辐射诱发细胞恶性转化时Smad7基因表达对细胞生长抑制效应的调节

背景：细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads，它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导，其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。目的：研究在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7过表达是否可通过抑制TGF-β信号转导通路来拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。设计：自身对照前瞻性研究。地点和对象：研究在军事医学科学院放射医学研究所完成。实验对象为永生化人支气管上皮细胞BEP2D及辐射诱发恶性转化的人支气管上皮细胞。BERP35T2。干预：以外源性TGF-β作为刺激因子，用Northern blot检测永生化。BEP2D及辐射诱发恶性转化的BERP35T2细胞中Smad7基因的表达水平；用Smad7真核表达载体PCISmad7．neo稳定转染永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系，筛选G418抗性克隆，用Western blot加以验证。用MTT法检测Smad7基因转染前后TGF-β对永生化及恶性化细胞的生长抑制效应。主要观察指标：Smad7转染前后BEP2D及BERP35T2细胞Smad7表达水平及TGF-β作用于Smad7转染前后细胞的增殖能力变化。结果：辐射诱发恶性转化的BERP35T2细胞中Smad7表达水平高于永生化BEP2D细胞，相同浓度的TGF-β对BERP35T2细胞的生长抑制效应较BEP2D细胞弱；BEP2D和BERP35T2细胞转染Smad7基因后，各筛选到2个稳定表达SMAD7蛋白的细胞克隆，同对照细胞比，TGF-β对稳定表达Smad7基因的细胞生长抑制能力显著减弱。结论：在辐射诱发细胞发生恶性转化过程中，Smad7基因表达增高，其过表达可降低TGF-β对细胞的生长抑制作用。     

外源Smad7转染肝星状细胞及对转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

背景:Smad7是转化生长因子β信号转导途径的主要抑制性蛋白,具有抗纤维化的作用.目的:构建并鉴定大鼠Srnad7真核表达质粒,观察外源Smad7可否有效转染肝星状细胞T6,并进一步研究其对转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平的影响.设计、地点:基因重组及细胞观察实验,于新疆石河子大学医学院第一附属医院完成.材料:pcDNA3.1(+)质粒为课题组保留;大肠杆菌DH5a系石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室所赠;肝星状细胞T6细胞由中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所提供品.方法:采用基因重组技术将Smad7cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建大鼠Smad7真核表达质粒.脂质体介导转染肝星状细胞T6细胞,分为正常对照、空质粒及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞.主要观察指标:反转录-聚合酶链反应法检测各组中Smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平.结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功.Smad7转染组与正常对照组、空质粒组比较:Smad7 mRNA 达显著增加(P<0.01);转化生长因子β、Ⅰ型胶原mRNA表达减少(P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05).正常对照组、空质粒组smad7、转化生长因子β及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达差异无显著性意义(P值均>0.05).结论:大鼠Smad7真核表达质粒构建成功,外源Srnad7转染肝星状细胞T6细胞后可有效表达,并能降低转化生长因子β及Ⅰ型胶原mRNA表达水平.     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中TGF-β1/Smad信号途径蛋白表达的变化

目的：观察在全反式维甲酸（ATRA）作用下,人急性早幼粒细胞白血病（APL）NB4细胞株转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad信号转导途径中蛋白表达的变化,探讨TGF-β1/Smad途径在NB4细胞分化过程中的作用机制。方法：将ATRA作用于NB4细胞株不同时间后,应用蛋白印迹（Western blot）方法检测TGF-β1、Ⅰ型受体（TβRⅠ）、Ⅱ型受体（TβRⅡ）、Smad2、Smad4和Smad7蛋白表达的变化。结果：ATRA作用3h后TβRⅠ、TβRⅡ的表达量开始增加;12h后TGF-β1的表达量开始增加,随着加药时间延长,蛋白表达量逐渐上升,48h表达量至最高,然后下降。而Smad2、4、7蛋白的表达在加药3～6h后开始增加,呈逐渐上升趋势,Smad2表达量于48h达峰值,然后逐渐下降;而Smad4和Smad7的最高值出现较晚,出现在72h,然后下降。结论：TGF-β1信号转导途径与APL细胞的分化密切相关,ATRA在体外能上调TGF-β1/Smad途径的蛋白表达,以发挥抗白血病效应。     

