ－６０细胞，用放射免疫法测定经过培养４８ｈ的对照组和药物处理组胞浆和膜部分的酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶（ＰＴＰＰ）的活力，比较酶活力变化情况。结果：药物对胞浆和膜两部分ＴＰＫ活力均有一定程度的抑制，但抑制作用不明显（Ｐ〉０．０５），而对两部分ＰＴＰＰ活力均有明     

蛋白质酪氨酸磷酸化水平在PC12细胞分化过程中的变化

研究表明,酪氨酸蛋白激酶(TPK)和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)与细胞分化关系密切.本文作者采用体外标记的方法研究1,25(OH)2D3诱导PC12细胞分化过程中胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平变化及P-Tyr含量的变化,从而进一步揭示酪氨酸磷酸化与诱导分化间的关系.     

组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力测定方法

目的 介绍一种组织细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶（TPK）活力测定方法。方法 密度梯度离心分离小鼠肝和骨骼肌细胞膜成分，不进行膜胰岛素受体纯化，用单位膜蛋白胰岛素刺激前后的膜TPK活力改变值，作为评估组织细胞膜胰岛素受体TPK活力的定量指标，并与传统方法的单位膜蛋白麦胚凝集素（WGA）亲和层析纯化后的胰岛索受体胰岛紊刺激前后的TPK活力改变值进行比较。结果 每mg膜蛋白基础（无胰岛索刺激）TPK活力明显高于每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力（P〈0．01）；每mg膜蛋白经胰岛素刺激的TPK活力改变值与每mg膜蛋白纯化后的胰岛素受体TPK活力改变值无显著差别（P〉0．05）。结论 组织细胞膜上存在TPK，用胰岛素刺激的组织细胞膜TPK活力改变值，可作为组织细胞膜胰岛素受体特异TPK活力。本方法不需要纯化组织细胞膜胰岛素受体，可作为评价组织细胞膜胰岛紊受体功能的实用科研技术。     

角质细胞生长因子对人卵巢癌细胞系CAOV3酪氨酸蛋白激酶活性及表达的影响

目的观察角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖及酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及表达的影响。方法培养人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,用四甲基偶氮蓝(MTT)比色法测定不同浓度KGF对细胞增殖的影响;通过免疫沉淀法纯化蛋白并用TPK试剂盒测定TPK活性;免疫印迹法(Western-blot)测定TPK表达。结果实验组CAOV3细胞增殖率、TPK活性及表达均大于对照组(P<0·05)。结论KGF可以促使人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3增殖,机制与其增强TPK活性及表达有关。     

TNFα对小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶活力影响

目的观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对KM小鼠骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力的影响。方法80只清洁级KM小鼠随机分为TNFα高剂量连续注射组(TH组,n=20)、TNFα低剂量连续注射组(TL组,n=20)、TNFα高剂量一次注射组(T1组,n=20)和正常对照组(C组,n=20)。密度梯度离心分离组织细胞膜,麦胚凝集素(WGA)亲和柱层析纯化膜胰岛素受体,外源聚谷-酪多肽底物同位素32P掺入法测定酪氨酸蛋白激酶(TPK)活力,观察各组胰岛素刺激前后的离体骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化。结果1)TH和TL组基础(无胰岛素刺激)骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力均明显低于C组,且TH组明显低于TL组(P均<0.01);2)TH组和TL组胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均明显低于C组,且TH组明显低于TL组,(P均<0.01);3)T1组无论基础还是胰岛素刺激的骨骼肌和肝细胞膜胰岛素受体TPK活力变化值均与C组无显著差别(P>0.05)。结论TNFα可抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,在组织细胞膜胰岛素受体信号转导障碍中发挥重要作用。TNFα抑制组织细胞膜胰岛素受体TPK活力,需连续刺激,一次刺激作用效果不明显。     

