脊索细胞研究进展

椎间盘再生研究中,脊索细胞独特的生理功能受到关注。成人髓核内脊索细凋亡与髓核内蛋白多糖含量降低、胶原含量增加、水含量丢失相关。脊索细胞分泌的可溶性因子具有引导终板软骨细胞向髓核迁移,调节髓核细胞蛋白多糖合成的作用。脊索细胞可促进髓核软骨样细胞增殖和表型维持,在维持髓核内细胞数量及细胞外基质含量中起着重要作用。脊索细胞独特的生理功能,在组织工程修复退变椎间盘研究中展现出广阔的应用前景。     

脊索细胞研究进展

椎间盘再生研究中,脊索细胞独特的生理功能受到关注.成人髓核内脊索细凋亡与髓核内蛋白多糖含量降低、胶原含量增加、水含量丢失相关.脊索细胞分泌的可溶性因子具有引导终板软骨细胞向髓核迁移,调节髓核细胞蛋白多糖合成的作用.脊索细胞可促进髓核软骨样细胞增殖和表型维持,在维持髓核内细胞数量及细胞外基质含量中起着重要作用.脊索细胞独特的生理功能,在组织工程修复退变椎间盘研究中展现出广阔的应用前景.     

低氧环境对小鼠未成熟关节透明软骨细胞培养的影响

目的研究低氧和低氧模拟化合物氯化钴对小鼠未成熟关节透明软骨细胞氧感应基因和细胞表型的影响。方法经酶消化分离出小鼠未成熟关节透明软骨细胞，分别在21％氧、2％氧和150μmol/L氯化钴条件下培养一定时间。通过倒置显微镜、透射电镜和扫描电镜观察细胞形态学变化。应用定量PCR和Western Blot检测葡萄糖转运体-1（GLUT-1）、葡萄糖转运体-3（GLUT-3）、磷酸果糖激酶-1（PGK-1）和低氧诱导因子-1α（HIF—1α）的表达。应用定量PCR观察软骨细胞表型改变。应用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测低氧及氯化钴对软骨细胞活性的影响。用葡萄糖检测试剂盒测葡萄糖摄取量。结果不同培养条件下软骨细胞形态无明显差异。2％氧和氯化钴可增加GLUT-1、GLUT-3及PGK-1mRNA表达。2％氧和氯化钴可促进GLUT-1、GLUT-3和HIF—1α蛋白表达。低氧和氯化钴促进细胞活性，增加葡萄糖摄取并促进细胞外基质合成。结论软骨细胞能通过调节氧感应基因适应低氧环境，HIF—1α可能起关键作用。低氧能在一定程度上增加软骨细胞活性和细胞外基质合成。模拟体内氧环境培养细胞能更好地了解软骨细胞特性。     

髓核细胞鉴定方法的相关研究进展

腰椎间盘突出症是引起腰痛的主要原因,目前治疗方法包括药物、手术等,这些方法不能阻止或延缓腰椎间盘突出症的病理进程,如腰椎融合术反而可能促进相邻椎间盘的退变病理进程.干细胞移植可以分化为髓核样细胞或/和可以促进退变椎间盘内髓核细胞的增殖,是目前研究的热点,但是,髓核细胞和关节软骨细胞表型非常相似,这些细胞均表达Ⅱ型胶原、SOX-9和聚集糖胺聚糖(目前最常用这三个指标来鉴定这些细胞),如何准确地区分干细胞是向髓核细胞方向分化还是向关节软骨细胞方向分化,这是研究椎间盘及关节疾病的基础,特别是我们如何准确高效地鉴定出髓核细胞是研究椎间盘退变的关键.现就如何准确高效地鉴定出髓核细胞综述如下.     

