二十二碳六烯酸增加人胃癌细胞SGC-7901对多柔比星的敏感性

目的:本研究旨在探讨二十二碳六烯酸[docosahexaenoic acid (DHA),22:6 ω-3]逆转由多柔比星( adriamycin,ADR)引起的胃癌SGC-7901细胞的耐药性.方法:体外常规培养人低分化胃腺癌细胞SGC-7901,分别以DHA、ADR单药和DHA+ADR联合作用于细胞24 h后,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;倒置光学显微镜下观察细胞的形态;FCM法检测细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜以及高效液相色谱法检测细胞中ADR的蓄积情况;RT-PCR及蛋白质印迹法检测细胞中多药耐药蛋白(multidrug resistanceprotein,MDR) P-糖蛋白p-170的表达情况.结果:DHA与ADR联合作用于胃癌SGC-7901细胞后,DHA能够增加ADR对细胞的生长抑制作用;细胞形态观察发现死细胞明显增多;细胞凋亡率显著增加;细胞中的ADR蓄积量约增加2.1倍;细胞中p-170 mRNA以及蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:DHA能够增加胃癌细胞SGC-7901对ADR的敏感性,放大ADR的肿瘤杀伤作用.     

多柔比星药动学研究进展

文章主要就蒽环类抗肿瘤药物多柔比星新剂型、不同给药途径、不同给药时间和不同剂量下的药动学研究,以及多柔比星联合用药时、不同生理或病理条件的特殊群体的药动学研究现状进行综述。     

沉默YAP逆转肺癌PC9细胞多柔比星耐药性及其机制研究

背景与目的：耐药性是导致肺癌患者化疗失败的主要原因。探讨YAP对人肺癌PC9细胞多柔比星耐药的逆转作用及其机制。方法：利用体外筛选方法从多柔比星敏感性肺癌细胞系PC9获得耐药细胞克隆,并检测YAP的表达水平;利用shRNA沉默细胞中YAP的表达,应用MTS法检测肿瘤细胞药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期、凋亡及对Rh-123的吸收能力,蛋白[质]印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)技术检测ABCB1、ABCC1、p53、Runx2、ITGB2和ErbB4的表达水平及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,AKT)的磷酸化水平变化。结果：经体外诱导获得多柔比星耐药细胞克隆PC9/Adr,且YAP蛋白在其中高表达,利用shRNA得到不同YAP沉默程度的PC9/Adr。YAP沉默后,细胞生长速度降低,细胞对多柔比星的敏感性显著增加,细胞周期被阻滞在G0/G1期,多柔比星诱导的细胞凋亡增多,细胞吸收Rh-123也增多,并与YAP的沉默程度呈正相关。Western blot和QRT-PCR结果显示,YAP沉默后,ABCB1、ABCC1、Runx2、ITGB2和ErbB4蛋白表达下调,而p53的表达上调,AKT的磷酸化水平则下降。结论：YAP过表达与PC9/Adr的耐药性相关,沉默YAP可恢复PC9/Adr对多柔比星的敏感性。这一作用与调节耐药相关基因的表达、促进细胞凋亡有关。     

