GM-CSF增强免疫调节作用的研究进展

DNA疫苗免疫哺乳动物存在免疫原性差和免疫效果不理想的诸多问题,因而影响DNA疫苗的免疫效果和应用性。如果要获得效力更持久、反应强度更优化的免疫应答,需要进一步改善DNA疫苗的免疫效果。根据目前的研究,     

丙型肝炎病毒包膜基因对核心基因DNA疫苗免疫应答强度的影响

目的 研究丙型肝炎病毒(HCV)包膜基因E1E2对核心基因C DNA疫苗诱生的免疫应答作用。方法 将包含HCV C或CE1E2基因片段插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pHCV-C或pHCV-CE1E2,分别免疫Balb/c小鼠,每间隔2wk加强免疫1次,同时剪尾取血。ELISA法检测免疫小鼠血清中HCV C特异性抗体的水平。以pHCV-C转染并表达HCcAg的BLAB/c小鼠骨髓瘤Sp4/0细胞为靶细胞,采用~(51)Cr释放试验检测特异性CTL的杀伤作用。结果 两个实验组20只小鼠均产生抗HCV C特异性抗体,当效/靶细胞比例为100:1时,CTL的杀伤率均明显高于对照组(p<0.01);而pHCV-CE1E2与pHCV-C组之间,无论是抗HCV C抗体的滴度还是CTL的杀伤率均无显著性差异(p>0.05)。结论 E1E2基因的加入,并没有增加HCV C基因DNA疫苗诱导的抗HCcAg特异性抗体的滴度和CTL的杀伤作用。     

日本血吸虫DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer的构建及免疫保护性效果的观察

目的 构建日本血吸虫铁蛋白proVAX/GMCSF-SjFer DNA疫苗,观察其诱导小鼠产生抗攻击感染的免疫保护性效果. 方法 小量制备pGMC/SjFer重组质粒DNA,PCR扩增GMCSF-SjFer基因,将此目的 片段亚克隆到真核表达载体proVAX中,构建重组真核表达质粒proVAX/ GMCSF-SjFer.雌性昆明鼠随机分为对照组、免疫组和空质粒组.空质粒组小鼠股四头肌注射proVAX,免疫组同法注射重组质粒proVAX/GMCSF-SjFer,对照组注射生理盐水.按0、2、6周设计接种3次.末次接种后第2周,感染血吸虫尾蚴(40±2)条/鼠.感染后第42 d剖杀小鼠,灌注法冲虫,计数虫荷和克肝卵数.免疫前和免疫后2周留取小鼠血清,用ELISA法检测抗血吸虫成虫抗体水平. 结果 经PCR和双酶切鉴定,获得1条约为960 bp的目的 片段和2条酶切片段.免疫组小鼠的减虫率及减卵率分别为22.46%和29.40%,空质粒对照组分别为3.11%和7.79%,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA检测免疫组小鼠血清特异性IgG抗体水平增高. 结论 构建的DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子编码基因对乙型脑炎DNA疫苗细胞免疫增强效应的影响

目的 研究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)编码基因对乙型脑炎(JE)DNA疫苗细胞免疫应答的影响.方法 套式RT-PCR法获取BALB/c小鼠GM-CSF编码基因,构建含乙型脑炎病毒(JEV)前膜(prM)-包膜(E)蛋白与GM-CSF编码基因以及单纯GM-CSF编码基因的重组质粒,分别命名为pJME/GM-CSF和pGM-CSF.脂质体法转染上述质粒入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),免疫荧光法检测编码蛋白的表达与分布.流式细胞仪检测经不同组合的免疫原免疫后小鼠脾T淋巴细胞亚群及Th细胞内细胞因子(IFN-γ、IL-4)变化,LDH法测定CTL活性.数据行单因素方差分析及最小显著差数法比较.结果 重组质粒pJME/GM-CSF与pGM-CSF经鉴定构建正确,所编码的蛋白主要分布于胞质,少量分布于胞膜.pJME/GM-CSF组CD4+T淋巴细胞比例为(33.90±0.79)%,明显高于其他组(t值分别为9.818、6.804、6.594、10.061、9.380和17.675,均P<0.05).pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组CD4+T淋巴细胞比例分别为(29.83±0.61)%、(29.70±0.51)%,高于pJME注射3 d后接种pGM-CSF组的(27.69±0.50)%(t=3.466、t=3.255,P<0.05).pJME/GM-CSF组与pJME+pGM-CSF同时注射组CD8+T淋巴细胞比例较空载体(pcDNA3.1+)组及JE灭活疫苗组升高(t值分别为3.811、2.627、10.537和3.811,均P<0.05).pJME/GM-CSF组CTL活性为(51.48±0.10)%,明显高于其他组(t值分别为22.868、13.823、5.377、32.287、34.632和53.795,均P<0.05).pJME/GM-CSF组、pJME+pGM-CSF同时注射组及pGM-CSF注射3 d后接种pJME组IFN-γ/IL-4比值分别为19.13±1.36、12.32±0.82、7.05±0.43,明显高于其他组(P<0.05).结论 GM-CSF编码基因可增强JE DNA疫苗的细胞免疫应答效应.     

