日本血吸虫24-26kDa抗原和重组Sj26抗原的抗原性和免疫原性比较研究

本文报告从日本血吸虫大陆株成虫抽提的24—26kDa抗原与源于日本血吸虫菲律宾株的重组Sj26抗原之间在抗原性和免疫原性上所进行的一系列比较研究。ELISA、IFA和Westernblotting等方法观察结果均表明,24—26kDa和rSj26抗原免疫后所诱导的特异性抗体与其对应的抗原之间具有明显的抗原交叉反应,而与其它血吸虫抗原如可溶性虫卵抗原也有交叉反应。若以两种抗原加福氏佐剂分别免疫小鼠,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击感染,减虫率相似(26～32％),表明两种抗原存在一定程度的交叉免疫保护性。这些研究结果为开发rSj26抗原,或是根据已知Sj26 cDNA核苷酸序列制备DNA探针,从已构建的日本血吸虫(大陆株)cDNA库筛选相关目的基因,加速血吸虫疫苗的研制起着重要作用。     

血吸虫疫苗候选抗原-谷胱甘肽S转移酶(GST)抗原的研究近况

GST为一组具有解毒功能的酶。曼氏血吸虫及日本血吸虫水溶性26-28KD蛋白质抗原具有GST酶活性。这类蛋白质抗原被认为是目前很有希望的血吸虫疫苗候选抗原。本文就近年来对血吸虫GST的研究情况作一概述:1理化性质;2免疫学特性;3基因克隆及表达等。     

曼氏血吸虫28kDaGST在感染人群中存在性别依赖的中和体液免疫应答

曼氏血吸虫(Sm)28 kDa GST为世界卫生组织推荐的血吸虫病疫苗候选分子。重组Sm 28 kDa GST免疫动物后引起血吸虫生殖力的降低及免疫人群获得抗感染能力均与特异性抗体抑制GST酶活性有关。近来的研究表明,吡喹酮治疗后可引起特异性抗体应答发生改变,因此对Sm 28 kDa GST及其主要的抗原表位(10—44AA,190—211AA)在感染者化疗前获得中和体液免疫应答进行了研究。     

使用日本血吸虫(亚洲种)基因的DNA接种

使用日本血吸虫cDNAs包括3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、22.6kDa的体表膜相关抗原(22.6kDa Teg·Ag)、副肌球蛋白片段、全长的副肌球蛋白、14kDa脂肪酸结合蛋白(FABP)、26kDa谷胱甘肽-S-转移酶(GST26)、28kDa谷胱甘肽-S-转移酶(GST28)。26kDa谷胱甘肽-S-转移酶和副肌球蛋白部分片段融合基因克隆到真核细胞表达载体且免疫实验动物。已知核酸疫苗可诱     

血吸虫28kDa谷胱甘肽S转移酶的种间变异

曼氏血吸虫28kDa谷胱甘肽S转移酶(Sm 28GST)是一种侯选的疫苗抗原,但血吸虫种间异源抗原交叉保护的可能性尚未完全了解。克隆不同种血吸虫28kDa GST并评价其种缘关系是必要的。选用牛血吸虫Salamance株(Sb)、埃及血吸虫Libore株(Sh)、曼氏血吸虫波多黎各株(Sm)和日本血吸虫大陆株(Sj)作为实验材料,用谷胱甘肽琼脂糖柱纯化各种成虫抽提液中的GST。重组体Sm 28GST在大肠杆菌表达并经亲     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶在大肠杆菌的温控高效表达及鉴定

以重组质粒pSj26为模板，PCR扩增出编码26kDa谷胱甘肽S-转移酶（Sj26GST）的cDNA，双酶切后克隆到pBV220DNA，构建pBV220-Sj26温控表达载体，CaCl2法转化大肠杆菌DH5α，氨苄青霉素筛选转化子，酶切图谱分析及PCR鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在30℃培养，42℃温控表达Sj26。测定表达产物GST活性，并用rSj26抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Dot－ELISA和Westernblot检测其抗原性。实验结果表明PBV220－Sj26温控表达产物具有GST酶活性。SDS－PAGE经考马斯亮蓝染色可见染色较深的26kDa条带，该条带占菌体总蛋白的33．83％。抗rSj26的免疫鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清均可识别26kDa条带。实验结果表明日本血吸虫26kDa条带能在大肠杆菌温控高效表达。     

