PGP9.5、SYn和α-actin在先天性肛门直肠畸形动物模型盆底肌的表达及意义

目的检测PGP9.5、SYn和α-actin在胎鼠正常盆底肌和肛门直肠畸形(ARMs)中的蛋白表达,探讨其表达意义。方法通过全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠胚胎产生ARMs动物模型,应用免疫组化方法检测正常与ARMs胎鼠直肠末端组织PGP9.5、SYn、α-actin在E16、18、20胎鼠盆底肌发育过程中的表达。结果正常组共产胎鼠91只,未见畸形、死胎、吸收胎;ATRA诱导大鼠共产胎鼠126只,除无肛畸形外,短尾、无尾畸形58例,存在显性脊柱裂、脑膜膨出等神经发育缺陷有29例,ARMs发生率为74.60%。E16、18、20胎鼠盆底肌:正常组PGP9.5、SYn和α-actin呈阳性表达;ARMs组PGP9.5、SYn和α-actin呈弱阳性表达,分布稀疏。PGP9.5、SYn强阳性表达率除E16 2组间差异无统计学意义外(P﹥0.05),E18、20差异有统计学意义(P<0.05)。α-actin在E16、18、20两种组织间强阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PGP9.5、SYn和α-actin分布异常是ARMs动物模型直肠末端壁的重要病理改变之一。     

Cajal间质细胞及突触素在肛门直肠畸形动物模型末端直肠壁的表达及意义

目的 检测Cajal间质细胞(ICCs)及突触素(SY)在肛门直肠畸形胎鼠直肠肠壁的胚胎发育过程,探讨其表达的意义.方法 应用免疫组化、免疫荧光和Western blot方法检测正常与肛门直肠畸形胎鼠直肠末端组织c-kit、SY的表达情况.结果 正常组结肠及直肠壁内肠壁肌层及黏膜肌层c-kit、SY大量表达;畸形组胎鼠直肠末端壁内的分布均比对照组明显减少,发育延迟,但随着远离盲端,c-kit、SY出现并逐渐增多.正常胎鼠直肠末端壁内c-kit、SY总蛋白量明显高于畸形组(P<0.05).结论 Cajal间质细胞及突触素的分布异常是肛门直肠畸形动物模型直肠末端壁的重要病理改变之一.     

先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌感觉神经元定量研究

目的定量观察支配肛提肌的感觉神经元,探讨先天性肛门直肠畸形术后发生排便功能障碍的病因。方法采用胎仔外科、显微注射和神经示踪相结合技术对孕20 d Wistar胎鼠支配肛提肌的感觉神经元进行荧光金标记,脊髓连续横切片,计数标记神经元数量并观察神经元形态。乙烯硫脲致畸制作先天性肛门直肠畸形动物模型。结果支配肛提肌的感觉神经元主要分布在L5-S1脊髓节段的脊髓背根神经节。正常对照组（24只胎鼠）标记神经元数量为（11804±2362）个,先天性肛门直肠畸形组标记神经元数量明显减少,低位畸形组（18只胎鼠）为（2886±705）个,高位畸形组（41只胎鼠）为（1026±425）个,两个畸形组分别与正常对照组相比差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论先天性肛门直肠畸形胎鼠支配肛提肌腰骶髓感觉神经元存在明显发育异常。     