丙型肝炎病毒核心蛋白DNA结合区的测定

目的 阐明丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白的DNA结合特性及其意义。方法 在大肠杆菌中表达谷胱甘肽转移酶（GST）融合HCV核心蛋白不同长度片段,并进行纯化。经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,通过更换缓冲液的方法将这些蛋白片段相对固定在凝胶中,用γ－^32P[4667-0091]ATP标记人工合成的DNA进行2次电泳,通过放射自影检测核心蛋白的DNA结合区。结果 HCV核心蛋白N端第10－16位氨基酸残基和第46－70位氨基酸残基可独立地结合DNA,核心蛋白既能和单链DNA结合又能和双链DNA结合,对单双链DNA的结合域相同。对所结合的DNA序列无选择性。结论 HCV核心蛋白的N端含有两个DNA结合区,结合区序列与核内转移信号的部分重迭以及对结合靶DNA序列的非选择性可能是HCV核心蛋白具有多功能的基础。     

急性白血病细胞G-CSF、GM-CSF受体的检测及其临床意义

目的：研究急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞表面粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）与粒-巨噬细胞集落刺激因子受体（GMCSFR）的表达规律。观察重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）在AL中应用的临床疗效。方法：采用流式细胞术检测15例正常对照和86例AL患者G-CSFR、GM—CSFR的表达率。观察rhG-CSF的应用对AL治疗的影响。结果：急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者G-CSFR、GM—CSFR的表达率明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）（P〈0．01），均低于对照组。AL患者G-CSFR与GMCSFR表达率无相关性（rs=0．127，P〉0．20）；ANLL患者，G-CSFR表达率与CD13、MPO表达率呈正相关（P〈0．01），与CD33表达率呈负相关（P〈0．01），GM-CSFR表达率与HLA-DR表达率呈正相关（P〈0．01）。ALL患者。GM—CSFR的表达率与CD19的表达率呈正相关（P〈0．01）。应用rhG-CSF能减少AL患者中性粒细胞缺乏及发热的天数，但对缓解率无影响。结论：G-CSFR、GM—CSFR．的表达率在ANLL与ALL中有差异，两者的表达无相关性，在化疗过程中及化疗后应用rhG-CSF对AL的缓解率无显著影响。     

肺泡蛋白沉着症——一种新的自身免疫性疾病

肺泡蛋白沉着症是一类由肺泡腔和远端气道内积聚大量富含磷脂蛋白质样物质为特征的罕见疾病.近年来,有关原发性肺泡蛋白沉着症发病机制的研究使我们对这组疾病的本质有了新的认识,即原发性肺泡蛋白沉着症能够产生对抗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的自身抗体.本文将着重综述对原发性肺泡蛋白沉着症这种新的自身免疫性疾病的认识过程,阐述其发病机制和治疗进展.     

