天然水蛭素对人微血管再生作用的初步研究

目的研究天然水蛭素对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMVECs)增殖的影响及其诱导血管再生的机制。方法取HMVECs接种至Matrigel基质胶培养24 h,体外建立三维培养模型,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况。然后将细胞三维培养模型随机分为不同浓度天然水蛭素培养组(1、4、7 ATU/mL组)以及单纯含10%FBS的DMEM培养基培养组(对照组)。各组细胞三维培养模型加入对应培养基后,培养24、48、72 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖情况;培养24 h行成管实验并采用免疫荧光染色法测定细胞VEGF及Notch1表达水平。结果细胞三维培养观察示,HMVECs于基质胶上贴附良好,24 h时完全形成管腔样结构。CCK-8检测示,各时间点1、4 ATU/mL组A值均高于对照组(P0.05),其中4 ATU/mL组最高;而7 ATU/mL组A值显著低于对照组以及1、4 ATU/mL组(P0.05)。细胞成管实验示,1、4 ATU/mL组成管数量较对照组及7 ATU/mL组明显增多,且4 ATU/mL组多于1 ATU/mL组,差异有统计学意义(P0.05);7 ATU/mL组与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。免疫荧光染色示,与对照组比较,1、4 ATU/mL组Notch1表达量增高,7 ATU/mL组降低;其中4、7 ATU/mL组与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。1、4、7 ATU/mL组VEGF表达量均较对照组增高,4 ATU/mL组高于1、7 ATU/mL组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论低、中浓度天然水蛭素可促进HMVECs增殖使血管再生,高浓度天然水蛭素则对HMVECs增殖及血管再生起抑制作用;其作用机制可能与VEGF-Notch信号通路有关。     

天然水蛭素对大鼠缺血皮瓣血管生成作用的Micro-CT观察

目的通过Micro-CT及三维重建技术观察天然水蛭素对大鼠缺血皮瓣血管生成的影响。方法选取32只成年SD大鼠,在其背部制备一8.0cm×1.8cm大小的缺血皮瓣模型,然后随机分为水蛭素组和对照组(n=16)。水蛭素组术后即刻和术后3 d内每天皮下注射天然水蛭素0.3 mL(含天然水蛭素6 ATU),对照组皮下注射等量生理盐水。术后6 d,大体观察皮瓣成活情况并测定皮瓣成活率,取材行HE染色观察皮瓣组织学变化,行Micro-CT三维重建观察并测量皮瓣血管容积、长度及数量。结果术后两组大鼠均存活至实验完成,无感染发生。术后6 d,两组皮瓣远端均发生不同程度坏死,水蛭素组皮瓣成活率为72.11%±8.97%,显著高于对照组的58.94%±4.02%,差异有统计学意义(t=3.280,P=0.008)。组织学观察示水蛭素组较对照组组织结构层次更清楚,有较多微血管生成,炎症反应及炎症细胞浸润更轻。Micro-CT三维重建示水蛭素组皮瓣血管更多、更加密集;血管容积、长度及数量均显著大于对照组(P<0.05)。结论天然水蛭素可减轻组织炎症反应、促进缺血皮瓣血管的新生与再通,从而提高皮瓣成活率。     

重组水蛭素对大鼠撕脱皮瓣存活的影响

目的 探讨重组水蛭素对撕脱皮瓣的保护作用及其在临床治疗撕脱皮瓣的应用前景.方法 将108只SD大鼠随机分为重组水蛭素组（A组）、低分子肝素组（B组）、生理盐水组（C组,对照组）,并形成撕脱皮瓣后原位缝合.术后即刻、12 h、24 h、48 h,给予皮瓣蒂部、距蒂部2 cm和4 cm3等分点皮下注射重组水蛭素、低分子肝素、生理盐水,于术后12 h、1d、3d、5d、7d,分别检测皮瓣远端组织内P选择素和血管内皮细胞生长因子（VEGF）含量,病理切片观察皮瓣远端组织毛细血管内炎性细胞聚集及微血栓形成情况,术后14d计算皮瓣存活率.结果 A组P选择素含量比B组、C组增加不明显,差异具有统计学意义（P＜0.05）,A组VEGF含量比B组、C组明显增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）;术后14 d皮瓣存活率A组明显高于B组（P＜0.05）和C组（P＜0.01）,差异具有统计学意义.结论 局部注射重组水蛭素能有效抑制P选择素的生成,减少炎性细胞的聚集,阻断微血栓的形成,改善撕脱皮瓣的局部缺血、缺氧状态;减弱内皮细胞的损伤,促进VEGF的表达,刺激新生毛细血管增生,提高撕脱皮瓣的存活率.     