腺苷酸活化蛋白激酶增强乳腺癌对多柔比星化疗敏感性的机制

背景与目的：腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)在调控细胞代谢和能量平衡方面起着重要作用,并与细胞增殖、生存和多种信号通路密切相关。近年来发现AMPK参与肿瘤的抑制和耐药。该研究旨在探讨AMPK对多柔比星抑制乳腺癌作用的影响及其机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝(meth-ylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测多柔比星作用后对MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞增殖的影响;Hoechst染色法观察各组细胞凋亡形态;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞凋亡率;荧光酶标仪检测3组细胞多柔比星累积量;蛋白[质]印迹法(Western blot)检测各组细胞中耐药蛋白及凋亡相关蛋白的表达。结果：多柔比星对MCF-7/adr细胞增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(36.8±2.1)和(28.8±1.3)μg/mL。过表达AMPKα可增加多柔比星对MCF-7/adr细胞的生长抑制作用,呈剂量和时间依赖性,其作用24、48 h的IC50值分别为(16.0±0.7)和(4.2±0.2)μg/mL。荧光形态分析发现多柔比星联合AMPKα能诱导MCF-7/adr细胞凋亡。1.0μg/mL多柔比星作用48 h后,MCF-7/adr、MCF-7/adr-vector及MCF-7/adr-AMPKα细胞的凋亡率分别为(12.0±1.4)%、(12.7±1.6)%和(32.0±4.2)%,MCF-7/adr细胞中AMPKα过表达明显提高MCF-7/adr细胞对多柔比星的敏感性。荧光酶标仪检测显示,过表达AMPKα能明显提高细胞内多柔比星的累积量,具有浓度依赖性。Western blot实验结果显示,与MCF-7/adr和MCF-7/adr-vector细胞比较,MCF-7/adr-AMPKα细胞中Bax、细胞色素c(Cyto c)的释放、caspase-3和多聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶降解产物(cleaved PARP)蛋白表达明显增加,而细胞外排泵P-糖蛋白(P-gp)和Bcl-2蛋白表达降低。结论：AMPKα可通过抑制耐药细胞外排泵以及调控凋亡相关蛋白的表达,从而增强乳腺癌耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性。     

阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对多柔比星化疗敏感性的机制研究

目的 探讨阿法替尼增强耐药性卵巢癌细胞对多柔比星化疗敏感性的机制.方法 选取人卵巢癌耐药细胞株A2780T,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0.63、1.25、2.50、5.00μmol/L)阿法替尼对A2780T细胞增殖的影响.分别将多柔比星、多柔比星+0.63μmol/L阿法替尼、多柔比星+1.25μmol/L...     

RNA干扰Livin 基因表达增强骨肉瘤MG-63 耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性

目的：研究凋亡抑制蛋白基因Livin 在逆转骨肉瘤耐药中的作用。方法：应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤MG-63 细胞建立耐药细胞株,MTT实验检测耐药细胞株的耐药指数,Western blotting 法检测MG-63 细胞和耐药细胞中Livin 蛋白表达的差异。构建Livin shRNA 真核表达载体,应用LipofectmineTM 2000 转染至耐药骨肉瘤细胞中,Real-time PCR 和Western blotting 分别检测Livin shRNA转染前后MG-63 耐药细胞中Livin 基因和蛋白表达的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT法检测对多柔比星化疗敏感性的变化。结果：成功构建重组质粒pSilencer3.1-H1 neo-Livin si。诱导的耐药细胞MG-63/R 对多柔比星的耐药指数为81.32±5.33。Livin shRNA可抑制MG-63 细胞中Livin 基因和蛋白表达,明显低于空白对照组和非特异性转染组（分别下调72%和69%,P<0.05）。特异性转染Livin shRNA组MG-63/R 细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组[(22.4±3.2)% vs (4.2±1.1)% 、(4.7±0.6)%,P<0.05]。3 组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制,且呈明显的时间-效应关系,但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组（P<0.05）。结论：应用RNA干扰技术下调Livin 的基因表达可有效促进耐药MG-63 骨肉瘤细胞的凋亡,从而增加其对化疗药物的敏感性。     