TGF-β1、Smad2、CyclinD1与恶性肿瘤关系的研究进展

<正>转化生长因子β1(TGF-β1)是具有负调控生长功能的细胞因子之一,它可使许多细胞生长发生停滞,其主要方式是通过阻止G1期细胞进入S期。TGF-β1的生长抑制作用是通过其信号转导通路完成的,TGF-β1首先与其对应的受体结合形成复合物,该复合物对下游的Smad2蛋白进行活化,并使Smad2与Smad4结合,形成转录复合物后进入细胞核,并参与核酸转录因子及靶基因     

转化生长因子βⅠ型受体多态性在结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨转化生长因子βⅠ型受体多态性——TGF-βRⅠ6A在结肠癌SW48和DLD-1细胞侵袭转移中的作用。方法将TGF-βRⅠ6A基因转染SW48和DLD-1细胞,MTT法检测TGF-βRⅠ6A对结肠癌细胞增殖能力的影响;MatrigelTM侵袭试剂盒检测转染TGF-βRⅠ6A后细胞侵袭迁移能力的变化。Western blot检测TGF-βRⅠ6A在TGF-β1作用下,SW48细胞中ERK、磷酸化ERK、p38、磷酸化p38、Smad2和磷酸化Smad2基因的变化。结果转染TGF-βRⅠ6A的SW48细胞和DLD-1细胞,在TGF-β1(5ng/ml)的作用下,其体外增殖、侵袭、迁移能力均增强。此外SW48细胞中磷酸化ERK、磷酸化p38表达增强,Smad2和磷酸化Smad表达无明显变化。结论 TGF-βRⅠ6A在TGF-β1的作用下,能够增强SW48和DLD-1细胞的体外增殖、侵袭、迁移能力,可能与非Smad信号通路交联增强ERK、p38等基因的表达,从而促进结肠癌细胞侵袭迁移的作用有关。     

转化生长因子β1抗体对大鼠肾缺血-再灌注时SMAD7表达的影响

转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)是一类多功能的细胞因子,由多种组织细胞合成,调控着细胞周期,影响细胞的增殖、分化、黏附、转移和凋亡,与人类多种疾病发生发展密切相关[1].研究表明在大鼠肾缺血-再灌注时TGF-β1表达呈增加趋势[2].与配体结合后,TGF-β家族受体激活了一个由Smad蛋白家族介导的独特的信号转导通路,Smad7是TGF-β/Smads蛋白信号通路中最重要的内源性抑制因子[3].笔者采用注射TGF-β1抗体的方法来中和体内表达增多的TGF-β1,观察肾功能损害变化以及此通路上重要抑制因子Smad7的表达变化.     

粉防己碱对转化生长因子-β1诱导的人近端小管上皮细胞转分化的干预作用及机制

目的探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的拮抗效应及其机制。方法体外培养的HK-2随机分为正常对照组、Tet组(100ng/ml)、TGF-β1(5ng/ml)组和TGF-β1(5ng/ml)+Tet(100ng/ml)组。Westernblot法检测细胞中TβRI蛋白、SnoN蛋白水平、Smad7蛋白水平和Smad2/3磷酸化水平的改变;半定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法观察细胞中TβRI mRNA、Smad7 mRNA、SnoN mRNA表达的改变。免疫荧光检测间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 Tet能抑制TGF-β1诱导α-SMA的表达,显著上调SnoN mRNA和蛋白的表达(P<0.01);Tet对TβRI表达、Smad2/3的磷酸化及Smad7的表达没有影响。结论 Tet能抑制人近端小管上皮细胞转分化,其机制与Tet上调SnoN表达有关。     

let-7a-5p在急性呼吸窘迫综合征中作用

目的探讨let-7a-5p靶向调节转化生长因子-β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGF-βR1)在急性呼吸窘迫综合征中作用及机制。方法 NIH3T3细胞经转染let-7a-5p mimics或let-7a-5p inhibitor等后,分为let-7a-5p增强组、let-7a-5p增强对照组、let-7a-5p抑制组、let-7a-5p抑制对照组和阴性对照组,检测各组细胞中let-7a-5p的相对表达量,转染成功后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白相对表达量。将HEK293细胞分为实验组和对照组,分别转染let-7a-5p mimic和阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定2组相对荧光素酶活性的荧光值。结果转染后let-7a-5p增强组let-7a-5p相对表达量(191 215.66±115 55.57)高于阴性对照组(251.85±85.12)和let-7a-5p抑制组let-7a-5p(1.14±0.22)(P0.05),阴性对照组高于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05);let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢmRNA相对表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),5组细胞中TGF-βR1mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);let-7a-5p增强组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值低于阴性对照组和let-7a-5p抑制组(P0.05),阴性对照组低于let-7a-5p抑制组(P0.05),let-7a-5p增强对照组和let-7a-5p抑制对照组细胞中TGF-βR1、Smad2、Smad3、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达灰度值与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,对照组细胞相对荧光素酶活性(1.00±0.00)高于实验组(0.34±0.13)(P0.05)。结论 let-7a-5可通过抑制TGF-βR1蛋白翻译而减轻肺纤维化,进而延缓急性呼吸窘迫综合征进程。     

