瘦素对hBMSCs成骨分化的作用及机制研究

目的 探讨瘦素(leptin,LEP)对hBMSCs成骨分化的作用及机制. 方法 采用全骨髓法培养hBMSCs,取第3代hBMSCs分为A、B、C、D、E、F组,待细胞贴壁后各组分别加入400、200、100、50 ng/mL LEP、100 ng/mL BMP和普通培养基2 mL进行培养.于培养后7 d行ALP染色、21 d行矿化结节染色,倒置相差显微镜观察染色结果 ;并于培养后7、14、21 d,检测各组ALP活性、骨钙素(osteocalcin,OCN)水平,筛选LEP的最佳诱导浓度;B、E、F组细胞培养7 d后,采用RT-PCR检测成骨相关基因:核心结合因子(core-binding factor α1,Cbfα1)、ALP、Col Ⅰ、OCN mRNA的表达. 结果 诱导培养7 d,ALP染色结果 显示,A、B、C、D、E组细胞胞浆均呈蓝色阳性着色,F组呈弱阳性;诱导培养21 d,矿化结节染色结果 显示,A、B、C、D、E组细胞染色呈阳性,F组呈阴性.B组培养后7、14、21 d,ALP、OCN活性低于E组,但显著高于其余各组,差异均有统计学意义(P<0.05),200 ng/mL LEP为最佳浓度.B、E、F组细胞培养7d,F组Cbfα1、ALP、Col Ⅰ、OCNmRNA均不表达;B、E组各产物mRNA均有表达,但B组低于E组. 结论 LEP可促进hBMSCs成骨分化,其机制可能为LEP促进了成骨相关基因的表达.     

富血小板血浆与地塞米松对人骨髓基质干细胞成骨分化作用的对比研究

目的 通过系统评价富血小板血浆(PRP)与地塞米松(DEX)对人骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,为PRP临床骨组织修复应用提供更为可靠的实验依据.方法 将体外培养的BMSCs分为单纯血清培养组(FCS组)、PRP诱导组和DEX组,通过相差显微镜观察碱性磷酸酶(ALP)染色、钙盐沉积染色,RT-PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原(Coll-Ⅰ)、骨连接蛋白(ON)、中心结合因子(Cbfα1)mRNA表达系统评价PRP的成骨分化能力. 结果 PRP抑制了BMSCs向三角形、多角形细胞转变,DEX则诱导BMSCs向三角形、多角形细胞转变;PRP抑制了ALP分泌,钙盐沉积;DEX增加了ALP分泌,促进钙化结节形成.与FCS组相比,DEX促进了ALP、OCmRNA表达,PRP抑制了ALP、OC mRNA表达;PRP、DEX对Coll-Ⅰ、ON、Cbfα1 mRNA表达均无影响.结论 在本实验条件下,PRP对人BMSCs体外成骨分化的直接作用是抑制效应;在体外PRP并不能代替DEX作为人BMSCs成骨分化的诱导因子.     

核心结合因子α1促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的观察核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)对兔骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)的促成骨效应.方法体外分离培养日本大白兔MSCs,按培养方法的不同分为3组.对照组:常规培养;单纯诱导组:以条件培养液(低糖DMEM 10%胎牛血清 10 mmol/L地塞米松 50 mg/L维生素C 10 mmol/L β-甘油磷酸钠)培养;实验组:以AdEasy1/Cbfα1转染MSCs,加入条件培养液培养.在诱导3 d,1、2、3和4周时,行组织学观察和免疫组织化学等方法检测成骨标志碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和骨钙素的表达.结果体外培养兔MSCs生长良好,实验组AdEasy1/Cbfα1转染后90%以上MSCs表达绿色荧光蛋白.实验组及单纯诱导组ALP染色呈棕黑色阳性,随培养时间延长逐渐加深,对照组仅少量散在细胞ALP呈弱阳性;第1、2、3和4周实验组ALP浓度与单纯诱导组及对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).实验组及单纯诱导组从2周开始有红色的阳性染色矿化结节出现,对照组为阴性,结节数目随时间推移而增多.实验组及单纯诱导组1周时有少量骨钙素染色阳性,2、3及4周时大量出现,对照组为阴性.结论应用Cbfα1可促进兔MSCs向成骨细胞分化,其分子机制仍需进一步深入研究.     

