体外培养大鼠胰岛细胞的观察

目的：对大鼠胰岛细胞培养方法进行改进并对胰岛细胞进行体外观察，方法：选用３～４周龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠胰腺，用２００Ｕ／ｍｌ的Ｖ型胶原酶消化，１０８μｍ孔径尼龙筛网滤过消化产物后，得到大小较一致的细胞团，加入含有１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的ＲＰＭ１６４０培养液内，进行体外培养，利用倒置相差显微镜，透射电镜，免疫组织化学技术对胰岛β细胞形态和结构进行观察；应用放射免疫技术对胰岛素进行检测和分析，结果：胰     

一种改良的大鼠胰岛细胞原代培养方法

目的 探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法，并寻求进行体外干预实验的最适条件。方法 选用3、4周龄SD大鼠胰腺，用0．5mg／mL的V型胶原酶逐级消化分离，80目尼龙筛网滤过消化产物后，加入含有11．1mmol／L葡萄糖的RPMI 1640培养液内，进行体外培养。DTZ染色、利用抗胰岛素抗体进行免疫细胞染色：应用放射免疫技术对培养液上清液中的胰岛素进行检测和分析。结果 胰岛细胞可以在体外培养2周以上。培养初期，细胞形态及分泌功能较稳定。DTZ染色B细胞胞浆着色，为均一的猩红色。Insulin抗体染色β细胞胞浆着色，经DAB显色为棕黄色。随培养时间延长，胰岛素分泌逐渐下降，培养7d内，胰岛素分泌较稳定。结论 改良后的大鼠胰岛细胞培养方法简单可靠，细胞培养至3～7d时，适合用于体外实验研究。     

SD大鼠乳鼠胰岛细胞体外培养方法探讨

目的 探讨一种获得足量、纯度高和功能良好的大鼠胰岛细胞的体外培养方法。方法采用胶原酶对胰腺组织进行分次短时间消化；细胞接种18h时，倒置显微镜下观察细胞生长情况；将细胞转入新的培养板培养，定期收集培养液上清。分别检测胰岛素、淀粉酶含量及葡萄糖刺激下的胰岛素分泌水平。结果 SD大鼠乳鼠原代培养的胰岛细胞中成纤维细胞明显减少，双硫腙可染率85％-90％，锥虫兰染色细胞活力90％以上，培养7～11d的细胞分泌功能正常。结论 用胶原酶反复短时间消化胰腺组织，细胞接种后及时转板的方法可获得纯度较高、生长良好、适合实验研究的胰岛单层细胞。     

SD大鼠乳鼠胰岛细胞体外培养方法探讨

目的探讨一种获得足量、纯度高和功能良好的大鼠胰岛细胞的体外培养方法。方法采用胶原酶对胰腺组织进行分次短时间消化;细胞接种18 h时,倒置显微镜下观察细胞生长情况;将细胞转入新的培养板培养,定期收集培养液上清。分别检测胰岛素、淀粉酶含量及葡萄糖刺激下的胰岛素分泌水平。结果SD大鼠乳鼠原代培养的胰岛细胞中成纤维细胞明显减少,双硫腙可染率85%~90%,锥虫兰染色细胞活力90%以上,培养7~11 d的细胞分泌功能正常。结论用胶原酶反复短时间消化胰腺组织,细胞接种后及时转板的方法可获得纯度较高、生长良好、适合实验研究的胰岛单层细胞。     

改良的新生猪胰岛细胞体外培养

介绍一种通过细胞分离及体外培养获得大量新生猪胰岛细胞团的方法，新生猪胰腺经0．5－1mg.ml^-1的V型胶原酶消化8－12min，再经体外培养7d，可获大量纯化的胰岛细胞团，同时，新生猪胰岛内的B细胞不仅胰岛素分泌功能良好，而且其超微结构正常，提示新生猪胰岛细胞可作为异种移植治疗1型糖尿病重要的供体来源。     

