自体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的基础及临床应用研究

目的:探讨自体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的疗效。方法:自体软骨细胞取自大白兔左股骨外髁,体外增殖后接种于胶原海绵支架上,后移植于兔膝关节软骨缺损处。取同一大白兔双膝关节内外髁分3组作自身对照研究,右股骨内髁作自体软骨细胞移植实验组,左膝股骨内髁作胶原海绵移植对照组,右膝股骨外髁作空白组。移植术后不同时间分批处死,进行大体、组织学观察。临床对8例软骨缺损患者先行关节镜下取软骨,然后制备种植了软骨细胞的胶原膜,再将其植入软骨缺损处,最后进行系统康复治疗。结果:实验组修复组织以透明软骨为主,对照组和空白组以纤维软骨修复为主。临床病例随访半年以上,患者症状消失,核磁共振或关节镜复查见软骨缺损已修复。结论:自体软骨细胞移植可修复关节软骨缺损,有良好的应用前景。     

组织工程修复关节软骨缺损的实验研究

目的　用组织工程的方法 ,将新生关节软骨细胞先在高分子聚乳酸材料上进行体外培养 ,然后移植于关节软骨缺损处 ,以达到修复关节软骨缺损的目的。方法　取新生新西兰兔关节软骨细胞培养于高分子聚乳酸材料支架上。将 16只兔的 32个膝关节股骨髁处人工造成一 4m m× 6 m m大小缺损 ,并随机分为二组。 组 10只兔 ,2 0个关节缺损 ,用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植修复。 组 6只兔 ,左膝用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体修复 ,表面覆盖单层软骨细胞 ;右膝仅用高分子聚乳酸材料修复。术后分别于 4、8、12、2 4周取标本进行大体、光镜、组织化学的方法进行结果评估。结果　用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体能修复关节软骨缺损 ,且为透明软骨。新生软骨组织胶原定型为 型胶原。结论　用软骨细胞 -高分子聚乳酸移植体移植 ,关节软骨缺损能获得透明软骨修复     

自体与新鲜同种异体骨软骨移植的实验研究

目的:评价自体与新鲜异体骨软骨镶嵌移植两种方法修复全层关节软骨缺损的生物学特性和修复效果。方法:采用完全随机设计,将16只新西兰大白兔的左右后肢制成全层软骨缺损模型,分别进行自体骨软骨镶嵌移植、同种异体骨软骨镶嵌移植修复。术后第12周处死动物取材,分别进行膝关节活动度测定、大体观察、光镜观察及Wakitani组织学评分法,数据行统计学分析。结果:膝关节伸屈活动度、大体观察、组织学光镜及组织修复评分显示自体骨软骨移植在第12周时能以类透明软骨组织修复缺损,而新鲜同种异体骨软骨移植为纤维肉芽组织。结论:自体骨软骨镶嵌移植可以修复兔关节软骨的缺损。新鲜无处理的同种异体骨软骨镶嵌移植修复关节软骨缺损不可行,其排斥反应及吸收破坏严重。     

脱钙松质骨复合同种异体软骨细胞修复兔关节骨软骨缺损的实验研究

目的评价脱钙松质骨（DCB）复合同种异体软骨细胞构建组织工程软骨修复兔关节骨软骨缺损的效果。方法分离1月 龄雄性新西兰兔关节软骨细胞,原代培养后复合制备的DCB体外培养2周构建组织工程软骨。4~5月龄新西兰兔30只双侧股 骨内髁制作直径3 mm、深3 mm,穿透软骨下骨板的骨软骨缺损模型,20只右侧关节缺损处植入构建的组织工程软骨（A组）,左 侧缺损处植入DCB（B组）,10只双侧骨软骨缺损未予处理作为空白对照（C组）。分别于术后1、3、6月取修复组织标本,进行大 体形态、组织学及Ⅱ型胶原染色;并对6月修复组织进行组织学评分,比较各组修复效果差异。结果制备的DCB为三维多孔的 海绵结构,孔隙大小约为100~500 μm,相互交通。DCB植入体内后1月开始降解,3月完全吸收。术后6月A组缺损处修复组织 主要为透明样软骨,与周围正常软骨厚度基本一致,修复交界区整合良好,不易辨认。修复组织深层细胞在软骨陷窝内,呈柱状 排列,基质蛋白多糖和Ⅱ型胶原染色接近正常软骨,软骨下骨板完整。B组缺损处以纤维软骨样组织修复为主。C组以纤维组 织填充。组织学评分显示术后6月A组除软骨下骨板重建与B组比较无统计学差异外, 其它各项评分均优于B组和C组,差异 有统计学意义（P<0.05）。结论DCB是一种较好的软骨组织工程支架材料,复合同种异体软骨细胞能修复关节骨软骨缺损,修 复组织为透明样软骨。     