沉默p53和p21基因延缓髓核细胞衰老退变实验研究

目的髓核细胞衰老凋亡是椎间盘退行性变的病理基础,探讨髓核细胞表型分子及延缓髓核细胞衰老退变的机制。方法原代培养8～10周龄雄性SD大鼠髓核细胞,免疫细胞化学染色鉴定髓核细胞表型分子低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1α,HIF-1α)、HIF-1β、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)及Ⅱ型胶原表达。小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)瞬时转染髓核细胞沉默p53、p21后行RT-PCR及Western blot检测沉默效率,siRNA转染前后细胞衰老相关β半乳糖苷酶(senescence associated-β-galactosidase,SA-β-gal)染色检测髓核细胞衰老变化,流式细胞仪检测髓核细胞周期变化,MTT法生长曲线分析髓核细胞增殖变化。结果免疫细胞化学染色显示髓核细胞表达HIF-1α、HIF-1β、MMP-2及Ⅱ型胶原。第35代髓核细胞转染p53、p21 siRNA后RT-PCR及Western blot检测示p53、p21表达明显受到抑制。第35代髓核细胞SA-β-gal染色阳性率明显高于第1代髓核细胞(P<0.001);正常第35代髓核细胞经p53 siRNA(p53转染组)和p21 siRNA(p21转染组)转染后,SA-β-gal阳性率明显低于正常第35代髓核细胞(正常组)和加入脂质体LipofectaminTM2000而无siRNA的第35代髓核细胞(阴性对照组),差异有统计学意义(P<0.001)。细胞周期分析显示,p53转染组及p21转染组G1期百分比均明显低于正常组和阴性对照组(P<0.05),S期百分比明显高于正常组和阴性对照组(P<0.05)。MTT生长曲线显示转染p53、p21 siRNA后可促进髓核细胞增殖。结论沉默p53、p21基因可通过调节细胞周期而抑制髓核细胞衰老退变,改善椎间盘退变过程;沉默p53、p21基因可能是潜在的治疗椎间盘退行性变的方法。     

雌激素α、β受体在大鼠椎间盘组织中的免疫组织化学定位

[目的]探讨雌激素α、β受体(ERα、ERβ)在大鼠椎间盘组织的定位和分布.进一步探讨ER与椎间盘退变的关系,对早期预防和治疗椎间盘退变提供一定的理论依据.[方法]用免疫组织化学染色法(Elivison二步法)检测大鼠关节软骨,椎体终板及椎间盘组织中ER-α,ER-β的表达及分布情况.[结果]免疫组织化学染色见ER-α,ER-β在椎体骨组织中表达明显,在终板软骨组织表达较为明显,在髓核组织中均有表达,在纤维环中未见表达.[结论]在大鼠的髓核组织中的髓核细胞(类软骨细胞)中存在ER.     

椎间盘髓核组织工程研究进展

1椎间盘生物学和退变椎间盘(intervertebral disc,IVD)是纤维软骨结构,由中央髓核(NP)和周围的纤维环(AF)构成。两个部分由不同细胞分型和细胞外基质构成。髓核细胞是圆形的像软骨细胞一样而纤维环有更多成纤维细胞的狭长的形状。髓核细胞生成的细胞外基质富含蛋白聚糖类(PGs),主要有聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。AF细胞可生成大量Ⅰ型胶原但仅有少量的PG或者Ⅱ型胶原。椎间盘是无血管的所以营养成分很难扩散。     

腺相关病毒载体介导的TIMP1对人退变腰椎间盘髓核细胞蛋白多糖的影响

目的:探讨腺相关病毒(Adeno-associated virus;AAV)载体介导的基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1;TIMP1)对人退变腰椎间盘髓核细胞的生物学效应.方法:单层培养并鉴定人退变腰椎间盘髓核细胞.采用绿色荧光蛋白标记的腺相关病毒(rAAV2-EGFP)检测其对髓核细胞的转染效率.应用构建的rAAV2-TIMP1转染髓核细胞;通过细胞形态学观察、35S标记氨基酸整合法检测rAAV2-TIMP1对人退变腰椎问盘髓核细胞基质合成的影响.在35S检测中;以未转染的退变髓核细胞做为正常对照组.结果:光镜下观察所培养的细胞类型以成纤维样细胞为主;Ⅱ型胶原免疫组化和番红O染色鉴定培养细胞为髓核细胞.AAV转染人退变腰椎间盘髓核细胞的转染效率为12%.35S标记整合法检测rAAV2-TIMP1转染组每分钟计数值为341.43±42.85;正常对照组为224.20±29.26;两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:TIMP1能够促进退变椎间盘髓核细胞蛋白多糖的合成.     