不同阶段ADSC-Exos促进成骨分化的体外研究

目的探究脂肪来源干细胞(humanadipose-derived stemcells, ADSCs)不同成骨分化阶段分泌的外泌体(ADSC-Exos促进原始ADSCs成骨矿化的能力,选择最适宜的外泌体提取时间区间,证明其能够进入ADSCs内进行调控。方法酶消化法分离培养原代ADSCs并进行鉴定;超速离心法提取ADSCs未成骨诱导(Exo0)、成骨诱导1～14 d(Exo14)及15～28 d(Exo28)的外泌体,并采用透射电镜,Western blot,动态光散射法进行鉴定;使用茜素红染色检测比较3种ADSC-Exos促进原始ADSCs成骨分化的能力;PKH67标记Exo14检测ADSCs对其摄取的能力。结果所获取的ADSCs符合间充质干细胞鉴定标准。所获取的外泌体具有典型的外泌体形态特征,粒径大小符合外泌体标准;Western blot检测外泌体CD63,CD9呈阳性表达。茜素红染色表明,Exo14组矿化结节含量(AExo14=1.851±0.064)明显高于Exo28组(AExo28=0.097±0.003)。Exo0组与PM组(阴性对照组)相比,钙结节含量无差别(P=0.124)。PKH67标记的外泌体能够被ADSCs摄取进入细胞。结论 ADSCs成骨诱导1～14 d分泌的外泌体Exo14能够被原始的ADSCs高效摄取,并进入细胞内独立作用诱导ADSCs成骨矿化。     

MC3T3E1细胞分化过程中Cbfα1及相关基因的表达

目的 研究在小鼠前成骨细胞MC3T3E1诱导成骨过程中，总Cbfα1、Cbfα1两种亚型Cbfα1／P56、Cbfα1／P57及碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白和骨桥素在前成骨细胞成熟过程中的变化。明确Cbfα1、Cbfα1亚型及相关基因表达与成骨细胞分化的关系，探求与成骨细胞成熟更密切相关的Cbfα1亚型，为进一步的Cbfα1亚型研究提供基础。方法 MC3T3E1细胞在含β-甘油磷酸钠，抗坏血酸的培养基中培养22d，在细胞培养的不同时间（0，4，10，14，18，22d），用α-磷酸奈酚法测定碱性磷酸酶（ALP）活性；VanGieSon苦味酸酸性复红染色法染色细胞Ⅰ型胶原；茜素红染色观察矿化结节形成；半定量RT-PCR检测总Cbfα1mRNA及Cbfα1／P56、Cbfα1／P57mRNA和Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥索mRNA的表达；用Western-blot检测Cbfα1蛋白的表达。结果 MC3T3E1细胞在β-甘油磷酸钠存在的情况下，培养第18d开始出现矿化，第22dⅠ型胶原染色及茜素红染色均观察到明显矿化结节形成。随MC3T3E1细胞的分化，Cbfα1mRNA的表达量逐渐增高，Cbfα1／P57mRNA在第18和22d的表达量明显增高，Cbfα1／P56mRNA无变化。Cbfα1蛋白随MC3T3E1细胞的分化，表达量逐渐增高。同样，随MC3T3E1细胞分化，Ⅰ型胶原、骨钙素、骨桥素和骨涎蛋白mRNA的表达量逐渐增高。ALP活性0～10d逐渐增高，10d后逐渐下降。结论 在MC3T3E1细胞的分化过程中Ⅰ型胶原、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥素mRNA随MC3T3E1细胞的分化表达逐渐增高。Cbfα1 mRNA及Cbfα1蛋白的表达随细胞的分化逐渐增高，与其他成骨特异性基因的变化趋势一致，并以Cbfα1／P57mRNA亚型为主。Cbfα1／P57亚型的表达与成骨分化的关系更密切，在进一步的与成骨细胞分化有关的Cbfα1亚型研究应以Cbfα1／P57亚型为主。     

