单抗F（ab‘）2段导向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制备及其体外杀伤癌细胞作用

目的：制备人肝癌特异性单克隆抗体HAb18的F（ab‘)2片段导向抗肝癌阿霉素（ADR）白蛋白（HSA）免疫毫微球（HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP)，并研究其体外靶向肝癌细胞和杀伤肝癌细胞的作用。方法：采用乳化高温固化法制备阿霉素白蛋白毫微球（ADR－HSA－NP）后，应用改进的N－琥珀酰亚胺基－3－（2－吡啶二硫），丙酸酯（SPDP）法制备HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP。在光镜和电镜下观察体外HAb18 F(ab‘)2-ADR-HSA-NP和ADR－HSA－NP与肝癌细胞株SMMC－7721的结合特性，并用3H－TdR法测定两种微球体外杀伤肝癌细胞株SMMC－7721的作用。结果：在荧光染色后，HAb18F(ab‘2)-ADR-HSA-NP表面发出明亮黄绿色荧光，而ADR－HSA－NP未见荧洮，HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP能结合肝癌细胞株SMMC－7721，且能呈剂量依赖地有效杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，而ADR－HSA－NP不能结合和明显杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，两种微球均不能结合和杀伤人大肠癌细胞株SW1116。结论：HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP具良好的体外特异性结合并杀伤人肝癌细胞。     

分泌抗人原发性肝癌单克隆抗体杂交瘤的制备及专一性分析

研制抗人原发性肝癌特异性单抗，为肝癌的导向诊断与治疗奠定基础。用人ＰＨＣ细胞系ＨｅｐＧ２免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，聚其脾细胞与同源骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经间接免疫荧光染色加流式细胞仪筛选及专一性鉴定，单抗经ＰｒｏｔｅｉｎＡ法纯化。用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度测定。     

鼠源性单克隆抗体F（ab‘）2片段制备工艺

目的 制备府合临床应用质量标准的鼠源性ｍＡｂＦ（ａｂ’）２片段。方法 采用胃蛋白酶消化小鼠腹水抗体,疏水作用钯谱法纯化Ｆ（ａｂ’）２片段的新工艺,替代原有的木瓜蛋白酶消化ＩｇＧ,阴离子交换色谱法纯化的旧工艺。结果 新工艺所制备的Ｆ（ａｂ’）２片段经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测纯度达９８％以上,ＡＢＣ免疫组化法测定免疫法性为１：８０００,回收率大于５０％,核酸含量及热原均合格,整个工艺流程可在４８ｈ内完成,     

肝癌单克隆抗体F（ab‘）2段与葡萄球菌肠毒素A结合物的制备及 …

制备眼抗原葡萄球菌肠毒素与抗人肝细胞癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２段的结合物，并对其活行鉴定。方法：提取ＭｃＡｂＨＡｂ１８并用木反蛋白酶切取其（ａｂ’）－ＳＥＡ结合物，     

单克隆抗体F（ab‘）2片段2种纯化方法的建立及比较

目的：建立纯化（ｍＡｂ）Ｆ（ａｂ‘）２片段的有效方法。方法：在ｐＨ５．５环境下，用ＤＴＴ激活木瓜酶，在没有ＤＴＴ存在下消化抗人肝癌ｍＡｂ ＨＡｂ１８ ＩｇＧ１，３７℃，反应８ｈ，然后分别用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００（１ｃｍ×６５ｃｍ）凝胶过滤柱和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－ＦＦ（２ｃｍ×１８ｃｍ）阴离子交换柱纯化。结果：经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１００ｇ／Ｌ）电泳测定，２种方法纯化的Ｆ（ａｂ’）２     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

The hepatocellular carcinoma (HCC) cell line, QGY-7703, derived from a Chinese patient, was used to immunize the BALB/c mice. Fifteen hybridomas producing McAb that reacted with QGY-7703 cells were isolated from 858 hybridomas created in three cell fusions. In further studies two McAb, namely, AQGY1 and A-QGY2, were selected which specifically stained HCC cells grown in vitro. The reactivity of these McAb was not removed by the absorption by homogenates of the normal liver, but was by homogenates of HCC cells. A-QGY1 and A-QGY2 also reacted definitely with HCC cells in liver tissues of HCC patients, but neither with other cells in the tissues nor with nontransformed liver tissues of the same patients. Furthermore these two McAb stained the adult or fetal liver tissues, nor all of the other normal or tumor tissues that had been tested. Blocking and absorbing experiments revealed that A-QGY1 and AQGY2 antigens had no immunohomogenicity with antigens such as HBsAg, HBcAg, HBeAg, AFP and CEA. The specificity of these two McAb may be used potentially for the sero diagnosis, histologic identification, radioimmunoimaging and destruction of human hepatocellular carcinoma.     