缺氧复合梭曼中毒对PC12细胞中IL-4、IL-8和TPK活性的影响

目的研究缺氧复合梭曼中毒PC12细胞中白介素-4、白介素-8(IL-4、IL-8)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的变化.方法采用ELISA法和放射免疫技术检测缺氧复合梭曼中毒PC12细胞的IL-4、IL-8和TPK活性.结果单纯梭曼中毒PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在中毒2 h升高,12 h活性水平最高,24 h活性降低.缺氧复合梭曼中毒组PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在缺氧中毒2 h升高,6 h最高,12 h活性降低,各时相点均明显高于正常对照组.结论提示酪氨酸蛋白激酶、IL-4、IL-8参与缺氧复合梭曼中毒所致脑损伤的发病机制.     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

酪氨酸蛋白激酶活性与2型糖尿病关系的研究

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶(TPK) 的活性与2 型糖尿病之间的关系,并对影响TPK 活性的因素作初步研究。方法:以Poly(Glu,Tyr)4∶1 为底物,用放射性核素磷(32P)标记的方法来测定正常人及2型糖尿病患者淋巴细胞膜上TPK 的活性。结果:2 型糖尿病患者TPK活性有显著下降,Mn2 、Mg2 和ATP的加入均能提高正常人TPK活性。结论:2 型糖尿病的发生可能与TPK的缺陷有关     

缺氧PC_(12)细胞中细胞因子和酪氨酸蛋白激酶活性的变化

目的 研究缺氧对PC12细胞中IL-1β、4、8、13(白介素-1β、4、8、13)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响.方法 采用放射免疫技术和ELISA法检测缺氧后PC12细胞的IL-1β、4、8、13和TPK活性.结果 缺氧后PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-1β、4、8、13活性在缺氧中毒2h升高,6h最高,12h活性降低,各时相点均明显高于正常对照组.结论 提示在缺氧所致的脑损伤发病机制中酪氨酸蛋白激酶、细胞因子及其相关的细胞内信号传递方面起了重要的作用.     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

香菇多糖协同阿糖胞苷对HL-60白血病细胞增殖力的影响

目的：研究香菇多糖协同阿糖胞苷(Ara—c)对HL-60白血病细胞增殖力的影响。方法：观察HL-60细胞,分别经香菇多糖、Ara—c或香菇多糖协同Ara—c处理后,HL-60活性、抑制率及集落形成能力的变化,并与对照组(不含处理因素)比较。结果：香菇多糖协同Ara—c组HL-60细胞集落形成能力、增殖抑制率与其他三组比有显著差异,HL-60细胞活力与Ara—c组比无显著差异;香菇多糖组与对照组比各项指标均无显著差异。结论：香菇多糖能增强Ara—c对HL-60细胞的杀伤力。     

PKC和TPK在血小板激活中的作用

目的为了研究蛋白激酶（PKC）和酪氨酸蛋白激酶（TPK）在血小板激活中的作用。方法用卟啉酸肉豆蔻乙酸酯（PMA）,凝血酶,前列腺素E1（PGE1）和环磷酸腺苷（db－cAMP）,在含二磷酸腺苷（ADP）清除剂的缓冲剂中去激发经阿司匹林切断,32P－NaH2PO4标记冲洗后的牛血小板。40KD（PKC的底物）的磷酸化程度随PMA或凝血酶的浓度而增加。同样26KD、38KD的磷酸也是如此。由于PMA诱导的血小板聚集的同时伴随PKC活化。PGE（腺苷环化酶激活物）不能抑制由50nmol/1PMA诱导的血小板聚集,db-cAMP,腺苷不能抑制PKC引起的蛋白磷酸化。结果在碱处理的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEgel）中发现40KD和57KD多肽比其他多肽更有抗碱力。40KD和57KD多肽的磷酸氨基酸分析指出含有磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸。结论在PMA、凝血酶激活的血小板中,PKC、TPK都发生激活作用,40KD废物是PKC的底物又是TPK的底物,PKC和TPK在血小板聚集中起着重要调节作用。     

