赤芍等5种上调酷氨酸酶活性中药乙醇提取液对棕黄色豚鼠背部皮肤的增色作用

为了研究中药对黑素细胞生物学特性的影响,筛选有增色作用的中药,为应用中药治疗白癜风等色素减退性皮肤病提供实验诊据。选定体外对酷氨酸酶活性有显著激活作用的中药5味,用中药乙醇提取液外涂棕黄色豚鼠背部皮肤,然后取材,进行HE、Schmorl、Imokawa等方面染色,观察外用中药后黑素细胞数量和形态的改变。结果,赤芍、川芎、菟丝子、补骨脂、刺蒺藜等中药组多巴阳性黑素细胞数、含黑素颗粒细胞数及黑素含量指数均较空白对照组明显增多（P＜0.01或P＜0.05),其中菟丝子、赤芍组与阳性对照组0.1%8-MOP酊外用无显著性差异（P＞0.05)。提示赤芍、川芎、菟丝子、补骨脂、刺蒺藜等中药具有增色作用,临床上可试用于白癜风等色素减退性皮肤病。     

槲皮素对过氧化氢诱导A375细胞氧化损伤的保护机制研究

目的探讨槲皮素对人A375黑素瘤细胞的氧化损伤是否具有保护作用。方法体外培养人A375黑素瘤细胞,随机分为空白对照组、H2O2损伤组、不同浓度槲皮素预处理组(槲皮素终浓度为5、10、25、50μmol/L)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法测定细胞增殖,NaOH法测定黑素含量,流式细胞仪(Annexin V/PI法)测定细胞早期凋亡百分率。结果与H2O2损伤组相比,25μmol/L槲皮素组对细胞增殖有促进作用,其余槲皮素各组与H2O2损伤组相比差异无统计学意义(P0.05);与H2O2损伤组相比,各浓度的槲皮素均对细胞的黑素合成有促进作用(P0.05)。各槲皮素预处理组细胞早期凋亡百分率均低于H2O2损伤组(P0.05)。结论槲皮素可以减轻H2O2对人黑素瘤细胞造成的氧化损伤和早期凋亡。     

槲皮素和原花青素对豚鼠白癜风模型黑素合成的影响

目的：明确槲皮素、原花青素单体对白癜风豚鼠皮肤黑素合成的影响。方法：利用过氧化氢构建38例豚鼠白癜风模型成功后,随机分为5组,分别给予乙醇（A组）、蒸馏水（B组）、0.1%8-甲氧补骨脂素（8-MOP）（C组）、0.5%槲皮素（D组）、0.1%原花青素（E组）以及0.3%原花青素（F组）外涂皮肤,其中C组用药1h后予日光照射10min。治疗期间,每2周拍摄记录豚鼠皮损色素沉着。40天后,处死全部模型并取被试区皮肤。肉眼下及HE染色观察皮肤基本病理改变;黑素颗粒染色法（Fontana-Masson法）检测含黑素颗粒细胞数量。结果：除A、B组外,其余4组在治疗期间均出现不同程度色素沉着。HE染色发现,与A、B组相比,其余4组皮肤厚度更厚,色沉较明显。Fontana-Masson法显示,与A、B组相比,其余4组黑素颗粒明显增多（P均<0.05）,其中,D、F组明显多于E组（P均<0.05）。结论：槲皮素以及原花青素单体对白癜风豚鼠模型的皮肤具有复色作用。     

槲皮素抗氧化作用研究新进展

槲皮素(Quercetin)是常见的黄酮类化合物,也是重要的膳食类抗氧化剂。槲皮素及其衍生物在植物界分布广泛,主要存在于多种蔬菜,水果,茶及酒中。其中槲皮素清除活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)发挥抗氧化作用的能力与其对人体健康的保护作用密切相关。     

过氧化氢对黑素细胞生物学作用的研究

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的正常人表皮黑素细胞的生物学作用.方法:分别以0.05、0.1、0.5、1 mmo1/L的H2O2作用于体外培养的黑素细胞24 h,采用多巴氧化法测定酪氨酸酶活性;NaOH裂解法测定黑素合成;比色法测定丙二醛(MDA)含量.结果:正常人表皮黑素细胞经H202处理后,酪氨酸酶活性降低,黑素合成量减少,丙二醛含量增多,其中以0.5、1 mmol/L的H2O2作用明显,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:H2O2在-定浓度时可抑制正常人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性,减少黑素合成,并可致细胞过氧化损伤.提示H2O2在白癜风发病中可能起到一定作用.     