阿托伐他汀增加乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨他汀类药物增加乳腺癌细胞对多柔比星敏感性的机制。方法(1)用不同浓度的多柔比星(0、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28μg/ml)与0、2μmol/L的阿托伐他汀联合处理MDA-MB-231细胞,通过细胞计数检测试剂盒(CCK-8)检测450 nm波长下的吸光度值,从而计算细胞活力。(2)分别用0.3μg/ml多柔比星、2μmol/L阿托伐他汀单药及两药联合处理MDA-MB-231细胞,并以未经任何药物处理的细胞作为对照组,通过Hoechst染色检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,通过细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,通过Western blot检测MDA-MB-231细胞中caspase 3、caspase 9、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、甾醇调节元件结合蛋白转录因子2(SREBP2)及低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达。细胞活力比较采用析因分析,未凋亡细胞数、划痕面积百分比、穿膜细胞数及不同蛋白表达等指标的多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法。结果(1)与多柔比星单药相比,阿托伐他汀与多柔比星联合应用可以显著抑制MDA-MB-231细胞活力(F=243.043,P<0.001);不同浓度多柔比星组细胞活力比较,差异有统计学意义(F=1803.617,P<0.001);两个因素存在交互作用(F=21.030,P<0.001)。(2)各组的未凋亡细胞数比较,差异具有统计学意义(对照组:94.00±4.24:阿托伐他汀组:57.00±1.41,多柔比星组:34.50±2.12,阿托伐他汀+多柔比星组:19.00±2.83,F=261.021,P<0.001),两两比较结果显示,组间差异均有统计学意义(P均<0.050)。各组间的划痕面积百分比比较,差异具有统计学意义[对照组:(28.94±3.59)%,阿托伐他汀组:(31.00±2.99)%,多柔比星组:(40.16±2.38)%,阿托伐他汀+多柔比星组:(60.86±3.60)%,F=42.080,P<0.050]。与对照组、阿托伐他汀组及多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组划痕面积均增加(P均<0.050)。各组穿膜细胞数比较,差异具有统计学意义(对照组:101.20±14.55,阿托伐他汀组:75.80±7.33,多柔比星组:32.40±4.78,阿托伐他汀+多柔比星组:8.80±2.50,F=118.031,P<0.001),两两比较结果显示差异均具有统计学意义(P均<0.050)。各组MDA-MB-231细胞中凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9的表达比较,差异均有统计学意义(F=128.854、247.530,P均<0.001)。与多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组caspase 3、caspase 9蛋白的表达显著增加(P均<0.050)。4组MDA-MB-231细胞中HMGCR、SREBP2、LDLR蛋白的表达量比较,差异均具有统计学意义(F=183.193、227.470、586.087,P均<0.001)。两两比较结果显示,与对照组比较,阿托伐他汀+多柔比星组中HMGCR表达明显升高,SREBP2、LDLR表达明显降低(P均<0.050);与对照组相比,多柔比星组HMGCR的表达无明显改变(P>0.050),SREBP2、LDLR的表达明显降低(P均<0.050),阿托伐他汀组HMGCR表达高于对照组(P<0.050);与多柔比星组相比,阿托伐他汀+多柔比星组HMGCR表达增加(P<0.050),SREBP2的表达降低(P<0.050),LDLR的表达无明显变化(P>0.050)。结论阿托伐他汀通过抑制HMGCR表达,减少细胞内胆固醇的合成,使细胞更依赖于外源性胆固醇的摄取;多柔比星通过抑制LDLR表达减少外源性胆固醇的摄取;因此,当两药联用后由于细胞内胆固醇合成减少,使细胞更依赖于外源性胆固醇的摄取,对多柔比星更加敏感。     

