一步法多重RT-PCR快速筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒

目的 建立能同时筛查A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒的多重RT-PCR技术.方法 针对A型流感病毒的M基因、B型流感病毒的NS基因设计通用扩增引物,针对新型甲型H1N1流感病毒的HA基因设计特异性扩增引物,采用一步法建立多重RT-PCR反应体系.通过盲法实验与实时荧光RT-PCR进行比对来评价方法的准确性,并应用于临床评价方法的实用性和有效性.结果 琼脂糖凝胶电泳分析多重RT-PCR产物,结果显示目的扩增片段条带清晰明亮,没有非特异性产物出现,可见该方法扩增效率高,特异性强.50份样本的盲法实验结果显示两种方法检测结果完全一致,符合率为100%.结论 建立的多重RT-PCR方法能通过一次实验快速、准确地同时筛检A型、B型和新型甲型H1N1流感病毒,是一项成本低廉、对流感的疫情监测和早期诊断具有实用价值的筛检技术.

Abstract：

Objective To developed a multiplex RT-PCR assay for simultaneous screening of type A, B and novel A (H1N1)influenza viruses. Methods Two pairs of universal primers in were designed for amplifying the M gene and NS gene of type A and B influenza viruses, respectively. A pair of specific primers of HA gene was designed to detect novel A (H1N1) influenza virus. A one-step method was used to establish the multiplex RT-PCR system. A blinded experiment was carried out to validate the accuracy of this assay in comparison with the results of real-time fluorescence RT-PCR. The clinical practicability and efficacy of this assay was also evaluated. Results The RT-PCR products were analyzed using agarose gel electrophoresis,which yielded distinct bands of the target fragments without non-specific reactions, suggesting the high efficiency and specificity of the multiplex RT-PCR. Blinded study of 50 samples demonstrated a concordance rate of 100%. Conclusion This multiplex RT-PCR assay allows one-step simultaneous detection of type A, B and novel A (H1N1) influenza viruses rapidly and accurately, and provides a valuable low-cost screening technique for influenza epidemic monitoring and early diagnosis.     

人感染甲型H1N1流感病毒重症死亡病例的病理学观察

目的：观察人感染甲型H1N1流感病毒重症死亡病例各主要脏器的病理改变。方法：按传染病尸体解剖要求对3例死亡病例进行系统解剖,并获得心、肝、脾、肺、脑和肾等全部脏器,组织常规HE染色和革兰氏染色,光学显微镜下观察。结果：3例病例主要致死性病变位于肺,呈现弥漫性肺泡损伤改变（坏死性细支气管炎、肺泡腔内有浆液性和/或纤维素性渗出、肺出血、肺透明膜形成）,其中 1例病程较长者部分区域伴肺泡上皮增生和肺间质纤维化,且合并细菌感染及肺脓肿,可见血管壁坏死,血管内血栓形成,1例有心肌水肿,1例有脑出血和脑液化性坏死。结论：人感染甲型 H1N1流感病毒后主要累及呼吸系统,患者最终因急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭死亡。     

妊娠期感染甲型H1N1流感46例临床分析

目的分析妊娠期感染甲型H1N1流感患者的临床症状、体征及病程。方法回顾性分析2009年9月－11月我科接诊并确诊为妊娠合并甲型H1N1流感的46例患者的临床资料,并与同期余甲型H1N1流感患者412例的临床资料进行比例分析。结果与其他甲型H1N1流感患者相比,妊娠期感染甲型H1N1流感患者头痛、流涕症状出现的比例明显增多,咽痛症状明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）;两组单核细胞百分比间差异有统计学意义（P〈0．05）;最高体温、体征、发热天数以及血常规其他检测结果间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论妊娠期感染甲型H1N1流感患者,临床症状略重于其他甲型H1N1流感患者,发热天数、最高体温、体征、血常规检查和其他甲型H1N1流感患者无明显差别。     