^99mTc标记卵巢癌单抗片段F（ab‘）2放射免疫显像的实验研究

目的：为了改进放射免疫显像（ＲＩＩ），进行＾９９ｍＴｃ标记卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ－Ｆ（ａｂ’）２ＲＨ的研究。方法：采用无茶果酶制单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２片段（ａｂ’）２，改进ＳｎＣｌ２法进行＾９９ｍＴｃ标记片段Ｆ（ａｂ’）２及正常鼠ＩｇＧ（ＮＭＩｇＧ）；＾９９ｍＴｃ－ＣＯＣ１８３Ｂ２或＾９９ｍＴｃ－ＮＭＩｇＧ标记物分别经腹腔注入荷入卵巢癌裸鼠体内，１８ｈ进行ＲＩＩ。显像后测定并计算肿瘤与非肿瘤     

一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段

目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍｍａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱,用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分,木瓜酶处理后分离,纯化出Ｆａｂ,免疫绵羊制备高效价抗表。用Ｇａｍｍａ Ｂｉｎｄ一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ     

抗人乳腺癌血清抗原单克隆抗体GB2的制备及鉴定

采用人乳腺癌血清抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，经ＥＬＩＳＡ筛选，有限稀释及克隆后获得了一析玢泌特异抗体的杂交瘤细胞株，命名为单克隆抗体ＧＰ２（ＭｃＡｂＧＢ２）。ＭｃＡｂＧＢ２经硫酸铵及ＤＥＡＥ纤维素纯化后效价达１：２×１０＾６，经琼脂糖免疫双扩证明ＭｃＡｂＧＢ２属小鼠ＩｇＧ１亚类。免疫印迹结果表明ＭｃＡｂＧＢ２识别的抗原呈两条区带，分子量分别为１１６ｋｄ及４５ｋｄ     

抗乙型肝炎表面抗原Fab片段联合抗细胞核单抗为载体的肝癌放射免疫治疗实验研究

目的 探讨核素标记人源化抗(乙型肝炎)乙肝表面抗原Fab片段(抗HBsAg Fab)联合核素标记抗细胞核单克隆抗体(chTNT)瘤内注射治疗荷人肝癌移植瘤裸鼠的可行性和优越性,为临床应用核素标记多种不同性质的单克隆抗体进行放射免疫治疗肝癌提供实验依据.方法 荷瘤裸鼠分为五组,分别瘤内注射131I-抗HBsAg Fab、131I-chTNT、131I-抗HBsAg Fab联合131I-chTNT、131I-无关抗体(131HgG)及PBS.治疗后行SPECT显像观察标记抗体在肿瘤内的浓聚,并澍量肿瘤大小变化,计算肿瘤抑制率.结果 研究发现2种标记抗体联合应用组的肿瘤抑制率为73.09%,呀显高于131I-抗HBsAgFab组的47.8%和131I-chTNT组的54.26%.联合应用组标记抗体在肿瘤组织/非肿瘤组织内的放射活度比值(T/NT值)大于单独应用组.结论 131I-抗HBsAg Fab联合131I-chTNT瘤内注射放射免疫治疗可增加标记抗体在肿瘤组织内的浓聚.并能提高放射免疫治疗效果.     

抗人肝癌单克隆抗体放射免疫治疗中的显象研究

用＾１３１Ｉ标记的抗人肝癌单克隆抗体Ｈｅｐａｍａ－１，对１５例经手术病理证实为原发性肝细胞癌的病人，在放射免疫治疗过程中，进行了放射免疫显象研究。注射治疗量的＾１３１Ｉ－Ｈｅｐａｍａ－１ ＭｃＡｂ后，用单光子发射型计算机断层扫描仪（ＳＰＥＣＴ）对病人作了动态显象观察。结果１１例阳性，４例阴性，阳性显象率为７３．３％。研究表明，＾１３１Ｉ－Ｈｅｐａｍａ－１ ＭｃＡｂ对原发性肝癌的定位、定性诊断，以及     