抗日本血吸虫蛋白质“靶抗原”单克隆抗体的研究

在成功地抽提出国际公认在诱导血吸虫保护性免疫力上起重要作用的24-26kD和90kD蛋白质“靶抗原”的基础上,进一步应用上述抗原免疫小鼠,经融合试验及克隆化获得分泌抗日本血吸虫蛋白质“靶抗原”单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞29株,其中IgG类16株(IgG_1 7株,IgG_(2a) 5株,IgG_(2b) 1株,IgG_3 3株),IgM 13株。以后,又从McAb的定位研究、McAb体外ADCC对血吸虫童虫的杀伤效应、McAb在不同血吸虫抗原中的识别位点(抗原结合位)等方面,对报获的McAb进行了研究。     

日本血吸虫成虫cDNA文库基因筛选结果的分析

分离和鉴定抗原候选基因是日本血吸虫疫苗研制的主要内容,目前常用的办法是通过构建日本血吸虫生活史某一阶段的 cDNA 文库,采用核酸探针或抗体探针,从 cDNA 文库中筛选出特异性抗原基因,或通过 EST 技术利用生物信息学方法得到所需 cDNA 序列,进而可以在体外表达抗原性蛋白质,作进一步的研究。本文就日本血吸虫成虫cDNA 文库的筛选结果作一综述。     

原血吸虫病流行区人群GST抗体水平调查报告

血吸虫疫苗研究进展表明,日本血吸虫成虫含有丰富的谷光甘肽S-转移酶(GST).用重组26kDa GST抗原免疫小鼠及猪诱导保护性免疫力已取得成功.为了解血吸虫病流行区人群自然感染血吸虫后体内GST抗体水平情况及杀虫治疗多年后抗体的留存情况,作者对已消灭血吸虫病多年的本地原血吸虫病流行区3个村及非流行区1个村人群用酶联免疫吸附法(ELISA)作了GST抗体水平调查,并以IHA作对照.     

日本血吸虫GST、Sj23及GST-Sj23 RNA颗粒抗原的制备及表达研究

目的制备日本血吸虫自杀性RNA颗粒抗原,并研究其在真核细胞内的表达,以期探讨新型抗原的研制方法,为制备抗血吸虫疫苗奠定基础。方法将编码日本血吸虫主要抗原GST、Sj23及编码两种抗原的嵌合基因(GST-Sj23)分别克隆到自杀性RNA疫苗载体SFV3.spider内,以体外转录法制备编码上述三种抗原的mRNA。同法合成编码SFV病毒表膜蛋白质(S蛋白质和C蛋白质)的mRNA,然后将编码上述三种抗原的mRNA分别与编码病毒膜蛋白质的mRNA混合,以电穿孔法导入BHK21细胞,制备含有日本血吸虫GST、Sj23抗原及GST-Sj23嵌合体抗原mRNA的假病毒颗粒。最后,对制备出的假病毒颗粒进行真核细胞感染实验,以间接免疫荧光法验证上述抗原的真核表达情况。结果三种RNA颗粒对BHK21细胞均具有很好的感染性,所编码的蛋白质在BHK21细胞内鉴定高效表达。     

血吸虫谷胱甘肽S-转移酶候选疫苗的研究现状

血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲的76个国家和地区.谷胱甘肽S-转移酶(GST)是WHO推荐使用的6种血吸虫疫苗候选抗原之一,用GST免疫小鼠、大鼠、牛或猴均可产生一定的保护力,提示GST是一种有希望的候选疫苗.该文综述了日本血吸虫Sj26GST和Sj28GST、曼氏血吸虫Sm28GST和埃及血吸虫Sh28GST等的研究现状.     