体外诱导家猪骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的观察家猪骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)在体外诱导条件下成骨分化的特征及相关基因的表达。方法选取3月龄雌性长白猪6头,无菌条件下于胫骨近端抽取骨髓15ml。采用密度梯度离心法并根据细胞贴壁特性对MSCs进行分离、纯化,倒置相差显微镜观察原代细胞生长情况,于培养第7天计算MSCs百分比含量及群体倍增值。将第1代细胞置于含1×10-8mmol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)、10mmol/Lβ-磷酸甘油(β-glycerophosphate,β-GP)和82μg/ml抗坏血酸(ascorbic acid,Asc)的成骨诱导培养液中培养21d,作为实验组;DMEM培养液中培养作为对照组。分别行细胞形态学观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)组织化学染色、钙沉积和细胞增殖测定,采用实时定量PCR分析成骨分化的相关基因表达。结果原代MSCs特征:培养第1天,有核细胞大部分由悬浮的圆形血源性细胞组成;第3天换液弃除非贴壁细胞,MSCs克隆开始形成,细胞呈成纤维细胞样生长;第7天,镜下观察到大小不一的克隆。细胞在培养后12～14d基本长满,原代细胞群体倍增值平均为13。MSCs成骨分化:诱导培养14d实验组细胞形态由成纤维细胞样变成立方体样,而对照组细胞始终保持成纤维细胞样。培养5d,对照组细胞计数为11723±4040,实验组为10276±5513,二者差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,实验组诱导培养14d,ALP染色呈强阳性,21d钙沉积明显增加(P<0.01)。实验组MSCs成骨相关基因:核心结合因子α1(corebinding factorα1,Cbfα1)、osterix、ALP、型胶原、骨连接素(osteonectin,ON)、骨钙素(osteocalcin,OC)表达逐渐增强;Cbfα1、ALP、ON在分化早期增加明显;与第7天比较,第21天osterix和OC基因表达明显上调(P<0.05);第14天,型胶原表达也上调(P<0.05)。结论密度梯度离心法分离的猪MSCs,在体外诱导条件下能通过上调分化特异基因表达向成骨细胞分化。     

体外血管内皮细胞和脂肪干细胞联合培养对脂肪干细胞成骨分化的影响

目的进一步研究血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)和脂肪干细胞(adipose-derivedstromal cells,ADSCs)联合培养对ADSCs成骨分化的影响,为联合培养VECs和ADSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性提供实验依据。方法分别自足月妊娠SD大鼠和18周龄SD大鼠制备脐血来源的VECs和ADSCs,行形态学观察及免疫荧光染色鉴定。取第3代ADSCs与诱导培养6周的VECs按细胞比例分别为3∶1、1∶1和1∶3设为实验组A、B、C组,ADSCs、VECs单独培养设为对照组D、E组。培养第7、14天取各组细胞行ALP和饱和茜素红钙染色,进行ALP和骨钙定性检测;第4、7、14天定量测定各组细胞ALP和骨钙素(osteocalcin,OC)含量。结果诱导培养6周的脐血来源VECs可见短梭形和多角形细胞混合生长,免疫荧光染色可见血管性血友病因子为阳性。ADSCs培养可见贴壁单个核细胞形态单一,呈梭形生长,无重叠现象;免疫荧光染色可见CD90+。各组细胞培养第7天,ALP染色示A、D、E组呈阴性反应,B、C组可见部分阳性细胞;第14天时D、E组仍呈阴性反应,A、B、C组可见片状阳性细胞。培养第7天,茜素红染色示各组均未发现红色阳性细胞;第14天时A、B、C组可见极少数阳性细胞,D、E组未发现阳性细胞。各组ALP含量随时间延长均逐渐增高,其中B组各时间点含量均最高,与其余各组比较差异均有统计学意义(P0.01),各时间点A、C组与D、E组比较差异均有统计学意义(P0.01),A、C组间及D、E组间比较差异无统计学意义(P0.05)。各组OC含量随时间延长逐渐增高,培养第7、14天时B组含量最高,各时间点B组与其余各组比较差异均有统计学意义(P0.01),第4、14天时C、D组间比较差异均有统计学意义(P0.01),第14天时A、C组和E组比较差异有统计学意义(P0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论大鼠脐血来源的VECs能在体外诱导ADSCs向成骨细胞方向分化,1∶1比例分化能力最强。     

体外冲击波对早中期股骨头坏死患者骨髓间质干细胞生物学特性的影响

目的 观察体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对早中期股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)患者骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨及成脂相关基因表达的影响.方法 取ONFH患者自愿捐赠的骨髓.体外分离并传代培养MSCs.将P_3代MSCs分为A组(干预组)和B组(对照组);细胞计数试剂盒检测P_3代MSCs不同时间点增殖差异;酶细胞化学和茜素红染色检测P_3代MSCs碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量和P_7代MSCs胞外基质矿化程度的差异;RT-PCR检测不同时间点骨钙素(osteocalcin,OC)、核心结合因子α1(core-binding factor alpha 1,Cbfα1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达量的差异.结果 A组各时间点(不含第1天)细胞增殖速度均明显强于B组;ALP含量(不含第3天)A组总体水平明显高于B组;茜素红染色示A组矿化结节数为(6.0±1.0)个/视野,B组始终为阴性;Cbfα1在成骨分化的整个过程中均持续表达,A组在各时间点(不含第3天)均明显强于B组;A组OC在各时间点(不舍第3、6天)均明显强于B组;PPARγ在成骨分化的整个过程中均持续表达.A组在各时间点(不含第3天)均明显弱于B组.结论 适当强度的ESW能够促进MSCs增殖,诱导MSCs向成骨细胞方向分化并抑制MSCs向成脂细胞方向分化是其治疗ONFH的有效机制.     

辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响

目的 从细胞和基因水平探讨辛伐他汀对老年大鼠骨髓基质干细胞成骨和成脂分化的影响.方法 18月龄雄性SD大鼠的骨髓基质干细胞进行成骨和成脂诱导培养,培养介质中加入辛伐他汀(10-6、10-7、10-8 mol/L和10-9 mol/L),同时设溶剂对照组.成骨检测:碱性磷酸酶(ALP)染色和定量,茜素红矿化染色和定量,ALP和骨钙素(OC)基因分析;成脂检测:油红脂肪细胞染色和定量,脂蛋白脂酶(LPL)和过氧化物酶增殖活化受体(PPARγ2) 基因分析.结果 在含有低剂量地塞米松的成骨诱导条件下,辛伐他汀随浓度增加促进了细胞基质的矿化,增强了ALP的活性及染色,提高了ALP和OC的基因表达(若无地塞米松,辛伐他汀则无法单独诱导成骨,此结果 未展示);同时,辛伐他汀随浓度增加减弱了脂肪细胞的油红染色,抑制了LPL 和PPARγ2的基因表达.显著性差异皆发生于10-6 mol/L和10-7 mol/L辛伐他汀组.结论 辛伐他汀随浓度增加抑制了老年骨髓基质干细胞的成脂分化,并中等强度地促进了老年骨髓基质干细胞的成骨分化.这表明辛伐他汀具有促进骨合成代谢的作用,可以用于治疗常见的骨代谢疾病,如增龄性的骨质疏松症.     

自体PRP促进人脂肪来源干细胞成骨分化的体外实验研究

目的 探讨自体PRP对体外培养人脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)增殖及成骨分化的影响.方法 取自愿捐献吸脂术获取的脂肪组织进行分离培养ADSCs,倒置显微镜下观察细胞生长情况.将第3代ADSCs分别行成脂、成软骨定向诱导培养鉴定,并行CD29及CD44免疫荧光染色观察.取第3代ADSCs分别采用含10 mL/L PRP的成骨诱导培养基(PRP组)和不含PRP的成骨诱导培养基(对照组)进行培养,倒置显微镜观察细胞生长情况,培养后1、2、3、4、5 d采用MTT法检测细胞增殖活性;7、14、21、28 d行ALP活性检测,另取培养7、14 d的PRP组细胞行ALP染色观察;14 d时行PRP组茜素红染色检测钙结节形成情况.结果 倒置显微镜下第3代ADSCs多为梭形,倍增时间约35 h.成脂及成软骨诱导鉴定均为阳性,免疫荧光染色CD29和CD44呈阳性.MTT法示PRP组1、2、3、4、5 d的吸光度值分别为0.137±0.015、0.219±0.023、0.367±0.031、0.586±0.039、0.948±0.046,对照组分别为0.081±0.009、0.115±0.012、0.162±0.017、0.242±0.025、0.356±0.032,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导7 d后,PRP组ALP染色阳性,细胞胞浆呈灰黑色,可见黑色沉淀:14 d后阳性细胞增多.ALP活性检测示PRP组7、14、21、28 d细胞活性值分别为23.96±2.05、41.26±3.38、38.12±3.03、35.89±2.24,对照组分别为17.83±1.62、26.64±2.37、23.85±1.99、20.78±1.81,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).成骨诱导14 d后,茜索红染色示PRP组钙结节形成.结论 体外培养时,自体PRP可促进人ADSCs的增殖并诱导成骨分化,为骨组织工程提供一种新的种子细胞来源.     

