以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料对兔桡骨骨缺损修复的实验研究

目的　了解以纤维蛋白胶 (FS)为载体的注射型骨修复材料修复兔桡骨节段性骨缺损的能力 ,为其临床的应用提供实验依据。方法　实验分组为 :实验组b (FS +bFGF +牛BMPbBMP)、对照组b1(FS +bBMP)、实验组r (FS +bFGF +rhBMP- 2 )、对照组r1(FS +rhBMP)、对照组FS。于 70只新西兰白兔右侧桡骨干处造成 1 5cm缺损 ,然后严密缝合皮下组织及皮肤 ,将各组材料经正常皮肤注射骨缺损处 ,术后不同时间进行放射学、组织学和骨密度等方法检查 ,对其成骨效应进行研究。结果　在以bBMP为成骨因子的实验区中 ,实验组b骨缺损区在成骨活跃程度、骨密度和再生髓腔结构等方面均显著优于对照组b1,使骨缺损得到了较彻底的修复 (P <0 0 1) ;同样 ,在以rhBMP - 2为成骨因子的实验区中 ,实验组r骨缺损区在成骨活跃程度、骨密度和再生髓腔结构等方面均显著优于对照组r1,使骨缺损得到了较彻底的修复 (P <0 0 1) ,对照组FS不能产生骨性愈合。结论　以FS为载体复合BMP和bFGF的注射型骨修复材料具有高效的骨修复能力。     

BMP/bFGF生物活性材料修复关节软骨损伤的实验研究

[目的]探讨骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)生物材料在关节软骨缺损修复过程中的作用,为内源性修复关节软骨缺损提供实验基础.[方法]取24只14龄成年大白兔随机分成4组,每只动物于双侧膝关节股骨膑股关节面制备直径5mm全层关节软骨缺损模型.钻通骨髓腔.A组应用BMP/bFGF生物活性材料,B组应用BMP生物活性材料,C组应用bFGF生物活性材料,D组单纯应用生物蛋白胶材料.于8、12、24周在大体,光镜及电镜下观察损伤修复效果,组织学评分.[结果]A组于8、12周时,软骨缺损被白色半透明坚硬组织平滑修复,富有光泽,24周时修复组织正常软骨边界模糊,连接紧密,质地坚硬,表面平滑光润.B、C组于8、12、24周时候均未见软骨缺损完全修复,边界清楚,中央凹陷明显残留.D组全程均未见软骨修复.组织学平分A组明显优于B、C、D组,而B、C组之间无差别.[结论]BMP/bFGF生物活性材料可以有效修复兔大面积关节软骨损伤,疗效明显优于单独应用骨形态发生蛋白或碱性成纤维细胞生长因子,为关节软骨损伤治疗提供新的治疗方法.     

一种新型注射型骨修复材料对犬桡骨骨缺损修复的实验研究

目的 探讨以纤维蛋白胶(fibrin sealant,FS)为载体复合牛骨形态发生蛋白(bBMP)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的注射型骨修复材料修复犬桡骨节段性缺损的效果. 方法 12只家犬随机分为实验组和对照组,每组6只.12只成年健康家犬右侧桡骨中上段造成2.0 cm缺损,制成犬桡骨2.0 cm骨缺损实验模型,然后严密缝合皮下组织及皮肤.对照组和实验组分别经切口周围正常皮肤注射FS和FS bFGF bBMP到骨缺损处,术后4、8、16、24周进行放射学检查,术后24周取标本进行组织学和骨密度检查,研究其成骨效应. 结果 ①影像学:实验组术后4周缺损区有密度较低的骨痂形成;术后24周,皮质完全连接,髓腔再通.对照组术后24周内缺损区均无骨痂生长,骨缺损未得到修复.②骨密度测定:术后24周时实验组的骨密度(456.33±13.74)mg/cm2显著高于健侧(433.33±6.77)mg/cm2(t=2.57,P=0.00)及对照组(0mg/cm2)的骨密度.③组织形态学:术后24周实验组新生皮质骨十分致密,骨皮质连接完整,髓腔完全再通;对照组无新生骨形成,缺损处完全为结缔组织修复. 结论 以FS为载体复合bBMP和bFGF的注射型骨修复材料具有高效的骨修复能力,对家犬的骨缺损有良好的修复效果.     