全反式维甲酸致先天性肛门直肠畸形胎鼠盆底肌肌肉、神经发育的形态学研究

目的 观察肛门直肠畸形（ARMs）大鼠胚胎盆底肌肌肉、神经发育的组织形态学变化,为寻找术后远期便秘和便失禁致病基因提供线索.方法 通过全反式维甲酸（ATRA）诱导大鼠胚胎产生ARMs动物模型,用电镜观察E20胎鼠正常组和ARMs大鼠胚胎盆底肌肌肉、神经及神经肌肉接头形态学变化.结果 取E20正常组、ARMs胎鼠盆底肌各20例,光镜下可见正常组胎鼠盆底肌肌纤维紧密相连,肌束间含有胶原纤维、成纤维细胞、血管及神经等结构,细胞核染色清楚;透射电镜见盆底肌肌纤维排列整齐,肌节清楚,肌丝明显,明带、暗带、M线、Z线清晰可辨,可见盆底肌神经、神经突触、线粒体.ARMs胎鼠盆底肌纤维明显萎缩,透射电镜见肌纤维排列紊乱、结构不清,部分核细胞明显增大,部分核固缩呈锯齿状,明带、暗带不清晰,M线、Z线有不规则改变、扭曲、断裂,肌膜之间满布成纤维细胞,神经及神经肌肉接头未找出.结论 ARMs胎鼠存在盆底肌肉的解剖缺陷及功能障碍,可能与ARMs存在骶髓、盆底及肛周神经发育不良有关.     

胚胎期宫内移植骨髓间充质干细胞对显性脊柱裂胎鼠脊髓骨形态发生蛋白4表达水平的影响研究

背景　骨形态发生蛋白4（BMP4）在神经管背腹轴模式的形成、细胞凋亡以及干细胞的分化和转化过程中均起重要作用,通过转基因的方法将BMP4基因转入骨髓间充质干细胞（MSCs）后,是否能分泌一定水平的BMP4,使干细胞既能替代受损神经元,又具有重建侧支循环和神经保护作用,一直是未解决的热点问题。目的　观察MSCs移植前后,显性脊柱裂胎鼠脊髓组织中BMP4表达情况。方法　于2017年11月-2018年10月,在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心购买Wistar实验大鼠50只（雄鼠8只,雌鼠42只）,出生后10 d的Wistar大鼠5只留作干细胞来源。常规条件下饲养,午夜合笼,确认交配。利用致畸药物维甲酸建立显性脊柱裂胎鼠模型,利用显微外科注射技术对胎鼠进行MSCs移植治疗。将同一只孕鼠所孕的胎鼠分为维甲酸无畸形组（10只）、脊柱裂畸形组（12只）、维甲酸无畸形干细胞移植组（10只）、畸形干细胞移植组（10只）和畸形空白移植组（8只）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测各组BMP4和拮抗剂Noggin mRNA表达情况。结果　脊柱裂畸形组BMP4 mRNA表达水平高于维甲酸无畸形组,Noggin mRNA表达水平低于维甲酸无畸形组（P<0.05）。脊柱裂畸形组、畸形干细胞移植组和畸形空白移植组BMP4、Noggin mRNA表达水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;其中畸形干细胞移植组BMP4 mRNA表达水平高于脊柱裂畸形组和畸形空白移植组,Noggin mRNA表达水平低于脊柱裂畸形组和畸形空白移植组（P<0.05）。维甲酸无畸形组和维甲酸无畸形干细胞移植组BMP4、Noggin mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论　BMP4与先天性显性脊柱裂畸形的发病机制有关;在MSCs移植治疗先天性脊柱裂畸形过程中可能通过上调BMP4 mRNA的表达而最终达到治疗的目的。     

嘌呤受体亚型（P2Y2）在肛门直肠畸形动物模型直肠末端的表达

目的检测嘌呤受体亚型（P2Y2）在肛门直肠畸形（ARM）胎鼠直肠末端的表达情况,探讨其可能对肠壁神经系统发育的影响。方法 SD孕鼠随机分正常组和乙烯硫脲（ETU）实验组,两组孕鼠在孕20d取出宫内胎鼠直肠末端,应用HE染色观察直肠末端组织结构变化,Western blot和qRT-PCR方法检测P2Y2在直肠末端的表达情况。结果正常组胎鼠直肠末端组织结构分界清楚,黏膜下和肌间神经元细胞数目多,胞浆丰富,轴突清晰;ETU组中患ARM的胎鼠各层组织结构分层不清,可见较多空腔,神经元细胞数目较少。Western blot和qRT-PCR结果显示ARM组胎鼠直肠末端蛋白含量及mRNA量明显低于正常组（0.23±0.06比0.42±0.05;49.40±26.49比98.53±52.25,P〈0.05）。结论 P2Y2可能参与ARM胎鼠直肠末端肠神经系统的发育。     