GM-CSF分泌型肝癌疫苗对荷瘤鼠脾血细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性的影响

目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)分泌型肝癌疫苗对移植性肝癌小鼠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。方法取小鼠肝癌细胞株H22细胞1×106/只注入小鼠腹腔内,接种7d形成腹水瘤后再在小鼠体内传3代。取生长旺盛且无血性的腹水,在无菌条件下制成2×107/ml的细胞悬液,以2×106细胞/0.1ml/只接种于小鼠右前肢皮下。将肝癌细胞移植瘤动物分成3组。4天后,在右侧背部皮下进行免疫治疗,即制备GM-CSF分泌型H22肝癌瘤苗并免疫ICR小鼠(H22-GM-CSF组,n=5),同时设立无GM-CSF基因修饰H22肝癌瘤苗组(H22组,n=5)和PBs对照组(PBS组,n=5),测量各组小鼠肿瘤体积;采用细胞增殖计数法检测小鼠脾血CTL杀伤活性。结果随着效/靶比增加,各组CTL杀伤活性均增强。在效/靶比为50∶1时,GM-CSF-H22组CTL杀伤活性为60±6.1%,明显高于H22组(17.4±0.9%)和PBS组(12.2±0.6%,P<0.01);GM-CSF分泌型肝癌细胞瘤苗明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长。在21天时,H22-GM-CSF组、H22组和PBS组小鼠肿瘤体积分别为0.63±0.05mm3、1.47±0.75mm3和1.79±0.34mm(3P<0.01)。结论 GM-CSF分泌型肝癌细胞瘤苗可抑制肿瘤细胞生长,增强CTL杀伤活性。     

免疫佐剂增强乙型肝炎核心抗原核酸疫苗免疫应答的小鼠初步实验

目的 观察小鼠实验中免疫佐剂QS－21对乙型肝炎核心抗原（HBcAg)核酸疫苗免疫应答的增强作用。方法 基因枪轰击法接种HBcAg核酸疫苗或对照质粒,皮内注射法给予QS－21;间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清抗－HBc(IgG及IgG亚类）水平;^51 铬释 放法检 小鼠脾 细胞特异性CTL杀伤活性。结果 Balb/c和C57BL／6小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的血清抗－HBc 终点滴度均分别为1:328050和1:984150;两组的-HBc-I gG亚类均以IgG2a略占优势;当效：靶比为12：1时,Balb/c小鼠单用疫苗组和疫苗加QS－21组的特异性CTL杀伤活性分别为51.1%和63.6%;C57BL／6小鼠两组的CTL杀伤活性分别为53.1%和68.1%。结论 QS－21对HBcAg核酸疫苗所诱导的小鼠特异性抗体及CTL应答均有增强作用。     

小鼠对乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗免疫应答

目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.1和生理盐水,im免疫小鼠2次(间隔2 wk),末次接种后2 wk时检测特异性抗体、γ-IFN水平和淋巴细胞转化率.结果:质粒pcHBV-CD80和pcHBV免疫后均可检测到特异性的抗体,抗-preS2在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为1 5125.52 nkat/L和14463.56 nkat/L;抗-HB c在pcHBV-CD80组和DcHBV组分别为7607.35 nkat/L和7711.21 nkat/L,两组间无明显差异;但p cHBV-CD80更能增加γ-IFN的产生(1266.7 ng/L vs 986.3 ng/L,P＜0.01),并增强免疫小鼠的激淋巴细胞转化.结论:含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗可诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答.     

结核杆菌Ag85A DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应比较

目的探索增强结核杆菌DNA疫苗有效性的新方法，为研制并开发新一代高效结核杆菌DNA疫苗奠定基础。方法分别构建结核杆菌Ag85A抗原基因真核表达质粒及其与小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的真核嵌合表达质粒，体外转染COS7细胞检测两种重组质粒的表达活性后，将其分别用作DNA疫苗给BALB／c小鼠肌内注射，检测小鼠体内特异性体液免疫和细胞免疫应答相关指标，同时进行动物免疫保护性实验，比较分析两种DNA疫苗在小鼠体内的免疫效应。结果结核杆菌Ag85A抗原蛋白基因与小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子的嵌合DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性明显强于Ag85A抗原基因非嵌合DNA疫苗，但两种DNA疫苗的免疫保护性无明显差异。结论粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子与结核杆菌免疫保护性抗原基因嵌合DNA疫苗能显著增强结核病DNA疫苗的免疫原性。     

丙型肝炎病毒核心基因免疫诱生细胞免疫应答研究

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫在诱生特异性细胞免疫应答中的作用。方法 将包含ＨＣＶ Ｃ基因片段的重组真核表达质粒ｐｃＣＮＡ ＨＣＶ Ｃ,在主宰其可以在小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０（Ｈ－２^d）中表达之后,注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠股四头肌。ＥＬＩＳＡ法检测血清中抗体水平;^3Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定免疫小鼠脾细胞特异性增殖能力;^51Ｃｒ释放法检测免疫小鼠细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬｓ）体外杀伤功能。结     