水蛭素通过上调VEGF/Notch1信号通路促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

摘要：目的 观察水蛭素对人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）成骨分化的影响。方法 BMSCs细胞分为正常培养的对照组、成骨诱导的诱导组以及加入不同浓度（1、10、20 ATU/mL）处理的水蛭素组。MTT检测细胞增值并筛选水蛭素最适作用浓度。流式细胞仪检测细胞凋亡。RT-PCR和Western blot分别检测成骨基因Runx2、Osterix、COL1A1的mRNA和蛋白表达。BCIP/NBT染色法检测细胞中的碱性磷酸酶水平。茜素红染色检测矿化结节。检测VEGF、Notch1、Jagged1和CBF1的mRNA和蛋白表达。结果 骨髓间充质干细胞经成骨诱导细胞增殖显著增加,中高浓度的水蛭素可以不同程度促进成骨诱导的BMSCs细胞增殖（P＜0.05）,并筛选出20 ATU/mL作为水蛭素的使用浓度。水蛭素抑制成骨诱导的BMSCs细胞凋亡,上调Runx2、Osterix、COL1A1的mRNA和蛋白表达,增加碱性磷酸酶水平,促进细胞中矿化结节的生成,并提升BMSCs细胞中VEGF、Notch1、Jagged1和CBF1的表达（P＜0.05）。结论 水蛭素可能通过上调VEGF/Notch1信号通路促进人骨髓间充质干细胞成骨分化。     

天然及重组水蛭素对大鼠随意皮瓣中ET和TXB2的影响

目的 通过检测大鼠随意皮瓣中ET和TXB2的含量,探讨局部应用天然及重组的水蛭素对随意皮瓣静脉淤血的影响.方法 自2009年4月至2009年8月,选取健康的Wistrar大鼠21只,随机分为A、B、C 3个组,于所有大鼠的背部设计并制作超长随意皮瓣淤血模型后,A组局部注射天然水蛭素;B组局部注射重组水蛭素;对照C组局部注射生理盐水.于皮瓣远端切取组织块,检测内皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)的含量.计算各组皮瓣的成活率,取成活皮瓣组织行常规HE染色后计数炎性细胞和微血管的数量.结果 各组中ET-1的含量:注射后第5天和第7天,C组中ET-1的含量高于A、B两组,其差异有统计学意义(P<0.05).各组中TXB2的含量:注射后第3天和第5天,C组中TKB2的含量高于A、B两组,其差异有统计学意义(P<0.05).A组中TXB2的含量高于B组,但两组比较其差异无统计学意义(P>0.05).结论 局部应用天然及重组的水蛭素使移植后的大鼠随意皮瓣中ET、TXB2的含量降低.由此推断,天然及重组的水蛭素对移植后随意皮瓣的静脉淤血可有改善作用.     

H型微血管在骨形成中的作用机制和研究进展

骨形成和血管新生是一个相互耦联的过程。最近在鼠科动物骨骼中新发现H型微血管(CD31hiEmcnhi),它可以调节骨骼血管密度,维持血管周围骨祖细胞活性,耦联血管新生和骨形成。Notch-Dll4信号可能是血管-成骨耦联的关键信号通路,激活Notch信号可促进H型微血管内皮细胞增殖和血管生成。H型微血管同时可分泌Noggin蛋白,调节骨祖细胞活性,恢复软骨细胞功能,重建骨小梁。     

