产金属酶铜绿假单胞菌的检测及耐药现状调查

目的:研究临床中分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌的产金属酶的检测及耐药现状,为合理选择抗生素提供理论依据。方法:采用EDTA纸片复合法和E-test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,同时用PCR法检测blaIMP-1和blaVIM-2耐药基因,用MIC法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度。结果:30株耐亚胺培南铜绿假单胞菌ED-TA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株blaIMP-1和3株blaVIM-2耐药基因。产金属酶菌株呈多重耐药,尤其是PCR法产金属酶菌株耐药呈现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星。结论:金属酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因之一,我院临床分离铜绿假单胞菌中部分携带金属酶,该酶导致该菌对碳青霉烯类耐药。     

铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的临床调查研究

目的调查临床分离铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶株分布情况及耐药现状，为临床合理应用抗生素提供依据。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌，采用κ—B法筛选对亚胺培南和头孢他啶同时耐药菌株，E—test法检测产金属伊内酰胺酶菌株，最后用最低抑菌浓度（MIC）法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度。结果300株铜绿假单胞菌中同时耐亚胺培南和头孢他啶者34株，占11．3％（34／300）；其中检出产金属伊内酰胺酶15株，占5．0％（15／300），产酶株分布较为集中，产酶株对亚胺培南和头孢他啶等抗生素高水平耐药，对阿米卡星和环丙沙星部分耐药。结论铜绿假单胞菌产金属伊内酰胺酶检出率升高，产酶株的多重耐药较严重，应高度重视产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的监测与控制。     

产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的筛选及基因型研究

目的 研究本院临床分离铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶的基因型、耐药性及同源性.方法 用2-巯基丙酸或 EDTA 协同试验筛选临床分离的亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌.协同试验阳性菌株用PCR法检测金属酶基因型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产金属酶菌株同源性.结果 31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌协同试验阳性5株,PCR扩增有4株阳性,为金属酶IMP-9型,均分离自神经科重症监护病房,PFGE结果显示为同一克隆株.产酶株对阿米卡星敏感或中介,对其他临床常用抗生素均高度耐药.结论 本院神经科重症监护病房有产IMP-9型金属酶铜绿假单胞菌流行,应注意进行临床检测和监控.     

产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌协同试验方法评价

[目的]在临床微生物实验室建立简便的纸片扩散试验方法,用于产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的检测。[方法]以头孢他啶、亚胺培南为底物,乙二胺四乙酸二钠（EDTA—Na2）和2-巯基乙醇（2-ME）为酶抑制剂,在MH平板上用纸片扩散法进行抗生素协同敏感试验,并与聚合酶链反应（PCR）检测金属β-内酰胺酶基因结果进行比较。[结果]任一药敏纸片与含酶抑制剂纸片间出现抑菌环扩大现象则表示受试菌产金属β-内酰胺酶表型初筛试验阳性,在144株受试菌中,协同试验阳性29株,PCR检测金属β-内酰胺酶阳性26株。[结论]CAZ—EDTA纸片协同法在检测产IMP-1型金属酶的铜绿假单胞菌时的特异性和敏感性可与PCR技术相媲美,适用于临床微生物实验室对产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的日常初步鉴定。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶基因的流行病学研究

目的明确我院临床分离的铜绿假单胞菌耐亚胺培南基因型。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌219株,筛选亚胺培南耐药株;采用双纸片协同试验对临床分离的35株耐亚胺培南铜绿假单胞菌进行金属β-内酰胺酶(MBL)表型检测;用聚合酶链反应(PCR)检测MBL基因型别,并对PCR扩增阳性株进行测序。结果 219株铜绿假单胞菌中35株为耐亚胺培南铜绿假单胞菌,35株耐亚胺培南铜绿假单胞菌共检出14株MBL表型阳性,占40%。其中IMP-1型阳性7株、VIM-2型阳性2株。结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一,临床应根据药敏结果及产酶情况综合考虑合理用药,以减少耐药菌株的产生。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的药敏情况与耐药机制

目的：探讨44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的药敏情况和产金属β-内酰胺酶的类型。方法：采用K-B法测定抗菌药物对细菌的体外抗菌活性，双纸片协同试验进行金属β-内酰胺酶筛选，PCR法进行金属β-内酰胺酶耐药基因IMP和IMP的检测。结果：阿米卡星敏感性最高为27．3％，其次为环丙沙星（20．5％）和头孢吡肟（15．9%）；44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中，扩增出IMP型阳性株4株，未检测到VIM型金属β-内酰胺酶基因。结论：对耐亚胺培南铜绿假单胞菌引起的感染，阿米卡星、环丙沙星和头孢吡肟可以考虑使用。北京天坛医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制中，产IMP型金属β-内酰胺酶起着重要作用。     