全反式维甲酸诱导大鼠肠神经系统发育异常的实验研究

目的利用全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)制作大鼠肠神经系统发育异常的动物模型,检测蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)及突触素(synaptophysin,SY)在胎鼠直肠肠壁胚胎发育过程中的分布,了解视黄酸(retinoie acid,RA)信号系统在鼠肠神经系统发育中的作用。方法妊娠SD母鼠共16只,随机分为两组,实验组在孕10d予ATRA一次性灌胃,对照组仅给等量橄榄油。孕20 d剖宫取出胎鼠,进行形态学观察和伴发畸形统计,HE染色和以PGP9.5、SY为肠神经系统(enteric nervous system,ENS)发育标志物的免疫组化SP法。结果对照组获胚胎70只,未见畸形,末端结肠及直肠壁内有神经节细胞,肠壁肌层及黏膜肌层PGP9.5及SY大量阳性表达,沿肠壁呈棕黄色颗粒分布;实验组获胚胎98只,可见先天性肛门直肠畸形及伴发畸形,直肠末端PGP9.5及SY阳性表达分布均比对照组减少。用QWIN3000生物图像分析软件测定随机选定切片视野内的平均阳性面积百分比,所有数据经秩和检验得出PGP 9.5及SY在对照组的表达高于实验组(PGP 9.5:W=1035.00,Z=-8.386,P=0.000<0.01;SY:W=820,Z=-8.121,P值=0.000<0.01),差异有统计学意义。结论 ATRA可成功诱导大鼠肠神经系统发育异常,提示视黄酸信号系统在消化道和神经嵴源性器官胚胎发育中起重要作用。     

克隆病合并直肠癌1例

1临床资料 患者,女,26岁,因腹痛、腹胀、粘液血便1年,加重伴肛门坠胀3个月于1998年12月3日人院.1988年曾2次行“肛瘘切开术”,1996年行“阴道直肠瘘修补术”.体检:下腹部散在深压痛,未扪及包块.肛门外距肛缘1 cm 9点处可见一瘘口,向肛管方向可扪及一皮下条索状物,直肠前壁距肛缘3 cm可触及一质硬疤痕块,与阴道粘连约3 cm×3 cm,其上方4 cm处可触及一溃疡型包块,占1/2周径,约4 cm×3 cm×3 cm大小,边缘隆起,质硬,活动,指套染有暗红色血迹.阴道后壁压痛,与直肠有一大小约3 cm×3 cm×3 cm粘连块,尚未穿透阴道粘膜.钡灌肠:回肠末段扩张.盲肠缩短至肝曲,结肠挛缩,结肠袋消失,直乙交界及升结肠部分肠管狭窄,肠管动度降低,排空后肠道呈管状.粘膜皱襞消失,肠管见小尖刺龛影.肠镜:镜入回肠末段约40 cm,见散在颗粒状或柱状小息肉,活检为炎性息肉,盲肠瘢痕化,回盲瓣旁及升结肠各见一个“粘膜桥”.病理报告:粘膜慢性炎.直肠5～9 cm处有火山口样溃疡,病检为高分化腺癌.镜诊:①直肠癌;②克隆病(结肠、回肠末段).术中探查见:末端回肠(距回盲瓣15 cm)浆膜有散在片状白色疤痕状物.     

