脑益康对阿尔茨海默病大鼠tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响

目的探讨脑益康对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化及其相关酶类表达的影响。方法采用β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）右侧海马注射制备AD大鼠模型,免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马神经元tau蛋白在Ser404位点的磷酸化水平、蛋白磷酸酯酶2A（PP-2A）的表达情况,ELISA法检测糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白的水平。结果AD模型组大鼠海马组织p-tau（Ser404）、GSK-3β表达增加,PP-2A表达减少,与假手术组的差异有高度统计学意义（P〈0.01）;脑益康治疗组大鼠的p-tau（Ser404）、GSK-3β表达显著减少,PP-2A表达显著增加,差异均有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论脑益康可通过增加PP-2A的表达和抑制GSK-3β的表达减轻AD模型大鼠tau蛋白的过度磷酸化。     

吡格列酮对Aβ1-42引起大鼠海马神经细胞凋亡caspase-3 表达的影响

目的 研究吡格列酮对Aβ1-42所致大鼠海马神经细胞凋亡基因caspase-3蛋白表达的影响.方法 大鼠脑室内一次性注射Aβ1-42制备AD动物模型,通过Western Blot方法检测caspase-3蛋白表达量的变化.结果 与正常对照组比较,caspase-3蛋白在Aβ1-42模型组的表达明显增多,(P＜0.05),吡格列酮组(20mg·kg-1,40mg·kg-1,80 mg·kg-1)的easpase-3蛋白表达比模型组明显减少(P＜0.05);吡格列酮40 mg·kg-1治疗组的caspase-3蛋白表达量要少于20、80 mg·kg-1剂量组.结论 吡格列酮可以明显的抑制Aβ1-42引起的海马神经细胞凋亡.     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的：研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法：采用冈田酸（OA）海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型，3周后银杏内酯腹腔注射，水迷宫行为学试验检测学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果：与拟AD模型组比较，银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01），银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失（P〈0．01）。结论：银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力，其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化，减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。     

雌激素对阿尔茨海默病大鼠学习记忆及海马神经元损伤保护作用的研究

目的:观察雌激素对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆及海马神经元损伤的影响,探讨雌激素神经保护的机制. 方法:选取雌性成年SD大鼠24只,随机分为对照组、AD 雌二醇(E2)组、AD组,每组8只.Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,苏木精-伊红(H-E)染色及Bielschowski染色法观察海马神经元形态,免疫组化法观察Tau蛋白异常磷酸化变化及GSK-3β活性.结果:与AD组相比,AD E2组大鼠迷宫测试明显改善(P<0.01);海马CA1区神经元纤维形态规则,Tau蛋白磷酸化阳性细胞数明显减少(P<0.01),Tau蛋白表达减少,且GSK-3β总量及磷酸化GSK-3β含量均有所增加.结论:雌激素治疗可改善Aβ诱导的大鼠学习记忆障碍及海马神经元损伤,可能通过作用GSK-3β导致Tau蛋白去磷酸化,从而达到保护神经的目的.     

罗格列酮调节IDE和GSK-3β的活性改善阿尔茨海默病动物认知能力

目的：研究作为胰岛素增敏剂的过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ）激动剂-罗格列酮对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）动物模型的认知水平、β淀粉样蛋白（amyloid β-peptide,Aβ）和Tau的影响,并探讨其改善AD模型认知能力的可能机制。方法：通过侧脑室注射链脲佐菌素建立AD动物模型,并用罗格列酮处理动物,第1次手术后21 d用Morris水迷宫检测动物的学习和记忆水平;采用Western blot检测胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,IDE）、糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）、Tau、磷酸化Tau（phosphoTau,pTau）的表达;通过免疫组化检测Aβ40和Aβ42在大脑的沉积。结果：Morris水迷宫结果显示罗格列酮可以明显改善AD大鼠的认知能力（P<0.001）;Western blot结果显示罗格列酮能增加IDE的表达（P=0.028）、降低GSK-3β的活性（P=0.012）、减少Tau的磷酸化水平（P=0.001）;免疫组化结果显示罗格列酮处理的大鼠,其大脑皮质Aβ40和Aβ42的沉积量均较模型组减少。结论：罗格列酮可以明显改善AD动物的认知能力、Aβ的沉积和Tau的磷酸化,机制可能与其调节胰岛素信号通路相关的IDE和GSK-3β的表达有关。     