胰敏颗粒对体外培养大鼠脂毒性胰岛细胞分泌胰岛素的影响

目的观察胰敏颗粒对体外培养的棕榈酸导致的脂毒性的大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响。方法分离正常大鼠胰岛细胞,置于RPMI 1640培养液中,加入20 mmol/L棕榈酸盐,培养24 h后,更换培养液,将胰岛细胞分为棕榈酸组(A组)、胰敏颗粒含药血清组(B组)、罗格列酮含药血清组(C组)3组;另设空白对照组(D组),未经棕榈酸盐处理,作为空白对照。各组分别加入含3.3或16.7 mmol/L葡萄糖的孵化液+非含药血清或含胰敏颗粒血清或含罗格列酮血清100μL/mL,进行葡萄糖刺激胰岛素释放试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素的浓度。结果在低糖和高糖刺激条件下,A组胰岛素分泌水平均显著低于D组,2组比较,差异具有高度统计意义(P0.01);在低糖和高糖刺激下,B组胰岛素分泌水平显著高于A组,2组比较,差异具有统计意义(P0.05或P0.01);C组仅在高糖刺激下,胰岛素分泌水平显著高于A组,2组比较,差异具有高度统计意义(P0.01);B组与C组在低糖和高糖刺激下胰岛素分泌水平差异均无统计意义。结论胰敏颗粒能够保护棕榈酸对胰岛β细胞分泌功能的损害。     

瘦素对大鼠体外胰岛β细胞胰岛素合成与分泌的抑制作用

目的了解不同浓度瘦素对体外培养大鼠胰岛β细胞胰岛素合成与分泌的影响。方法用含11.1 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养液体外培养大鼠胰岛β细胞系胰岛素-1(insulin-1,INS-1)细胞,实验分为5组,培养液瘦素浓度分别为0、5、10、20μg/L和50μg/L。培养24 h后分别以荧光定量PCR和ELISA方法检测胰岛β细胞前胰岛素原mRNA的表达及上清液胰岛素浓度。结果在葡萄糖浓度11.1 mmol/L、瘦素作用24 h情况下,胰岛β细胞前胰岛素原mRNA表达随培养液瘦素浓度的升高而逐渐下降,上清液胰岛素浓度随培养液瘦素浓度的升高而逐渐下降,瘦素可抑制胰岛β细胞胰岛素的合成与分泌。结论重组瘦素对体外培养大鼠胰岛β细胞(葡萄糖浓度11.1 mmol/L,瘦素作用24 h)胰岛素的合成与分泌具有抑制作用,随瘦素浓度的增加,抑制作用越明显。     

IL-6促进胰岛细胞胰岛素分泌在PCOS发病机制中的作用

目的 探讨IL-6在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)高胰岛素血症和胰岛素抵抗中的作用。方法 在体外培养的大鼠胰岛细胞培养液中加入10、100和1000pg/ml IL-6,于培养24、48、72h后,采用放射免疫法检测IL-6对胰岛细胞胰岛素分泌的影响。结果 培育48h时,1000pg/ml IL-6板孔中的胰岛素浓度高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);培育72h时,100、1000pg/ml IL-6板孔中的胰岛素浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 IL-6在体外具有刺激胰岛细胞分泌胰岛素的作用,这可能与PCOS患者常出现高胰岛素血症、胰岛素抵抗现象有关。     

猫胰岛细胞的分离纯化和培养

目的建立猫胰岛细胞分离纯化和体外培养的方法。方法在自制玻棒持续振荡下常规分离胰岛细胞,进行单层细胞培养和组织块培养。采用差速贴壁法。碘乙酸法、消化时间差法去除培养中的成纤维细胞。动态收集单层细胞培养液, 分别用放射免疫法和比色法检测胰岛素和淀粉酶含量。光镜下观察５～３０ｄ细胞生长情况。分别对培养第５、１５、２１天的 细胞进行葡萄糖负荷试验、组织块培养的细胞进行透射电镜检查。结果猫胰岛细胞在体外培养可保持良好的生物学活 性３周或３周以上（组织培养）。结论　在国内首次建立的猫体外胰岛细胞培养方法可行可靠,体外培养第７～２５ｄ的细 胞形态和功能良好,是进行实验研究的极好材料。     

神经生长因子对白细胞介素-1β抑制的胰岛B细胞功能的影响

目的：观察神经生长因子（NGF）对白细胞介素－β（IL－1β）作用后的胰岛B细胞分泌功能的影响。方法：实验分为正常对照组，IL－1β作用组，不同浓度NGF对IL-1β处理后胰岛作用组，采用胰岛细胞培养的方法，观察NGF对IL－1β作用后的胰细胞胰岛素基础分泌量、葡萄糖刺激分泌量和对MTT还原的影响，通过斑点印迹检测c-fos mRNA。结果：（1）IL－1β作用的胰岛B细胞胰岛素基础分泌量和葡萄糖刺激分泌量明显低于对照组，不同浓度NGF对IL－1β处理后胰岛作用组的胰岛细胞胰岛素基础分泌量和葡萄糖刺激分泌量明显高于IL－1β作用组；（2）IL－1β抑制胰岛细胞还原MTT，NGF能使MTT还原得到恢复；（3）NGF和IL－1β均诱导c-fos mRNA。结论：NGF具有促进IL－1β抑制的胰岛B细胞功能恢复作用，其机制可能是通过促进细胞代谢，调节基因表达影响细胞内蛋白质的合成。     

