共查询到20条相似文献,搜索用时 15 毫秒
1.
日本血吸虫中国大陆株62kDa重组抗原的表达、纯化及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:获得并鉴定日本血吸虫62kDa重组抗原。方法:将Sj62/pGEX-1 λT/TG2克隆菌用IPTG诱导表达,经超声粉碎,离心后取上清过GS4B柱,用还原型谷胱甘肽洗脱液洗脱后获得纯化的rSj62/26GST重组融合蛋白,用Thrombin酶切后获得纯化的rSj62重组蛋白,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:重组蛋白纯度较高,且可被血吸虫感染的鼠血清识别。结论:用重组的方法获得了与天然虫源蛋白性质相似的重组抗原蛋白。 相似文献
2.
3年来的主要进展为:完成了重组谷胱甘肽-S-转移酶(GST)免疫兔、牛的免疫持效观察。在国内外首先进行GST基因和K99基因共表达成功。表达产物分子量50kDa,以纤毛形成存在于细菌表面,并分别濉有GST和K99抗原活性,为重组GST抗原与幼畜腹泻疫苗在血吸虫病疫区联合应用打下基础。此外,还首次证明日本血吸虫GST与肝片吸虫(Fh)、猪蛔虫(As)有明显交叉保护性免疫力,并完成FhGST和AsGS 相似文献
3.
4.
用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ICR雄性小鼠32只,分成免疫组和佐剂对照组各16只,免疫组小鼠经rSjc26GST免疫。免疫结束后第5天两组小鼠均由 尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液0.2ml(内含活卵1500-2000个),于注卵后第8天、16天和21天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第8天、16天、21天肺肉芽肿平均直径分别为 相似文献
5.
日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/26GST)的免疫原性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:鉴定纯化的重组日本血吸虫线粒体相关融合蛋白(rSj338/26GST)的免疫原性。方法:对已构建的阳性表达菌pGEX-6p-1/Sj338进行大量诱导表达,并对纯化蛋白进行活性分析。将粗提包涵体蛋白、复性包涵体蛋白、经分子筛纯化并复性的蛋白分别免疫新西兰家兔2只。用Western blot及Dot-ELISA方法检测特异性抗体的免疫原性及各组抗体水平。结果:用分子筛纯化的融合蛋白rSj338/26GST经SDS-PAGE电泳鉴定显示达电泳纯;Western blot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及rSj338/26GST免疫兔血清识别。Dot-ELISA法检测结果表明,经分子筛纯化并复性的rSj338/26GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高,为1:51200。结论:纯化后的融合蛋白rSj338/26GST具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子,值得进一步深入研究。 相似文献
6.
日本血吸虫(中国大陆株)若干酶类基因的发现 总被引:6,自引:1,他引:6
目的 运用表达序列标签(EST)技术,从日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)cDNA文库中分离、鉴定出有潜在应用价值的血吸虫基因序列。方法 应用EST方法,从日本血吸虫cDNA文库中随机挑选出单个重组克隆,PCR扩增出插入片段,并进行PCR产物直接测序;将获得的序列资料与EBI和GenBank进行BLASTn和BLASTx同源性检索,对可能的酶类基因序列进行分析。结论 采用EST策略,可获得日本血吸虫(中国大陆株)若干酶类基因序列EST,为进一步的cDNA全长坟和克隆奠定基础。 相似文献
7.
日本血吸虫Sj28GST疫苗研究进展 总被引:2,自引:2,他引:0
日本血吸虫病是由日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,是国家卫生部规划防治的五大寄生虫病之一[1].现在我国主要流行于湖南、湖北、江西、江苏和安徽省的江湖洲滩地区及四川、云南省的大山区,现症患者90万人,病牛240万头,钉螺面积37.9×109m2,受威胁人口4000万以上.随着三峡建坝、南水北调、农田水利建设、退田还湖、平垸行洪和移民建镇等水利工程的实施,导致钉螺的迁移扩散,有可能引起血吸虫病的潜在流行. 相似文献
8.