何首乌对Aβ1-40诱导的AD大鼠海马线粒体膜流动性及COX活性的影响

目的：探讨何首乌对AD模型大鼠线粒体膜流动性和COX活性的影响。方法：45只大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组（n=15）。大鼠海马内注射Aβ1-40建立AD模型。Y-型迷宫实验检测AD模型大鼠的学习记忆能力。运用荧光光度计和紫外分光光度仪分别检测海马线粒体膜的黏滞系数和细胞色素氧化酶（COX）活性。结果：与对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力的下降（P〈0.01）,模型组大鼠海马线粒体膜的黏滞系数增高（P〈0.01）,细胞色素氧化酶活性明显减低（P〈0.01）;与AD模型组比较,治疗组大鼠线粒体膜的黏滞系数降低（P〈0.05）,细胞色素氧化酶活性明显增高（P〈0.05）。结论：何首乌可改善AD模型大鼠海马线粒体膜流动性,提高其细胞色素氧化酶活性。     

柚皮素改善阿尔茨海默病模型大鼠的认知能力及其机制研究

摘 要：目的 研究柚皮素对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠认知水平的影响及对其β淀粉样蛋白（Aβ）和Tau抗体的调节作用,探讨其改善AD认知能力的可能机制。方法 于实验第1、3天向大鼠侧脑室内注射（icv）链脲佐菌素（STZ）建立AD模型,ig给予柚皮素、罗格列酮,模型组和对照组则ig等量生理盐水,第1次术后21 d用Morris水迷宫检测动物的学习和记忆水平;采用Western blotting检测胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,IDE）,糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinese-3β,GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3β（pGSK-3β）、Tau、磷酸化Tau（pTau）的表达;采用免疫组化检测Aβ40和Aβ42在大脑的沉积。结果 Morris水迷宫结果显示柚皮素和罗格列酮均可以恢复AD动物的认知能力（P＜0.05）;Western blotting结果显示柚皮素和罗格列酮能增加IDE的表达和降低GSK-3β的活性,减少Tau的磷酸化水平（P＜0.05）;免疫组化结果显示柚皮素和罗格列酮处理大鼠的大脑皮质Aβ40和Aβ42均减少。结论 柚皮素作为过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）激动剂可以发挥胰岛素增敏剂的作用,可能通过改善与胰岛素相关的IDE和GSK-3β的表达来缓解AD动物的认知能力、Aβ的沉积和Tau的磷酸化。     

Aβ杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白表达的影响

目的：观察AD对异常磷酸化tau蛋白表达的影响。方法：本研究采用Aβ5～35片段单侧杏仁核注射，建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。通过Morris水迷宫试验、放射免疫法、免疫组化法等观测大鼠空间学习记忆能力、胆碱能系统、tau蛋白异常磷酸化的改变。结果：模型大鼠的空间学习记忆能力明显障碍；ChAT活性及M受体Rt值均显著降低；海马及额皮层异常磷酸化tau蛋白AT8表达显著增高。结论：Aβ杏仁核单侧注射可诱导大鼠空间学习记忆障碍及胆碱能系统功能损害，同时伴有皮层、海马部位tau蛋白的异常磷酸化。AB是AD发生、发展的关键因素。     

1型糖尿病大鼠海马Alzheimer样磷酸酯酶2A活性降低导致tau蛋白过度磷酸化

目的 为探讨1型糖尿病增高阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)发病风险的机制,采用1型糖尿病大鼠模型,研究tau蛋白过度磷酸化及其形成机制.方法 以同龄Wistar大鼠为对照组(CTL),大剂量链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ)造成1型糖尿病大鼠模型(T1DM).葡萄糖氧化酶法检测血糖,放射免疫法检测血浆胰岛素;蛋白质印迹分析海马内总tau蛋白及tau蛋白上部分位点(Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422)的磷酸化水平及胞质内总糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β水平;免疫组化技术分析海马神经细胞内tau蛋白上位点Ser396磷酸化状态;蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)、蛋白磷酸酯酶2B(PP2B)试剂盒检测PP2A、PP2B活性.结果 T1DM组血糖水平较对照组(CTL)显著升高,血浆胰岛素水平显著下降.TIDM组大鼠海马总tau蛋白水平与CTL组比较差异无显著性意义,但tau蛋白上位点Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422上磷酸化程度有明显升高,Tau-1所检测的Ser199/202位点的非磷酸化水平较CTL组显著降低.免疫组化结果显示T1DM组海马区tau蛋白位点Ser396磷酸化水平显著高于CTL组.两组总GSK-3β水平差异无显著性意义,TIDM组磷酸化GSK-3β水平较CTL组下降,但差异无显著性意义.磷酸酯酶活性检测结果显示,T1DM组PP2A活性显著下降至CTL组的1/3,而PP2B活性不变.结论 1型糖尿病大鼠海马中.主要由于PP2A活性下降导致tau蛋白呈Alzheimer样过度磷酸化改变.     