人髓核细胞外泌体诱导人尿源干细胞向髓核样细胞分化的研究

目的探讨人髓核细胞(nucleus pulposus cells, NPCs)外泌体对诱导人尿源干细胞(urine-derived stem cells, USCs)向髓核样细胞分化的作用。方法体外分离培养USCs和NPCs, 提取NPCs外泌体, 以Western-blot检测外泌体标记蛋白;以GFP慢病毒转染标记USCs细胞质、DAPI染料标记USCs细胞核以及PKH26染料标记NPCs外泌体;将USCs与NPCs外泌体共孵育12 h并观察摄取情况, 采用NPCs外泌体和非接触共培养方法诱导USCs分化, 检测各组髓核细胞标志基因mRNA的相对表达量和450 nm波长处的吸光度。结果分离的USCs具备向骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的能力, 高表达干细胞标志蛋白CD29(99.57%)、CD44(97.46%)、CD73(97.71%), 低表达干细胞阴性蛋白CD31(0.59%)、CD45(0.19%)。分离的NPCs高表达髓核细胞标志蛋白COL2A1、ACAN、SOX-9。提取的NPCs外泌体高表达标志蛋白CD63、CD81、Tsg101。共孵育12 h后, NPCs外泌体与U...     

基质金属蛋白酶9及TGF-β_1 mRNA和蛋白在骨关节炎中的表达

目的 TGF-β1对骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨起保护作用,探讨OA中基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、TGF-β1 mRNA和蛋白表达的相关性,为临床治疗OA寻找有效的干预靶点提供理论依据。方法取自愿捐赠的关节软骨及滑膜标本,其中OA患者60例(实验组),外伤截肢、交叉韧带断裂、盘状软骨损伤与半月板损伤患者20例(正常对照组)。行HE染色观察关节软骨与滑膜的病理组织学改变,免疫组织化学染色观测MMP-9及TGF-β1蛋白表达,原位杂交技术检测MMP-9及TGF-β1 mRNA表达;并进行相关性分析。结果 HE染色显示实验组关节软骨细胞固缩、坏死、排列紊乱,细胞外基质断裂,关节滑膜细胞肥大增生、淋巴细胞和单核细胞浸润,多数小血管增生;正常对照组软骨细胞排列整齐、基质染色均匀,滑膜组织无慢性炎症表现、无明显增生。两组均可见MMP-9、TGF-β1 mRNA和蛋白阳性表达,阳性细胞包括软骨细胞、滑膜衬里层细胞及滑膜下层的血管内皮细胞、成纤维细胞、炎性浸润细胞等。实验组MMP-9及TGF-β1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组(P<0....     

肿瘤干细胞与肝癌干细胞

肿瘤起源于干细胞的假说正在各种人类肿瘤中得到证实,肿瘤不单是一种基因病,而且是一种干细胞病,基因突变作用于干细胞,干细胞突变成为肿瘤干细胞,这是肿瘤发生、再生、转移和复发的关键。肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,其中是否存在“肝癌干细胞”的问题一直倍受人们关注。该文介绍肿瘤干细胞与肝癌干细胞的研究情况。     

热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究

目的：体外建立表皮细胞去分化模型,为深入阐明表皮细胞去分化过程奠定基础。方法：离体条件下选择热损伤与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作为联合诱导因素处理成熟表皮细胞。通过Giemsa染色和电镜观察细胞形态的改变;通过细胞培养和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力,包括克隆形成和复层生长情况;采用器官培养体系体外构建三维皮肤,观察细胞再分化形成表皮情况;应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变。结果：经联合诱导后,细胞形态发生改变,表现为体积减小,细胞器数目减少,核浆比增大。增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆,在滋养层培养条件下可以形成复层生长,并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构。基因水平的改变表现为与角质化相关基因下调和与有丝分裂相关基因上调。结论：在热损伤与bFGF联合诱导下,已分化的表皮细胞会发生形态、功能和基因表达的改变,表现为干细胞的特性。     

间充质干细胞及其作用的研究新进展

间充质干细胞(MSCs)可以成功地从所有哺乳动物组织细胞内分离出来,它的多向分化潜能在再生医学中有很大应用潜力.随着对MSCs的生物学特征、MSCs与其周围内环境之间的相互作用、MSCs归巢的分子调节机制及多向分化能力的深入研究,MSCs将作为细胞修复或外源性基因转染和表达的载体在临床试验中发挥重要作用.     