天然水蛭素对猪随意型皮瓣静脉淤血影响的实验研究

目的 探讨局部应用天然水蛭素对猪随意型皮瓣移植后静脉淤血的影响. 方法 6～8月龄广西巴马小型猪3只,雌雄不限,体重10～15 kg.于每只猪背两侧制备6个大小为14 cm×4 cm的随意型皮瓣,共18个皮瓣.根据术后注射药物不同,皮瓣随机分为3组(n=6).术后即刻、1、2、3 d,A组:局部注射3 mL生理盐水,作为对照组;B组:局部注射3 mL天然水蛭素20 ATU:C组:局部注射3 mL天然水蛭素40 ATU.术后1、10 d行大体观察,1、7d行组织学观察,3、7 d测定湿重/干重比值,5 d测定皮瓣表面温度,7 d皮瓣局部血流彩色超声检测,12 d测定皮瓣成活率. 结果 术后即刻,3组皮瓣均出现远端2/3范围内轻度淤血,差异无统计学意义(P＞O.05):术后1 d,A组皮瓣淤血长度明显长于B、C组(P＜0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后10 d,A、C组皮瓣坏死长度明显长于B组,差异有统计学意义(P＜0.05),A、C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).组织学观察:术后1 d,B组真皮内毛细血管及微静脉红细胞淤滞现象较A组明显减轻;术后7 d,B组皮下胶原及肉芽组织增生明显优于A组.术后3 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.94 4±0.14、3.43±0.14、3.60±0.19,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);术后7 d,A、B、C组湿重/干重比值分别为3.61±0.11、3.08±0.13、3.34±0.21,A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后5 d,A、B、C组皮瓣表面温度分别为(36.64±0.70)、(38.61±0.42)和(37.50±0.46)℃,A组与B、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05),B、C组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).术后7 d,皮瓣局部血流彩色超声检测示A组血流信号稀少,B组见较完整的动静脉回流信号,可见垂直于皮肤的动脉穿支,C组可见动脉血流信号.术后12 d,A、B、C组皮瓣成活率分别为45%4±7%、67%±4%、52%±4%,B、C组与A组比较,筹异有统计学意义(P＜0.05),B、C组问比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 局部应用天然水蛭素对猪随意犁皮瓣移植后静脉淤血有较明显的改善作用.     

水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响

目的 探讨水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响,为临床应用水蛭素治疗增生性瘢痕提供理论基础.方法 用消化法进行人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的体外培养,用流式细胞仪检测不同浓度水蛭素对不同来源的成纤维细胞细胞周期的影响,用Western印迹法检测部分与细胞周期相关的蛋白（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27及细胞周期蛋白E（cyclin-E）的表达.结果 随着水蛭素浓度的增加,人体正常皮肤及增生性瘢痕组织成纤维细胞G1期细胞增加而S期细胞则减少,周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27的表达上调,细胞周期蛋白E的表达下调.结论 水蛭素通过影响细胞周期调控蛋白的表达,使正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的周期分布发生改变,导致细胞周期G1期阻滞（G1 phase arrest）,从而抑制成纤维细胞增生,因此水蛭素对于瘢痕的防治有一定的作用.     

水蛭素对大鼠随意型皮瓣存活的影响

目的 研究水蛭素对大鼠背部超长随意型皮瓣存活的影响.方法 采用改良大鼠"McFarlane flap"模型,将实验动物随机分为水蛭素实验组(水蛭素组)和生理盐水对照组(生理盐水组),水蛭素组局部注射3 ml(30 ATU)水蛭素,生理盐水组则注射3 ml生理盐水,连续注射7 d后分别检测两组皮瓣的存活面积百分比,并取皮瓣近、中、远段(即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区)组织做光镜观察,免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)的表达.结果 术后7 d,水蛭素组皮瓣的存活面积百分比为(69.52±3.23)%,生理盐水组为(50.36±2.37)%,水蛭素组显著高于生理盐水组,差异有统计学意义(P＜0.01);水蛭素组皮瓣坏死与存活并存的Ⅱ区,组织水肿、炎性细胞浸润情况明显比生理盐水组轻.水蛭素和生理盐水组皮瓣Ⅱ区的新生血管计数分别为(28.24±4.23)个/mm2和(17.45±5.43)个/mm2,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).通过计算累积吸光度A值(IA),得到水蛭素和生理盐水组VEGF阳性量分别为9262.23±896.99和4938.05±1623.67,bFGF阳性量分别为5122.83±1176.12和2779.45±472.00,水蛭组VEGF及bFGF的表达均高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 水蛭素可能通过体内一系列复杂的调控通路,最终增加VEGF、bFGF表达,促进皮瓣新生血管增生,改善皮瓣血供,减轻炎性反应,降低缺血皮瓣的坏死率,从而提高大鼠随意型皮瓣的存活.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Hirudin on random skin flap survival in rats.Methods 24 SD rats were randomly divided into control group and experimental group. The "McFarlane flap(3 cm ×9 cm)" rat models were established on the rat dorsum. 3 ml Hirudin (30 ATU) was injected into the flap in the experimental group, while 3 ml saline in the control group. The injection was performed for 7 days. The flap survival area in the two groups was measured. The tissue samples were taken from proximal( Ⅰ ), middle( Ⅱ ) and distal( Ⅲ ) portions of flaps for histologic study. The VEGF and bFGF expression was also detected with immunohistochemistry method. Results 7 days after operation, the flap survival rate was ( 69.52 + 3.23 )% in the experimental group, while ( 50.36 ± 2.37 )% in control group,showing a significant difference between the two groups ( P ＜ 0.01 ). In the middle portion, tissue edema and infiltration of neutrophils in experimental group was markedly slighter than that in control group. The VEGF and bFGF expression and neovascularization was enhanced markedly in experimental group.Conclusions Hirudin can increase the survival of random pattern skin flaps. It may increase the VEGF,bFGF expression through a series of complex regulatory pathway. Then flap neovascularization is promoted and the flap blood supply is increased.     