miR-130a靶向调节PTEN基因对人乳腺癌细胞多柔比星敏感性影响的观察

目的:探讨miR-130a对PTEN基因表达的调控,及其与乳腺癌MCF-7细胞株多柔比星耐药的关系。方法:利用miRNA芯片结合RT-qPCR的方法筛选到miR-130a在亲代敏感MCF-7/S细胞与多柔比星耐药细胞(MCF-7/Adr)中表达差异;通过靶基因预测软件预测PTEN与miR-130a基因的关系;通过miR-130a模拟物和抑制物转染实验结合四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、RT-qPCR和蛋白质印迹法观察miR-130a的表达变化对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其与PTEN基因表达间的关系。结果:与MCF-7/S相比,miR-130a在MCF-7/Adr中的表达水平明显增高(116 834.70±4 728.32)倍,t=19.035,P=0.000;但在多西紫杉醇耐药株MCF-7/Doc中的表达差异无统计学意义,t=0.703,P=0.521。MCF-7/S细胞转染miR-130amimics后,与阴性对照组相比,其miR-130a表达水平明显增高(17.686±1.057)倍,t=8.360,P=0.001;MCF-7/S空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(0.240±0.099)、(0.181±0.060)和(0.606±0.164)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130amimics后细胞的IC50显著增高,t=5.200,P=0.007。同时PTEN mRNA和蛋白表达水平明显下调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(0.362±0.076)倍,t=2.927,P=0.043;蛋白表达水平是阴性对照组的(0.386±0.020)倍,t=20.713,P=0.000 3;而MCF-7/Adr转染miR-130ainhibi-tors后,其miR-130a表达水平是阴性对照组的(0.169±0.035)倍,t=12.036,P=0.000 2;MCF-7/Adr空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(50.793±3.970)、(46.206±1.963)和(23.366±1.304)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130ainhibitors后细胞的IC50显著降低,t=16.784,P=0.000 7;同时PTEN mRNA和蛋白表达水平均明显上调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(3.564±0.336)倍,t=4.122,P=0.015;蛋白表达水平是阴性对照组的(2.019±0.268)倍,t=8.999,P=0.000 8。结论:miR130a可能通过靶定PTEN基因来增强乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性。     

表柔比星、脂质体多柔比星单药对乳腺癌细胞和树突状细胞生长的抑制作用

背景与目的:表柔比星(epirubicin)是临床上治疗乳腺癌的一线化疗药物,脂质体多柔比星(liposome doxorubicin)是一种新型脂质体类药物,相比传统蒽环类药物可以降低心脏毒性和骨髓抑制.树突状细胞(dentric cell,DC)在肿瘤免疫中起到重要作用.本实验旨在探讨这2种药物对人乳腺癌细胞株Bcap37和MDA-MB-231,以及人树突状细胞生长的抑制作用,以评估2种制剂在乳腺癌治疗中的价值.方法:用不同浓度(0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μg/ml)表柔比星和脂质体多柔比星分别作用于Bcap37、MDA-MB-231和树突状细胞,MTT法检测24、48和72 h时对细胞生长的抑制率.结果:2种药物对肿瘤细胞和正常细胞均有抑制作用.与对Bcap37、MDA-MB-231的作用相比,脂质体多柔比星对树突状细胞的抑制作用较小(F=22.208,P<0.01;F=20.534,P<0.01).脂质体药物对Bcap37的抑制作用强于MDA-MB-231(F=12.873,P<0.01).结论:恶性程度低的乳腺癌细胞对脂质体多柔比星的敏感性高,恶性程度高的细胞则化疗敏感性低.脂质体制剂较普通制剂对于正常树突状细胞的毒性小.     

艾迪与多柔比星联合对骨肉瘤细胞杀伤协同作用的观察

目的:探讨中药制剂艾迪对骨肉瘤化疗的增效作用及其相关机制。方法:将艾迪与多柔比星单独及联合应用于骨肉瘤OS732细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪定量分析凋亡细胞所占比例,倒置相差显微镜及荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变,免疫细胞化学技术分析凋亡相关蛋白Fas表达。结果:艾迪与多柔比星对骨肉瘤细胞都有剂量依赖性杀伤作用,艾迪浓度达到25μL/mL时,细胞生长受到抑制,再增加艾迪浓度抑制率不再明显改变,但如与1μg/mL多柔比星合用将使细胞生长抑制率进一步提升,P=0.003。细胞超微结构观察及凋亡率测定结果也显示,艾迪与多柔比星联用可诱导更多骨肉瘤细胞凋亡,且联用时骨肉瘤Fas表达明显提升,P=0.005。结论:艾迪与小剂量多柔比星合用与单用多柔比星相比可更高效杀伤骨肉瘤细胞,此作用与上调Fas表达诱导骨肉瘤细胞凋亡有关。     