丁苯酞对AD大鼠模型认知及海马Aβ、NR2b表达的影响

目的观察丁苯酞对AD大鼠模型的学习记忆能力及海马Aβ、NR2b表达的影响。方法采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导AD模型。采用Morris水迷宫评价大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学染色法测定海马区Aβ、NR2b蛋白的表达。结果丁苯酞低剂量组和高剂量组能明显减少海马Aβ的沉积,有效促进海马CA1区NR2b的表达（P〈0.01）;对AD大鼠模型的学习、空间记忆能力有明显的改善（P〈0.01）;而高剂量组和低剂量组对AD大鼠模型的改善作用没有明显差异。结论 AD大鼠模型学习记忆的改变与海马Aβ、NR2b变化相关,丁苯酞可能通过减少海马Aβ的沉积、促进CA1区NR2b的表达从而改善AD大鼠模型的学习和空间记忆能力。     

不同频率电针通过调控GSK-3β蛋白及其磷酸化水平改善阿尔茨海默病大鼠突触可塑性损伤

【目的】研究不同频率电针治疗对阿尔茨海默病(AD)大鼠突触形态可塑性损伤的改善机制,为临床上应用电针治疗AD提供实验依据。【方法】将90只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,假手术组,2 Hz、30 Hz、50 Hz电针组,每组15只。Wistar大鼠经筛选后通过侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导构建AD大鼠模型;电针组采用不同频率(2、30、50 Hz)的电针针刺百会穴、肾俞穴进行治疗。采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆能力和空间探索情况,采用透射电镜观察海马组织的突触超微结构,采用Golgi法进行神经纤维染色,采用Western blot法检测各组大鼠脑组织的糖原合酶激酶3β(GSK-3β)及其磷酸化表达水平。【结果】(1)与正常组比较,模型组大鼠的平均逃避潜伏期时间延长(P0.05),跨越平台次数减少(P0.05),提示动物造模成功;与模型组比较,各电针组大鼠的平均逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数增加(P0.05)。(2)模型组海马区突触前膜、后膜和间隙界限不清晰,膜结构不完整,出现溶解现象,但电针组的突触结构均有所改善。(3)模型组脑组织可见明显神经纤维缠结,各电针组能够改善神经纤维缠结情况,神经纤维丝较清晰。(4)与正常组比较,模型组大鼠脑组织中GSK-3β总蛋白和Tyr216位点磷酸化水平升高(P0.05),Ser9磷酸化水平下调(P0.05)。随着电针频率的增加,GSK-3β和Tyr216磷酸化水平下调,Ser9磷酸化水平上升,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。(5)50 Hz电针组大鼠的跨越平台次数、平均逃避潜伏期和GSK-3β蛋白及其磷酸化水平与其他2个电针组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。50 Hz电针组的突触结构和神经纤维改善情况亦明显优于其他2个电针组。【结论】不同频率电针治疗能够改善AD大鼠的学习记忆能力,且50 Hz电针的治疗效果更好,其治疗效果可能是通过调控GSK-3β蛋白及其磷酸化水平从而改善AD大鼠突触可塑性损伤来实现的。     

胰岛素对APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的影响及其机制研究

目的 采用过度表达APPsw基因的SH-SY5Y细胞（APPsw细胞）,体外观察不同浓度的胰岛素对APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的影响.方法 应用Western blot技术检测APPsw细胞内tau蛋白磷酸化的表达;应用免疫荧光双标与共聚焦激光扫描显微镜检测APPsw细胞内p-GSK-3β和p-tau的共表达.结果 Western blot结果显示,与对照组相比,1 000 nM的胰岛素使APPsw细胞内Thr231和Ser396位点上的tau蛋白磷酸化表达水平分别降低到（68.91±13.55）和（45.53±22.16） （P＜ 0.05）;共聚焦显微镜检测结果显示p-tau和p-GSK-3β主要分布于细胞质中,而且在APPsw细胞中二者的表达有一定关系.结论 胰岛素抑制APPsw细胞内tau蛋白的过度磷酸化,其机制可能与GSK-3β蛋白活性减小有关.     

