地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长抑素mRNA

目的：建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达．方法：用体外转录法制备地高辛精（Ｄｉｇ）标记生长抑素ｃＲＮＡ探针，在４％多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交，结果：杂交阳性部位呈紫蓝色，位于胞浆，背景浅淡，反差强烈．含生长抑素ｍＲＮＡ细胞与以前所报道的生长抑素免疫反应细胞的形态、分布均一致。结论：Ｄｉｇ标记ｃＲＮＡ探针原位杂交法敏感、简便、迅速、可靠，可用于胃肠调节肽基因表达的研究．     

PCR引物法及随机引物法标记cDNA探针杂交效率的研究

目的：为提高原位杂交所用ｃＤＮＡ探针的杂交效率。方法：采用正义引物ＰＣＲ法及正义、反义引物ＰＣＲ法制备地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＴＧＦ－βｃＤＮＡ探针。同时采用常规的随机引物法标记上述探针。用斑点杂交及原位杂交法比较三者的效率。结果：在斑点杂交中，正义引物ＰＣＲ法所标记的单链探针的杂交效率最高，高于随机引物法一个数量级。在探针浓度相同条件下，正义引物ＰＣＲ法标记探针的原位杂交效果优于随机引物法标记的探     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

①目的　制备胆囊收缩素（ Ｃ Ｃ Ｋ）ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达。②方法　将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 的质粒 Ｐ Ｕ Ｃ１３ 扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（ Ｄｉｇ）标记 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针。用原位杂交技术,对癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达进行研究。③结果　 Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针标记效率为５０ｍ ｇ／ Ｌ;遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内 Ｃ Ｃ Ｋｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达显著增加。④结论　本实验制备的 Ｄｉｇ Ｃ Ｃ Ｋｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,具有较好的特异性和灵敏度;原位杂交实验证实, Ｃ Ｃ Ｋ 参与了癫痫发作过程。     

地高辛标记反义RNA探针对大鼠不同组织生长抑素mRNA原位杂交的实验研究

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，与Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃、十二指肠和甲状腺组织进行原位分子杂交，以显示不同组织中ＳＯＭｍＲＮＡ对ＳＯＭ细胞进行分子水平的细胞定位和形态学观察。结果显示：杂交阳性信号呈蓝色位于胞质内，背景清晰，细胞轮廓清楚，主要分布于胃粘膜底部，十二指肠阳性细胞较少，在甲状腺滤泡旁和滤泡上皮细胞之间均可见到形态不一的杂交阳性细胞。用ＲＮａｓｅＡ预处理标本和免去探针均无杂交信号出现。表明ＤＩＧ标记的反义ＲＮＡ探针具有高度的敏感性和特异性。     

人宫颈癌组织中c-myc基因的表达

目的研究人宫颈癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达。方法应用Ｄｉｇ标记ｃＤＮＡ探针，ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交技术检测３７例人宫颈鳞状细胞癌内癌基因ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。结果３７例中１６例有ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达，检出率为４３．２４％，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ主要分布在癌细胞胞浆内。结论ｃ－ｍｙｃ癌基因表达在宫颈癌发生中可能起作用，宫颈癌的发生可能还有更多的癌基因参与。     

应用RNA探针检测流感病毒特异性RNA

插入流感病毒Ａ／Ａｉｃｈｉ（Ｈ３Ｎ２）ＮＰ ｃＤＮＡ的ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＾＋质粒，分别经Ｘｃｍ Ｉ和ＢｓｐＭＩ线性化之后，以此为模板用Ｔ７和Ｔ３ＲＮＡ多聚酶合成了同位素标记的正链和负链ＲＮＡ探针。流感病毒在狗肾传代细胞（ＭＤＣＫ）生长良好，而在其变异株ＭＤＣＫ－Ｌ细胞生长受阻。为了分析比较两种细胞中流感病毒基因复制情况，作者应用上述ＲＮＡ探针，检测了接种流感病毒的两种细胞中病毒ＲＮＡ（ｖ     

肾综合征出血热病毒R22株感染人血管内皮细胞的核酸原位杂交研究

用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交，杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂交信号，而正常细胞和ＨＦＲＳ病毒感染经ＲＮＡ酶处理组不出杂交信号，结果表明ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ主要定位于血管内皮细胞的细胞浆中，提示病毒ＲＮＡ在胞浆中复制。     

RNA和蛋白合成抑制剂对RXR基因转录表达的影响

目的：了解ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂对维甲酸Ｘ受体表达的影响。方法：常规培养人真皮成纤维细胞，用ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ及ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ共同作用于细胞２，４，８ｈ，然后分离总ＲＮＡ，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ方法，与标记的ＲＸＲα、β探针进行杂交。结果：这些抑制剂对ＲＸＲα均无影响。虽然ａｃｔｉｎｏｍｙｘｉｎ Ｄ对ＲＸＲβ的表达无影响，但ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ和ｃｙｃｌｏ－ｈｅｘ     

人bcl-2基因反义cDNA探针的制备和地高辛标记

制备地高辛标记的人ｂｃｌ－２基因的反义链ｃＤＮＡ探针。方法：首先从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应得到ｂｃｌ－２特异的ｃＤＮＡ片段，然后以此为模板利用ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ作另一轮非对称ＰＣＲ扩增。结果：合成了灵敏、特异的ＤＩＧ－标记的ｂｃｌ－２反义单链ｃＤＮＡ探针。结论：本文报道的方法是制备ＤＩＧ－标记的单链反义ｃＤＮＡ探针的一个有效手段。     