小肠重复畸形误诊为肠粘连肠梗阻1例

本文报告1例被误诊为粘连性肠梗阻的小肠重复畸形。患者男性,15岁,临床表现为腹痛、腹胀、恶心、呕吐、肛门排便减少。腹腔镜中转开放剖腹探查见距回盲部约100cm处的近侧小肠呈重复畸形,重复肠管与正常肠管伴行并向屈氏韧带方向延伸约60cm,远端为盲端。术中切除重复畸形肠管并行正常肠管端端吻合,患者术后恢复良好,于术后第14天痊愈出院。术后病理诊断为“先天性缺陷,小肠重复畸形伴憩室出血坏死”。     

小儿外科学

小儿外科学金百祥近年有关先天性肛门直肠畸形的病因研究有所进展，成功地应用致畸剂乙烯硫脲诱发大白鼠产出肛门闭锁鼠仔，畸形发生率分别为４９．０６％（妊娠１１天）及３６．７３％（妊娠１３天），为研究提供了适宜模型。通过对４４只胎鼠组织学观察，发现肛门闭锁类...     

大肠癌COX-2和BFGFR表达与Dukes分期,淋巴结转移之间的关系

目的:研究COX-2、BFGFR在大肠癌中的表达和相互作用,以及它们与大肠癌Dukes分期,淋巴结转移之间的关系。方法:采用免疫组化SP法检测了49例手术切除的大肠癌及20例大肠增生性息肉组织中的COX-2、BFGFR表达。结果:COX-2、BFGFR在大肠癌中的表达阳性率分别为59.2%、65.3%,而增生性息肉的表达率分别为30.0%、35.0%,COX-2、BFGFR在大肠癌组织与增生性息肉中表达均有显著性差异。COX-2、BFGFR在大肠癌中表达分别与肿瘤Dukes分期、淋巴结转移之间具有显著性差异。大肠癌组织中COX-2、BFGFR表达二者间无相关性。结论:大肠癌组织中的COX-2、BFGFR表达水平增高,参与了大肠癌的发生发展过程,与大肠癌的预后有关,但二者的表达无相关性,提示它们在大肠癌的发生发展中所起的作用不同,是相互独立的作用因子。     

P物质和血管活性肠肽在慢传输型便秘大鼠肠壁内的变化和可复性研究

目的观察便秘模型大鼠小肠和结肠P物质(SP)和血管活性肠肽(VIP)的变化及自然恢复情况,了解大黄所致便秘的可恢复性。方法Wistar大鼠60只,按照完全随机的方法分为便秘组、恢复组、对照组各20只,便秘组和恢复组给予大黄建立便秘大鼠模型,恢复组于建立模型完成后任其自然恢复6周。以放射免疫方法和免疫组织化学方法测定比较各组大鼠小肠和结肠VIP和SP的变化。结果与对照组比较,便秘组和恢复组大鼠的小肠、结肠SP含量均显著降低(P<0.05),恢复组小肠SP含量显著高于便秘组(P<0.05),恢复组结肠SP含量与便秘组比较无差别(P>0.05)。便秘组小肠和结肠VIP表达较对照组明显降低(P<0.05);恢复组VIP表达较便秘组高(P<0.05),但低于对照组(P<0.05)。结论长期应用大黄等蒽醌类泻剂对肠道神经系统有明显的损害作用,小肠和结肠SP含量降低,VIP反应性降低,停用大黄恢复性饲养6周后肠道神经递质VIP和SP部分恢复。     