雪旺细胞调控骨组织再生的研究进展北大核心CSCD

目的对雪旺细胞调控骨组织再生的研究进展进行综述。方法广泛查阅国内外雪旺细胞对组织再生研究的相关文献,从雪旺细胞的骨再生作用、多样化促进组织再生能力、旁分泌神经因子网络的营养效应和其在骨组织工程学中的应用等多个方面进行总结分析。结果作为周围神经系统的组成部分,雪旺细胞通过旁分泌效应,调控多种神经营养因子和生长因子的表达,从而有效参与到了血管和骨骼等非神经组织的再生分化过程,体现了其具有神经-血管-骨整合的营养效应。结论充分利用雪旺细胞的神经、血管和骨骼组织多能化再生效应,可为组织工程骨的临床应用提供新思路。     

水蛭素对瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶作用的实验研究

目的:探讨水蛭素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞基质金属蛋白酶(mat r i x met al l opr ot ei nas es,MMPs)表达水平的影响。方法:取10例烧伤愈合后6个月内瘢痕挛缩需手术治疗的患者的瘢痕组织,采用组织块法分离培养增生性瘢痕成纤维细胞。取第4～7代细胞实验,加入0、1、10、50U/ml的水蛭素干预。观察加药后24h、48h成纤维细胞形态学变化,利用MTT(四甲基偶氮唑蓝)比色法及酶联免疫吸附试验(Enzyme-l i nked i mmunos or bent as s ay,ELI SA)检测水蛭素对增生性瘢痕成纤维细胞(hypert rophi c scar fi brobl ast,HSFB)及基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的作用。结果:①1、10、50U/ml组水蛭素对HSFB均有抑制作用(P<0.05),以50U/ml作用最明显(24h、48h抑制率分别为14.75%、15.42%);②水蛭素作用成纤维细胞24h后MMP-2、MMP-9表达含量均增加,分别以1U/ml、50U/ml作用最明显,差异有统计学意义(P<0.05);48h后MMP-2表达降低,MMP-9表达有增加但无意义。结论:水蛭素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,能促进增生性瘢痕成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)有利于细胞外基质降解减少沉积。     

重组双功能水蛭素的抗凝防栓作用

目的探讨新药重组双功能水蛭素(RGDHirudin)的抗凝防栓作用。方法新西兰大白兔30只,行颈动脉吻合术后注射生理盐水、GPⅡb/Ⅲa(血小板表面糖蛋白)单抗、野生型水蛭素和RGDHirudin,比较各组动脉造影、术后病理以及血液学指标的差异。结果RGDHirudin(0.2mg/kg)给药1h后活化部分凝血活酶时间(aPTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)分别延长至(32.92±2.05)s、(22.98±1.56)s、(45.44±9.40)s,血小板最大聚集率降至(0.29±9.68)%;其通畅率与野生水蛭素(0.5mg/kg体重)一致(60%～100%),并优于抗GPⅡb/Ⅲa单抗(0.2mg/kg体重,40%)。结论RGDHirudin具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重活性,且治疗剂量较小。     