白细胞介素-1对大鼠离体胰岛B细胞分泌功能的影响

目的 :观察白细胞介素 1(IL 1)对大鼠胰岛B细胞分泌功能的影响并探讨其机制。方法 :采用胰岛细胞培养的方法 ,观察IL 1对胰岛素分泌和MTT还原的影响 ;通过分子杂交检测c fosmRNA并分析蛋白质合成的变化。结果 :IL 1作用后胰岛素分泌和MTT还原量明显减少 ,且有时间依赖性 ;IL 1诱导c fosmRNA ,从而使细胞蛋白质表达发生变化。结论 :IL 1可能通过改变胰岛细胞内基因表达 ,抑制细胞代谢 ,从而使胰岛素分泌减少     

颅脑损伤大鼠胰岛素细胞、生长抑素细胞和血糖含量的变化

目的　探讨脑损伤后大鼠胰岛素细胞 (B细胞 )、生长抑素细胞 (D细胞 )及血糖含量的变化。方法　采用落体法致大鼠脑损伤 ;伤后 2 4h断头处死 ,用免疫组织化学和图像分析方法观察脑损伤后大鼠胰岛B、D细胞的变化 ,用生化分析仪测定血糖含量。结果　与对照组比较 ,脑损伤大鼠胰岛B细胞数量减少 ,平均光密度减弱 (P <0 .0 5 ) ,胰岛D细胞数量增多 ,平均光密度增强 (P <0 .0 5 ) ,血糖升高 (P <0 .0 1)。结论　脑损伤大鼠胰岛B细胞分泌胰岛素功能减弱 ,胰岛D细胞分泌生长抑素的功能增强     

体外诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化的研究

目的:体外分离和定向诱导小鼠胎肝间充质干细胞向胰岛B样细胞分化.方法:无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝中分离出间充质干细胞,体外培养传3代后用高浓度葡萄糖培养基以及碱性纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和尼克酰胺诱导分化,观察胎肝间充质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后胰十二指肠同源异型基因盒1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)、胰岛素原1(proinsulin-1,INS-1)、葡萄糖转运子2(glucose transporter-2,GLUT-2)表达情况;胰岛素免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞胰岛素的表达;在形成胰岛样细胞簇后,用双硫腙做胰岛B细胞特异性染色.结果:RT-PCR显示诱导5 d后PDX-1、INS-1、GLUT-2均有表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;胰岛素免疫细胞化学表明细胞簇内的细胞胰岛素染色强阳性;细胞簇双硫腙染色阳性(每个T-25培养瓶有80～120个).结论:从胎肝中分离出的间充质干细胞在体外可以定向诱导分化为胰岛B样细胞.     

低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能的调节作用

本研究工作以健康成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠为对象，分４组：（１）对照组；（２）糖尿病组；（３）预防加治疗组；（４）治疗组。第２、３、４组均应用ＳＴＺ制成糖尿病大鼠，其中３、４组应用低剂量三氯化钐（０．０５ｍｇ／ｋｇ）治疗６周后，采用放射免疫检测术测定了各组动物血浆中胰岛素、胰高血糖素、生长抑素及血糖的变化。实验结果表明：经使用低剂量三氯化钐治疗后的第（３）、（４）组动物均活泼、状态良好，体重增加，血浆中胰岛素水平增高及生长抑素水平下降，均与正常对照组近似；胰高血糖素及血糖水平均呈下降趋势。由此可见，低剂量三氯化钐对糖尿病大鼠胰岛细胞分泌功能具有调节作用，从而使糖尿病大鼠的健康状况得以明显改善。     

胰淀素致大鼠胰岛细胞功能损伤的实验研究

目的观察胰淀素对体外培养的大鼠胰岛细胞功能的影响,探讨胰淀素在2型糖尿病发病过程中的作用。方法应用体外单层培养大鼠胰岛细胞,检测不同浓度胰淀素对细胞胰岛素分泌、细胞内DNA及胰岛素含量的影响。结果10 μmol/L以上胰淀素作用2 h后,可抑制高糖(16.7 mmol/L)刺激下的胰岛素分泌(P<0.01),并呈剂量依赖性。10 μmol/胰淀素作用后,胰岛β细胞内DNA、胰岛素含量升高,与对照组相比有显著性差(P<0.01)。结论10 μmol/L以上胰淀素可显著抑制高糖刺激下大鼠胰岛素的分泌与释放。