Characterization of Two Monoclonal Antibodies Raised Against Human Testicular Cells/Charakterisierung von zwei monoklonalen Antikörpern gegen menschliche Hodenzellen

Summary: Human testicular cells isolated from biopsy tissue were used for generation of monoclonal antibodies. Two hybridoma supernatants C3 and D4 were selected according to their reaction with sperm-precursor cells (immature sperms) in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). C3 reacted with testicular but no other tissue. D4 did not reveal any pattern of testicular staining in spite of its similarity to C3 in binding to sperm-precursor cells in ELISA and microcytotoxicity test.
Zusammenfassung: Für die Bildung von monoklonalen Antikörpern wurden menschliche Keimzellen verwendet, die aus dem Gewebe von Hodenbiopsien stammten. Zwei Hybridom-Überstand-Lösungen, C3 und D4, wurden hinsichtlich ihrer Reaktion mit Spermatozoen-Precursorzellen (unreife Spermatozoen) in einem ELISA-Test selektiert. C3 reagierte mit Hoden-, aber nicht mit anderem Gewebe. D4 deckte keine weiteren Muster in der Hodenfärbung auf, ungeachtet der Ähnlichkeit zu C3 hinsichtlich der Bindung der Spermatozoen-Precursorzellen an ELISA und an den Mikrocytotoxizitätstest.     

Cell proliferation studies in the rat prostate: II. The effects of castration and androgen-induced regeneration upon basal and secretory cell proliferation

The changes over short and prolonged periods (up to three months) after castration on the proliferative activity of basal and secretory epithelial cells in the rat prostate were studied. Although castration induced widespread apoptosis of the secretory cells, no compensatory hyperplasia of the basal cells in response to this was noted. Instead, observations of the cell kinetics and ultrastructure suggested that both the basal and secretory cells entered a quiescent state as a result of castration. The proliferative potential of secretory cells was not diminished up to three months after castration. During androgen-induced regeneration of the prostate the pattern of basal and secretory cell proliferation was found to be similar to that observed during normal growth, although it was more rapid and of shorter duration.     

人脂肪组织来源的基质细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的 探讨人脂肪组织来源的基质细胞（adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs）向神经元样细胞分化的可能性，为神经移植探索新的细胞来源。方法 采用胶原酶消化法分离培养成人的ADSCs，含血清的培养基进行培养，胰蛋白酶消化传代，采用第3～9代的ADSCs进行诱导。应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松，诱导其向神经元样细胞和脂肪细胞分化，采用苏丹黑B和免疫细胞化学方法对ADSCs进行鉴定。结果 成功培养出ADSCs来源的基质细胞，细胞在体外生长形态类似成纤维细胞，可维持在未分化状态并稳定增殖，体外扩增可达20代。细胞表达波形蛋白和巢蛋白，大部分细胞还表达平滑肌肌动蛋白和βⅢ管蛋白；应用异丁基甲基黄嘌呤、消炎痛、胰岛素和地塞米松，可诱导ADSCs向神经元样细胞和脂肪细胞分化，其中0．1％～0．2％的细胞分化为神经元样细胞，40％～50％分化为脂肪细胞。分化的神经元样细胞具有典型的神经元形态，并能表达神经元标志物；部分分化的神经元样细胞仍然表达平滑肌肌动蛋白。结论 脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的基质细胞，并能克服间充质细胞的限制，分化为神经元样细胞，但这种细胞是否为有功能的神经元，还需深入研究。     

微波消融联合树突状细胞瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 观察微波消融联合树突状细胞(DC)瘤内注射对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 建立BALB/C小鼠皮下骨髓瘤模型,分为对照组、微波消融组、微波消融联合不成熟DC组、微波消融联合成熟DC组,分别于微波消融后第1、3、5、7、9及11天采用流式细胞仪检测各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群.结果 对照组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+值逐渐下降(P<0.05);微波消融组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+无明显改变(P>0.05);微波消融联合不成熟DC组小鼠的CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+在术后第3、5、7天明显减低(P<0.05),第9、11天恢复;微波消融联合成熟DC组小鼠CD3~+、CD4~+及CD4~+/CD8~+则在术后第3、5、7天明显增高(P<0.05),第9、11天下降.结论 微波消融联合成熟DC在一定时间内(约1周)能够增强实验小鼠的抗肿瘤免疫反应.