EFFECTS OF CURCUMIN ON PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN ACUTE MYELOID LEUKEMIA CELLS HL-60

Curcuministhemajoringredientofextractsfromcurryfamilywidelyusedasayellowspiceandfoodadditive.Ithasavarietyofpharmacologicaleffectsincludinganti-inflammation,antioxidant,decreasingbloodlipid,enhancingphagocaryosisofmonocyte-macrophagesystemandregulatinghumanimmunityfunction.Ithasbeenshowntohaveanticarcinogenicpropertiesinanimalmodelsincludingcutaneous,gastrointestinaltractandbreastcancercausedbymanykindsofcarcinogenesisagents[1].Invitrostudieshaveshownthatcurcuminselectivelyinhibitgrowthofsomep…     

地西他滨对人急性髓系白血病细胞株HL-60的调控作用及其机制研究

目的 研究地西他滨(DAC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60体外生长及自然杀伤(NK)细胞活化性受体配体(NKG2DL)表达的调节作用,并探讨JAK-STAT3-SOCS信号通路相关的分子机制.方法 CCK-8法检测DAC对HL-60细胞增殖活性的影响,Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞术检测HL-60细胞表面NKG2DL分子MICA/B、ULBP的表达,羧基荧光素双乙酸盐(CFSE)法检测NK细胞的杀伤活性,蛋白印迹法分析细胞内JAK-STAT3通路中STAT3、STAT3上游激酶JAK1、JAK2及STAT3活性负调控因子细胞因子信号抑制物(SOCS)-1、SOCS-3的蛋白表达水平,甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析(MS-HRM)检测DAC处理后SOCS-1、SOCS-3基因甲基化程度.结果 DAC可抑制HL-60细胞活性:0.2、0.5和1.0 μmol/L DAC处理48 h,HL-60细胞活性较对照组分别下降(25±11)%、(39±8)%和(50±7)%(P<0.01);48 h时,细胞凋亡发生率分别为(24.77±7.50)%、(27.10±4.48)%和(30.53±3.93)%,均较对照组细胞的(3.11±0.50)%增加(P<0.01).DAC可诱导HL-60细胞表面MICA/B、ULBP-1及ULBP-3分子的表达增高,增强HL-60细胞对NK细胞的杀伤敏感性.DAC处理后HL-60细胞内STAT3、JAK1、JAK2及p-STAT3、p-JAK1、p-JAK2表达下降,SOCS-1和SOCS-3蛋白表达增高.DAC可抑制SOCS-3基因甲基化.结论 DAC抑制人急性髓系白血病细胞株HL-60增殖,上调HL-60细胞对NKG2DL的表达,增强NK细胞对其的杀伤活性,其机制可能与细胞内JAK-STAT3-SOCS信号通路的活性调控有关.     

正常人骨髓成纤维样基质细胞对HL-60/VCR耐药细胞增殖的影响

目的观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病多药耐药细胞HL-60/VCR增殖和分化的影响.方法采用四唑氮蓝(MTT)法进行HL-60/VCR细胞药物敏感实验.建立HL-60/VCR细胞和HFCL细胞共培养体系,苔盼蓝拒染法测定生长曲线;硝基四氮唑蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化;Western blot检测增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)和P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp).结果HL-60/VCR细胞对多种药物耐药.与HFCL细胞共培养后,HL-60/VCR细胞生长受抑,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用＞用transwell组.同时发现HL-60/VCR细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增多,S期细胞减少;同时CD11b和CD14表达增高,CD13和CD33变化不大;且NBT阳性细胞轻度增多.Western blot检测结果显示,PCNA表达下调,以直接接触组为甚.但是P-gp表达无变化.结论正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病MDR细胞HL-60/VCR的增殖,抑制PCNA的表达,出现G1期阻滞,并部分向单核细胞分化.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对急性髓系白血病细胞株HL60/ADM增殖、凋亡及耐药的影响