可注射型骨修复材料对兔MSC增殖及分化的影响

目的：观察以纤维蛋白胶为载体的骨修复材料对兔骨髓基质细胞（marrow stromal cell,MSC)增殖及分化的影响。方法；采用细胞培养及组织化学等方法对各材料组兔MSC的增殖、碱性磷酸酶（alkaline phosphase,ALP)的活性和染色、细胞贴壁率及I型胶原表达进行研究。结果：（1）各组材料对细胞贴壁率及促增殖作用的影响总体上由强到弱依次是：对照组2→实验组→对照组1[纤维蛋白胶（fibrin sealant,FS)]→对照组3→单纯对照组，差异有显著性（P＜0．05）。（2）各组细胞的I型胶原表达水平和ALP活性由强到弱依次是：实验组→对照组3→对照组1→对照组2→单纯对照组，差异有显著性（P＜0．05）。结论：以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料可显著保进MSC贴壁率和向成骨细胞方向的分化水平。     

纤维蛋白用作BMP载体的研究

目的：将纤维蛋白用作ＢＭＰ（骨形态发生蛋白）的载体材料。方法：用５ｍｇ ＢＭＰ分别与３种不同浓度的纤维蛋白制成复合物，植入小鼠肌囊后不同时间进行组织学观察、测定碱性磷酸酶活性和钙含量等。结果：纤维蛋白浓度为１２０ｍｇ／ｍｌ的复合物具有良好的骨诱导活性，成骨量是单纯５ｍｇ ＢＭＰ的两倍。结论：纤维蛋白是理想的ＢＭＰ载体材料，复合物可望应用于临床骨缺损的修复。     

多孔磷酸钙人工骨复合BMP-2/bFGF成骨的实验研究

目的 研究多孔磷酸钙人工骨与重组人骨形成蛋白2/碱性成纤维细胞生长因子复合后成骨的作用.方法 通过体外实验获取BMP-2/bFGF最佳比例,将犬的骨髓基质细胞与PCPC/BMP-2/bFGF复合材料扫描电镜观察,以BMSCs/PCPC为对照组,BMSCs/PCPC/BMP-2、BMSCs/PCPC/bFGF、BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF为实验组,植入裸鼠皮下,术后4、8、16周,取材行组织学观察,计算新骨形成面积.结果 扫描电镜显示,BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF吸附了大量BMSCs,BMSCs/PCPC/BMP-2/bFGF组新骨形成较其他组明显增多.结论 PCPC是BMP-2/bFGF较理想的载体材料,复合后具有良好的诱导成骨作用,可作为一种新型复合人工骨修复骨缺损.     

bFGF/BMP/AACB复合物修复犬股骨头缺损坏死模型的实验研究

目的制备bFGF/BMP/AACB复合物,通过动物实验研究其对股骨头缺损坏死模型的修复作用及相关问题,探讨临床应用的可能性。方法制备异体脱抗原松质骨(AACB),并将其与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及骨形态发生蛋白(BMP)复合制成bFGF/BMP/AACB复合物,植入通过液氮冷冻建立的犬股骨头缺损坏死模型,术后不同时间处死动物。通过大体解剖、X线片、组织学染色、图像分析、血管免疫组化染色、X线能谱分析、生物力学测定等手段观察缺损坏死模型的修复情况。结果术后各组动物均无毒性反应和炎症反应。A组(空白缺损组)术后12周缺损仍未愈合;B组(AACB组)虽然优于A组,但成骨作用不及C组(BMP/AACB组);而D组(bFGF/BMP/AACB组)成骨和成血管作用优于A、B、C组。早期(3、6周)甚至优于E组(自体骨组),后期(12周)的骨修复及骨改建效果与E组相当。结论bFGF/BMP/AACB复合物具有明显促进犬股骨头缺损坏死模型再血管化及新骨形成的作用,可望成为新型的股骨头缺血性坏死(ANFH)修复材料。     