烧伤病区产金属酶铜绿假单胞菌的筛选及分析

目的比较烧伤病区和其他病区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的情况并分析其耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法采用细菌鉴定药敏分析仪进行铜绿假单胞菌的鉴定及药敏试验。同时采用纸片协同法筛选产金属酶的菌株。结果在检测的68株铜绿假单胞菌中,产金属酶的有9株,占13．2％。烧伤病区产金属酶的有7株（7／32）,占21．9％;其他病区产金属酶的有2株（2／36）,占5．6％。产酶株对头孢他啶、头孢噻肟、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林、氨曲南的耐药率分别为100％、100％、88．9％、66．7％、88．9％、100％、100％、88．9％,远远高于不产金属酶的铜绿假单胞菌。结论烧伤病区的铜绿假单胞菌的产酶率比其他病区的高,产金属酶的铜绿假单胞菌对临床常用的多种抗生素具有较高的耐药率,临床必须依据药敏实验结果使用抗生素。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药检测

目的对临床分离的铜绿假单胞菌进行常规药物敏感性试验时，同步检测细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性。方法选取临床分离对亚胺培南耐药的46株铜绿假单胞菌，用聚合酶链反应（PCR）和二维试验分别检测其对亚胺培南耐药的基因型及表型，表型检测时以铜绿假单胞菌标准菌株（ATCC 27853）、亚胺培南纸片为抗菌药物的底物。结果亚胺培南耐药的46株菌中，PCR检测膜孔蛋白基因OprD2缺失菌株7株，检出率为15．2％；金属β-内酰胺酶基因blaIMP阳性菌株9株，检出率为19．6％；blaVIM阳性0株，检出率为0％。二维试验检测产碳青霉烯酶菌株15株，阳性率为32．6％，金属p．内酰胺酶基因blaIMP阳性菌株9株，全部阳性。膜孔蛋白基因OprD2缺失7株菌中，二维试验阴性6株。结论铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药主要由产酶及膜孔蛋白缺失引起，二维试验操作简便，可与常规的纸片琼脂扩散法药物敏感性试验同步进行，结果易于判读，可在各级临床细菌室操作。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶相关基因型的分布

目的 研究本地区患者对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌产金属酶检出情况及基因型分布特征.方法 本研究收集2012年2月～2013年2月共151株铜绿假单胞菌,分离出对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌47株.使用IMP/EDTA纸片法筛选产金属酶的耐药表型,PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM 4种基因型.PCR反应产物进行纯化后,进行核酸电泳.结果 47株对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中,IMP/EDTA纸片法检测金属酶表型阳性21株,占44.6％.PCR检测金属酶基因型阳性14株,占29.8％,其中IMP型阳性11株,占78.6％,VIM型阳性3株,占21.4％.未检测出SPM和GIM型金属酶.结论 池州地区产生的金属酶同时存在IMP和VIM两种基因型,其中以IMP亚型为主,少部分为VIM亚型,分布科室主要为ICU,其次为神经外科.产金属酶是本地区对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌的重要耐药机制,对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌产金属酶的监测十分重要.     

PAE-MHT法检测铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶的临床适用性的评估

目的评估铜绿假单胞菌-改良Hodge（PAE-MHT）法对铜绿假单胞菌（PAE）金属β-内酰胺酶（MBLs）检测的临床适用性。方法收集82株临床分离的耐亚胺培南的PAE,通过双纸片协同法、E-test法及PAE-MHT法作为MBLs表型初筛试验,并对几种方法进行比较。聚合酶链反应（PCR）法检测IMP型和VIM型MBLs基因并测序。结果 PAE-MHT法的敏感性、特异性和准确率分别为84.6%,97.2%,97.6%.PAE-MHT法和双纸片协同法、Etest法有非常好的一致性。结论 PAE-MHT法简便、快捷,不失为临床快速筛查非发酵菌产MBLs的一种新方法。     

106株铜绿假单胞菌耐药性分析及金属β-内酰胺酶检测

目的分析医院铜绿假单胞菌的分布、耐药性及产金属β-内酰胺酶的现状,为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供合理用药的实验依据。方法将VITEK-2全自动鉴定仪鉴定出的106株铜绿假单胞菌,采用琼脂纸片扩散(K-B)法进行体外耐药性监测及统计耐药率,同时用双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶的百分率。结果 106株铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的22株,占20.8%。金属β-内酰胺酶阳性与阴性的铜绿假单胞菌耐药率相比较,对头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢曲松、头孢哌酮的耐药率差异有统计学意义(P<0.05);而对氨曲南、阿米卡星、左氧氟沙星、庆大霉素呈现的耐药率二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论产金属β-内酰胺是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一,临床应根据药敏结果及产酶情况综合考虑合理用药,以减少耐药菌株的产生。     