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对急性髓系白血病细胞株HL660/ADM的增殖、凋亡和耐药的影响.方法 采用不同浓度LBH589处理耐药的HL60/ADM细胞,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖和多柔比星作用24h IC50值,AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡、多柔比星摄取率和多药耐药蛋白1（MRP1）表达,评估LBH589逆转耐药效应.Westemblot检测p53、Akt、p-Akt、组蛋白-3、乙酰化组蛋白-3、β-actin蛋白表达.结果 10～80 nmol/L LBH589能够抑制HL60/ADM细胞增殖和诱导凋亡,70 nmol/LLBH589作用60 h抑制效果最佳.20 nmol/LLBH589显著下调HL60/ADM细胞表面MRP1的表达[（93.90±4.20）％比（76.19±6.53）％,P＜0.05]、提高HL60/ADM细胞多柔比星摄取率[（8.53±0.68）％比（25.67±1.34）％,P＜ 0.01]、降低多柔比星24 hIG0值[（6.833±0.319） μg/ml比（1.382±0.104）μg/ml,P＜ 0.01],其逆转耐药倍数为4.9倍.LBH589处理HL60/ADM细胞24、48 h,乙酰化组蛋白-3相对表达水平均高于LBH589处理前（P＜0.01）,处理后24h和48 h p-Akt相对表达水平分别为1.07±0.09和0.59±0.01,低于处理前表达水平（2.03±0.12）（P＜0.01）,p53蛋白相对表达水平分别为0.57±0.04和1.31±0.09,明显高于处理前的表达（0.21±0.02）（P＜ 0.01）.结论 LBH589通过阻断PI3K-Akt通路、下调其MRP1的表达及提高多柔比星摄取率有效地抑制HL60/ADM细胞的增殖和诱导其凋亡,并逆转其耐药.     

环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用

 目的　探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利对人类急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用。方法　以不同浓度的尼美舒利体外处理HL-60细胞,采用CCK-8、流式细胞术、Western blotting、ELISA等方法,检测尼美舒利对HL-60细胞增殖的作用及对细胞凋亡、细胞周期、COX-2、前列腺素E2（PGE2）、Bax、bcl-2、c-myc的影响。结果　尼美舒利对HL-60细胞增殖的抑制呈剂量、时间依赖性,可诱导细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0～G1期。尼美舒利作用HL-60细胞48 h后,细胞COX-2表达下调,100、200、400 μmol／L尼美舒利处理组与对照组HL-60细胞总凋亡率分别为（24.97±6.36）%、（34.22±5.76）%、（44.59±6.69）%及（4.11±1.26）%,差异有统计学意义（P＜0.05）。HL-60细胞合成PGE2减少,同时bcl-2、c-myc蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显上调。结论　尼美舒利可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用与抑制COX-2表达,减少PGE2合成,阻滞细胞周期和调节凋亡相关蛋白bcl-2、c-myc、Bax的表达等有关。     

抗CXCR4单克隆抗体12G5对HL-60细胞粘附及增殖的影响

背景与目的:近年研究发现,骨髓基质细胞分泌的趋化因子SDF-1通过其分布于白血病细胞膜表面的生理性受体CXCR4可能参与了白血病细胞的髓内屏障,然而,SDF-1/CXCR4系统与白血病细胞之间的相互关系尚不清楚,因此,本研究采用抗CXCR4单克隆抗体12G5阻抑SDF-1活性,观察与白血病骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞粘附性及细胞增殖的变化,以探讨从阻抑SDF-1活性入手治疗残留白血病的可能性。方法:培养并共培养HL-60细胞,采用12G5(10μg/ml)阻断SDF-1生物作用,观察HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况并测定细胞粘附率,通过流式细胞仪检测凋亡率,并观察其增殖周期的变化;应用台盼蓝拒染法检测细胞存活情况,绘制细胞生长曲线。结果:(1)12G5孵育后24h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(39.4±7.9)%,对照组为(51.4±5.9)%,二者具有显著差异(P<0.05)。(2)比较细胞增殖周期及凋亡率,实验组中G0/G1期细胞比例为(55.2±4.9)%,S期为(30.4±4.1)%,G2/M期为(14.4±5.2)%,细胞凋亡比例为(9.0±1.7)%;对照组中G0/G1期细胞比例为(44.7±2.2)%,S期为(45.3±3.7)%,G2/M期为(10.0±2.6)%,细胞凋亡比例为(4.0±2.4)%。(3)12G5孵育48h后,HL-60细胞生存率明显下降,增殖减缓。结论:12G5能在一定程度上抑制HL-60细胞的粘附性及增殖活性,因此,通过1     