日本血吸虫发育过程中副肌球蛋白的免疫定位

在血吸虫疫苗研究中,副肌球蛋白(一种97kDa蛋白)被认为是一种有效的疫苗靶抗原。本文对日本血吸虫各发育阶段副肌球蛋白的免疫定位进行了研究。 各期日本血吸虫分别取自湖北钉螺和感染血吸虫的BALB/c小鼠。压螺收集菲律宾株尾蚴,用尾蚴逸出法收集中国株尾蚴;肺期童虫从感染3天后的小鼠肺部取得;感染40     

日本血吸虫22.6kDa重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究

目的:研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa 抗原作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能,并探讨Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白作为复合疫苗的可能性。方法:用亲和层析法制备Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白。将这两种蛋白分别免疫BALB/c小鼠后进行攻击感染试验。结果:Sj22.6 重组蛋白和Sj22.6/Sj26 GST 融合蛋白分别可诱导小鼠产生32.1% (P< 0.005) 和34.9% (P< 0.02)的成虫减虫率, 28.4% (P< 0.02)和45.1% (P< 0.005)的总减卵率。结论:rSj22.6 与Sj22.6/Sj26 GST融合蛋白均有疫苗应用价值     

日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白对小鼠免疫保护性的初步研究

目的 研究日本血吸虫（中国大陆株）线粒体相关蛋白（rSj338/26GST)对小鼠的免疫保护性，预测其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能。方法 将编码日本血吸虫线粒体相关蛋白的cDNA经PCR扩增后亚克隆人载体质粒pGEX-6p-1进行表达，并用表达的重组抗原的融合蛋白免疫BABL／c小鼠。结果 与对照组相比，rSj338/26GST重组蛋白免疫小鼠获得了32．3％的减虫率及46．5％肝总减卵率；与Sj26GST免疫组相比，rSj338抗原可能使小鼠获得22．5％的减虫率及30．0％的肝总 减卵率。结论 证明重组的日本血吸虫线粒体相关蛋白(rSj338/26GST及rSj338)可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力，可望成为新的疫苗候选分子。     

血吸虫糖蛋白研究进展

有关血吸虫疫苗的研究迄今已有70余年的历史.90 年代中期WHO/TDR 选定了6 种曼氏血吸虫候选疫苗分子,它们是28kDaGST、97kDa 副肌球蛋白、62kDaIrv-5、28kDa磷酸丙糖异构酶(TPI)、23kDa表膜抗原和14kDa脂肪酸结合蛋白.但这些候选疫苗分子单独免疫尚不足诱导40%以上的免疫保护力.因而,对血吸虫疫苗保护性抗原及其效应机制的研究还需要进行大量的基础性工作.糖蛋白是血吸虫主要抗原物质,大量存在于童虫和虫卵阶段,在血吸虫免疫应答及免疫调节方面起着十分重要的作用.现已证明,血吸虫糖蛋白不仅可以诱导保护性抗体,亦可诱导封闭性抗体的产生[1].因此,研究血吸虫糖蛋白的结构、功能及免疫机制,可为血吸虫疫苗的发展提供新的策略.本文就血吸虫糖蛋白及其在疫苗研究中的进展概述如下.     

日本血吸虫线粒体相关蛋白基因原核表达产物的纯化

目的建立日本血吸虫线粒体相关蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物.方法菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后,用分子筛层析纯化蛋白质并使之复性,再用Western-blot方法对纯化蛋白的抗原性进行分析.经动物免疫后采用dot-ELISA方法检测兔血清中抗体滴度,分析纯化蛋白的抗原活性.结果经分子筛纯化后的融合蛋白rSj338/26GST经SDS-PAGE电泳鉴定达电泳纯,Westernblot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及rSj338/26GST免疫兔血清识别.dot-ELISA法检测结果表明经分子筛纯化并复性的rSj338/26GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高,为1∶51200.结论纯化后的融合蛋白rSj338/26GST具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子进一步深入研究.     