TGF-β1/Smad4在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的:探讨TGF-β1/Smad4信号通路与乳腺癌发生发展的关系。方法:采用荧光定量PCR技术、免疫组织化学技术对30例乳腺癌临床标本及恶性程度不同的乳腺癌细胞株中TGF-β1及Smad4的表达情况进行检测。结果:TGF-β1和Smad4mRNA表达及蛋白表达随着乳腺癌细胞恶性程度增加而逐步下降。结论:TGF-β1/Smad4信号通路参与了乳腺癌的发生、发展过程,TGF-β1/Smad4信号通路可能在乳腺癌演变中起抑制作用,与乳腺癌的恶性程度呈负相关。     

Epithelium-specific deletion of TGF-β receptor type II protects mice from bleomycin-induced pulmonary fibrosis

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a chronic fibroproliferative pulmonary disorder for which there are currently no treatments. Although the etiology of IPF is unknown, dysregulated TGF-β signaling has been implicated in its pathogenesis. Recent studies also suggest a central role for abnormal epithelial repair. In this study, we sought to elucidate the function of epithelial TGF-β signaling via TGF-β receptor II (TβRII) and its contribution to fibrosis by generating mice in which TβRII was specifically inactivated in mouse lung epithelium. These mice, which are referred to herein as TβRIINkx2.1-cre mice, were used to determine the impact of TβRII inactivation on (a) embryonic lung morphogenesis in vivo; and (b) the epithelial cell response to TGF-β signaling in vitro and in a bleomycin-induced, TGF-β-mediated mouse model of pulmonary fibrosis. Although postnatally viable with no discernible abnormalities in lung morphogenesis and epithelial cell differentiation, TβRIINkx2.1-cre mice developed emphysema, suggesting a requirement for epithelial TβRII in alveolar homeostasis. Absence of TβRII increased phosphorylation of Smad2 and decreased, but did not entirely block, phosphorylation of Smad3 in response to endogenous/physiologic TGF-β. However, TβRIINkx2.1-cre mice exhibited increased survival and resistance to bleomycin-induced pulmonary fibrosis. To our knowledge, these findings are the first to demonstrate a specific role for TGF-β signaling in the lung epithelium in the pathogenesis of pulmonary fibrosis.     

Inhibition of type III TGF-β receptor aggravates lung fibrotic process

Transforming growth factor-beta (TGF-β) is a multifunctional cytokine that regulates cell proliferation, death, development or differentiation. In addition, TGF-β is considered a key mediator in fibrogenic processes, and signals either directly or indirectly through types I, II and III (TβRI, II, and III) receptor complexes. The type III TGF-β (TβRIII or betaglycan) is a transmembrane proteoglycan without a functional kinase domain, and is considered as a coreceptor to increase the affinity of ligand binding to TβRII. Little is studied on TGF-β and TβRIII (or betaglycan) signaling, while it is well known about TGF-β ligand and TβRII signaling. In this study, we investigated the effects of TβRIII expression on TGF-β induced differentiation, in view of the finding that TβRIII is significantly downregulated during TGF-β-induced differentiation in fibroblasts. TGF-beta induced alpha-SMA and Procollagen Type I expression were markedly inhibited in fibroblasts stably expressing TβRIII. Endogenous TβRIII expression did not alter the TβRI or TβRII levels, but inhibited Smad 2/3, Akt and ERK phosphorylation. The molecular mechanism of TβRIII action in TGF-β-induced differentiation is associated with both Smad-dependent and Smad-independent pathways. Our results suggest that TβRIII is a novel molecular target for regulation of TGF-β signaling in myofibroblast differentiation.     