针刺对便秘型肠易激综合征大鼠肠运动及胃肠激素含量的影响

目的 观察针刺对便秘型肠易激综合征（constipation-predominant irritable bowel syndrome,IBS-C）大鼠的小肠推进率及血清、结肠中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP)、P物质（substunce P,SP)水平的影响,探讨针刺对IBS-C大鼠的作用机制。方法 从60只健康清洁级SD大鼠中随机选取10只作为正常对照组,其余50只大鼠采用寒冷-束缚-饥饱失常综合法进行IBS-C模型复制,进行模型评价后采用随机数字表法选取30只分为模型组、四单穴组方组、非经非穴组,每组10只。分别用活性炭粉悬浊液灌胃法观察各组大鼠小肠推进率,采用ELISA法检测血清5-HT、VIP、SP水平,采用免疫组织化学法测定结肠中5-HT、VIP、SP水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠小肠推进率显著降低（P<0.05）;与模型组比较,四单穴组方组大鼠小肠推进率显著升高（P<0.05）。与正常对照组比较,模型组大鼠血清、结肠组织中5-HT、VIP水平显著升高（P<0.05）,SP水平显著降低（P<0.05）;与模型组及非经非穴组比较,四单穴组方组大鼠血清、结肠组织中5-HT、VIP水平均显著降低（P<0.05）,SP水平均显著升高（P<0.05）。结论 针刺可明显升高IBS-C大鼠小肠推进率,其作用机制可能与降低结肠、血清中5-HT、VIP水平,升高SP水平有关。     

Effects of Wei Chang An pill(胃肠安丸) on enzyme activity and levels of vasoactive peptide and substance P in the small intestine of rats with compound diarrhea

OBJECTIVE:To investigate the regulatory effects of Wei Chang An Pill(WCAP) on enzyme activity and gastrointestinal hormones in the small intestine of rats with compound diarrhea.METHODS:Forty Wistar rats were randomly divided into a control,diarrhea model,and WCAP high,medium,and low dose groups.The control group was not treated,and the model group was administered intragastric distilled water.The WCAP groups were given WCAP suspension,80,60 or 40 mg · kg-1 · d-1,for 4 days.Stool properties were observed.After the experiment,thymus and spleen indices were measured,and the activities of lactate dehydrogenase(LDH),malate dehydrogenase(MDH),and disaccharidase(lactase) in the small intestinal mucous membrane,and levels of substance P(SP) and vasoactive peptide(VIP) in the colon were determined.RESULTS:Compared with the control group,thymus and spleen indices were significantly decreased,LDH,MDH,and disaccharidase activity in the small intestine was decreased,and SP and VIP levels in the colon were significantly increased inthe diarrhea model group.Compared with the model group,thymus and spleen indices were significantly increased,and LDH,MDH,and disaccharidase activity in the small intestine and SP and VIP levels in the colon were significantly decreased in theWCAP medium dose group.CONCLUSION:The diarrhea model rats exhibited pathological changes including atrophy of the thymus and spleen,decreased enzyme activity in the small intestine,and gastrointestinal hormone disturbance.WCAP can increase the activity of intestinal digestive enzymes and regulate gastrointestinal hormones,thereby relieving diarrhea.     

宫颈癌术后调强放射治疗的剂量学研究

目的：研究宫颈癌术后调强放射治疗的剂量学特点.方法：选取我院放疗科收治的宫颈癌术后患者20例,在Pinnacle3 V7.0治疗计划系统上对每例患者分别制定4野三维适形放疗（4FC）计划及7野调强放疗（IMRT）计划,进行放射治疗剂量学对比,评价计划靶区（PTV）和危及器官剂量分布特点.结果：①IMRT计划与4FC计划的靶区在平均最小剂量、平均最大剂量,适形度指数CI、剂量均匀度度指数HI上有显著差异,且差异有统计学意义（P＜0.001）.②直肠、小肠和膀胱在30 Gy以上、结肠在45 Gy以上、骨髓在20 Gy以上照射剂量水平,IMRT计划照射体积明显低于4FC计划,差异有统计学意义（P＜0.001）;在10 Gy以下照射剂量水平,IMRT计划的小肠和结肠的照射体积高于4FC计划的照射体积,差异有统计学意义（P＜0.001）.结论：IMRT计划在靶区剂量的均匀性上较差,但在靶区适形性及对正常组织的保护方面优势更显著,和4FC计划相比,明显减少了小肠、直肠、膀胱、骨髓的高剂量受照体积,从剂量学上分析,宫颈癌术后放疗IMRT计划优于4FC计划.     