重症H1N1流感病毒感染小儿器官功能评估

目的研究重症H1N1流感病毒感染小儿器官系统功能衰竭情况。方法 PCR检测H1N1流感病毒RNA阳性重症患者32例,按小儿多器官功能衰竭诊断标准对各器官系统进行评估。结果 (1)重症H1N1流感病毒感染小儿呼吸系统与中枢神经系统功能衰竭发生机率最高,分别为46.88%与12.5%;(2)其他器官系统功能衰竭未见单独出现,多与呼吸与神经系统异常伴发;(3)急性坏死性脑病是重症H1N1流感病毒感染小儿死亡的重要原因。结论重症H1N1流感病毒感染小儿呼吸系统与神经系统功能衰竭发生机率高,值得临床医生注意。     

成功救治甲型H1N1流行性感冒危重症一例

患者女,28岁,因咳嗽、咳痰、发热5d入院。患者于2009年10月27日无诱因出现咳嗽,咳少量黄黏痰且难以咳出,伴周身肌肉酸痛,发热（达39．5℃）,无畏寒、寒战,有恶心、呕吐少许胃内容物,无腹痛、腹泻。10月28日于社区医院静脉滴注氨曲南3d,上述症状无好转,     

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

目的：研究人流感病毒（H1N1）及禽流感病毒（H5N1）感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法：分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素（IL）-1β、-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α变化。结果：与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论：H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。     

甲型H1N1流感病人的护理

目的：探讨甲型H1N1流感的观察与护理。方法：回顾性总结345例甲型H1N1流感病人的护理,即加强病区管理,用药护理、病情观察、发热护理、心理护理、健康教育。结果：345例病人病程1d-10d,均治愈,无死亡病例。结论：掌握甲型H1N1流感发生发展规律,提供系统全面的护理,可有效预防甲型H1N1流感并发症的发生,提高治愈率。     

成人甲型H1N1流感病毒裂解疫苗接种副反应339例观察分析

目的探讨国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗接种的副反应发生情况。方法选择宁波市传染病医院接受甲型H1N1流感病毒裂解疫苗接种的339例成人为观察对象,观察接种国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗后出现的副反应,并进行追踪观察和记录。结果接种国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗后副反应发生率为11．80％（40／339）,均为一般副反应,其中全身副反应发生率为8．55％（29／339）,局部副反应发生率为5．01％（17／339）。共12例男性、28例女性发生副反应,男女副反应发生率间差异无统计学意义（P〈0．05）。发生副反应和未发生副反应的接种者的年龄间差异无统计意义（P〈0．05）。结论国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗接种后未出现严重副反应,可用于人群的大规模预防接种及疫情应急接种。     

甲型H1N1流感病毒感染不同免疫缺陷小鼠的比较

目的宿主免疫系统的功能状态在病毒的感染中起着至关重要的作用,本实验观察了不同免疫缺陷小鼠感染甲型H1N1流感病毒的差异。方法使用六个品系的近交系小鼠,经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒,分析其在病毒感染后存活率、体重变化和肺组织病理改变的异同。结果感染H1N1病毒的6种小鼠在观察的14 d内,野生型的C57BL/6小鼠感染开始体重缓慢下降,感染后期有所回升,有半数存活;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后体重随病情发展快速下降,死亡率均为100%。野生型C57BL/6小鼠感染初期为较弥漫的间质性肺炎,后期病变逐渐局限;BALB/c小鼠和四种免疫缺陷品系小鼠感染病毒后出现弥漫的中重度间质性肺炎,细支气管上皮有变性坏死,但炎症细胞明显少于C57BL/6小鼠。结论在甲型H1N1流感病毒的初次感染中固有免疫和特异性免疫分别在感染的初期和后期起主要作用,宿主免疫系统的功能状态影响着甲型H1N1病毒感染和预后。     