组织工程化软骨对兔膝关节全层软骨缺损的修复效果

目的 观察同种异体软骨细胞复合人胎盘Ⅰ型胶原蛋白海绵对兔膝关节股骨髁间窝全层软骨缺损的修复效果.方法取2周龄新西兰兔软骨细胞体外培养传代,选择生长状态相对较好的第2代细胞作为种子细胞,并与人胎盘Ⅰ型胶原蛋白海绵复合.取雄性8月龄新西兰兔54只,制作股骨髁间窝全层软骨缺损模型,随机分为3组：分别为对照组、种子细胞组及种子细胞＋支架材料组.后两组分别植入相应成分.于术后12周、24周、36周分别取其膝关节,观察修复效果. 结果 术后12周种子细胞组缺损区可见少量白色半透明组织覆盖,组织结构粗糙,可见多数针尖样结构;复合支架材料组表面相对光滑,亦可见半透明白色组织形成.24周,种子细胞组缺损区可见较多白色组织形成,透明度较前降低,呈半软骨半纤维样组织;复合支架材料组修复明显较种子细胞组快,表面光滑,呈半透明状覆盖于缺损区,与周围组织有较好吻合,但仍未完全修复软骨缺损.36周,种子细胞组可见更多白色组织覆盖,透明度较前更低;复合支架材料组则修复完好,高度基本与周围组织平齐,呈半透明样软骨组织.空白对照组随着时间的推移,呈现不同程度的纤维组织样修复. 结论 关节软骨自身修复能力有限,只能实现纤维样修复;软骨细胞可部分修复关节软骨缺损,但随着修复时间的推移,逐渐去分化而出现纤维样改变;而软骨细胞复合Ⅰ型胶原蛋白海绵则可以较好地修复关节软骨缺损,且随着时间的延长,关节软骨可基本实现完全修复.     

兔胚胎软骨细胞移植修复关节软骨缺损的初步研究

目的　采用兔胚胎软骨细胞培养移植修复关节软骨缺损 ,并对其组织形态学进行观察。方法　在成兔股骨内侧髁作关节软骨缺损模型 ,实验组采用生物蛋白胶与胚胎软骨细胞相混后 ,植入兔膝关节实验性软骨缺损区 ,对照组不做任何处理或单纯用生物蛋白胶移植修补 ,分别于术后 4、8、1 2周观察关节软骨缺损修复的情况 ,并对其进行组织学评分。结果　实验组在胚胎软骨细胞移植 8、1 2周后 ,于缺损区内可形成透明软骨 ,组织评分及效果评定优于对照组。结论　胚胎软骨细胞移植组所产生的修复组织接近正常软骨组织 ,明显优于对照组     

聚乳酸涂层的多孔羟基磷灰石负载软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的　研究复合材料负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损。方法　把软骨细胞种植到聚乳酸 (PLA)涂层的多孔羟基磷灰石 (HA)表面 ,培养 2周后 ,移植软骨细胞 载体的复合体修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损 (直径约 5mm ,深约 2 .5mm ,达钙化层 )。然后对缺损的修复情况在移植后进行大体、光镜评估和电镜观察。另外对兔膝关节正常的软骨和移植后 12周缺损处的修复软骨进行胶原量的测定。结果　移植的软骨细胞能在复合材料上良好地生长 ,形成透明软骨 ,软骨缺损被修复。无细胞移植的对照组仅纤维修复。另外 ,多孔HA在修复过程中充当了软骨下骨的临时替代。胶原量的测定显示移植 12周后的修复软骨胶原量约 44 .6 9% ,自身正常的软骨胶原量约为 5 4.74% ,两者差异有统计学意义。结论　PLA涂层的多孔HA负载软骨细胞移植能以透明软骨的方式成功修复兔膝股骨髁软骨缺损。软骨细胞不成熟导致胶原量的差异有统计学意义。     

