褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元特异性烯醇化酶的影响

目的研究褪黑素（MT）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的神经保护作用以及MT的用药时间窗。方法选用7日龄的SD大鼠，随机分为假手术组、模型组（HIBD组）、MT治疗组（按给药时间分为HIBD前组、HIBD后0h组、HIBD后1h组和HIBD后2h组），即治疗组在各不同时间给予腹腔注射一次MT10mg／kg，各组动物分别在术后6h、12h、24h、48h、72h处死。用酶联免疫吸附法检测血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的水平，用免疫组化法检测脑组织NSE的表达变化。结果HIBD模型组血清NSE水平显著高于MT各治疗组（P〈0．01），HIBD模型组皮质NSE阳性细胞数显著低于MT各治疗组（P〈0．01或P〈0．05）；MT治疗组各组间比较，HIBD前组、HIBD后01h组、HIBD后1h组血清NSE和皮质NSE阳性细胞数的变化差异性不明显（P〉0．05），但它们与HIBD后2h组在血清NSE和皮质NSE阳性细胞数的变化上有显著性差异（P〈0．05）。结论MT对新生大鼠HIBD有预防和治疗作用，能有效地保护NSE的活性。MI在HIBD的治疗上存在时间窗，预防用药和HIBD后2h内给药效果明显，而且HIBD后1h内给药优于HIBD后2h给药。     

亚低温和Caspase抑制剂干预缺氧缺血性脑损伤中的研究

新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗是人们积极探讨的一个重要课题。亚低温治疗的动物实验和临床试验已证实对HIBD有明显保护作用，半胱氨酸蛋白酶抑制剂对HI后的脑神经具有保护作用，其使用剂量、给药途径、药物种类等有待进一步探讨。亚低温和caspase抑制剂联合应用于HIBD显示了二者的协同作用，可能给HIBD的治疗带来新的契机。     

高压氧促进缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的时间窗研究

目的：探讨高压氧（HBO）治疗是否可以促进缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠内源性神经干细胞（NSC）的增殖及HBO治疗HIBD的时间窗。方法：采用Rice法制成HIBD模型,分别于HIBD后第3、6、12、24和72h开始给予HBO治疗,1次/d,连续7 d。HIBD后10 d,BrdU/Nestin免疫荧光双标法检测不同时间窗HBO治疗对内源性NSC的影响,Western blot法检测Nestin蛋白的表达;HIBD后28 d尼氏染色法检测海马CA1区锥体细胞密度。结果：HIBD后3、6、12和24 h给予HBO治疗,侧脑室室管膜下（SVZ）区BrdU＋Nestin＋细胞显著增加（P〈0.05）,损伤侧大脑Nestin蛋白表达显著高于HIBD组（P〈0.05）;尼氏染色结果显示HIBD后3、6、和12h给予HBO治疗,海马CA1区神经元丢失较HIBD组显著减少（P〈0.05）。结论：HBO治疗可以促进HIBD新生大鼠内源性NSC的增殖,治疗时间窗拓宽至HIBD后24 h可促进NSC增殖,HIBD后72 h进行HBO治疗则疗效不显著。     

选择性头部亚低温治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤疗效观察及护理

新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是引起新生儿死亡和儿童伤残的主要原因之一，其发病机制复杂，目前仍缺乏特效疗法。近年来大量的动物实验及多中心临床实验均证明亚低温对HIBD有肯定的保护作用。但亚低温对各器官系统均可能产生影响，因此亚低温治疗中新生儿的监护非常重要，护理贯穿于整个治疗过程。现将我科自2002年以来开展选择性头部亚低温治疗HIBD的研究结果报告如下。     

