转染胰岛素样生长因子-1的骨髓基质细胞对心肌梗死后心功能的影响

目的:移植转染胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的骨髓基质细胞(MSC)到心肌梗死大鼠模型中,观察心肌细胞的凋亡和心功能的变化。方法:采用结扎法制作心肌梗死大鼠模型,用含pBabe-puro/IGF-1的病毒液感染MSC,移植MSC进入梗死心肌边缘。将实验分为心肌梗死组(MI)、心梗单纯移植细胞组(MI+MSC)、心梗移植感染空质粒细胞组(MI+MSC-pBabe-puro)、心梗移植感染IGF-1质粒的细胞组(MI+MSC-pBabe-puro/hIGF-1)。免疫组化检测炎性反应的时间,决定细胞移植的时间点。术后4周,通过TUNEL法检测心肌的细胞凋亡,超声心动图检测心功能的变化。结果:免疫组化结果显示梗死后第7天的ED1细胞的阳性数比第2天明显降低(P<0.05);转染IGF-1的MSC移植到心梗的心肌中,和转染空质粒的MSC以及未作转染的MSC组比较,明显减少心肌的细胞凋亡(P<0.05);且射血分数、左室壁厚度、左室短轴缩短率明显提高(P<0.05)。结论:转染IGF-1的MSC移植到心梗大鼠心肌内,可能是通过减少心肌的细胞凋亡来改善心功能。     

胰岛素样生长因子-1抗氧化损伤雪旺细胞凋亡的实验研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对H2O2损伤的雪旺细胞（SCs）抗凋亡的作用。方法将培养的SCs分为H₂O₂处理组、H₂O₂加IGF-1保护组和正常对照组。检测各组细胞内超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛(MDA)的含量,丫叮橙（AO）染色观察细胞存活、凋亡情况,蛋白印迹（Western blot）法检测Bcl-2的表达水平。结果与正常组及保护组相比,H₂O₂处理组细胞具有典型的凋亡形态特征：核染色质浓染、边集,细胞体积缩小,细胞存活率降低;SOD含量明显减少（P＜0.01),MDA含量明显增加（P＜0.01),Bcl-2表达下调;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高（P＜0.01),SOD含量较损伤组增高（P＜0.01),MDA含量较损伤组明显减少（P＜0.01),Bcl-2表达明显上调。结论本实验结果提示IGF-1对氧化损伤的SCs具有保护作用。     

人胰岛素样生长因子-1逆转录病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达

目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;培养人骨髓基质干细胞,用病毒上清感染骨髓基质干细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测目的基因在靶细胞的表达。结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了IGF-1逆转录病毒表达载体,转染包装细胞后可以产生IGF-1逆转录病毒,病毒感染人骨髓基质干细胞后能够表达IGF1-1重组蛋白。结论成功建立逆转录病毒载体介导的IGF-1体外表达体系,能够快速、稳定地将IGF-1基因转入骨髓基质干细胞。     

胰岛素样生长因子-1基因修饰骨髓基质细胞对大鼠脑缺血的神经保护作用

目的：探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）基因修饰的骨髓基质细胞（MSCs）对大鼠脑缺血的神经保护作用及其机制。方法健康雄性Wistar大鼠48只分为假手术组、缺血模型组、 MSCs组、MSCs-IGF-1组,每组12只。除假手术组外,其余组采用改良线栓法建立左侧大脑中动脉缺血再灌注模型。再灌注24 h后MSCs组、MSCs-IGF-1组分别采用MSCs、IGF-1修饰的MSCs 干预治疗。每组于再灌注后3 d和14 d行神经功能缺损评分,采用免疫组化法测 BrdU阳细胞数量, TUNEL法测大鼠神经细胞凋亡数量,分光光度计测脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果再灌注14 d后MSCs组与MSCs-IGF-1组的神经功能缺损评分较缺血模型组明显降低（ P＜00．5）,而MSCs-IGF-1组神经功能缺损评分低于MSCs组（P＜0．05）。再灌注后3 d及14 d,假手术组与缺血模型组未见明显BrdU阳性细胞,MSCs-IGF-1组BrdU阳性细胞数较MSCs组明显增多（P＜0．05）。再灌注后3 d及14 d,MSCs组与MSCs-IGF-1组梗死半球神经细胞凋亡数目较缺血模型组相比明显减少（P＜0．05）,MSCs-IGF-1组比MSCs组凋亡细胞明显减少（P＜0．05）。在灌注后3 d及14 d,与缺血模型组相比,MSCs组脑组织中SOD活性明显升高（P＜0．05）,MDA含量明显下降（P＜0．05）,且MSCs-IGF-1组SOD活性较MSCs组更高（P＜0．05）,MDA含量更低（ P＜0．05）。结论 IGF-1基因修饰骨髓基质细胞治疗干预比单纯骨髓基质细胞干预对脑缺血具有更好的神经保护作用,其机制可能与增强骨髓基质细胞的抗氧化应激能力、减少神经细胞凋亡有关。     