Comparison of Osteogenic Potentials of BMP4 Transduced Stem Cells from Autologous Bone Marrow and Fat Tissue in a Rabbit Model of Calvarial Defects

We compared bone marrow stem cells (BMSCs) and adipose-derived stem cells (ADSCs) of adult rabbits under identical conditions in terms of their culture characteristics, proliferation capacity, osteogenic differentiation potentials induced by adenovirus-containing bone morphogenetic protein 4 (Ad-BMP4) in vitro, and capacity to repair calvarial defects in the rabbit model by autologous transplantation ex vivo. According to the results of growth curve, cell cycle, and telomerase activity analysis, ADSCs possess a higher proliferation potential. Both of the Ad-BMP4 transduced MSCs expressed BMP4 mRNA and protein and underwent osteogenic differentiation. Up-regulated mRNA expression of all osteogenic genes was observed in differentiated BMSCs and ADSCs, but with different patterns confirmed by real-time RT-PCR. Deposition of calcified extracellular matrix was significantly greater in differentiated ADSCs compared with differentiated BMSCs. X-ray and histological examination indicated significant bone regeneration in the calvarial defects transplanted with Ad-BMP4 transduced autologous MSCs compared to the control groups. There was no significant difference in new bone formation in Ad-BMP4 transduced MSCs based on quantitative digital analysis of histological sections. The use of ADSCs often resulted in the growth of fat tissue structures in the control groups, and the fat tissue structures were not seen with BMSC cells. Our data demonstrate that BMP4 can be potently osteoinductive in vivo, resulting in bone repair. ADSCs may be an attractive alternative to BMSCs for bone tissue engineering under appropriate stimuli. But the easy adipogenic differentiation needs to be considered when choosing adipose tissue for specific clinical application.     

血管内皮生长因子对脂肪干细胞成骨分化基因转录水平的调节

目的探讨内源性血管内皮生长因子（VEGF）体外诱导脂肪干细胞（ADSCs）分化成骨的转录活化机制。方法脂肪干细胞来自大白鼠腹股沟处脂肪,脂肪内干细胞的分离根据JMGimblel所描述的方法获取,培养鉴定后以BMP-2修饰组作为阳性对照组,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法及琼脂糖凝胶电泳方法分析在不同诱导条件下Cbfal和Osterix表达的差异。结果BMP-2重组蛋白组的Cbfal基因转录水平明显高于VEGF诱导组（P〈0．01）,两者联合应用未见Cbfal基因转录增强;在以VEGF为诱导因子的ADSCs组,Osterix的mRNA水平明显低于BMP-2组（P〈0．01）,与Cbfal基因转录模式不同,VEGF联合BMP-2共同诱导ADSCs成骨分化组,Osterix基因的mRNA水平有增高的趋势。结论通过Cbfal和Osterix在ADSC成骨分化的不同时间的表达差异,本研究认为在ADSCs诱导成骨分化过程中,Cbfal启动和激活Osterix转录,仍是主要的信号传导途径。VEGF具有一定的诱导ADSCs成骨分化能力,但其作用主要是非依赖性Cbfal通路调控的Osterix表达。     

脂肪组织来源的基质细胞研究进展

目的介绍近期国内外脂肪组织来源的基质细胞研究进展. 方法广泛查阅近期有关文献,归纳分析此种细胞的培养和分化的研究状况. 结果脂肪组织中存在一种多能的基质细胞,体外培养条件下这种细胞生长状态类似成纤维细胞,可长期增殖,细胞绝大多数为中胚层来源,混有少量的血管周细胞、内皮细胞和平滑肌细胞,在一定的诱导条件下能分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、成肌细胞和神经细胞. 结论脂肪组织来源的基质细胞可替代间充质干细胞作为组织工程的另一种干细胞.     

长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞生物学特性的影响

目的通过观察长期体外培养对人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)生物学特性的影响,鉴定ADSCs作为组织工程种子细胞的优越性。方法通过流式细胞技术观察长期体外培养对人ADSCs表面抗原表达和凋亡的影响。通过碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及RT-PCR检测长期体外培养对人ADSCs成骨分化潜能的影响。结果原代ADSCs表面高表达间充质干细胞表面标记物,而不表达血源性细胞表面标记物,标记物不随传代次数变化。早期ADSCs凋亡率为1%～2%,随传代次数增多凋亡率逐渐增加．但幅度不大。碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色和RT-PCR检测显示ADSCs传至第8代时仍能保持成骨分化潜能。结论ADSCs生物学特性稳定,是较为理想的组织工程及再生医学研究的种子细胞。     