危重症甲型H1N1流感病例临床分析

目的通过回顾性分析24例危重症甲型H1N1流感病例的特点,提高对该病危重症病例认识、诊断及治疗水平。方法对24例甲型H1N1流感危重症病例临床资料进行回顾性分析。分析该病危重症患者的一般临床表现、影像学改变、实验室检查等相关资料,提高甲型H1N1流感危重症病人早期诊断。结果 24例患者均为甲型H1N1流感危重症患者,男性10例,女性14例(其中孕妇3例,产妇1例),平均年龄(39.25±18.57)岁。其中7例患者存在基础疾病,4例患者为术后病人。14例患者经复查咽拭子,甲型H1N1病毒核酸检测转阴时间为(12.4±5.7)天。经治疗,17例患者症状改善时间平均为(11.2±12.1)天。24例患者中14例存在ARDS,22例患者伴有不同程度的肺水肿,2例患者出现多脏器功能衰竭,2例患者出现脓毒症。24例患者中除5例患者放弃治疗外,有3例(15.8%)死亡。结论大多数危重症患者就诊时流感样症状均不典型,临床表现及理化检查差异性较大,容易出现漏诊误诊。多数病人存在不同程度的ARDS、肺水肿,进展快,死亡率较高。     

金柴抗病毒胶囊防治甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的实验研究

目的观察金柴抗病毒胶囊对甲型H1N1流感病毒PR8株感染小鼠肺炎的防治作用,为进一步临床应用提供依据。方法采用滴鼻感染正常小鼠和免疫低下小鼠建立流感病毒感染肺炎模型,分别采用治疗和预防性给药,观察给药后各组对小鼠肺指数、死亡率、生存时间的影响。结果①金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组均可明显降低正常小鼠感染后和免疫低下小鼠感染后肺指数、减少死亡率并延长生存时间。②金柴抗病毒胶囊所试3个剂量组在降低以上两种动物模型肺指数、降低免疫低下小鼠感染后死亡率的作用方面与达菲比较,差异无统计学意义。结论金柴抗病毒胶囊对流感病毒感染有较好的治疗和预防作用。     

甲型H1N1流感相关性肺炎的胸部CT表现及随访观察

目的探讨甲型H1N1流感相关性肺炎的CT表现及其鉴别诊断意义。方法通过回顾分析19例确诊为甲型H1N1流感相关性肺炎患者的胸部CT资料,观察其病变的形态、分布和伴随征象等。由2名医生独立观察完成。结果胸部CT表现:双侧磨玻璃影7例,单侧实变影1例,双侧磨玻璃影并实变影11例。双侧分布18例,单侧分布1例。胸膜下分布为11例,中央性分布为主2例,弥漫性分布为主4例,随机分布为2例。合并胸腔积液7例,其中双侧4例,单侧3例。合并细网状影6例。结论甲型H1N1流感相关性肺炎患者的胸部CT征象具有一定的特点,结合病史及实验室检查在一定程度上可以与其他疾病进行鉴别。     

甲型H1N1流感病例513例分析

目的对比分析甲型H1N1流感、季节性流感、普通感冒的临床症状、体征及病程。方法对比分析2009年5-10月来我科就诊并确诊为甲型H1N1流感患者513例（A组）、季节性流感患者242例（B组）、普通感冒患者1200例（C组）的临床资料。结果A、B组患者头痛、咽痛、咳嗽、胃肠症状、全身酸痛、关节痛等症状发生率,最高体温、发热天数、肺部哆音和腹部压痛等体征发生率以及血常规检验中淋巴细胞百分比、单核细胞百分比均明显高于C组,血小板计数明显低于C组,差异均有统计学意义（P〈0．05）;A组患者头痛、咳嗽、胃肠症状等的发生率,扁桃体肿大、肺部哆音、腹部压痛等体征发生率,以及血常规检验中淋巴细胞百分比、单核细胞百分比等均高于B组（P〈0．05）。结论甲型H1N1流感患者症状、体征、病程及血常规检查均较普通感冒重,类似于季节性流感,但二者在某些症状和实验室指标方面有明显差别。     