兔关节软骨缺损修复的实验研究

目的观察自制猪耳廓的脱细胞软骨基质(Extracellular Cartilage Matrix ECM)复合自体软骨细胞对兔膝关节软骨5mm的缺损的修复作用。方法新西兰大白兔60只,随机分为3组,均制备股骨下端滑车处直径为5mm、深4mm的软骨缺损。实验组(A组)：用自制ECM复合自体培养的软骨细胞修复兔关节软骨缺损,实验组(B组)：单纯自制ECM修复兔关节软骨缺损,于4、8、12、24周后分别与空白对照组(C组)相比较,通过大体形态学观察、组织学检查、胶原含量的测定,观察EcM修复软骨缺损的能力。结果第12、24周时,A组修复效果最好,修复组织填充于软骨缺损处,与正常组织连接紧密,分界较为平滑;B组修复效果次之;C组最差,各阶段缺损少量的新生软骨,修复组织多为纤维组织。结论自制的ECM与自体软骨细胞复合具有较强的软骨生成能力,可作为异体软骨移植的一种替代物。     

软骨细胞复合纤维蛋白胶植入修复兔关节软骨缺损的效果研究

目的:观察软骨细胞复合纤维蛋白胶植入修复兔关节软骨缺损的效果。方法:用硫酸铵沉淀法从兔血液中提取纤维蛋白并且制备纤维蛋白胶;建立兔关节软骨缺损模型,编号,将40只新西兰兔分为实验组及空白对照组,实验组植入复合物,空白对照组不进行任何植入处理。分别于术后4、8、12周取材料,进行大体、甲苯胺蓝以及组织学的观察,判断关节软骨细胞缺损的修复情况。结果:实验组实验12周时可以修复膝关节软骨的缺失,以透明的软骨组织为主,修复效果明显优于空白对照组。结论:软骨细胞复合纤维蛋白可以很好地修复关节软骨的缺损,可以考虑用于再生修复软骨的缺损。     

聚乳酸涂层的多孔羟基磷灰石负载软骨细胞移植修复兔关节软 …

目的 研究复合材料负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损。方法 把软骨细胞种植到聚乳酸（ＰＬＡ）涂层的多孔羟基磷灰石（ＨＡ）表面,培养２周后,移植软骨细胞－载体的复合体修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损（直径约５ｍｍ,深约２．５ｍｍ,达钙化层）,然后对缺损的修复情况在移植后进行大体、光镜评估和电镜观察。另外对兔膝关节正常的软骨和移植后１２周缺损处的修复软骨进行胶原量的测定。结果 移植的软骨细胞能在复合材料上良好     

同种异体骨髓基质细胞移植修复兔膝关节骨软骨缺损

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)作为种子细胞在软骨组织工程中的应用.方法 同种异体BMSCs与丝素蛋白-异体松质骨共培养构建组织工程化骨软骨复合体,移植修复兔膝关节骨软骨缺损,术后2、4、12周取材,行组织学观察及Ⅱ型胶原、Brdu免疫组化染色.结果 BMSCs能在丝素蛋白和松质骨支架上较好的黏附、生长,共培养后成功地构建了组织工程化骨软骨复合体;体内移植后生成透明软骨样组织并修复了骨软骨缺损.结论 同种异体BMSCs可作为软骨组织工程的种子细胞,丝素蛋白-松质骨双相支架负载同种异体BMSCs可用于骨软骨缺损的修复.     

异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损

目的 :研究采用同种异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损的效果。方法 :将体外培养的同种异体第二代软骨细胞与透明质酸苄基酯凝胶复合注入兔关节软骨缺损区作为实验组 ,以软骨细胞悬液组和不作任何处理组作为对照 ,于第 4、8、1 2周取材 ,进行大体、组织学、电镜检查 ,观察其修复效果。结果 :实验组术后 1 2周时 ,缺损区可见新生透明样软骨组织 ,表面光滑 ,与周围软骨界面难以辨认。软骨细胞悬液组和空白对照组组均未见明显修复。结论 :同种异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损效果明显 ,将透明质酸苄基酯凝胶作为移植载体是可行的。     