IMRT中手术与非手术宫颈癌患者危及器官受照剂量的研究

目的比较调强放射治疗(IMRT)中手术与非手术宫颈癌患者危及器官的受照剂量。方法将10例宫颈癌患者根据是否接受手术治疗分为手术组(n=5)和非手术组(n=5),所有患者均采用CT模拟定位机扫描,IMRT计划靶区勾画标准相同,在GMS治疗计划系统上测定危及器官(如小肠,膀胱,左、右股骨头及直肠)的受照剂量,小肠、直肠:5%体积受照剂量(D5)、D10、D20、D30、D40、D50;膀胱:D10、D20、D30、D40、D50;左、右股骨头:D20、D30、D40、D50及其平均剂量、最大剂量、最小剂量。结果手术组患者小肠,膀胱,直肠及左、右股骨头不同体积的受照剂量与非手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌手术后,只要靶区勾画正确,IMRT不会增加危及器官的受照剂量。     

痛泻要方对慢性应激大鼠肠功能及下丘脑和结肠VIP的影响

目的观察痛泻要方对慢性应激大鼠肠功能及下丘脑和结肠血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）的影响。方法以匹维溴胺为对照,观察痛泻要方对慢性应激大鼠粪便含水量、值肠内玻璃小球排出时间、小肠墨汁推进率以及下丘脑和结肠VIP含量的影响。结果慢性应激大鼠粪便含水量显著增加,直肠内玻璃小球排出时间显著缩短,小肠墨汁推进率显著升高,下丘脑和结肠中VIP的含量显著升高;痛泻要方、匹维溴胺能减轻以上部分肠功能紊乱,显著降低结肠中VIP含量,但对下丘脑中VIP的影响不明显。结论痛泻要方能减轻慢性应激大鼠的肠功能紊乱,该作用可能与其对结肠中VIP的调节有关。     

不同健脾方对脾虚模型大鼠水盐代谢及水转运的作用比较

【目的】观察比较健脾—健脾渗湿—健脾升阳方对脾虚证模型大鼠水盐代谢状态的影响。【方法】选用雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、脾虚模型组,采用过度疲劳+饮食失节的方法复制脾虚证模型,造模2周后随机分为脾虚模型组、补中益气汤组、四君子汤组、参苓白术散组。于造模第15天,给药各组大鼠按4.05 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量给予补中益气汤、四君子汤、参苓白术散灌胃;模型组和正常组给予等量蒸馏水,连续14 d。测定各组大鼠血清中Na~+、K~+、抗利尿激素(ADH)、醛固酮(ALD)、结肠和小肠段水通道蛋白-3(AQP3)及肾脏水通道蛋白-2(AQP2)。【结果】与正常组比较,脾虚模型组大鼠血中Na~+、ALD、ADH均显著性升高(P0.01),肾脏AQP2显著升高,血K~+及结肠和小肠段中AQP3显著降低(P0.01)。与模型组比较,3方干预组大鼠血中Na~+、ALD、ADH及肾脏AQP2均显著性降低(P0.05或P0.01),血K~+及降结肠和小肠段AQP3显著性升高(P0.05或P0.01)。补脾类方之间比较,参苓白术散组血中Na~+、ALD、AVP均较其他2方组显著性降低(P0.01),血K~+及降结肠段和小肠段AQP3较其他2方组显著升高(P0.01);参苓白术散组和补中益气汤组的肾脏AQP2较四君子汤组显著性降低(P0.05或P0.01)。【结论】脾虚证模型大鼠存在水盐代谢及细胞水转运功能的异常,健脾—健脾渗湿—健脾升阳3方对脾虚证模型大鼠水液代谢失调均有不同程度的改善作用,其中以健脾渗湿方参苓白术散作用最优。