神经生长因子对缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的：探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）与凋亡之间的关系,研究神经生长因子（NGF）对HIBD的保护作用,为用NGF治疗新生儿HIBD提供理论依据。方法：生后7天SD大鼠40只制成HIBD动物模型,随机分成两组：HIBD模型对照组20只,HIBD模型NGF治疗组20只,观察NGF对HIBD模型新生大鼠体重增长情况、死亡率、左右脑重量的影响,并用原位缺口末梢标记（TUNEL）法检测NGF对缺氧缺血后脑细胞凋亡的影响。结果：HIBD模型NGF治疗组体重增长明显高于对照组（P＜0．01）;治疗组实验过程中死亡率明显低于对照组：HIBD模型NGF治疗组与对照组健侧（右侧）脑重量相近,但治疗组患侧（左侧）脑重量明显重于对照组（P＜0．01）;治疗组左右脑重量无显著差异,而对照组左右脑重量差异显著（P＜0．01）;TUNEL染色所见阳性凋亡细胞,其凋亡特征为胞体缩小、核固缩、核碎裂、凋亡小体形成。NGF治疗组阳性细胞均数明显低于对照组（P＜0．01）。结论：NGF治疗减轻了缺氧缺血后脑萎缩和细胞凋亡。     

早期干预对脑损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的 研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠学习记忆能力及脑细胞中神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法 选用SD大鼠建立宫内HIBD动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组和对照组，每组12只。HIBD干预组采取早期触摸和丰富环境刺激，HIBD非干预组与对照组常规饲养。干预28d后，通过三等臂Y型迷宫试验检测大鼠学习记忆功能，而后取大鼠额皮质和海马组织，用免疫组织化学染色法检测GAP-43表达情况。结果 HIBD非干预组学习与记忆能力明显低于对照组（P〈0．01），HIBD干预组Y迷宫测试成绩则优于HIBD非干预组（P〈0．01）。同时，HIBD非干预组额皮质和海马神经元GAP-43阳性系数高于对照组（P〈0．01），而HIBD干预组GAP-43的表达又明显高于HIBD非干预组（P〈0．01）。结论 早期干预具有改善HIBD大鼠认知能力的效果，其促进HIBD脑功能修复的作用与增加脑组织GAP-43的表达有关。     

亚低温和Caspase抑制剂干预缺氧缺血性脑损伤中的研究

新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗是人们积极探讨的一个重要课题。亚低温治疗的动物实验和临床试验已证实对 HIBD 有明显保护作用,半胱氨酸蛋白酶抑制剂对 HI 后的脑神经具有保护作用,其使用剂量、给药途径、药物种类等有待进一步探讨。亚低温和 Caspase 抑制剂联合应用于 HIBD 显示了二者的协同作用,可能给 HIBD 的治疗带来新的契机。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期影响

【目的】探讨早期和延迟高压氧（HBO）治疗对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠的远期影响。【方法】7日龄大鼠37只随机分为对照组（n=10，假手术处理）、HIBD组（n=9）、EHBO组（n=9，HIBD模型后0．5～1h开始2个绝对大气压HBO治疗，稳压30min／次，间隔24h，连续2次）和LHBO组（n=9，HIBD模型后48～72h开始2个绝对大气压HBO治疗，稳压30min／次，间隔24h，连续5次），以大鼠远期的学习记忆功能（Morris水迷宫实验）和海马形态组织学（海马锥体细胞层结构和CAl区存活神经元数）来判断干预效果。【结果】HIBD组大鼠的学习记忆功能严重不良伴海马结构严重受损，与对照组相比，水迷宫实验中平均逃逸潜伏期延长（56．35S与23．07S，P〈0．05）、搜索时间和搜索路程缩短（分别为29．29S与51．21S，548cm与989cm．均P〈0．05）、海马存活神经元减少（100个／mm与183个／mm，P〈0．05）；早期HBO治疗明显减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍（潜伏期：39．17s与56．35s；搜索时间：36．84s与29．29s；搜索路程：686cm与548cm，P〈0．05），并使海马存活神经元增多（131个／mm与100个／mm，P〈0．05），延迟HBO治疗不能减轻HIBD大鼠的学习记忆功能障碍（潜伏期：56．25s与56．35。；搜索时间：30．11s与29．29s；搜索路程：572cm与548cm，P〉0．05），海马存活神经元无增多（95个／mm与100个／mm，P〉0．05）；大鼠在水迷宫实验中的逃逸潜伏期与海马锥体细胞层存活神经元数呈直线负相关（r=-0．819，P〈0．01）。【结论】早期HBO治疗可减轻HIBD程度，并可改善HIBD所引起的远期学习记忆功能缺陷，延迟HBO治疗对HIBD无效。     