氯胺酮对幼龄大鼠学习记忆功能和海马糖原合酶激酶-3β活性的影响

目的:观察腹腔注射氯胺酮对幼龄大鼠空间学习记忆功能和海马糖原合酶激-3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)活性的影响。方法:健康月龄雄性SD大鼠40只随机分为4组:对照1组(C4组)、对照2组(C21组)、氯胺酮4 d组(K4组)、氯胺酮21 d组(K21组),每组10只。K4、K21组腹腔注射氯胺酮40 mg/kg,随后每隔15 min追加1/2首剂量,共追加3次,对照组给予生理盐水,各组于给药后1、2、3、4、18、19、20、21 d行水迷宫试验,并于末次水迷宫实验结束后1 h断头取脑,应用免疫组化测海马GSK-3β的含量。结果:K4组与C4组比较,K4组逃避潜伏期显著延长(P<0.01),K4组海马神经元中GSK-3β密度增加与C4组比较有显著性统计学意义(P<0.05),但是K21组与C21组比较差异无显著性统计学意义。光镜下各组大鼠海马神经元结构未见明显异常。结论:腹腔注射氯胺酮可导致幼龄大鼠早期学习记忆功能障碍,可能和海马区GSK-3β活性升高有关。     

脑尔康对阿尔茨海默病模型大鼠海马β淀粉样肽1-42及脑啡肽酶表达的影响

目的：观察复方中药脑尔康对阿尔茨海默病（Alzheimers disease, AD）模型大鼠海马β淀粉样肽1-42（β-amyloid peptide 1-42,Aβ1-42）及其降解酶——脑啡肽酶（neprilysin, NEP）表达的影响,探讨其抗痴呆的作用机制。 方法：48只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和大、中、小剂量脑尔康组,每组8只。除空白对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态Aβ1-425 μL（2 μg/μL）制备AD模型,空白对照组注射等体积生理盐水。3个剂量脑尔康组大鼠给予脑尔康［60、30、15 g/（kg·d）］连续灌胃28 d,吡拉西坦组给予吡拉西坦［0.375 g/（kg·d）］灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。采用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测海马内Aβ1-42和NEP的表达。 结果：大鼠海马注射Aβ1-42后,与空白对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,海马内Aβ1-42表达明显增多（P＜0.01）。用药干预28 d后,与模型组比较,吡拉西坦组和各剂量脑尔康组大鼠学习记忆能力改善（P＜0.05,P＜0.01）,海马内Aβ1-42的表达下降（P＜0.05,P＜0.01）,NEP的表达增加（P＜0.05,P＜0.01）,其中以大剂量脑尔康组效果最佳。 结论：复方中药脑尔康可能通过上调AD模型大鼠海马NEP的表达来降低Aβ1-42的含量,改善其学习记忆能力,发挥抗痴呆作用。     

远志对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及在体海马LTP的影响

目的观察远志对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠学习记忆能力及在体海马突触传递长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,探讨该中药对AD的作用及其电生理机制。方法将32只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、远志低剂量组、远志高剂量组。模型组在D-半乳糖致衰老基础上定向注射鹅膏蕈氨酸,行Meynert基底核损毁建立AD大鼠模型;远志高、低剂量治疗组则在造模的同时用远志水煎剂灌胃;后用水迷宫实验对动物学习记忆能力进行评价,并用电生理学方法通过对高频刺激前后海马CA1区场兴奋性突触后电位(field exciatatory postsynaptic potential,fEPSP)幅度的比较检测大鼠海马LTP的变化。结果模型组大鼠的学习记忆能力、兴奋性突触后电位与正常组相比明显下降(P0.01);远志高、低剂量组大鼠的学习记忆能力、兴奋性突触后电位与模型组相比均明显提高(P0.01或P0.05);远志低剂量组大鼠的学习记忆能力、兴奋性突触后电位较远志高剂量组明显降低(P0.01)。结论远志可提高AD模型大鼠的学习记忆能力,并对AD模型大鼠在体海马LTP具有促进作用,且上述作用具有剂量依赖性。     