冷冻同种异体骨软骨移植修复大面积关节软骨缺损的可行性研究

目的观察冷冻同种异体骨软骨移植修复大面积关节软骨缺损的可行性，为临床应用提供实验依据。方法共选取36只新西兰兔，随机数字表法分成供体组、实验组和对照组，每组12只。供体组制备冷冻同种异体胫骨内侧髁骨软骨移植物后处死；实验组将经程序深低温冷冻保存的同种异体胫骨内侧髁移植；对照组将取下的胫骨内侧髁原位植入。所有实验动物在术后12周处死。应用苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理学变化，软骨缺损的组织学评分以半定量的改良Wakitani score法评估，内容包括：细胞种类、髓质染色、表面完整性、软骨的厚度、移植软骨在受体周围组织的完整性5个方面，采用0、1、2、3、4评分，最高总分14分。观察两组动物的大体标本、X线片、组织学检查、Waki-tani score评分及免疫组织化学检查结果。结果①移植软骨的大体观察：两组动物关节活动度正常，关节腔无粘连、无积液，实验组移植软骨颜色及高度与周围关节软骨大致相同，关节面较平整，基底部界限模糊。对照组关节软骨面平整、无塌陷，厚度不变。②两组动物关节X线片均见骨折线已模糊，对位、对线良好。③组织学检查：两组动物关节软骨均已被透明软骨覆盖，细胞排列有序，软骨基质大量分泌，未见淋巴细胞和浆细胞浸润。④两组动物关节软骨Wakitani score评分结果无显著性差异，总评分相近（P〉0.05）。⑤两组修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色强阳性。结论冻存同种异体骨软骨移植后可完全修复大面积关节软骨缺损，并与自体骨软骨块修复兔的关节软骨缺损在组织学上相近，未见免疫排斥反应。     

低频脉冲磁场对兔膝关节软骨缺损修复作用的实验研究

目的:研究低频脉冲磁场在间充质干细胞和双层PLGA支架构建复合体修复兔骨软骨缺损过程的作用。方法:用密度梯度离心法和贴壁培养法获得5月龄兔骨髓来源间充质干细胞,在体外培养并进行分化诱导后作为种子细胞复合双层PLGA构建成复合体植入兔膝股骨髁间设计骨软骨缺损模型,全过程施加低频脉冲磁场干预,于第24周取材,进行大体观察、组织学检查和病理评分。结果:诱导MSCs+支架+2.0A·m-1脉冲电磁场刺激组在术后又继续进行脉冲电磁场照射后,兔膝关节骨软骨创伤修复明显加快,统计学分析各组单项评价指标得分差异有显著性(P<0．05),与自体骨软骨移植组相当。结论:在适当低频脉冲磁场作用下,诱导MSCs+双层PLGA支架能较好地修复兔膝关节骨软骨创伤。     

深低温同种异体关节软骨帽移植的实验研究

目的　观察经深低温冷冻保存的同种异体关节软骨帽移植修复关节软骨缺损(ArticularCartilage,AC)的 实验效果。方法　取成年新西兰大白兔36只,其中12只作为关节软骨帽供体,另24只兔作为关节软骨帽受体, 将受体动物随机分为A、B两组,严格无菌条件下A组12只肱骨头行深低温冷冻软骨帽移植,B组12只肱骨头行 新鲜软骨帽移植。术后常规抗感染3d,两组分别于6、12周取肱骨头作相关观察与检测。结果　术后6周大体观 察,光镜,电境A、B两组无明显区别,移植物无明显移位,表面光滑、有光泽。软骨细胞形态基本正常,细胞核形态 基本正常。S 100(β亚链)蛋白免疫组化染色无差异。12周时,A、B两组移植物外形良好,移植物表面颜色为乳白 色,中心负重区可见明显塌陷。移植软骨有退行性改变。在电镜观察上,两个时间点上均无统计学差异(P> 0.05)。　结论　(1)大块软骨组织中的软骨细胞在经过深低温冷冻处理后,仍可保持较好的生物活性,可以用于 长期库存和移植使用。(2)大块深低温冷冻保存和新鲜同种异体软骨移植的近期效果良好,但远期效果有待进一 步研究。     

光固化树脂表层技术在兔关节软骨缺损修复中的实验研究

目的：探讨光固化树脂表层技术对兔关节软骨缺损修复的作用与效果。方法：40只6周龄雄性成年新西兰大白兔建立双股骨关节软骨缺损模型，将全部受试大白兔左侧股骨髁软骨缺损纳入实验组，右侧股骨髁软骨缺损纳入对照组。分别观察两组大白兔术后不同阶段大体观察情况、组织学特征、透视电镜下超微结构特征等。结果：实验组术后各阶段修复组织覆盖面积明显大于对照组，修复组织为透明软骨的比例明显高于对照组，各阶段修复组织评分结果明显低于对照组（ P＜0．05）。透视电镜下软骨细胞恢复情况较对照组好。结论：光固化树脂表层技术应用于关节软骨缺损的修复中具有比传统钻孔术更好的修复效果，其材料又安全美观，是一种新型关节软骨缺损修复的有效方法，值得推广宣传。     

骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质修复兔膝关节全层软骨缺损的实验

目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)复合脱钙骨基质(deminerized bone matrix, DBM)修复兔膝关节全层软骨缺损的疗效. 方法:MSCs取自4～6 mo龄2.5～3.5 kg的青紫兰兔,体外分离培养后种植于DBM支架上体外培养,再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处. 实验动物选用健康的青紫兰兔36只,随机分成A, B, C 3个处理组各12只,A处理组(MSCs/DBM)双侧股骨髁间窝软骨缺损处植入DBM吸附体外分离培养的自体MSCs复合物;B处理组(DBM)单纯植入DBM;C处理组(对照)不作任何植入. 分别于术后4, 8和12 wk各处死4只兔子,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS 10.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义. 结果:MSCs复合DBM所修复组织为透明软骨样修复;而单纯DBM移植组和对照组为纤维性修复. 对术后12 wk大体及组织学形态进行评分. 按完全随机设计进行方差分析和SNK-q检验,结果显示,SMCs/DBM组明显优于DBM植入组和对照组(P<0.05);DBM组优于对照组(P<0.05). 结论:运用软骨组织工程的原理,以DBM为支架材料的自体MSCs移植是一种修复软骨缺损的行之有效的方法.     

藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损

目的 探讨异体关节软骨细胞作为软骨种子细胞修复关节软骨缺损的可行性。方法 无菌取成年新西兰大白兔四肢关节软骨，酶消化法分离细胞，条件培养基体外培养扩增，藻酸钙凝胶包埋培养1周，植入兔膝关节股骨髁间软骨缺损，对照组缺损旷置。术后3、6个月分别取材，观察缺损修复情况；切片特染和免疫组化观察修复组织病理，并Wakitnni评分评估修复质量。结果 7／8缺损为成熟透明软骨组织修复，1／8为纤维软骨修复；Wakitani平均评1．75分；空白对照组评7．65分。实验组3个月组标本未见淋巴细胞或白细胞浸润，6个月组标本未见明显退变；所有标本均未见藻酸残留。结论 用藻酸包埋异体关节软骨细胞修复兔膝关节软骨缺损的方法是可行的，异体关节软骨细胞在适当的处理后可成为关节软骨组织工程种子细胞。     

柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损

目的：应用柱形藻酸钙载体复合骨细胞俱复兔膝关节软骨缺损,为骨关节病的组织工程学修复提供一定的实验依据,方法,应用自行制作的柱形藻酸钙载体复合消化分离的兔关节软骨细胞,共同植入异体兔膝关节软骨缺损处,分别于术后4,8和12wk观察大体标本及组织学修复结果：结果：术后8wk时缺损处可见一定程度的修复,到12wk时大体标本修复较好,修复组织和周围关节面界限不清,组织学见缺损处表现为软骨组织修复,结论：通过短期观察说明藻酸钙可以作为软骨的细胞的革体材料,用于关节软骨缺损修复的组织工程学研究。     

鹿茸多肽对兔骨髓间充质干细胞移植修复关节软骨缺损的影响

为探讨经鹿茸多肽诱导的兔自体骨髓间充质干细胞-胶原膜支架(MCMG)复合物修复兔膝关节软骨缺损的效果,抽取兔骨髓液经体外分离、培养获得兔MSCs.选用健康的新西兰大白兔27只,随机分成A、B、C 3组.A组以未经诱导的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;B组以经TGF-β1诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损;C组以经鹿茸多肽诱导后的自体MSCs-MCMG复合物修复兔膝关节软骨缺损.分别于术后2、4、8周取材,行HE、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色观察各组兔膝关节软骨缺损修复情况.结果显示术后8周,C组修复软骨缺损的效果无论从大体标本观察或是组织学检查都与B组的修复效果相当,而且C组与B组修复效果明显优于A组.说明经鹿茸多肽诱导的兔自体MSCs-MCMG复合物移植可提高兔膝关节软骨缺损的修复质量.