IGF-1对新生鼠低氧缺血性脑损伤的治疗作用

目的 :观察胰岛素样生长因子 1(IGF 1)对新生大鼠低氧缺血性脑损伤 (Hypoxic ischemicbraindam age ,HIBD)的治疗作用。方法 :制作新生大鼠HIBD模型 ,把HIBD大鼠分成IGF 1治疗组 (n =6)和非治疗组 (n= 6) ,HIBD后 72h取脑标本、病理切片 ,予HE染色 ,观测两组大鼠大脑皮层梗死面积率、海马坏死细胞率 ,用Tunel法测定凋亡细胞率。结果 :与非治疗组相比 ,IGF 1治疗组的皮层梗死面积率、皮层凋亡细胞率、海马坏死细胞率 ,均显著降低 (P <0 .0 5)。但两组海马凋亡细胞率差别无显著性。结论 :基因重组人类IGF 1(rhIGF 1)治疗新生鼠HIBD疗效明显     

高压氧对HIBD新生大鼠学习记忆功能及海马CA1区神经元的远期影响

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)新生大鼠远期的学习记忆功能和海马CA1区神经元的保护作用.方法 18只7日龄SD大鼠随机分为3组(n=6),分别是:假手术组、HIBD组、HBO干预组(HBO HIBD).基于Rice法制作HIBD模型,HIBD HBO组大鼠在HIBD后1 h应用2.5 ATA(1 ATA=100 kPa)的高压氧进行一次性治疗,治疗时间为1.5 h.在大鼠6周龄时,应用抑制性回避实验评价其短时程记忆功能,用Morris水迷宫实验评价大鼠8周龄时的空间学习和记忆功能.9周龄时灌注取脑,观察大鼠海马CA1区的神经元死亡和丢失情况.结论 在抑制性回避实验中,各组大鼠在学习期跳台潜伏期差异没有统计学意义,在测试期,HIBD HBO组大鼠的跳台潜伏期长于HIBD组(P＜0.05);在Morris水迷宫实验中,HIBD HBO组大鼠无论在定位航行实验中还是在空间探索实验中均比HIBD组表现良好,在定位航行实验中,各组大鼠的寻台潜伏期随着实验次数的增多而逐渐缩短,而HIBD HBO组的平均寻台潜伏期比HIBD组短(P＜0.05);在空间探索实验中,无论是站台区探索时间还是穿越站台区的次数,HIBD HBO组均优于HIBD组(P＜0.05).HIBD HBO组大鼠的脑组织病理变化比HIBD组轻,且损伤侧的海马CA1区的神经元没有明显的死亡和丢失.结论 新生大鼠HIBD后1 h给予单次高压氧(2.5 ATA,1.5 h)治疗,可以有效地改善大鼠远期的学习记忆功能,同时也可以减轻大鼠海马CA1区的神经元的坏死与丢失.     

GM1对缺氧缺血新生大鼠脑损伤的保护作用

目的研究外源性单唾液酸四已糖神经节苷脂(monosialotetrahexosylgangtliosicle,GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic—ischemic brain damage，HIBD)的保护作用。方法建立HIBD模型，观察腹腔注射GM，对HIBD模型鼠体重增长、脑水肿的影响，并用免疫组化及苏木素-伊红(HE)染色方法检测缺氧缺血(hypoxic—ischemic，HI)和GM1干预后不同时间点脑海马组织HSP70阳性细胞及病理学改变。结果HI后新生大鼠海马CA1区仅能检出少量阳性HSP核蛋白(仅在核内表达的蛋白)，海马CA1区神经元呈较严重的缺血损伤性改变。而GM1组体重增加、脑水肿减轻、可见应激蛋白HSP70明显表达。结论GM1可使新生大鼠海马CA1区HSP70表达上调，减轻脑水肿、减轻脑缺氧缺血后病理损伤，对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤具有保护作用。     