日本血吸虫(中国大陆株基因工程疫苗的研究) 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道应用PCR技术或RT-PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库或成虫mRNA中扩增到Sj28GST、C-Sj- paramyosin、H-Sj23、Sj14、sJ22.6和Sj.TP16个编码日本血吸虫中国大陆株抗原的基因,并把它们克隆入适合载体中,在大肠杆菌系统和蚕核型多角体病毒(BmNPV)系统中进行表达。免疫学检测证明这6种基因重组抗原都具有较好的抗原性。我们进一步应用4种比较成熟的基 相似文献
9.
日本血吸虫病是由日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)引起的一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,是国家卫生部规划防治的五大寄生虫病之一[1].现在我国主要流行于湖南、湖北、江西、江苏和安徽省的江湖洲滩地区及四川、云南省的大山区,现症患者90万人,病牛240万头,钉螺面积37.9×109m2,受威胁人口4000万以上.随着三峡建坝、南水北调、农田水利建设、退田还湖、平垸行洪和移民建镇等水利工程的实施,导致钉螺的迁移扩散,有可能引起血吸虫病的潜在流行. 相似文献
10.
用日本血吸虫虫卵肉芽肿的小鼠肺模型进行研究。ICR雄性小鼠32只,分成免疫组和佐剂对照组各16只,免疫组小鼠经rSjc26GST免疫。免疫结束后第5天两组小鼠均由尾静脉注射新鲜日本血吸虫虫卵悬液0.2ml(内含活卵1500-2000个),于注卵后第8天、16天和21天分批剖杀小鼠,观察肺部形成的虫卵肉芽肿病变。结果发现免疫鼠肺内肉芽肿大小受到明显抑制,免疫后第8天、16天、21天肺肉芽肿平均直径分别为100.00±12.6μm,106.43±11.4μm,105.70±11.8μm,对照鼠在相应时间分别为141.90±23.4μm,176.67±34.9μm,199.53±21.7μm,抑制率从8天的29.5%、16天的39.8%到21天的47.0%逐渐增加,并且免疫组肺相对湿重也较佐剂对照组有所减少,证实rSjc26GST具有明确的抗肉芽肿病变效应。 相似文献
11.
日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白的基因克隆与序列分析 总被引:2,自引:4,他引:2
本研究根据曼氏血吸虫疫苗候选分子Sm23的基因序列,设计了一对引物,并通过聚合酶链反应(PCR)基因克隆技术,从日本血吸虫中国大陆株cDNA文库中克隆出了中国大陆株23kDa膜蛋白基因。DNA序列分析表明,编码日本血吸虫中国大陆株Sj23膜蛋白的基因含有657bp,与曼氏血吸虫Sm23的核着酸有79.5%的同源性,而与日本血吸虫菲律宾株的Sj23的同源性为100%。该研究为发展Sj23多肽疫苗奠定了基础。 相似文献
12.
目的 观察rSjc2 6GST抗原诱导水牛产生特异性抗体水平以及排卵数量的减少。 方法 2 0头水牛随机分为两组 ,每组 1 0头。试验组免疫rSjc2 6GST抗原 ,对照组注射佐剂 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴后 ,定期检测抗rSjc2 6GST抗体、粪检虫卵和毛蚴。 结果 水牛免疫rSjc2 6GST抗原后 1个月 ,产生抗rSjc2 6GST抗体 ,至 1 2个月一直维持较高水平。试验组水牛感染后 50~ 90d,粪便EPG和MPG几何均值明显低于对照组 ,但在 1 0 0d以后两组的EPG和MPG均逐渐降低 ,至 330d均为 0。结论 水牛免疫rSjc2 6GST抗原后能产生特异性抗体 ,维持较高水平至 1 2个月 ,在感染后 3个月内有显著的减卵效果 ,此后排卵量逐渐下降至阴性 相似文献
13.
日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的?… 总被引:1,自引:2,他引:1
为研究日本血吸虫22.6kDa抗原的免疫保护性。方法:将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体重粒pGEX-1λt进行表达,并重组抗原免疫了一批昆明鼠。结论:证明重组的日本血吸虫22.6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。 相似文献
14.
15.