大分子拥挤对脂肪干细胞增殖及其成骨分化能力的影响

目的 研究大分子拥挤环境对脂肪干细胞(ADSCs)增殖及体外成骨分化能力的影响。方法 将大分子拥挤试剂Ficoll 400和Ficoll 70分别以25 mg/mL和37.5 mg/mL的浓度混合,制备成50 mg/mL Fc混合液,用于体外培养ADSCs。通过CCK-8法、dsDNA核酸定量分析及BCA蛋白浓度测定,定量检测大分子拥挤环境对ADSCs增殖能力的影响;在不同培养时间对ADSCs进行成骨诱导,茜素红染色,检测ADSCs成骨分化能力。结果 CCK-8法检测显示大分子拥挤促进了ADSCs的增殖;dsDNA核酸定量分析及BCA蛋白浓度测定结果表明,大分子拥挤促进了ADSCs的DNA和蛋白质的合成;茜素红染色结果显示,大分子拥挤环境下ADSCs成骨分化能力增强,钙结节增加。结论 大分子拥挤环境对ADSCs的增殖及其体外成骨分化均有一定的促进作用。     

兔脂肪干细胞体外成骨诱导培养及成骨活性鉴定的实验研究

目的体外分离培养兔脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）,在成骨诱导条件下鉴定其成骨活性。方法取4月龄新西兰大白兔腹股沟区脂肪,Ⅰ型胶原酶消化,分离、培养及传代原细胞,将第3代ADSCs消化后,加入成骨培养液中诱导分化,分别行碱性磷酸酶染色、茜素红染色、VonKoss（a钙结节）染色,以鉴定分化结果。结果体外分离培养的细胞增殖活跃,成骨诱导后碱性磷酸酶染色、茜素红染色及Von Kossa染色均呈阳性表达。结论脂肪干细胞具有成骨分化能力,是一种理想的骨组织工程种子细胞。     

葛根素诱导脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的观察葛根素诱导卵巢切除后骨质疏松大鼠模型的脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)成骨分化的能力。方法分离、培养、传代及鉴定去卵巢骨质疏松模型大鼠ADSCs;含葛根素培养基诱导去卵巢骨质疏松大鼠ADSCs成骨分化,并测定最大有效浓度。结果去卵巢骨质疏松大鼠ADSCs成骨分化能力与加入含葛根素培养基的时间和培养基中葛根素的浓度呈正向相关,浓度为12 mmol/L时呈现无毒剂量下促进成骨分化最显著作用。结论葛根素具有较强促进去卵巢骨质疏松大鼠ADSCs成骨分化的诱导能力。     

活体小鼠脂肪来源干细胞的获取与鉴定

目的 探究一种从活体小鼠身上提取脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的实验方法.方法 自2020年3月至2020年7月,中国医科大学附属第一医院整形外科麻醉C57小鼠后从其腹膜外及腹股沟处分离脂肪组织,采用胶原酶消化,获得ADSCs.传至3代后,使用流式细胞仪分别检测其表面...     

脂肪源性干细胞体外成骨特性的研究

目的探讨兔脂肪源性干细胞体外成骨分化能力。方法取3个月龄新西兰白兔颈背部皮下脂肪组织,型胶原酶消化获得细胞。绘制细胞生长曲线,采用免疫细胞荧光法检测细胞表面抗原CD44、CD45;分别加入条件培养液对所获得细胞进行成骨成脂诱导,并分别进行形态学、碱性磷酸酶、钙盐沉积和油红O染色相关检测;将脂肪源性干细胞分为成骨诱导组和非成骨诱导组,分别于诱导后1、2、3、4周检测两组的碱性磷酸酶和钙离子浓度并作统计分析。结果 a）所获细胞CD44阳性表达,CD45阴性表达;所绘制的生长曲线成典型的＂S＂型。b）在诱导条件下,碱性磷酸酶及钙盐沉积均呈阳性表达,油红O染色为阳性。c）碱性磷酸酶浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别,在各个时间点诱导组碱性磷酸酶浓度均高于非诱导组（P〈0.05,n=5）;诱导组碱性磷酸酶浓度在不同诱导时相其浓度变化趋势不同（P〈0.05,n=5）;钙离子浓度在诱导组与非诱导组之间存在组间差别,在各个时间点诱导组钙离子浓度高于非诱导组（P〈0.05,n=5）。诱导组钙离子浓度在不同诱导时相其浓度变化的趋势不同（P〈0.05,n=5）。结论脂肪干细胞的易分离培养、增殖快和良好的成骨诱导活性完全符合对种子细胞的要求,是一种理想的骨组织工程种子细胞。