骨形态形成蛋白复合纤维蛋白载体修复全厚关节软骨缺损的实验研究

目的：用骨形态形成蛋白（BMP）复合纤维蛋白载体修复创伤性全厚关节软骨缺损,方法：60只新西兰家兔,体重2．5－3kg,雌雄不限,随机分为5组,每侧股骨髌髁关节面低速电钻钻一直径为4mm全厚关节软骨缺损,一侧缺损填充BMP／FS,对照侧缺损填充单纯FS,单纯BMP和空白组,膝关节不做固定,允许笼中自由活动,术后2,4,8,12周空气栓塞分批处死动物,大体观,组织学切片HE染色,S－100蛋白免疫组化染色和透射电镜观察实验结果,结果：术后4周,BMP／HF填充的部分关节软骨缺损由类透明软骨修复,术后8周,实验组缺损大部分由类透明软骨修复,而对照组则由纤维软骨或纤维组织修复,术后12周,实验组修复组织主要是透明软骨或类透明软骨,修复面较平整光滑,与周围组织愈合良好,但部分修复软骨面变薄,纤维化。结论：BMP／FS复合物促进了关节软骨的早期修复,并且最终的修复组织更接受正常的关节软骨,但术后12周修复的关节软骨出现退行性改变。     

成纤维细胞生长因子增强骨形态发生蛋白在小鼠体内骨诱导作用

在啮类动物体内植入骨形态发生蛋白后，引起细胞内一系列生化和形态学变化，在植入物内和其周转形成新骨。这过程受多因素影响。本实验将重组人成纤维细胞生长因子与部分纯化的ＢＭＰ悬液混合后注入小鼠肌肉，观察成骨反应。单独注射牛骨ＢＭＰ组和ｂＦＧＦ组为对照。     

溶胶凝胶生物活性玻璃复合BMP人工骨修复骨缺损的实验研究

目的:观察溶胶凝胶生物活性玻璃复合BMP人工骨修复骨缺损的情况.方法:新西兰种兔,阶段性完全性骨缺损,将人工骨植入骨缺损处,分别进行(1)大体标本;(2)组织学;(3)X线片;(4)生物力学.结果:BMP 生物活性玻璃组已完全修复,颗粒已基本吸收,对照组修复效果较差.生物力学显示实验组扭转强度明显高于其他三组.结论:该人工骨具有高效的诱导成骨能力和良好的生物降解性.     

HA、RBM、BMP及FS复合物修复骨缺损的实验研究

目的探讨羟基磷灰石HA、自体红骨髓RBM、骨形态发生蛋白(BMP)及纤维蛋白(FS)复合物修复骨缺损的能力及其作为人工骨移植替代材料的可行性。方法在新西兰大白兔双侧桡骨制备骨缺损模型,将HA-RBM-BMP-FS复合物植入骨缺损动物模型处,以自体骨移植及空白组(不植入任何物质)作为对照,在2、4、8、12周四个时间点分别进行大体标本观查、组织病理学、X线片观察及生物力学测试,比较三者修复骨缺损的能力。结果大体标本观查、组织病理学、X线片显示,在12周,HA-RBM-BMP-FS复合物与自体骨移植组骨缺损均已完全修复,HA无明显吸收,而空白对照组骨缺损未修复;生物力学测试显示自体骨移植组与HA-RBM-BMP-FS复合物组差异无显著性意义。结论HA-RBM-BMP-FS复合物具有较强的成骨能力,可修复骨缺损,并能作为自体骨移植的一种替代物。     