红色毛癣菌对动物毛发降解的实验研究

目的:研究红色毛癣菌对动物毛发的降解作用.方法:采用体外液体培养红色毛癣菌,加入数根小鼠或豚鼠毛发,以低浓度的酵母浸膏提供菌株生存所必需的营养,菌株生长所需的碳源和氮源由菌株分解动物毛发获得,培养2周后观察菌落的生长情况及动物毛发结构的改变,须癣毛癣菌作为阳性对照.结果:2周后,红色毛癣菌和须癣毛癣菌在豚鼠和小鼠毛发上均能生长,菌落生长后,光镜下可见动物毛发正常结构破坏,横纹变模糊消失.结论:红色毛癣菌能在体外分解豚鼠或小鼠的毛发作为营养,维持菌落的生长.     

中药消白灵汤对黑素细胞影响的实验研究

目的：观察中药消白灵汤对体外培养的鼠黑素细胞的影响，探讨中药消白灵汤治疗白癜风的疗效机制。方法：用MTT法测定中药消白灵汤及其主要成分不同浓度对体外培养的鼠B16F10黑素瘤细胞系黑素细胞生长增殖的情况；用NaOH裂解法测定中药消白灵汤及其主要成分不同浓度对黑素细胞黑素合成的影响。结果：消白灵汤组、补肾阳药组和养血活血药组及其不同浓度在第3天至第5天均能明显促进黑素细胞增殖（P〈0.05），且以消白灵汤组浓度为1mg／mL者刺激黑素细胞的增殖更明显（P〈0．01）；补肾阳药组浓度为2mg／mL和3mg／mL者和养血活血药组浓度为3mg／mL者对黑素细胞合成黑素的能力均有所增强（P〈0.05）。结论：中药消白灵汤能促进黑素细胞增殖和黑素合成，并提示补肾阳药和养血活血药在治疗白癜风的组方用药中的重要作用。     

某些化妆品致色素作用的实验研究

用Ｉｍｏｋａｗａ等的实验方法，用１０种化妆品及８种化妆品化学成分涂于黄棕色豚鼠侧背部皮肤，然后取材，进行ＨＥ染色、黑素染色及Ｄｏｐａ氧化酶染色，以探讨化妆品及其化学成分的致色素作用。结果：１０种化妆品均显著增加黄棕色豚鼠表皮基底细胞中含黑素的细胞数，而８种化妆品成分中仅胭脂红、对羟基苯甲酸、柠檬黄、松香、羊毛脂等５种引起此种改变。提示此动物模型易于显示化妆品的致色素作用，又可显示化学品致色素作用的差异。并观察到组织有无炎症反应及反应程度与色素沉着不完全平行，提示化妆品及其成分所致的色素沉着并非全是炎症的后果，因此，在化妆品生产中不仅要避免化妆品中所含的致敏物质，还须设法避免致色素的物质     

17味中药对豚鼠皮肤TNF-α、IL-10作用的影响

目的探讨17味中药对豚鼠皮肤肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)的调节作用。方法实验动物随机分4组,17味中药乙醇提取液为实验组,8-甲氧补骨脂素(8-MOP)、75%乙醇为阳性及阴性对照组,均涂于豚鼠皮肤上,40 d后取皮肤标本免疫组化染色,测TNF-α、IL-10平均光密度,比较其作用结果。结果当归、甘草、枸杞、红花、女贞子、首乌、益母草、黑芝麻、栀子对TNF-α表达下调;甘草、枸杞、合欢皮、黄芪、女贞子、沙参、沙苑子、菟丝子、黑芝麻对IL-10表达上升,其中甘草、枸杞、女贞子、黑芝麻对TNF-α、IL-10均表现正向调节作用;合欢皮、黑桑葚对TNF-α表达上调,旱莲草、黑桑葚使IL-10表达下降,出现负向调节作用。结论通过中药对TNF-α、IL-10调节作用探讨,为研制治疗白癜风的有效组方提供可靠实验数据。     