胰岛素样生长因子1促许旺细胞生长的实验研究

目的 探索促进许旺细胞增殖的方法。方法 将原代大鼠许旺细胞进行体外培养，并在培养基中加入不同浓度的胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）。通过绘制细胞生长曲线及＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入等方法，观察ＩＧＦ－１对许旺细胞的作用。结果 ＩＧＦ－１能使培养的许旺细胞增殖加快，提前进入平台期。许旺细胞的增殖与ＩＧＦ－１的浓度在一定范围内呈现量效关系，同时ＩＧＦ－１的作用并不导致许旺细胞的肥大。结论 ＩＧＦ－１对许旺细胞     

脑出血模型大鼠脑组织胰岛素样生长因子-1表达的实验研究

目的：观察脑出血模型大鼠脑组织胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达及其对细胞凋亡的影响。方法随机将105只大鼠分为正常对照组、假手术组及脑出血组,应用立体定向技术,将自体未抗凝血注入大鼠基底节区制备脑出血模型;分别在造模后6、24、48、72h和1周将大鼠断头取脑制作标本,采用TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡、荧光定量RT-PCR检测IGF-1 mRNA表达,免疫组化分析IGF-1表达。结果脑出血后6h血肿周围脑组织IGF-1及TUNEL染色阳性细胞表达升高,其中IGF-1在24h达高峰,48h开始下降,而细胞凋亡于72h达高峰,1周开始下降,表达均明显高于假手术组和正常对照组（P〈0.05,P〈0.01）;且IGF-1表达与细胞凋亡数呈正相关（P〈0.05）。结论脑出血后IGF-1表达上调,参与了脑出血的病理生理过程,可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用。     

胰岛素样生长因子-1与胰岛素样生长因子结合蛋白-1在妇产科临床应用的研究进展

1概述 胰岛素样生长因子系统(IGFs)包括IGF多肽(IGF-1、IGF-2)、两种IGF受体、6种胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP1～6)以及一组胰岛素样生长因子结合蛋白酶。IGF通过与其受体结合发挥其生物学效应，与IGFBP结合成无活性复合物存在，IGFBP具有延长循环水平的IGF、半衰期和稳定IGF血浓度的作用。IGFs中的IGF-1及IGFBP-1与妇产科的关系密切。     

胰岛素样生长因子-1与胰岛素抵抗和冠心病

目的 :探讨胰岛素样生长因子- 1(IGF- 1)与胰岛素抵抗 (IR)在冠心病发病机制中可能作用。方法 :测定了 16例正常人外周静脉血清IGF- 1和胰岛素 (IS)水平与 16例冠心病患者外周静脉血清IGF- 1和IS水平。结果 :冠心病患者外周静脉血清IGF- 1水平显著低于正常人 ,IS水平显著高于正常人 ,胰岛素敏感指数 (ISI)显著低于正常人。结论 :IGF -1和IR可能参与冠心病的病理生理过程。     

体外胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞生长的抑制作用

目的 观察胰岛素样生长因子结合蛋白-1对人血管内皮细胞的影响及其对胰岛素样生长因子的调节作用。方法 MTT比色法观察IGFBP-1及与IGF-1预混后对脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)生长影响。结果 IGFBP-1对内皮细胞ECV304的生长具有抑制作用且与剂量成正比；预混后各组IGF-1促细胞生长作用明显被抑制。结论 IGFBP-1既可以直接也可以通过调节IGF-1抑制血管内皮细胞生长。     