基因活化纳米骨浆异位诱导成骨能力的实验观察

目的观察纳米骨浆经成骨基因-人骨形态发生蛋白2（human bone morphogenetic protein 2，hBMP2）活化后是否具有异位诱导成骨能力。方法昆明种小鼠24只，4周龄，体重（20±2）g，随机分为两组。两组小鼠右侧大腿后群肌袋均注射纳米骨浆＋hBMP2质粒，作为实验侧；1组：左侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆＋空白质粒，作为对照侧1；2组：左侧大腿后群肌袋注射纳米骨浆，作为对照侧2。术后2、4周，采用放射学、分子生物学和组织形态学等方法检测成骨基因hBMP2表达和诱导成骨效应。结果术后所有动物均存活，饮食活动正常。RT-PCR和Western blot检测发现术后2、4周实验侧注射材料组织有hBMP2表达。术后2周，实验侧植入材料出现大量软骨组织和呈岛状散在分布的骨组织，对照侧未见骨组织形成。术后4周，实验侧可见大量骨化组织，新生骨相互融合生长并形成较为成熟的板层骨和骨小梁结构；对照侧植入材料外周有较多纤维结缔组织，未见骨或软骨形成。术后2、4周，实验侧碱性磷酸酶活性均明显高于对照侧（P〈0．01），差异有统计学意义。结论纳米骨浆在hBMP2基因质粒活化后具有显著的骨诱导活性。     

纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究

目的　探讨纤维蛋白胶 (FG)作为神经生长因子 (NGF)载体对周围神经再生的促进作用。方法　将Wistar大鼠 96只随机分为 4组 ,即对照组、FG组、NGF组、FG +NGF组 ,每组 2 4只 ,以大鼠左侧坐骨神经为修复神经模型进行实验。术后 2、4、8周进行组织学检查 ,术后 8周进行电生理检查、肌湿重检测、图像分析和透射电镜观察。结果　FG +NGF组的神经传导速度、肌张力、肌湿重、有髓纤维截面积恢复率分别为 ( 84.10± 2 .33) %、( 83 .88± 2 .96 ) %、( 6 2 .5 4± 5 .94) %、( 71.0 1± 3 .6 2 ) % ,吻合口有髓纤维通过率为 ( 6 5 .5 1± 4.5 4) % ,高于对照组、FG组 ( P <0 .0 1) ,高于NGF组 (P <0 .0 5 ) ,FG +NGF组大鼠坐骨神经再生优于单纯NGF组。结论　纤维蛋白胶可作为NGF的载体 ,用纤维蛋白胶载NGF修复周围神经损伤 ,有促进周围神经再生的作用。     

局部应用重组人碱性成纤维细胞生长因子对牵开骨痂影响的研究

目的评价在骨延长区坚实化期局部应用重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF）对牵开骨痂的影响。方法对30只成年犬单侧胫骨中段横断截骨后，应用Ilizarov环形外固定架以1mm／d的速度，每天延长1次的频率延长，建立14mm的牵开间隙。在延长期末通过手术切开的方式于延长区域中央植入不同的材料。根据植入物的不同将动物等分成三组，A组（空白对照组）：进行假手术；B组（阴性对照组）：植入不含生长因子的胶原海绵；C组（实验组）：植入含rh-bFGF 400μg的胶原海绵。于第二次手术后即刻、2周、4周和8周时分别摄普通X线片，测量骨密度和行不脱钙组织学检查。结果x线片上A组至8周时仍未出现连续的骨痂，B组和c组分别在8周和4周时有骨痂连接截骨断端。重复测量的方差分析表明延长区分组因素差异有统计学意义，而其它区域无差异。单因素方差分析表明延长区在术后即刻组间无差异，第2、4、8周时A组和B组间任何时刻差异无统计学意义，C组分别是A组的1．62、1．60和1．5l倍，差异有统计学意义（P值分别为0．005、0．006和0．004）。在第2,4周时c组分别是B组的1．38和1．44倍，差异有统计学意义（P值分别为0．03和0．02）。组织学上牵开间隙内同时存在膜内化骨和软骨内化骨的过程，实验组愈合和塑形均比对照组提前。结论在成年犬骨延长模型局部应用rh-bFGF能够促进牵开区骨组织的再生、钙化和塑形，缩短坚实化的时间。