局部应用水蛭素对扩张皮瓣静脉淤血的防治

目的探讨局部应用水蛭素对扩张皮瓣静脉淤血的防治作用.方法以白色小型家猪为实验对象,将其模拟成扩张皮肤转移术后的淤血皮瓣,随机分成三组,A组(局部注射天然水蛭素,0.5 U/皮瓣)、B组(局部注射天然水蛭素,1 U/皮瓣)和对照组.进行大体观察、病理切片和ET-1、NO、TXB2的测定.结果用药组(A组与B组间差异无显著意义)术后与对照组比较淤血消散快.光镜下用药组与对照组微血管淤血同期比较有明显差异.用药组的ET-1、NO、TXB2与对照组同期比较差异有显著意义(P＜0.05).结论水蛭素的局部应用对扩张皮瓣静脉淤血有明显的防治作用.     

糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨糖皮质激素通过PI3K-Akt-mTOR信号通路诱导股骨头骨微血管内皮细胞凋亡的机制。方法分离培养人骨微血管内皮细胞,取第3代细胞,给予不同剂量的氢化可的松处理24 h,浓度分别为0.1 mg/mL（低剂量）、0.2 mg/mL（中剂量）和0.3 mg/mL（高剂量）,Western blot法检测PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及其磷酸化形式的表达,AnnexinV/PI染色的流式细胞检测细胞凋亡。结果 Western blot电泳条带灰度值分析提示高浓度氢化可的松可以使该通路关键蛋白表达下降。与对照组相比,0.1 mg/mL、0.2 mg/mL和0.3 mg/mL三组的p-Akt表达分别下降60.72%、61.91%、100.00%（P＜0.01）。p-PI3K表达分别下降12.95%、36.26%、100.00%（P＜0.01）。p-mTOR表达分别下降22.95%、41.28%、57.11%（P＜0.01）。流式细胞检测显示正常对照组的早期凋亡、晚期凋亡/坏死以及活细胞比例分别为16.08%、30.86%和52.52%;激素损伤组这一比例分别为21.67%、37.2%、39.85%。激素损伤+PI3K抑制剂组这一比例分别为19.05%、37.9%和41.26%。统计学分析显示细胞比例组间差异均具有统计学意义（P＜0.001）。结论 糖皮质激素可以显著抑制人股骨头骨微血管内皮细胞内PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白的表达,从而诱导股骨头骨微血管内皮细胞发生凋亡和坏死。     

重组双功能水蛭素抗凝防栓作用的实验研究

目的研究注射用重组双功能水蛭素(RGD-Hirudin)抗凝防栓的作用。方法选用36只SD大鼠制备股动脉切断吻合模型,随机分成6组,每组6只。1．生理盐水(对照)组。2．肝素钠组(150U/ kg~(-1)·d~(-1))。3．野生型水蛭素组(0．5mg/kg~(-1)·d~(-1))。4．重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg~(-1)·d~(-1))。5．重组双功能水蛭素组(0．2mg/kg~(-1)·d~(-1))。6．重组双功能水蛭素组(O．5ms/kg~(-1)·d~(-1))。术前30 min、术后60 min和术后72 h心脏取血,测定血小板聚集率、aPTT、PT、TT和血浆纤维蛋白原的含量。术后3 d,切取吻合口远、近端血管5mm,作病理切片分析。结果重组双功能水蛭素组(0．1mg/kg~(-1)·d~(-1))的血管通畅率与野生型水蛭素组的疗效相同,优于肝素钠组,随着剂量的加大,治疗效果越好,并有明显的量效关系。血液学指标证明：重组双功能水蛭素能抑制血小板聚集,显著延长aPTT、PT和TT,对血浆纤维蛋白原几乎没有影响。结论重组双功能水蛭素具有抗凝血酶和抗血小板聚集双重活性,抗凝、防栓作用强。与野生型水蛭素相比,产生相同治疗效果所需剂量小,疗效优于肝素钠和野生型水蛭素。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠残肾模型微血管的影响