佛波酯对人肝癌细胞胞液和膜性组分中3类蛋白激酶的早期效应

研究佛波酯（PMA）对人肝癌细胞7721胞液和膜性组分中3类蛋白激酶（TPK、PKA、PKC）的早期（5～60min）效应。采用体外细胞培养和蛋白激酶的同位素标记底物测定法。结果：PMA在30min内可促进PKA由膜向胞液的转位和PKC由胞液向膜的转位，并能迅速促进胞液PKC的下降，但膜性PKC的下降发生在30min的活力高峰以后。60min时膜性PKA和PKC都恢复到正常水平。PMA还使胞液TPK持续升高，高峰在5min，而使膜性TPK先降低，40min后才明显升高。结论：PMA对蛋白激酶的早期作用相当多样化，不单是通过受体PKC起作用。     

Genistein对aFGF诱导的AGZY-83A细胞增殖的抑制作用

目的 探讨酷氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）诱导的肺腺癌细胞株ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞增殖的抑制作用。方法 以不同浓度的ａＦＧＦ刺激ＡＧＺＹ－８３Ａ细胞,再对由ａＦＧＦ引起增殖的细胞施加不同浓度的Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ,用细胞计数器计数细胞,观察Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ对细胞增殖的抑制作用。结果 ａＦＧＦ可使该细胞株增殖比明显增加,而Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ可引起细胞     

RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：研究酪氨酸蛋白激酶抑制荆RG50864对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞，采用细胞计数法、MTT比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞进行分析。结果：与对照组相比，RG50864处理组能在24h、48h、72h显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖，且呈剂量依赖性。结论：RG50864可显著抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖。     

HL-60/ADM细胞系耐药性检测

目的　检测 HL- 6 0 / ADM细胞化疗药物敏感性及 MRP表达。方法　以 HL- 6 0 / ADM细胞为实验对象 ,对化疗敏感的 HL - 6 0细胞为对照 ,MTT法检测药物敏感性 ,免疫细胞化学法检测 MRP蛋白的表达 ,PT- PCR法检测MRP m RNA表达。结果　两种细胞生长周期基本一致 ;HL - 6 0 / ADM细胞对 ADM、MTZ、VCR、H四种化疗药物 IC50 显著高于 HL- 6 0细胞 (P<0 .0 1) ,RF均在 2 0倍以上 ;HL- 6 0 / ADM表达 MRP m RNA,细胞膜表面 MRP阳性。结论　 HL-6 0 / ADM细胞系适合体外 MDR研究。     

亚硝胺诱发大鼠肝癌不同细胞组分中三类蛋白激酶的变化

作者研究了正常大鼠肝三个亚细胞组分中酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）、蛋白檄酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力和亚硝胺诱发大鼠肝癌后这些蛋白激酶的变化。发现正常鼠肝中的ＴＰＫ的活力为胞核＞膜性结构＞胞液，ＰＫＡ为胞液＞膜结构＞胞核，而ＰＫＣ则为膜结构＞胞液＞胞核。在胞液的三类蛋白激酶中，ＰＫＣ＞ＰＫＡ＞ＴＰＫ；膜结构为ＰＫＣ＞ＴＰＫ＞ＰＫＡ；而胞核却以ＴＰＫ特别高，ＰＫＡ和ＰＫＣ的含量甚微。ＤＥＮ诱发大鼠肝癌１８周后，膜性和胞核ＴＰＫ升高，尤以膜性ＴＰＫ升高明显。但膜性ＰＫＡ则降低而胞核ＰＫＡ升高，胞液中ＴＰＫ和ＰＫＡ均无明显变化；而ＰＫＣ和ＴＰＫ相反，胞液中显著升高，膜性及胞核变化不大。其中ＰＫＣ的增高不是激活剂含量上升的结果。     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。