胰岛素样生长因子-1与肺纤维化的研究进展

IGF-1（instdin-like growth factor-1，IGF-1）是一种功能广泛的多肽因子，在所有靶组织内均可促进DNA、RNA和蛋白质的合成并能促进细胞生长。近年来，相关研究证实，IGF-1在肺纤维化发生发展过程中起着重要作用，但仍缺乏IGF-1单一因子直接导致肺纤维化的证据，它在肺纤维化形成中的作用及其机制尚未完全明了。本文对IGF-1近年来的研究进展及其对肺纤维化的病理生理意义综述如下。     

低氧对骨髓间质细胞表达VEGF的影响

目的:研究低氧对骨髓间质细胞(MSCs)分泌VEGF及促血管内皮细胞(VECs)增殖的影响。方法:用VEGF ELISA试剂盒和Micro BCA蛋白质定量试剂测定正常氧和低氧培养的MSCs的上清液中VEGF与总蛋白的含量的比值(pg·μg-1)。用不同成份配制的1%FBS的DMEM培养基培养VECs,实验分成5组:低氧MSCs组(低氧培养的MSCs的上清液)、VEGF组(与低氧MSCs组等浓度VEGF)、antibody-低氧MSCs组(低氧MSCs组中加入10μg·ml-1anti-VEGF)、antibody-VEGF组(VEGF组中加入10μg·ml-1anti-VEGF)和对照组(不加其它成份)。用MTT法检测VECs的增殖程度。结果:在低氧条件下培养的MSCs分泌的VEGF明显高于正常氧条件下培养的MSCs分泌的VEGF(P<0.01)。促进VECs增殖的程度依次为低氧MSCs组>VEGF组>antibod-y-低氧MSCs组>antibody-VEGF组=control组。结论:MSCs在低氧条件下比在正常氧条件下具有更强的分泌VEGF的能力。MSCs可分泌VEGF和其它细胞因子共同促进VECs增殖,但VEGF发挥主要作用。     

pcDNA_4-PDGF-B重组质粒的构建并转染体外培养兔骨髓间充质干细胞

目的:探讨自行构建pcDNA_4-PDGF-B重组质粒并转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法及可行性,并观察转染阳性细胞形态及生物特性。方法:构建包含人类血小板源性生长因子B(PDGF-B)重组质粒,将目的基因转染到兔BMSCs中,并通过形态观察、双酶切、聚合酶链反应、免疫组化来检测该目的基因在兔BMSCs中表达,通过G418抗生素筛选、MTT法绘制细胞生长曲线探讨PDGF-B基因对靶细胞生长影响。结果:pcDNA_4-PDGF-B重组质粒的构建合成及人PDFG-B基因成功转染BMSCs,并持续稳定地表述PDGF-B。结论:PDGF-B基因可以对骨髓间充干细胞进行转染,PDGF-B对靶细胞增殖、分裂有明显促进作用,为后期研究植入人PDGF-B转染BMSCs以缓解急性肝功能衰竭奠定了基础。     

异体骨髓基质细胞促进引导性骨再生的实验研究

目的:利用膜引导组织再生技术,将复合异体骨髓基质细胞(BMSCs)的明胶海棉移植于硅胶膜管内,旨在观察异体BMSCs促进膜引导骨组织再生的能力.方法:抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增.36只成年新两兰兔随机分成3组,每组12只,造成双侧12 mm桡骨缺损,A组缺...     

同时沉默IGF-1R和EGFR基因对肝癌HepG2细胞株生长抑制的作用机理

目的:同时沉默表皮生长因子受体(EGFR)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)基因,研究其抗瘤疗效及作用机理.方法:分别构建靶向EGFR、IGF-1R及两受体的小分子干扰RNA(siRNA-EGFR、siRNA-IGF-1R、siRNA-EGFR&IGF-1R),构建与任何基因无同源的阴性对照质粒(siRNA-H...     