姜黄素与阿霉素联合应用对人白血病耐药细胞株HL-60/ADR的生长抑制影响

目的：研究姜黄素与阿霉素联合应用对人白血病多药耐药细胞株HL-60／ADR的生长抑制作用。方法：采用MTT法测定药物的体外杀伤作用，应用金氏公式进行联合用药效果分析。应用流式细胞术分析细胞周期和测定细胞内药物浓度。结果：姜黄素2～16μmol／L，阿霉素0．8～6．4μmol／L同时给药对HL-60／ADR细胞可产生单纯相加至增强的协同杀伤效果，对HL-60／ADR细胞周期的影响也有协同作用。序贯给药法中，先给姜黄素后给阿霉素结果为协同作用，先给阿霉素后给姜黄素实验结果为拮抗作用。结论：姜黄素与阿霉素同时用药可产生协同作用，可有效逆转多药耐药，HL-60／ADR细胞内ADR积聚增加可能是其原因之一；序贯联合用药仅产生单向协同作用。     

Resistance to oxidants associated with elevated catalase activity in HL-60 leukemia cells that overexpress multidrug-resistance protein does not contribute to the resistance to daunorubicin manifested by these cells

Purpose: It has been recognized that enhanced antioxidant defenses can contribute to the resistance of cancer cells displaying multidrug resistance (MDR) that arises in conjunction with the overexpression of P-glycoprotein (Pgp). The purpose of this study was to determine if the defenses against oxidant stress in MDR human leukemia cells (HL-60/AR) that overexpress multidrug-resistance-associated protein (MRP), but not Pgp, contribute to the mechanism of drug resistance in this cell line. Methods: HL-60/AR cells were evaluated in comparison with wild-type cells with respect to sensitivity to the oxidants hydrogen peroxide (H₂O₂) and tert-butyl hydroperoxide (t-BuOOH), the activities and amounts of the antioxidant enzymes catalase and glutathione peroxidase (GSH-Px), and the effects that manipulation of the activities of these enzymes may have on cellular sensitivity to the oxidants and to daunorubicin. We also evaluated the ability of the cells to generate daunorubicin semiquinone free radical as measured by electron spin resonance (ESR) spectroscopy. Results: HL-60/AR cells were >10-fold resistant to the cytotoxic effects of the H₂O₂ or t-BuOOH as compared with parental, drug-sensitive HL-60 cells. This phenomenon could be attributed largely to elevated activity and protein levels of catalase in HL-60/AR cells. Furthermore, inhibition of catalase by 3-amino-1,2,4-triazole (AT) diminished the resistance of HL-60/AR to these oxidants by >80% or >50%, respectively. Despite these findings, AT was incapable of causing sensitization of HL-60/AR cells to the cytotoxic effects of daunorubicin. We found that the activity and amount of selenium-dependent glutathione peroxidase (GSH-Px) was no greater in HL-60/AR cells than in HL-60 cells. Cultivation of cells in selenium-deficient medium caused a marked reduction in GSH-Px activity in HL-60/AR cells and a profound inhibition of GSH-redox cycling manifested by a decrease in baseline hexose monophosphate shunt activity (HMPS) and markedly blunted stimulation of the HMPS by the oxidant t-BuOOH in both wild-type and resistant cells. These variations in GSH-Px activity and GSH-redox cycling, however, were not associated with an alteration in cellular sensitivity to daunorubicin. The failure of catalase inhibition or selenium manipulation of GSH-Px activity to affect daunorubicin cytotoxicity was not due to the inability of these cells to produce free-radical species of daunorubicin, since ESR studies revealed that the generation of daunorubicin semiquinone free radical by HL-60/AR cells was equal to and, in fact, 3-fold that obtained with HL-60 cells. Conclusions: In comparison with parental HL-60 cells, MRP-overexpressing HL-60/AR cells have demonstrable alterations in antioxidant defenses that are manifested by cellular resistance to the cytotoxic effects of H₂O₂ and t-BuOOH and by elevated protein levels and activity of catalase. Whether these alterations are epiphenomena or are related to overexpression of MRP remains to be determined. However, it does appear that the enhanced antioxidant defenses observed in HL-60/AR cells do not contribute to the resistance to daunorubicin manifested by this cell line. Although HL-60/AR cells generate daunorubicin semiquinone free radical to an extent equal to or greater than that observed in HL-60 cells, the failure of alterations in GSH-Px activity or inhibition of catalase to change the sensitivity of HL-60/AR cells to daunorubicin suggests that the cytotoxicity of daunorubicin in these cells in not mediated through H₂O₂ or other peroxide species detoxified by these enzymes. Received: 11 March 1994/Accepted: 15 July 1994     