自身皮肤移植和黑素细胞移植对白癜风的治疗研究

迄今,白癜风的治疗仍然是临床医生最棘手的问题之一,药物和(或)物理疗法虽有一定的疗效,但由于黑色素再生缓慢,疗程长,或易产生毒副反应,患者常常不能坚持,效果不够满意。因此,促使人们考虑自身皮肤移植的方法,近年来,由于培养技术的进展,黑素细胞的自身移植也列入研究的范围。虽然这些方法未能解决发病问题也不是最好疗法,但未尝不是一个探索的途径。现将有关研究情况介绍如下:     

白术等对UVB诱导豚鼠皮肤色素沉着的抑制作用

目的 研究中药对皮肤色素沉着的抑制作用,筛选有作用的单味中药,为应用中药治疗色素障碍性皮肤病提供实验依据。方法 选定体外对酪氨酸酶活性有显著抑制作用的中药5味,应用棕黄色豚鼠UVB照射诱导皮肤色素沉着实验动物模型,采用HE、Schmorl、Imokawa等方法染色,观察外用中药后黑素细胞数量和形态的改变。结果 白术、茯苓、山茱萸、猪苓、沙苑蒺藜等中药组多巴阳性黑素细胞数及含黑素颗粒细胞数较对照组明显减少(P<0.01),其中白术、茯苓、山茱萸与阳性对照组3%氢醌外用差异无显著性(P>0.05)。结论 白术、茯苓、山茱萸、猪苓、沙苑蒺藜等中药对UVB诱导的色素沉着具有抑制作用。     

槲皮黄酮抑制LRIG2/EGFR信号转导诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡

目的 研究槲皮黄酮(Qu)对人皮肤鳞状细胞癌(CSCC)A431细胞增殖、凋亡及免疫球蛋白样结构域2(LRIG2)/表皮生长因子受体(EGFR)信号转导的影响.方法 CCK8法和流式细胞术分析Qu对A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标的影响;倒置显微镜观察A431细胞的克隆数;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测5-溴...     

槲皮素对鼠黑素细胞株B10BR细胞的抗氧化保护效应及对其生物学活性的影响

目的 探讨槲皮素保护鼠永生化黑素细胞（B10BR）对抗氧化应激的有效性及其对B10BR细胞生物学活性影响。方法 MTT法测定B10BR细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置显微镜下观察细胞形态改变,并检测槲皮素对酪氨酸酶活性及黑素合成的影响。结果 经33.33 μmol/L槲皮素预处理24 h后细胞活性增高至（94.22 ± 3.36）%,此外黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素含量可分别增高至（107.15 ± 10.96）%和（111.85 ± 9.49）%,与过氧化氢处理组相比,差异均有统计学意义（P < 0.01）。流式细胞仪检测结果表明,槲皮素可抑制过氧化氢诱导的黑素细胞凋亡。结论 槲皮素抑制过氧化氢诱导黑素细胞凋亡的保护效应为其治疗白癜风提供一定的依据。     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

目的研究槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响,探讨其作用机理。方法体外培养瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞,应用羟脯氨酸比色法对不同药物浓度处理后成纤维细胞胶原合成量进行分析;RT-PCR及Real-timePCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ-1基因表达水平。结果槲皮素可抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成,该作用呈剂量依赖效应;槲皮素可降低Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGFβ-1基因mRNA水平。结论槲皮素对于瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有显著抑制效应,其作用机制之一为通过抑制TGFβ-1基因在转录水平降低了前胶原mRNA水平,因而使成纤维细胞胶原合成减少。     