几种不同药物对缺氧缺血新生大鼠神经元凋亡的影响

目的：探讨7—硝基吲唑(7—NI)、N—乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、硫酸镁、脑细脆生长肽(bFGF)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时神经细胞凋亡的影响。方法：72只Wistar大鼠随机分成6组，(1)假手术组(n＝12)，仅作正中切口，不作颈总动脉结扎；(2)空白对照组(生理盐水组)(n＝12)，HIBD后即刻腹腔注射生理盐水(NS)0．5ml；(3)7—NI组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射7—NI 25mg/kg；(4)NAC组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射NAC200μg/只；(5)硫酸镁组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射硫酸镁450mg／kg；(6)bFGF组(n＝12)HIBD后即刻腹腔注射bFGF 10mg。各组均于处置后24小时(h)处死断头取脑，取丘脑中1／3平面行冠状切片，常规石蜡包埋后切片6um,用HE和Tunel染色检测脑细胞凋亡数目。结果：假手术组末见有凋亡特征的阳性细胞；7—NI、NAC硫酸镁和bFGF组脑细胞凋亡数均明显低于对照组；各组与对照组分别经统计学处理差异有显著意义。结论：7—NI、NAC硫酸镁和bFGF对HIBD时脑细胞凋亡确有显著的影响。     

脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠脑保护作用的实验研究

目的 探讨脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠（HIBD）脑的保护作用。方法 7日龄Wistar大鼠，72只，随机分成3组，（1）假手术组（n=12）；（2）观察组（n=30）：HIBD模型后即刻给脑细胞生长肽10mg腹腔注射；（3）对照组（n=30）HIBD模型后即刻腹腔注射等体积的生理盐水。于处置后0、24、48、72h检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）水平；并于处置后24h作HE和Tunel染色光镜下检测脑细胞凋亡数。结果 观察组脑组织SOD、MDA、NO水平及脑细胞凋亡数与对照组比较均有显著性差异。结论 脑细胞生长肽可通过拮抗氧自由基、抑制NO合成和阻止神经细胞凋亡，发挥对HIBD时脑的保护作用。     

神经元型一氧化氮合酶在缺氧缺血新生大鼠脑组织的表达变化及其抑制剂7-NI的脑保护作用

目的　探讨神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)及其选择性抑制剂 7 硝基吲唑 (7 NI)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)中的作用。方法　制备新生大鼠HIBD模型 ,用RT PCR的方法测定HIBD组缺氧开始后 0h、1h、2h、6hnNOSmRNA的表达 ,同对照组相应时点比较。测定HIBD组、7 NI组缺氧开始后 1h、2h、6h、8h以及对照组一氧化氮合酶 (NOS)、一氧化氮 (NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)的含量并作相应比较 ,另用TUNEL法比较 3组缺氧结束后 2 4h神经细胞凋亡的情况。结果　在缺氧开始后 2h和 6hHIBD组nNOSmRNA表达高于对照组 (P <0 0 5 ) ,且以 6h表达更高 (P <0 0 5 )。HIBD组各时点与对照组比较NOS、NO、MDA值升高 (P <0 0 1) ,SOD值下降 (P <0 0 1) ,而 7 NI组各时点MDA、NOS和NO值较HIBD组下降 (P <0 0 5 ) ,SOD值升高 (P <0 0 5 ) ,1h时点测定值接近对照组水平。对照组未见明显细胞凋亡情况 ,7 NI组比HIBD组凋亡减少 ,差异具有显著性 (P <0 0 0 1)。结论　nNOS参与了新生鼠HIBD的形成 ,其抑制剂 7 NI通过抗氧化和抑制凋亡发挥了神经保护作用。     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

IGF-1对缺氧缺血新生大鼠总Tau蛋白的影响

目的:本研究利用经典的新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)动物模型,观察应用胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)前后脑白质微管相关蛋白(microtubule-associated protein,MAP)总Tau水平的改变,探讨新生大鼠HIBD早期应用IGF-1后总Tau蛋白水平的改变与脑损伤的关系。方法:7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和用药组,分别给予同等剂量的磷酸盐缓冲液PBS(假手术组、模型组)和IGF-1(用药组)腹腔注射,给药后24小时采集标本。HE及嗜银染色法光镜下分别观察脑神经细胞和神经纤维的病理变化;免疫组化和Western Blot方法检测脑白质总Tau蛋白水平的表达。结果:(1)假手术组HE染色后脑白质神经细胞形态正常,轮廓清晰,核仁核膜明显,大小无变化,未见明显损伤性改变;模型组新生大鼠脑组织HE病理检测可见明显的毛细血管出血,细胞核固缩、核碎裂明显,模型建立成功。(2)假手术组脑神经细胞染色分布均匀,树突轴突沿其走行分布;模型组嗜银染色示神经纤维增粗,部分神经纤维呈缠结状;用药组神经纤维稍增粗,未见明显的神经纤维缠结。(3)免疫组化和WesternBlot检测用药组总Tau蛋白的值低于模型组(p(0.05),但高于假手术组(p(0.05)。结论:HIBD新生大鼠早期应用IGF-1对脑白质神经细胞和神经纤维具有保护作用,总Tau蛋白水平下降。     