Pivotal role of cardiomyocyte TGF-β signaling in the murine pathological response to sustained pressure overload

The cardiac pathological response to sustained pressure overload involves myocyte hypertrophy and dysfunction along with interstitial changes such as fibrosis and reduced capillary density. These changes are orchestrated by mechanical forces and factors secreted between cells. One such secreted factor is TGF-β, which is generated by and interacts with multiple cell types. Here we have shown that TGF-β suppression in cardiomyocytes was required to protect against maladaptive remodeling and involved noncanonical (non-Smad-related) signaling. Mouse hearts subjected to pressure overload and treated with a TGF-β-neutralizing Ab had suppressed Smad activation in the interstitium but not in myocytes, and noncanonical (TGF-β-activated kinase 1 [TAK1]) activation remained. Although fibrosis was greatly reduced, chamber dysfunction and dilation persisted. Induced myocyte knockdown of TGF-β type 2 receptor (TβR2) blocked all maladaptive responses, inhibiting myocyte and interstitial Smad and TAK1. Myocyte knockdown of TβR1 suppressed myocyte but not interstitial Smad, nor TAK1, modestly reducing fibrosis without improving chamber function or hypertrophy. Only TβR2 knockdown preserved capillary density after pressure overload, enhancing BMP7, a regulator of the endothelial-mesenchymal transition. BMP7 enhancement also was coupled to TAK1 suppression. Thus, myocyte targeting is required to modulate TGF-β in hearts subjected to pressure overload, with noncanonical pathways predominantly affecting the maladaptive hypertrophy/dysfunction.     

转化生长因子β1及其受体以及Smad4和Smad7在胃癌组织表达的临床病理学意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体(TGF-βRⅡ)和Smad4、Smad7蛋白在胃癌组织中表达的临床病理学意义.方法 采用免疫组织化学方法检测109例胃癌、28例高度不典型增生、20例低度不典型增生、30例慢性萎缩性胃炎、29例肠上皮化生和21例正常对照的胃黏膜组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白的表达变化.结果 在胃癌和不典型增生组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达均明显高于慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和正常胃黏膜组织(P均<0.001).而Smad4蛋白在高度和低度不典型增生组织中虽呈高表达状态(细胞质染色分数分别为4.89±2.38、5.80±1.54;细胞核染色分数分别为3.89±1.52、3.80±1.33),但在胃癌组织中其表达水平(细胞质染色分数为2.41±2.27、核染色分数为2.02±2.14)又明显降低(P均<0.001).在胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ和Smad7蛋白的表达在进展期胃癌(分别为4.36±2.66、3.05±1.93、4.84±3.06)高于早期胃癌(分别为2.93±1.85、2.17±1.87、4.14±2.46),差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05,P<0.05),而Smad4蛋白的表达则在早期胃癌中表达更高(P<0.001).同时,Smad4蛋白表达与肿瘤的大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.001)、组织学分期(T分期)(P<0.001)和临床分期(P<0.001)均有关系,而TGF-βRⅡ和Smad4蛋白的表达则与患者的5年生存率有密切关系(P<0.05,P<0.01).在蛋白表达相关性上,TGF-β1蛋白表达与TGF-βRⅡ和Smad7蛋白表达之间存在正相关性(r1=0.45,P<0.05;r2=0.49,P<0.05),而与Smad4蛋白的表达呈负相关(r=-0.21,P<0.05).结论 TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad4和Smad7蛋白共同参与胃癌的形成,且Smad4蛋白是TGF-β信号传导通路中的最关键因素.四种蛋白的检测对反映胃癌的侵袭、转移和预后是一个非常有意义的指标.     

积雪草苷对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7表达的影响

背景转化生长因子-β(TGF-β)是病理性瘢痕形成的重要因素.Smad蛋白家族是近年来发现的TGF-β受体下游信号蛋白.积雪草苷可抑制成纤维细胞增殖及胶原的合成,使瘢痕内的TGF-β表达减少.目的研究积雪草苷对瘢痕成纤维细胞增殖与磷酸化Smad2和Smad7的作用及机制.设计以细胞为研究对象,对照、观察性研究.单位一所大学医院烧伤整形科. 对象实验于2002-04/2003-03在中山大学外科实验室完成.标本取自因增生瘢痕住院进行整形手术的患者6例,男3例,女3例,年龄1～35岁.增生性瘢痕成纤维细胞由本科实验室经原代培养后传代获得.干预研究分为实验组和对照组,将积雪草苷作用于成纤维细胞为实验组,对照组不加积雪草苷,观察用药前后各指标的改变.主要观察指标①积雪草苷对磷酸化Smad2和Smad7的影响.②积雪草苷对细胞周期和凋亡的影响.结果积雪草苷可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期,减少成纤维细胞中磷酸化Smad2的含量,两组差异无显著性意义(t=1.53,P=0.08),细胞中Smad7的含量实验组为(50.80±22.40)%,对照组(32 18±17.84)%,两组的差异有显著性意义(t=2.17,P=0.024).结论积雪草苷抑制瘢痕可通过Smad通路发挥作用.     