甲型H1N1流感患者隐私的伦理学探索

甲型H1N1流感患者并非故意感染者,不能因为被动感染了流感病毒,就必须接受剥夺隐私权的惩罚,更不能因此牵连其无辜的家人。保护个人隐私成为维护人格尊严和个性自由不可或缺的条件,保护患者的隐私权具有现实意义。宽容以伦理学上的后果论作为理论基础,宽容也是公正和正义的本质要求。自觉保护甲型H1N1流感患者的隐私是文明和进步的表现。     

护理人员311例接种甲型H1N1流感疫苗免疫效果分析

目的了解内蒙古大兴安岭地区医院中的护理人员接种甲型H1N1流感疫苗的免疫效果。方法选用随机采样的方法,对311名接种者的特异性抗体进行调查分析,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法半定量测定人血清中H1N1IgG含量。结果接种甲型H1N1流感疫苗后93d内的抗体的阳转率为86.17%。所产生的特异性抗体在各年龄段之间比较,差异没有统计学意义（P〉0.05）;免疫60d内的阳转率在92.98%以上,免疫80～93d的阳转率已经降至80%以下,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论内蒙古大兴安岭地区医院中的护理人员接种甲型H1N1流感疫苗工作取得了非常好的免疫效果。     

甲型H1N1患者循环血白细胞VCS参数分析

目的探讨VCS（Volume Conductivity Scatter）参数在甲型H1N1患者白细胞中的变化及其辅助诊断价值。方法用Beckman Coulter LH750型全自动血液分析仪,分别测定基因扩增法确诊甲型H1N1患者（实验组）和健康人群（对照组）白细胞VCS的参数。结果甲型H1N1患者VCS参数MMV（171.615±9.156）明显高于对照组（157.157±10.026）（P〈0.001）;MLS（62.003±6.916）比对照组（54.263±3.817）明显增加（P〈0.001）;MNS（114.946±1.603）较正常对照组（154.263±3.817）明显减低（P〈0.001）。结论甲型H1N1患者白细胞VCS参数改变不同于健康人群,对早期诊断有一定参考价值。     

甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因遗传进化分析

【目的】 了解季节性H1N1流感病毒与2009年新型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的遗传进化关系,探讨甲型H1N1流感病毒的遗传变异规律｡【方法】 分别从2006年和2009年流感病人标本中分离并鉴定出季节性HIN1流感病毒和新型H1N1流感病毒,用RT-PCR技术扩增了病毒NA基因全序列,并对其分子进化和重要功能位点的遗传变异进行了分析｡ 【结果】 2009年新型H1N1流感病毒与2006年季节性HIN1流感病毒比较,NA基因的同源性较低(77.9% ~ 78.8 %),与世界各地不同年代代表株及WHO推荐的1979 ~ 2010年季节性流感疫苗株比较,NA基因的同源性也较低(78.1% ~ 79.3%),但与WHO推荐的2009年新型H1N1流感疫苗株比较同源性则高达99%以上;系统进化分析结果表明,2009年新型H1N1流感病毒NA基因与欧亚猪流感病毒株A/swine/Belgium/1/1983的亲缘关系最近;并发现自2005年以来季节性H1N1流感病毒NA基因的某些抗原位点和神经氨酸酶活性位点已发生了变异｡【结论】 2009年新型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒;接种季节性流感疫苗不能对本次流行的新型流感产生有效的免疫保护作用;季节性H1N1流感病毒在流行过程中NA基因已发生了一定的变异,有必要持续跟踪和监测病毒的变异情况｡     

重症甲型H1N1流感实验室预警指标分析

目的:探讨重症甲型H1N1流感预警指标。方法:检测418例确诊甲型H1N1流感患者实验室指标,分普通患者与重症患者比较。结果:重症甲流患者血清铁、CRP、ESR、心肌酶变化明显。结论:重症甲型H1N1流感患者血清铁、CRP、血沉、心肌酶可作为预警指标,CH50、免疫球蛋白有一定预警意义。