乙型肝炎表面抗原与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子融合表达质粒诱导小鼠特异性免疫应答

目的 观察乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)融合表达质粒诱导特异性免疫应答的效果。方法 以HBsAg与GM-CSF融合表达质粒DNA免疫BALB/C小鼠,用酶链免疫吸附方法检测质粒诱导BALB/C小鼠产生抗HBs及脾细胞经HBsAg体外刺激后分泌白细胞介素(IL)-2、4及γ干扰素(IFNγ)的水平;并用~(21)Cr释放法检测HHsAg特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果 各组小鼠加强免疫后血清抗体水平(P/N值)A组(PcDNA3.1-S)16.1 20.3,B组(PcDNA3.1 GM-CSF-S)28.3±19.7,F组(重组酵母乙型肝炎疫苗)29.5±21.5,C组(PcDNA3.1S-GM-CSF)0.3±0.0,D组(PcDNA3.1—S PcDNA3.1-GM-CSF)4.5 5.9,E组(PcDNA3.1—GM-CSF)0.9±1.2,G组(PcDNA3.1)及H组(PBS)为阴性(F-4.176,P<0.01);IL-2分泌水平A组(26.6±1.9)、B组(56.0±2.2)、C组(4.3±1.2)、D组(33.5±1.7)、F组(3.5 1.4)、F组(7.5±2.0)、G组(1.5±0.7),H组未检测到IL-2分泌(F=31.188,P<0.01);IFN-γ分泌水平A组(64.0±7.5)、B组(139.0±17.0)、C组(11.0±5.0)、D组(53.0±9.5)、E组(9.0±3.0)、F组(13.0±2.0)、G组(8.0±2.0,P(0.05),H组未检测到IFN—γ泌(F=31.796,P<0.01);HBsAg特异性CTL活性,效靶比为30:1及10:1时各组音有差异有显著性(F值分别为26.891、12     

肺泡蛋白沉积症的研究进展

肺泡蛋白沉积症(pulmonaryalveolarproteinosis,PAP)是一种发病率较低,起病隐匿,确诊困难的肺部疾病,呈特发性或继发于其它疾病。本文就其临床表现、诊断方法及近年来的病因、发病机制研究进展和治疗进展作一综述。     

急性心肌梗死后血清GM-CSF水平变化及其与心功能的相关性

目的研究急性心肌梗死（AMI）后患者血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）水平变化,及其与心功能的关系。方法AMI患者30例,AMI后8,16,24,36,48 h及3,4,5,6,7 d分别测定血清GM-CSF,肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度。并在AMI 1周后测量左室射血分数（LVEF）,左室舒张末期内径（LVEDD）。从30例患者中选取5例急性广泛前壁心梗,并且LVEF<40%的患者作为亚组,描述心梗后GM-CSF时间相;并分析30例患者血清GM-CSF峰值与心梗后心功能的关系。结果GM-CSF在AMI后8 h开始逐渐升高,3672 h达高峰,在以后7 d的测量中均保持较高水平。GM-CSF峰值与CK-MB峰值呈正相关（r=0.566,P<0.05）;与LVEF呈负相关（r=-0.42,P<0.05）;与LVEDD呈正相关（r=0.454,P<0.05）。结论心肌梗死后血清GM-CSF水平增高与心功能呈负相关。     

转GM-CSF基因瘤苗联合B7基因治疗淋巴瘤的实验研究

用电穿孔法将粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）表达质粒导入RMA淋巴瘤细胞,筛选出高表达GM—CSF的细胞克隆（RMA-GM）,再转入B7质粒,经过丝裂霉素处理后皮下接种C57小鼠,观察抗肿瘤免疫效果。结果获得了高表达GM-CSF的小鼠T细胞淋巴瘤克隆RMA-GM,联合B7质粒电转染细胞接种C57小鼠后,出瘤时间比对照组延长,肿瘤生长速度减慢,生存期明显延长,90％小鼠长期生存。提示GM-CSF联合B7基因质粒转导的肿瘤瘤苗比单一基因转导有更好的抗肿瘤免疫效果。     