产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法2003-2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株，采用三维试验筛选产8内酰胺酶（包括AmpC酶）的铜绿假单胞菌，应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐药基因，应用荧光定量RT—PCR的方法检测染色体AmpC酶基因和oprD2基因的表达情况。结果共检出40株产口内酰胺酶的菌株，其中产AmpC酶、ESBLs、金属酶（MBL）和未知酶型铜绿假单胞菌的构成比分别是62．5％（25／40）、20％（8／40）、7．5％（3／40）和10％（4／40）。25株产AmpC酶菌株均有不同程度AmpC酶基因表达量升高，其中，仅1株细菌携带DHA质粒型AmpC酶基因，12株菌oprD2基因表达量减低，这些菌株均对亚胺培南耐药，13株菌oprD2基因表达量正常，其中仅5株菌对亚胺培南耐药；7株菌（占产AmpC酶菌株的28％，不产金属酶）的酶粗提物能微弱水解IPM，这7株菌AmpC酶基因的表达量均有明显升高，其中5株菌同时伴有oprD2基因表达量降低。结论铜绿假单胞菌产生的AmpC酶可做弱水解亚胺培南，且其水解亚胺培南可能与AmpC酶产生量有一定关系；产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因可能是细菌AmpC酶表达量增加和oprD2表达量减低两者共同作用的结果。     

两种方法在筛选产金属β-内酰胺酶鲍曼不动杆菌中的应用价值

目的以E-test法、双纸片增效法筛选产金属β-内酰胺酶(MBL)鲍曼不动杆菌(Ab),为临床筛选产MBL菌株、探究Ab耐药机制提供依据。方法使用MicroScan Walkway-40全自动微生物分析仪及MicroScanNegative Combo Panel Type31复合板进行菌株鉴定和药敏试验,筛选出泛耐药Ab,再分别用双纸片增效法、E-test法检测产MBL菌株。结果从298株Ab中筛选出38株泛耐药菌,经双纸片增效法筛选出MBL阳性19株(50.0%);E-test法筛选出MBL阳性18株(47.4%),两种方法阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论双纸片增效法、E-test法操作简单,均可用于MBL表型的快速筛查;但由于E-test法成本昂贵,不适宜在临床实验室推广;双纸片增效法成本低廉,适合在广大临床实验室特别是基层医院实验室推广。     

Emergence of NDM-1 metallo-β-lactamase in Pseudomonas aeruginosa clinical isolates from Serbia

This work reports, for the first time, the presence of New Delhi metallo-β-lactamase 1 (NDM-1) in Pseudomonas aeruginosa. Moreover, this is the first report of the NDM-1 presence in the Balkan region. Cosmid gene libraries of carbapenem-nonsusceptible Pseudomonas aeruginosa clinical isolates MMA83 and MMA533 were screened for the presence of metallo-β-lactamases. Accordingly, both MMA83 and MMA533 carried the bla(NDM-1) gene. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) analysis indicated that strains MMA83 and MMA533 belonged to different clonal groups. Five additional isolates from different patients clonally related to either MMA83 or MMA533 were found to be NDM-1 positive.     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌金属β内酰胺酶的检测和同源性分析

目的了解亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的耐药性、同源性及金属β内酰胺酶类型。方法收集我院2006年1—9月临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌29株，用琼脂稀释法测定10种抗菌药物的MIC；通过改良Hodge试验、双纸片协同试验、PCR、序列分析等方法分析金属β内酰胺酶类型，紫外分光光度法测定金属β内酰胺酶的活性；脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果29株细菌均为多重耐药株，仅对哌拉西林一他唑巴坦和阿米卡星敏感率较高，分别为69．7％和60．6％。29株细菌PFGE图谱分为16个基因型，A型主要集中在呼吸内科病房，B、C型来自神经外科ICU，D、E型来自器官移植病房，F型来自创伤外科病房，G型来自神经内科病房，其余为散在分布。29株菌中有2株产VIM-2金属β内酰胺酶（6．9％）。结论本院亚胺培南耐药铜绿假单胞菌主要为医院感染流行株，且呈多重耐药，有2株菌产VIM-2型金属β内酰胺酶。     

Detection of metallo-beta-lactamase-producing Pseudomonas aeruginosa strains isolated from burn patients in Ahwaz, Iran

The antimicrobial activities of 6 common antimicrobial agents including carbapenems were tested against 100 clinical Pseudomonas aeruginosa isolates using a disk diffusion method. All imipenem (IPM)-resistant isolates were screened for metallo-beta-lactamase (MBL) production by Etest assay and were subsequently subjected to polymerase chain reaction (PCR) analysis with the bla(IMP) and bla(VIM) genes. Of 41 IPM-nonsusceptible isolates detected, 8 (19.51%) appeared to produce MBL, as determined by Etest. Using PCR assay, these isolates were positive for bla(VIM) genes, whereas none were positive for bla(IMP) genes.