人bcl—2基因反义cDNA探针的制备和地高辛标记

目的：制备地高辛标记的ｂｃｌ－２基因的反义链ｃＤＮＡ探针。方法首先从Ｕ９３７细胞总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应得到ｂｃｌ－２特异的ｃＤＮＡ片段，然后以此模板利用ＤＩＧ－ｄＵＴＰ作另一轮非对称ＰＣＲ扩增。结果：合成了灵敏，特异的ＤＩＧ－标记的ｂｃｌ－２反义单链探针。结论：本文报道的方法是制备ＤＩＧ－标记的单链的ｃＤＮＡ探针的一个有效手段。     

人IL—3cDNA探针刺备及应用

采用多连反应扩增人ＩＬ－３ｃＤＮＡ片段,以地高辛为标记物,随机引物法标记ＩＬ－３ｃＤＮＡ探针。探针经斑点杂交和核酸原位杂交证明：用制备ＩＬ－３ｃＤＡＮ探针检测细胞ＩＬ－３ｍＲＮＡ表达具有特异性强,灵敏度高,使用简便,杂交结果直观,探针可较长时间保存和无放射性污染等优点。     

一种从总RNA制备非放射性cDNA探针的方法

目的介绍一种从总ＲＮＡ制备ＤＩＧ标记的非放射性ｃＤＮＡ探针的方法。方法以总ＲＮＡ的反转录产物为模板,用随机引物延伸法掺入ＤＩＧ－１１－ｄＵＴＰ来制备ｃＤＮＡ探针。结果该方法标记的探针灵敏度较高,可达０．０１ｇｐ。结论这种ｃＤＮＡ探针可用于差异筛选的反向杂交及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。     

Northern杂交法分析转染的胞苷酶

目的：研究人胞苷转移酶（ＣＴ）ｃＤＮＡ在鼠巨噬细胞中的表达。方法：按照Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ等人的方法人转染的巨噬细胞中提取总ＲＮＡ，电泳分离ＲＮＡ，转移ＲＮＡ至尼龙膜并固定，制备３２ｐ标记的胞苷转移酶ＤＮＡ探针，杂交及放射性自显影。结果：对照组无表达，同类转染的细胞均有不同程度的表达。结论：制备探针前应用电泳法确定ＣＴｃＤＮＡ片段的浓度比紫外光吸收法更准确适用。Ｑｕｉｃｋｓｐｉｎ柱（Ｓｅｐｈａｄｅ     

外源性ANF基因在人血管平滑肌肉瘤细胞中的表达

对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的人心钠素（ＡＮＦ）基因表达质粒ｐｃＤＡＮ３／ＡＮＦ转染，并以非同位素地高辛标记的ＲＮＡ分子探针，对转染细胞中的ＡＮＦｍＲＮＡ水平进行ＲＮＡＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测；同时，利用...     

影响地戈辛标记cDNA探针检测prET—1mRNA原位杂交效果的因素探讨

影响地戈辛标记ｃＤＮＡ探针检测ｐｒＥＴ－１ｍＲＮＡ原位杂交效果的因素探讨①华西医科大学附属第一医院（６１００４１）陈明②黄颂敏刘聪地戈辛标记探针的原位杂交是利用地戈辛配基作为标记物，非放射性检测特异性ＤＮＡ或ＲＮＡ序列的一种分子生物学技术，可特异判别...     

急性白血病细胞p53,C—Myc基因表达

采用＾３Ｈ－ｄＡＴＰ标记基因探针，ＤＮＡ－ＲＮＡ斑要交及免疫组化技术分析急性白血病细胞中ｐ５３，Ｃ－Ｍｙｃ基因的ＲＮＡ水平表达。结果：４０例白血病组织中３４例Ｃ－Ｍｙｃ ＲＮＡ表达水平升高，粒，淋白知病细胞之间无显著差异。     

胆囊收缩素cDNA探针制备及其在癫痫发病机制研究中的应用

目的 制备胆囊收缩素（ＣＣＫ）ｃＤＮＡ探针,并以此探针检测遗传性听源性癫痫易感大鼠癫痫发作后脑内ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达。方法 将含０．５ｋｂｐ Ｒａｔ ＣＣＫ－ｍＲＮＡ的质粒ＰＵＣ１３扩增、回收和纯化,用随机引物标记法,得到地高辛精（Ｄｉｇ）标记ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针。用原位杂交技术,原癫痫发作后大鼠海马和大脑皮层ＣＣＫ－ｍＲＮＡ表达进行研究。③结果 ＣＣＫ－ｃＤＮＡ探针标记效率为５０ｍｇ／Ｌ;遗传性     

用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在垂体的分布

用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素ｍＲＮＡ在垂体的分布向正华，等。解剖学杂志，１９９４；１７（２）：１３５用地高辛标记反意前阿黑皮素（Ｐｒｏ－ｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ，ＰＯＭＣ）ｃＲＮＡ探针原位杂交组化在光镜和电镜水平观察了...     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大鼠下丘脑生长抑素mRNA

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经４％多聚甲醛灌注固定，取下丘脑组织，行再固定２４ｈ，常规石蜡包埋和切片，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针进行原位杂交，结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元，阳性信号为蓝色颗粒，胞质、核膜及核仁呈阳性。阴性对照均无阳性反应出现。本实验证实，用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究，能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物ｍＲＮＡ，方法稳定，重复性好，便于普通实验室开展工作。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术