槲皮素对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的影响

目的探讨槲皮素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在生长增殖、细胞凋亡方面的作用,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法MTT法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞干预前后的生长曲线;光学显微镜观察干预后细胞的形态学变化;流式细胞仪分析成纤维细胞在干预前后的细胞周期变化;原位细胞凋亡检测成纤维细胞干预后的细胞凋亡率;免疫细胞化学和蛋白印迹实验检测成纤维细胞干预前后p53、bcl-2、bax蛋白表达水平的变化。结果MTT法显示槲皮素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞有抑制作用,抑制效应呈剂量时间依赖关系;槲皮素作用后48h瘢痕疙瘩成纤维细胞发生G2/M期阻滞,并且出现细胞凋亡,光镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集;流式细胞仪结果显示有凋亡峰出现;原位细胞凋亡检测显示凋亡率为16.5%±2.7%。槲皮素作用后细胞p53蛋白和bax蛋白表达升高,bcl-2蛋白表达降低。结论槲皮素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长。     

中药对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响及致色素作用

目的 探讨中药对皮肤酪氨酸酶基因表达、色素生成和黑素细胞增殖的影响。方法 选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用的旱莲草等7种中药,以棕色豚鼠为动物模型,采用mRNA原位杂交观察中药外涂对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响,并用Schmorl法染色和多巴-氧化酶染色观察中药促色素生成及黑素细胞增殖的作用。结果 原位杂交显示中药处理组的酪氨酸酶阳性细胞数和杂交信号明显高于对照组(P<0.01),尤其以旱莲草、夏枯草、刺蒺藜等显著。Schmorl法和多巴-氧化酶染色示7种中药能使豚鼠表皮基底层内含有黑素颗粒的细胞数和多巴阳性细胞的数量增多(P<0.05),但7种中药的两种作用并不完全平行(P>0.1)。结论 旱莲草等7种中药均具有上调豚鼠皮肤酪氨酸酶的基因表达、促进黑素生成和黑素细胞增殖的作用,提示中药的作用不仅限于转录水平,有可能影响黑素细胞的增殖和黑素颗粒的生成。     

单味中药提取物对体外培养的黑素细胞酪氨酸酶基因和c-kit基因表达的激活作用

目的 研究补骨脂、白芷、夏枯草、川芎和墨旱莲单味中药提取物对黑素细胞的酪氨酸酶基因和原癌基因c-kit蛋白表达的影响，以及对总蛋白合成的影响。方法 采用蛋白印迹法检测了酪氨酸酶蛋白和干细胞因子受体kit蛋白含量的变化；595nm比色标准曲线测定黑素细胞可溶性总蛋白含量。结果 白芷、补骨脂、夏枯草、川芎和墨旱莲对黑素细胞可溶性总蛋白合成和c-kit基因蛋白表达有促进作用，其中白芷和补骨脂对c-kit基因蛋白表达的促进作用为69．44％和58．43％；夏枯草、墨旱莲和川芎对酪氨酸酶基因的蛋白表达有一定的促进作用。结论 在白癜风治疗中传统中药具有较好的疗效．可能与酪氨酸激酶受体蛋白含量的提高相关，即通过SCF／kit蛋白途径起作用，因此可以通过该途径进一步筛选更多治疗白癜风的单味中药。     

胎盘中提取的黑素生成素有效成分分析及动物实验

目的 分析黑素生成素中的活性成分及其对豚鼠表皮中黑素细胞的影响。方法 利用放免法及比色法分别测定黑素生成素中内皮素和唾液酸的含量;用黑素生成素外搽豚鼠背部皮肤加红外线照射,5周后,对搽药的皮肤和对照皮肤进行活检,分别制备透射电镜超薄切片及不同的特殊染色的病理切片。统计搽药表皮病理切片中黑素细胞数目及黑素含量的变化并进行超微结构观察。结果 测定黑素生成素中内皮素含量为210.5±30.1pg/mL,唾液酸含量为147.9±12.1μg/mL。用黑素生成素外搽动物表皮后黑素细胞数目明显增加;含有黑素颗粒的角质形成细胞数、黑素含量指数(MCI-1、2)均有明显提高。结论 黑素生成素中含有能促进黑素细胞增殖的内皮素及增强细胞间识别与粘附的糖和糖脂类物质,作用于动物表皮具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。