日本血吸虫成虫38kDa天然分子抗原的分离纯化与免疫保护性的研究

目的研究日本血吸虫成虫可溶性抗原38kDa（SjAWA38kDa）的动物保护作用，并对SjAWA38kDa作为抗日本血吸虫病分子疫苗的可行性进行评估。方法用SDS-PAGE电泳、切胶、电洗脱、超滤等方法分离纯化SjAWA38kDa．继而用SjAWA38kDa免疫昆明小鼠，然后进行尾蚴攻击感染（40尾／只），进行减虫率和减卵率研究。结果SjAWA38kDa天然蛋白质分子能刺激机体产生抗日本血吸虫的作用，其减虫率为33．8％，减卵率为51．7％，有统计学意义（P〈0．05）。结论SjAWA38kDa分子抗原具有刺激机体产生抗日本血吸虫病的免疫保护作用，可以作为抗日本血吸虫病分子疫苗研究的靶标。     

佐剂对血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白诱导体液免疫的影响

许多研究表明人类对血吸虫的免疫力是通过重复感染逐渐获得的。因此,抗血吸虫疫苗从理论上说是可行的。由于人类使用活疫苗以及制备足够数量减毒活疫苗的困难,使非活性或修饰的抗原疫苗备受欢迎。研究表明日本血吸虫和曼氏血吸虫谷胱甘肽巯基转移酶(GST)是很有潜力的疫苗抗原。曼     

抗日本血吸虫生殖抗原SIEA 26-28 ku组分的质谱分析

目的 筛选确定抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA26-28 ku的编码基因. 方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA),选择SIEA 26-28 ku免疫血清识别信号较强的SIEA-2D蛋白质斑点(65～73号)采样,消化处理后进行质谱与生物学信息分析. 结果 从SIEA-2D图谱上共获得1 037个蛋白质斑点;通过MALDI-TOF-MS对其进行肽指纹图谱分析后获得了7张肽指纹图谱.通过PeptIdent软件检索SWISS-PROT数据库,发现有意义的血吸虫同源蛋白质11个,这些同源蛋白质部分与细胞代谢或蛋白质合成代谢相关,部分与核苷酸代谢有关,其中编号为SIEA-2D66为日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT),SIEA-2D71为琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白(SDISP),SIEA-2D73为谷胱甘肽-S-转移酶(GST),其同源程度分别为37.2%、18.7%和22.9%. 结论 初步获得与抗日本血吸虫生殖功能抗原SIEA 26～28 ku相关的编码基因HGPRT、SDISP和GST.     

日本血吸虫(中国大陆株)基因工程疫苗的研究

本文报道应用PCR技术或RT－PCR技术从日本血吸虫成虫cDNA文库或成虫mRNA中扩增到Sj28GST、C－Sjparamyosin、H-Sj23、Sj14、Sj22．6和Sj．TPI6个编码日本血吸虫中国大陆株抗原的基因，并把它们克隆入适合载体中，在大肠杆菌系统和蚕核型多角体病毒（BmNPV）系统中进行表达．免疫学检测证明这6种基因重组抗原都具有较好的抗原性。我们进一步应用4种比较成熟的基因重组抗原Sj26GST、Sj28GST、C－Sj．paramyosin和H－Sj23进行3批绵羊试验和1批黄、水牛田间试验，评估这几种重组抗原在绵羊和黄、水牛中的免疫保护效果，rSj26GST和rSj28GST分别获得62．1％和50.4％－68.5％的显著保护；n－paramyosin获得42.9％－55．3％、r－C－paramyosin获得44．2％－47．1％的显著保护，r－H－Sj23为51．2％－66．1％的显著保护．各组免疫后的粪便虫卵数和组织虫卵数也有不同程度的减少．用r－C－Sjparamyosin、r－Sj28GST和r－H－Sj23免疫典、水牛在血吸虫重疫区田间试验的结果表明，减虫率水牛高于黄牛，显示上述试验的3种日本血吸虫重组分子抗原有希望成为家畜日本血吸虫病的候选疫苗抗原．