目的 :获得编码日本血吸虫大陆株磷酸丙糖异构酶 ( Sjc TPI)的 c DNA基因片段 ,对其克隆与测序。方法 :以日本血吸虫大陆株成虫总 RNA为模板 ,经过逆转录 -聚合酶链 (式 )反应( RT- PCR)获得编码 Sjc TPI抗原的 c DNA片段 ,并克隆于载体 M13mp18、M13mp19,双脱氧链末端终止法测 DNA序列。结果 :体外 PCR扩增获得了编码 Sjc TPI的 0 .75kb c DNA片段 ,6个重组克隆子经酶切鉴定均有 0 .75kb片段的插入。测得编码 Sjc TPI的 DNA序列。结论 :用自行设计的引物成功地扩增了编码日本血吸虫大陆株 TPI抗原的基因片段并进行了克隆、测序 ,为制备重组 TPI进行疫苗试验打下基础。 相似文献
16.
目的 :获得编码日本血吸虫大陆株磷酸丙糖异构酶 ( Sjc TPI)的 c DNA基因片段 ,对其克隆与测序。方法 :以日本血吸虫大陆株成虫总 RNA为模板 ,经过逆转录 -聚合酶链 (式 )反应( RT- PCR)获得编码 Sjc TPI抗原的 c DNA片段 ,并克隆于载体 M13mp18、M13mp19,双脱氧链末端终止法测 DNA序列。结果 :体外 PCR扩增获得了编码 Sjc TPI的 0 .75kb c DNA片段 ,6个重组克隆子经酶切鉴定均有 0 .75kb片段的插入。测得编码 Sjc TPI的 DNA序列。结论 :用自行设计的引物成功地扩增了编码日本血吸虫大陆株 TPI抗原的基因片段并进行了克隆、测序 ,为制备重组 TPI进行疫苗试验打下基础。 相似文献
17.
重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果 总被引:2,自引:1,他引:2
目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。 结果 试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。 结论 用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。 相似文献
18.
日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原的免疫原性研究 总被引:4,自引:2,他引:4
用日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原(rSj22.6)免疫一批昆明小鼠,获得特异性免疫血清,其与22.6kDa重组抗原和日本血吸虫成虫抗原作免疫印迹试验(Westernblot),结果显示可特异地识别重组抗原和成虫抗原中22.6kDa分子,而正常鼠血清则不能识别。实验中,血清经去除抗大肠杆菌抗体的处理后,其与大肠杆菌的非特异性反应条带被去除,特异性反应的条带则增强。 相似文献
19.
目的研究负载GST抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpGODN)免疫小鼠抗日本血吸虫感染的作用。方法将GST抗原纯化后负载树突状细胞株DC2.4,免疫荧光染色法检测GST的负载情况,并进行动物保护性实验。35只C57BL/6小鼠随机均分7组(每组5只),分别作免疫注射:A组为未处理的DC,B组为牛血清白蛋白(BSA)处理的DC,C组为GST负载的DC,D组为GST+CpGODN共刺激的DC,E组为CpGODN刺激的DC,F组为GST蛋白,G组为空白对照组。A~E各组DC经0.25%胰蛋白酶消化后用PBS调整密度至107/ml,每鼠皮下注射0.1ml,每次间隔2周,共免疫3次。F组首次每鼠免疫50μgGST蛋白加福氏完全佐剂,第2、3次分别免疫50μg、10μgGST蛋白加福氏不完全佐剂,均为皮下注射。各组于末次免疫后10d收集血清,ELISA方法分析血清中的特异性抗体。各组小鼠于末次免疫后2周每鼠经腹部感染尾蚴30±1条。6周后剖杀小鼠,计算减虫率。结果 DC经GST负载后可在荧光显微镜下观察到抗GST的特异荧光,表明抗原已被DC摄取。各组小鼠免疫后,F组抗体水平最高,为2.1270±0.4115,另外C组(0.5552±0.0789)和D组(0.7150±0.0523)的抗体水平均高于G组(0.2358±0.0889),差异有统计学意义(P0.05)。免疫后攻击感染,D组小鼠的减虫率最高为53.3%,其次为F组(24.0%)和C组(21.3%),但D组与两组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CpGODN联合GST抗原负载的树突状细胞疫苗具有一定的抗日本血吸虫感染作用。 相似文献
20.
重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。 结果 试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。 结论 用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。 相似文献