抗人肝癌单克隆抗体在裸鼠移植瘤中的免疫定位

以＾１３１Ｉ标记抗人肝癌单克隆抗体及正常小鼠ＩｇＧ进行裸鼠人原发性肝癌移植瘤的肿瘤定位显像研究。每鼠从尾静注射１．１１×１０＾７Ｂｑ，注入后２４，４８，９６，１６８ｈ行全身ｒ照相，观察肿瘤摄取标记抗体的能力，并计算生物半衰期，同时定期测定肿瘤与各器官组织的放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。     

抗人肝癌单克隆抗体和Fab片段在裸鼠体内分布及药物偶…

大鼠抗人肝癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ５（ＩｇＧ１）腹水经亲和层析柱纯化后，用木瓜蛋白酶消化得到Ｆａｂ片段，经ＥＬＩＳＡ检测均具有良好的免疫活性。将＾１２５Ｉ－Ｆａｂ和＾１２５Ｉ－３Ａ５注入移植人肝癌裸鼠体内Ｆａｂ片段分布在主要脏器的每克组织注射剂量百分比（ＩＤ％／ｇ）的持续时间和数值均低于完整ＭｃＡｂ，但肿瘤与非肿瘤组织（Ｔ／ＮＴ）的比值则高于完整ＭｃＡｂ，说明Ｆａｂ片段的分布对肿瘤组织具有较高     

抗人胎盘酸性同功铁蛋白单克隆抗体制备及对原发性肝癌诊断的研究

从人胎盘组织中提取纯化出酸性同功铁蛋白（ＡＩＦ），应用杂交瘤技术，获得５株能稳定和抗人胎盘酸性同功铁蛋白单克隆的细胞。５株单抗能识别不同抗原表面，用其中两株单抗４ｇ７和２ｆ８分别作为包被抗体和酶标抗体，建立了测定血清ＡＩＦ的夹心ＥＬＩＳＡ。该法上限为１０μｇ／Ｌ，在１０－２５０μｇ／Ｌ之间，标准曲线有较发的线性关系。临床检测结果：健康献血员、良性肝病和原发性肝癌（ＰＨＣ）患者血清ＡＩＦ分别为３６．     

单抗F(ab′)2段导向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制备及其体外杀伤癌细胞作用

目的　制备人肝癌特异性单克隆抗体 HAb18的 F(ab′) 2 片段导向抗肝癌阿霉素 (ADR)白蛋白(HSA)免疫毫微球 (HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA- NP) ,并研究其体外靶向肝癌细胞和杀伤肝癌细胞的作用。方法　采用乳化高温固化法制备阿霉素白蛋白毫微球 (ADR- HSA- NP)后 ,应用改进的 N-琥珀酰亚胺基 - 3- (2 -吡啶二硫 )丙酸酯 (SPDP)法制备 HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA- NP。在光镜和电镜下观察体外 HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA- NP和 ADR- HSA- NP与肝癌细胞株 SMMC- 772 1的结合特性 ,并用 3H- Td R法测定两种微球体外杀伤肝癌细胞株SMMC- 772 1的作用。结果　在荧光染色后 ,HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA - NP表面发出明亮黄绿色荧光 ,而 ADR-HSA- NP未见荧光。 HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA- NP能结合肝癌细胞株 SMMC- 772 1,且能呈剂量依赖地有效杀伤肝癌细胞株 SMMC- 772 1,而 ADR- HSA- NP不能结合和明显杀伤肝癌细胞株 SMMC- 772 1。两种微球均不能结合和杀伤人大肠癌细胞株 SW1116。结论　 HAb18F(ab′) 2 - ADR- HSA - NP具良好的体外特异性结合并杀伤人肝癌细胞     

疏水作用FPLC一步法制备级纯化抗人肝癌单抗HAb18 F(ab')2片段

制备符合人用标准的肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ（ａｂ’）２片段,方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体,胃蛋白酶与抗体在ＰＨ３．５０．１ｍｏｌ．Ｌ＾－１柠檬酸条件下,经不同反应时间,收集样品,上ＦＰＬＣ（快速蛋白液相色谱）Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化并进行质检。结果按上述条件消化２ｈ,９５％ｃ ｈ ｒ ＩｇＧ裂解为Ｆ（ａｂ’）２片段,经Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＨＰ疏水柱纯化后Ｆ