白细胞介素-12对DNA疫苗治疗小鼠丙型肝炎病毒的增强作用

目的     

粒-巨噬细胞集落刺激因子及肺表面活性蛋白在肺泡蛋白沉积症患者肺内的表达

目的通过观察成人特发性肺泡蛋白沉积症(PAP)患者肺部粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及其受体蛋白以及肺泡表面活性蛋白的表达,探讨PAP的发病机制。方法用SP免疫组化技术检测6例PAP患者(PAP组)及6例对照者(对照组)肺组织肺泡巨噬细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞GM-CSF、GM-CSF/IL-3/IL-5共同β链受体(GM-CSFβcR)、肺表面活性蛋白(SP)-A和SP-D蛋白表达。结果(1)肺泡巨噬细胞2组表达GM-CSF蛋白均较弱,阳性细胞数少,组间比较差异无统计学意义(P=0.818);2组均表达GM-CSFβcR蛋白,对照组显著高于PAP组(P=0.002);2组均表达SP-A蛋白,且PAP组呈阳性反应,但阳性细胞数少,积分指数显著低于对照组(P=0.004);2组表达SP-D蛋白差异无统计学意义(P=0.24)。(2)Ⅱ型肺泡上皮细胞2组均表达SP-A和SP-D蛋白,组间比较差异无统计学意义(P=0.818,P=0.485);对照组少数表达GM-CSFβcR蛋白,PAP组无GM-CSFβcR蛋白表达;2组均无GM-CSF蛋白表达。结论肺泡巨噬细胞表达GM-CSFβcR蛋白减少可能与成人特发性PAP肺泡巨噬细胞功能障碍有关。     

血清GM-CSF IL-18在急性肾损伤中的相关性及对急性肾损伤的预测作用

目的探讨血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-18(IL-18)在急性肾损伤(AKI中的相关性及对AKI的预测作用。方法选取SPF级Wistar大鼠30只,采用随机数字表法将其分为假手术组(SHAM组,n=5)和AKI模型组(AKI组,n=25)。检测两组在0、24、48、72、96 h时间点的血清肌酐(SCr)、IL-18、GM-CSF的水平变化,分析其相关性。结果在造模后,AKI组出现了肾小管间质细胞坏死及炎症细胞浸润情况,AKI组在0、24、48、72、96 h时间点的肾小管损伤评分呈先升高后降低的变化,在48 h时间点的肾小管损伤评分评分最高。AKI组24～96 h时间点的肾小管损伤评分均高于SHAM组,差异有统计学意义(P 0.05)。AKI组SCr水平随时间呈持续升高趋势;而IL-18、GM-CSF水平呈先上升后下降的变化。SHAM组SCr、IL-18、GM-CSF水平在不同时间点变化不显著。AKI组在造模后48、72、96 h的SCr水平显著高于SHAM组(P 0.05); AKI组在造模后48 h和72 h的IL-18、GM-CSF水平显著高于SHAM组(P 0.05)。Pearson相关分析结果显示,AKI组血清IL-18水平与SCr、GM-CSF呈正相关(P 0.05)。结论在大鼠AKI模型中,血清GM-CSF与IL-18呈正相关,其峰值出现早于SCr,可作为预测AKI发生的标志物。     

日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究

目的 探讨日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用以增强免疫保护作用的效果。方法分别大量制备质粒DNA：pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30。pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6等量混合后即为鸡尾酒式的混合DNA疫苗，重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30等量混合后即为鸡尾酒式的混合蛋白疫苗。70只BALB／c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组，每组14只。A组为自然感染组；B组（空质粒对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1；C组（空质粒＋混合蛋白对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μl福氏完全佐剂（FCA）；D组（混合DNA组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗；E组（混合DNA＋混合蛋白组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μlFCA。DNA免疫组末次免疫后4周，蛋白加强组末次免疫后2周，所有小鼠同时经腹部皮肤感染（40±1）条尾蚴。攻击感染后42d剖杀小鼠，计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血，分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a，并取小鼠脾脏制备单个脾细胞，检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果C、D组和E组的减虫率分别为17．70％、32．88％和45．35％，D组和E组的减虫率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率显著高于D组（P〈0．01）；C、D组和E组的减卵率分别为9．39％、36．20％和48．54％，D组和E组的减卵率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率也显著高于D组（P〈0．05）。C、D、E3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体，?