Propofol may protect PC12 cells from induced apoptosis through the signaling pathway

Background There are two major pathological hallmarks of AIzheimer's disease.One is the progressive accumulation of beta-amyloid (Aβ) in the form of senile plaques; the other is hyperphosphorylated tau,causing neuronal apoptosis.Some inhalation anesthetics,such as isoflurane and desflurane,have been suggested to induce Aβ accumulation and cause AD-like neuropathogenesis.Whether intravenous anesthetics have similar effects is still unclear.We therefore set out to determine the relationship between propofol and AD-like pathogenesis.Methods PC12 cells were cultured in serum-free medium for 12 hours prior to drug treatment.Various concentrations from 5 μmol/L to 80 μmol/L of aggregated Aβ25-35 were added to determine a proper concentration for further study.After exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 alone or with 20 μmol/L propofol for 6 hours,PC12 cell viability was determined by MTT assay.Western blotting and immunocytochemical staining were performed to observe the protein expression of the Bcl-2 family,tau phosphorylation at different sites,and tau protein kinases and phosphatases.Results Aβ25-35 induced a decrease in PC12 cell viability in a dose-dependent manner.Exposure to 10 μmol/L Aβ25-35 for 6 hours resulted in the mild cell survival,accompanied by a decline in Bcl-2,and an increase in phosphorylation of GSK-3β and tau at different sites.Compared with the Aβ25-35 group,cells treated with propofol alone showed no significant difference,while cells co-incubated with propofol and Aβ25-35 showed a significantly higher survival rate (P ＜0.01 or P ＜0.05).Tau phosphorylation at Ser396,Ser404 and Thr231 and the level of GSK-3β in PC12 cells increased after exposure to 10 μmol/L Aβ25-35.Co-incubation with propofol attenuated cellular apoptosis by inhibiting tau phosphorylation.Conclusions These data indicate that propofol may protect PC12 cells from Aβ25-35-induced apoptosis and tau hyperphosphorylation through the GSK-3β pathway,therefore it may be a safer anesthesia for AD and elderly patients.     

蒺藜总皂苷对AD大鼠GSK-3β的影响

目的探讨蒺藜总皂苷对AD大鼠GSK-3β的影响。方法采用AlCl3灌胃制作AD大鼠模型,Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力,免疫印迹检测GSK-3β蛋白水平。结果蒺藜总皂苷明显缩短大鼠寻找平台的时间,降低GSK-3β蛋白水平。结论蒺藜总皂苷能有效改善因AlCl3所致的大鼠空间记忆障碍,其机制可能与抑制GSK-3β蛋白过度激活有关。     

肺岩宁方对ILK基因沉默后转染人肺癌A549细胞相关基因表达的影响

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)基因沉默后及中药肺岩宁方对相关下游靶基因表达的影响。方法:构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,随机分为阴性对照病毒感染细胞(NC)组、RNAi靶点病毒感染细胞(KD)组、10%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组、20%肺岩宁含药血清干预的NC组与KD组,以及阳性对照10%DDP干预的KD组,应用Real time-PCR及Western Blot方法检测下游靶基因蛋白激酶B(Akt/PKB)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、转录因子-1(AP-1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、β-链蛋白(β-catenin)的mRNA及蛋白表达水平。结果:与NC组比较,KD组GSK-3β、VEGF mRNA和蛋白表达显著下调(P0.05,P0.01),cyclinD1、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05,P0.01),Akt表达无变化,AP-1与β-catenin在mRNA水平表达升高(P0.01)、蛋白水平表达则下降;与KD组比较,KD+10%肺岩宁含药血清和KD+10%DDP组具有下调VEGF、cyclinD1、MMP-9和β-catenin蛋白表达、上调GSK-3β蛋白表达,以及下调AP-1、cyclinD1 mRNA表达的作用(P0.01);与KD组相比,KD+20%肺岩宁含药血清具有下调AP-1、cyclinD1和MMP-9蛋白表达的作用。结论:沉默ILK基因后可以明显降低GSK-3β、VEGF的表达,10%的中药肺岩宁方含药血清可能通过下调靶基因AP-1、cyclinD1、MMP-9、VEGF和β-catenin蛋白表达的作用而发挥其抗肿瘤的作用。