目的 探讨大鼠残肾模型中血管紧张素Ⅱ与肾脏新生血管形成间的关系。方法 分别用缬沙坦、氨氯地平或生理盐水治疗大鼠残肾模型12周,测定24h尿蛋白排泄量、血压、BUN和Scr;评估病理切片肾小球硬化和肾小管间质损害程度;采用免疫组化染色技术,分析浸润肾组织巨噬细胞数、毛细血管密度和增生内皮细胞数。结果 缬沙坦和氨氯地平可显著减少残肾模型尿蛋白排泄量、降低血压、改善肾功能、抑制巨噬细胞浸润、减轻肾小球硬化和肾间质纤维化(P<0.05),但缬沙坦组尿蛋白显著少于氨氯地平组(P<0.05)。残肾模型肾小球毛细血管指数(GCI)和肾小管周毛细血管指数(PCI)均显著低于假手术组(P<0.01)。缬沙坦或氨氯地平治疗均显著增加肾小球和肾间质毛细血管数目(P<0.05),而缬沙坦组显著高于氨氯地平组(P<0.05)。缬沙坦或氨氯地平组肾小球和肾间质增生内皮细胞数分别高于生理盐水对照组(P<0.01),而缬沙坦组显著高于氨氯地平组(P<0.01)。结论 缬沙坦能改善大鼠残肾模型新生血管形成和增加毛细血管密度,血管紧张素Ⅱ可能通过直接抑制新生血管形成和升高血压间接加速毛细血管毁损而加重肾缺血和肾损害。     

脂氧素A4改善肺微血管内皮细胞炎症损伤的体外实验研究

目的 观察脂氧素A4（lipoxin A4,LXA4）对肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）炎症损伤的治疗作用。方法 体外培养人PMVECs,第一阶段：分为空白对照组（完全培养基培养）和TNF-α组（分别以5、10、20 ng/mL共培养24 h）,采用MTT法检测各组PMVECs存活率,用针头式滤器检测TNF-α损伤前后PMVECs的单层通透性。第二阶段：分为TNF-α组（20 ng/mL处理24 h）和LXA4干预组（1、10、100 μg/L处理24 h）,检测PMVECs存活率和单层通透性,RT-PCR检测PMVECs IL-1β、VCAM-1、NF-κB p65 mRNA的表达。结果 （1）5、10、20 ng/mL TNF-α组的PMVECs存活率分别是（76.39±9.3）%、（61.87±11.7）%、（49.54±12.6）%,与空白对照组比较,均显著降低（P< 0.05）,而经1、10、100 μg/L三种浓度LXA4干预后,20 ng/mL TNF-α组的PMVECs存活率均得到提高,其中100 μg/LLXA4干预后的PMVECs存活率为（82.32±8.7）%,有统计学差异（P < 0.01）;（2）与损伤前[（0.021±0.011）mL/min·cm2·kPa]比较,TNF-α处理60、90 min后PMVECs单层通透系数（Kf值）显著增高[（0.067±0.007）和（0.096±0.007）mL/min·cm2·kPa,P< 0.05）],而LXA4干预60、90 min时Kf值则显著降低[（0.039±0.008）和（0.058±0.011） mL/min·cm2·kPa,P< 0.05）];（3）与对照组比较,TNF-α组的IL-1β、VCAM-1、NF-κB p65 mRNA的表达水平均有显著升高（P < 0.01或P < 0.05）,而LXA4干预组显著改善（P< 0.01或P< 0.05）。结论 TNF-α能引起PMVECs的急性炎症损伤,LXA4对TNF-α引起的PMVECs急性炎症损伤有改善作用。     

小鼠脊髓背根神经节细胞与人微血管内皮细胞共培养对细胞增殖的影响

目的 观察小鼠脊髓背根神经节细胞(DRGC)与人微血管内皮细胞(HMVEC)共培养对细胞增殖的影响,并探讨其机制.方法 分离培养小鼠DRGC,并与HMVEC进行共培养,设为DRGC组、HMVEC组、DRGC+ HMVEC组.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1(Cyclin Dl) mRNA及蛋白的表达.结果 细胞培养24h后,DRGC+ HMVEC组相对于DRGC组和HMVEC组的细胞增殖率分别为136.29％和137.45％,细胞增殖能力显著提高(P＜0.05).VEGF、NGF、PCNA和Cyclin Dl mRNA和蛋白的表达在DRGC+HMVEC组中最高,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 共培养DRGC和HMVEC能够促进VEGF和NGF的表达,并可能通过调控PCNA和Cyclin D1的表达促进共培养体系细胞增殖能力.