血小板生长因子对新生鼠缺血缺氧性脑损伤保护作用

目的探讨血小板生长因子(PDGF)对新生鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法 7日龄Wistar大鼠72只,随机分为假手术组、治疗组和对照组,每组24只。假手术组仅分离右颈总动脉,治疗组和对照组分离右颈总动脉结扎,低氧2h制备新生大鼠HIBD模型。治疗组在成模后即刻给予PDGF50ng/kg腹腔注射,假手术组和对照组成模后即刻腹腔注射等体积的生理盐水。每组随机取8只大鼠于术后12、24、72h处死,取脑组织制备脑细胞悬液,双染法流式细胞仪检测脑细胞凋亡率。结果假手术组各时间点神经细胞凋亡率无明显差异(P>0.05),术后12、24、72h对照组和治疗组神经细胞凋亡率均逐渐增加,差异有显著性(F=130.35、78.83,q=5.07～19.46,P<0.01);各时间点对照组和治疗组较假手术组脑细胞凋亡率显著增加,治疗组较对照组脑细胞凋亡率显著减少,差异有显著性(F=39.01～194.20,q=3.08～16.51,P<0.01)。结论 PDGF可通过减少神经细胞凋亡,发挥对新生鼠HIBD的神经保护作用。     

缺氧缺血新生鼠损伤脑组织中Nogo-A,Ng-R mRNA的表达

目的：观察Nogo-A、Ng-R mRNA在缺氧缺血新生鼠损伤脑组织中表达量的变化。方法：将7d龄SD大鼠随机分为假手术组和缺氧缺血脑损伤(HIBD)组(结扎右颈功脉后,置于低氧舱处理),分别于缺氧处理0h、6h、12h、24h、72h及7d后断头处死6只动物。用RT-PCR方法定量分析缺氧缺血侧脑组织Nogo-A及Ng-RmRNA的表达水平。结果：假手术组各时点脑组织Nogo-A及Ng-RmRNA表达无变化。与假手术组比较,HIBD组大鼠Nogo-A mRNA在HIBD后6h开始升高．12h达峰值;Ng-RmRNA在HIBD后6h开始升高,12h达峰值．24h时仍维持在较高水平。结论：Nogo-A Ng-R可能与HIBD后神经再生抑制有一定关系。     

间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子含量的影响

目的 观察间充质干细胞（MSCs）移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）含量的影响,初步探讨间充质干细胞移植治疗新生大鼠HIBD的机制。方法 体外分离培养4～6周龄SD大鼠骨髓MSCs。采用新生7日龄SD大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露2.5h制作HIBD模型。24h 后,MSCs移植组（n=20）经尾静脉注射1×106个MSCs,PBS对照组（n=20）尾静脉注射PBS（0.01ml /g）,HIBD手术组（n=20）和正常对照组（n=20）不作注射。采用大鼠改良神经功能损害评分(mNSS)及ELISA法分别检测移植后1、3、7、14d各组大鼠神经功能及脑内GDNF含量。结果 MSCs移植后7、14d,MSCs移植组的神经功能损害评分明显低于PBS对照组和HIE手术组（P<0.05）。制模后,所有HIBD大鼠的GDNF含量均较正常对照组明显升高（P<0.05）。与PBS对照组和HIE手术组比较,MSCs移植组在各个时间点的GDNF含量升高更为明显（P<0.05）。结论 MSCs移植可改善HIBD新生大鼠的神经功能,促进脑内GDNF的合成和分泌,从而发挥神经保护和修复作用。