转化生长因子β1对肝星状细胞活化及跨膜信号转导影响与舒肝颗粒的干预

背景:肝纤维化是一种可逆性的病变,及时地干预肝纤维化的病程能够减少肝硬化及其致命并发症的发生.肝星状细胞在肝纤维化发病机制中起主要作用.目的:采用舒肝颗粒作用于体外培养的大鼠肝星状细胞,观察其是否对转化生长因子β1促进肝星状细胞活化及跨膜信号转导有影响,以探讨其抗纤维化的作用机制.设计、时间及地点:对照观察细胞学实验,于2008-06／2009-02在泸州医学院分子中心实验室完成.材料:肝星状细胞株HSC-T6购自上海中医药大学肝病研究所,其表型为活化的肝星状细胞.舒肝颗粒由泸州医学院附属医院药物研究所提供,批号:20071120.方法:四甲基偶氮唑盐法测不同质量浓度(0.01,0.02,0.04,0.08 g/L)舒肝颗粒对HSC-T6细胞增殖情况的影响,选择对细胞增殖无影响的剂量(0.01 g／L).再将HSC-T6细胞种板培养后,分为4组,空白对照组培养液中不加其他处理因素.转化生长因子β1组培养液中加入5 μg/L转化生长因子β1液.舒肝颗粒组培养液中加入前面选择的0.01 g／L舒肝颗粒药液;联合用药组培养液中同时加入舒肝颗粒药液与转化生长因子β1液,剂量同上.主要观察指标:①肝星状细胞的形态.②免疫组织化学观察肝星状细胞表达Smad3和Smad7.③反转录-聚合酶链反应观察肝星状细胞活化及跨膜信号转导结果.结果:①转化生长因子β1组细胞形态类似于对照组,且伸展更明显,联合用药组,细胞形态更接近于转化生长因子β1组,各组均未见核固缩或凋亡现象.②免疫组织化学法测Smad3和Smad7在对照组分别表达较高;转化生长因子β1能轻度上调Smad3和Smad7的表达(P<0.05):而舒肝颗粒组和联合用药组与对照组相比,Smad7表达上调更为显著,为对照组的1.99倍(P<0.01).⑨反转录-聚合酶链反应结果显示与对照组相比,舒肝颗粒组上调Smad7mRNA表达(P<0.05),而Smad3mRNA的表达无明显变化.给予转化生长因子β1(5μg/L)作用后,Smad3和Smad7表达均上调(P < 0.05).联合组作用的影响是Smad7上升1.01倍(P < 0.05),但Smad3的转录水平无明显变化(P > 0.05).结论:① 转化生长因子β能刺激smad3和smad7的基因表达,使R-Smads/I-Smads之间的反馈调节机制重新达到平衡.②舒肝颗粒可能通过对肝星状细胞增殖的抑制而起到抗肝纤维化的作用,且抑制程度与药物剂量呈一定依赖关系.③舒肝颗粒可能通过上调smad7的表达,抑制TGF-β/smad信号转导途径.     

转化生长因子-β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的研究转化生长因子-β 1(TGF-β 1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞( KFB) Smad3,7mRNA表达的调控机制.方法用放线菌酮( CHX)和放线菌素 D预处理 KFB,以分别阻断 KFB内源性蛋白质的合成及 mRNA合成.采用逆转录 PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞 Smad3,7 mRNA表达水平.结果经 CHX预处理后, KFB的 Smad3 mRNA表达轻度上调,并完全抑制了 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA的下调作用,而 CHX预处理对 KFB的 Smad7 mRNA表达及 TGF-β 1上调 Smad7 mRNA的作用并无明显影响.经放线菌素 D预处理后,随 TGF-β 1作用时间延长, KFB的 Smad3 mRNA表达水平无明显下降.结论 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对 Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与, KFB细胞中的 Smad7可能也是活化的 Smads的直接靶基因.