亚低温对外源性骨髓基质细胞迁移、增殖的影响

目的:了解亚低温对外源性骨髓基质细胞迁移、增殖的影响,探讨亚低温可能的脑保护机制。方法:建立大鼠局灶性脑梗塞模型,从侧脑室注射骨髓基质细胞,给予亚低温干预,观察移植后第14、28天低温组和常温组神经功能评分、梗死灶周围BrdU(+)细胞数。结果:移植后第14和28天,亚低温组大鼠神经缺损评分低于同时间点的对照组评分,移植第14天多数标记的骨髓基质细胞细胞已经迁移至梗死灶周围,第14和28天亚低温组较常温组梗死灶周围有更多的BrdU(+)。结论:亚低温可以促进骨髓基质细胞的迁移和(或)增殖,对局灶性脑缺血有神经保护作用。     

兔骨髓基质细胞的体外培养

目的：探讨兔骨髓基质干细胞(BMSCs)在体外培养的生长特点,为骨组织工程种子细胞的选择奠定基础。方法：取三月龄新西兰大白兔经转子窝抽取骨髓,制成细胞悬液进行培养,通过倒置显微镜、透射电镜(TEM)、HE染色等观察细胞的生物学特性,计算细胞的生长曲线、贴壁率和分裂指数。结果：BMSCs在体外生长良好,传代后性状稳定,增值期为2～4d,12h贴壁率为90％,第4天时分裂指数最高为92‰。结论：兔BMSCs体外培养时生长性状稳定,增殖速度快,可作为骨组织工程的种子细胞。     

β-抑制蛋白1在胰岛素样生长因子-l受体的内化和泛素化中的作用

目的:探讨β-抑制蛋白1分子在过度表达胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的肿瘤细胞中IGF-1R膜受体内化和泛素化降解的作用。方法:采用免疫印迹法(WB)、免疫沉淀技术(IP)和FACS技术对鼠胚胎成纤维瘤3种细胞株[P6、β-抑制蛋白1阳性(WT1)和β-抑制蛋白1阴性KO细胞]进行IGF-1R内化检测。结果:在IGF-1R过度表达的P6细胞随配体刺激时间的增加内化IGF-1R明显增加,但非内化IGF-1R的水平明显降低;在β-抑制蛋白1阴性细胞株随配体刺激时间的增加非内化IGF-1R的水平保持不变,而无IGF-1R内化产生,但阳性对照可以看到条带清晰的IGF-1R;使用FACS分析也证实了两个细胞株的WB结果,同时检测在细胞通路中IGF-1R内化的作用在β-抑制蛋白1阴性细胞检测不到磷酸化的pERK。结论:在β-抑制蛋白1缺乏的情况下IGF-1R内化不能发生,β-抑制蛋白1可作为一个调节IGF-1R内化的工具,也表明IGF-1R内化对细胞通路之一的MAPK是必需的。     

胰岛素样生长因子-1在糖尿病合并结肠癌患者血清及癌组织中的表达

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在2型糖尿病合并结肠癌患者血清及癌组织中的表达,探讨其在2型糖尿病并发结肠癌中的作用.方法:采用放射免疫测定法及免疫组化SP染色法检测40例2型糖尿病合并结肠癌患者(A组)、30例2型糖尿病合并结肠腺瘤患者(B组)、20例结肠癌病患者(C组)、20例2型糖尿病患者(D组)及健康对照者(E组)血清IGF-1水平及其在组织中的表达.结果:5组间血清IGF-1水平差异有统计学意义(F=14.577,P＜0.01).组间两两比较结果提示A组血清IGF-1水平高于其他4组(P＜0.05),E组血清IGF-1水平低于其它4组(P＜0.05).与正常结肠黏膜组比较,结肠腺瘤组、结肠癌组IGF-1的表达增强,差异有统计学意义(P＜0.01);与结肠腺瘤组比较,IGF-1在结肠癌中的表达显著增强(P＜0.05).结论:2型糖尿病并发结肠癌的过程中,IGF-1可能发挥了一定作用.     

体外共培养诱导骨髓间充质干细胞向雪旺细胞分化

目的:观察体外雪旺细胞环境对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用。方法:分离和体外培养新生大鼠MSCs和雪旺细胞;实验组MSCs经DAPI标记后与雪旺细胞按1∶2比例共培养,观察细胞的形态变化,在第1,3,6天时使用免疫细胞化学染色检测MSCs中Nestin,GFAP及S-100表达。对照组MSCs单独培养,其余处理与实验组相同。结果:共培养1 d后部分MSCs出现雪旺细胞样形态,Nestin表达率为(83.4±3.5)%,随时间增加而降低。GFAP及S-100表达率随时间而增加。对照组细胞形态无变化,不同时间点均有少量MSCs表达Nestin,而GFAP和S-100未见表达。结论:MSCs可通过体外共培养向雪旺细胞分化。