木香烃内酯通过p38-MAPK通路影响慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞对多柔比星敏感性的研究

目的探讨木香烃内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/ADR多柔比星敏感性的影响及其机制。方法取对数生长期K562/ADR细胞,分别以不同浓度木香烃内酯、多柔比星以及两药联合作用72 h,CCK-8法检测细胞增殖情况,计算细胞增殖率,获得两药半数抑制浓度(IC50)。以10μmol/L木香烃内酯、10μmol/L多柔比星及两药联合作用于K562/ADR细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测p38-MAPK通路相关蛋白的表达水平。结果木香烃内酯与多柔比星联用组细胞增殖率均低于相应浓度两药单用组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多柔比星对K562/ADR细胞的IC50为(13.50±0.86)μmol/L,木香烃内酯为(7.30±0.55)μmol/L,差异有统计学意义(t=7.044,P=0.002)。流式细胞术检测结果显示,10μmol/L木香烃内酯和10μmol/L多柔比星联用组K562/ADR细胞凋亡率均高于空白对照组、木香烃内酯单用组以及多柔比星单用组[(19.68±3.21)%比(2.96±0.87)%、(9.34±2.89)%、(9.18±2.13)%],差异均有统计学意义(均P<0.01)。与10μmol/L木香烃内酯单用组和10μmol/L多柔比星单用组相比,两药联用组凋亡抑制蛋白bcl-2表达下调,bad、p-p38、cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白的表达水平上调。结论木香烃内酯可增强多柔比星对慢性粒细胞白血病K562/ADR细胞增殖的抑制作用,促进多柔比星诱导细胞凋亡,其可能通过调控p38-MAPK通路逆转K562/ADR细胞的耐药性。     

SLC7A11在急性髓系白血病患者中的表达及抑制HL-60细胞增殖的机制

目的:探讨SLC7A11 siRNA及Erastin对人急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞株HL-60细胞活性的影响。方法:应用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中AML患者样本的数据,比较SLC7A11不同表达水平患者的预后。利用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印记法(Western-blot)检测SLC7A11在AML患者和缺铁性贫血（iron deficiency anemia,IDA）患者中mRNA和蛋白的表达水平。培养人AML细胞株HL-60,用病毒介导的siRNA转染HL-60细胞,建立SLC7A11基因沉默的HL-60细胞株(siSLC7A11),用Erastin和DMSO分别处理HL-60细胞。利用qRT-PCR和Western-blot方法检测HL-60细胞和siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白的表达水平。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。结果:SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平在AML患者中明显高于IDA患者(P＜0.05)。siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05)。siSLC7A11细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05)。结论:SLC7A11在AML患者中表达增加,通过siRNA或Erastin抑制SLC7A11能明显抑制人AML细胞株HL-60细胞增殖,SLC7A11基因可能成为治疗AML的新靶点。