胰岛素对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响及机制

目的:探讨胰岛素对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:不同浓度的胰岛素(5μIU/m L、10μIU/m L、20μIU/m L、40μIU/m L、80μIU/m L)处理人肝癌Hep G2细胞24h,同时设置对照组,CCK8检测细胞增殖情况; 80μIU/m L胰岛素处理细胞24h,Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡; Western blot检测凋亡蛋白Cleaved caspase 3、侵袭相关蛋白(MMP-2)和MMP-9、PI3K/AKT信号通路PI3K和p AKT的蛋白表达。结果:随着胰岛素浓度的升高,肝癌细胞增殖能力增强,与对照组比较,差异具有统计学意义(P 0. 05),选择80μIU/m L胰岛素进行后续侵袭、凋亡及蛋白表达实验研究;与对照组比较,胰岛素组细胞侵袭数显著升高,细胞凋亡率显著降低; Cleaved caspase 3蛋白表达显著下调,MMP-2、MMP-9、PI3K、p AKT蛋白表达显著上调(P 0. 05)。结论:胰岛素可促进肝癌细胞增殖和侵袭能力,抑制细胞的凋亡,其功能与Cleaved caspase 3、MMP-2、MMP-9蛋白表达及PI3K/AKT信号通路密切相关。     

prohibitin基因在胃癌中的表达及诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨siRNA介导抗增殖蛋白prohibitin(PHB)基因沉默对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。[方法]Western blot法检测胃癌组织及相应的癌旁组织中prohibitin的蛋白表达;NC-siRNA和prohibitin-siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何的siRNA作为空白对照组,48h后检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。[结果]prohibitin在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.01),转染prohibitin-siRNA后能显著降低prohibitin的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,prohibitin-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白表达显著下调(P0.01)。[结论]靶向prohibitin-siRNA干扰可有效的降低胃癌SGC-7901细胞中prohibitin的表达,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

PAX6通过PI3K/AKT信号通路抑制mESCs增殖的研究北大核心CSCD

目的探讨PAX6对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)增殖的影响及其机制。方法用过表达PAX6慢病毒重组质粒载体感染mESCs,上调mESCs中PAX6的表达;采用CCK8检测PAX6对mESCs增殖的影响;采用流式细胞仪检测PAX6对mESCs周期的影响;采用葡萄糖生化试剂盒和ATP检测试剂盒分别检测mESCs葡萄糖和ATP含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-P70S6K、P70S6K、GLUT1的表达。结果慢病毒重组质粒载体感染后,PAX6过表达组mESCs较对照组PAX6表达增加,细胞增殖受到抑制,并出现G1期阻滞(二倍体含量百分率55.54±1.00%vs 41.12±0.63%,P<0.05);与对照组比较,PAX6过表达减少mESCs中ATP(277.7±14.3 vs 804.4±13.4 umol/gprot,P<0.05)及葡萄糖含量(2.55±0.16 vs 5.16±0.15 mmol/L,P<0.05);与对照组相比,PAX6过表达组、PAX6过表达+BKM120组和BKM120组的p-PI3K,p-AKT,p-P70S6K,GLUT1蛋白表达量显著降低。结论 PAX6可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活性,减少mESCs中的ATP及葡萄糖含量,从而抑制mESCs的增殖。     

PI3K/AKT信号转导系统在土槿皮乙酸诱导胃癌细胞凋亡中的作用

以不同浓度的土槿皮乙酸(PAB)分别处理BGC823细胞24 h,采用MTT法检测PAB对细胞增殖抑制作用,PI染色检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blot法检测PAB对Caspase-3剪切片断及PI3K与Akt通路相关蛋白表达的影响.结果 发现,PAB对BGC823细胞的增殖具有显著的抑制作用,呈剂量及时间依赖性.Caspase-3蛋白出现断裂片断,并随着浓度的增加断裂更明显,磷酸化PI3K/AKT开始降低,72 h降低最明显,而非磷酸化的PI3K/AKT无明显改变.认为PAB具有明显的细胞毒作用,通过PI3K/AKT途径激活Caspase-3诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖.     

PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21在青海藏族及汉族胃癌患者癌组织中的表达差异

目的探讨PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21在青海藏族及汉族胃癌患者癌组织中的表达差异。方法选取2016年12月至2018年12月我院胃肠外科进行手术的78例胃癌患者为研究对象(藏族38例,汉族40例)。采用实时荧光定量PCR法检测癌组织标本及癌旁组织中miR-21水平,采用免疫组化染色法检测PTEN/PI3K/AKT蛋白,分析不同民族胃癌患者不同组织PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21表达情况,同时分析其与临床病理特征之间的关系。结果汉族、藏族胃癌患者癌组织中miR-21表达水平高于癌旁组织(P<0.05),且汉族癌组织中miR-21表达水平明显高于藏族(P<0.05)。汉族、藏族胃癌患者癌组织中PTEN、PI3K、AKT蛋白阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中汉族胃癌组织中PTEN蛋白阳性率低于藏族,但PI3K、AKT蛋白阳性率高于藏族(P<0.05)。两民族胃癌组织中的PTEN、AKT蛋白、miR-21表达与TNM分期、分化程度、淋巴转移相关(P<0.05),PI3K蛋白表达与TNM分期、淋巴转移相关(P<0.05)。在汉族、藏族胃癌患者中,miR-21与PTEN蛋白均呈负相关,与PI3K、AKT蛋白均呈正相关(P<0.05)。结论PTEN在藏族、汉族胃癌患者中表达水平降低,且汉族表达低于藏族,且PTEN与PI3K、AKT呈负相关,miR-21可能通过抑制PTEN,激活PI3K、AKT信号通路从而参与胃癌患者的发生、发展。     

BCG感染树突状细胞的转录组测序和分析

目的 通过转录组学筛选DC2.4细胞内BCG感染相关的差异表达基因和信号通路,为探索DC细胞抗分枝杆菌的胞内免疫机制提供科学依据。方法 以小鼠DC2.4细胞作为细胞模型,设置感染组和未感染组,感染组经BCG(MOI=2)感染,培养24 h后收集细胞,采用转录组测序技术(RNA-Seq)检测感染组和未感染组mRNA表达谱并结合生物信息学分析方法,筛选树突状细胞内与BCG感染相关的差异表达基因并进行qRT-PCR验证。结果 与未感染组相比,感染组差异表达基因共有27个(P<0.05),其中26个上调基因,1个下调基因。通过GO和KEGG富集分析发现差异基因参与炎症反应、免疫系统过程等;TNF信号通路、IL-17信号通路以及细胞因子与细胞因子受体信号通路等参与BCG胞内感染过程。qRT-PCR验证与BCG感染相关的差异表达基因与转录组数据趋势一致。结论 BCG感染树突状细胞后,能够激发宿主细胞炎症反应和免疫应答,TNF、IL-17等信号通路参与BCG胞内感染过程。     

二黄糖肾康对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响

目的 观察二黄糖肾康对糖尿病肾病(DN)大鼠细胞凋亡及PI3 K/AKT信号转导系统的影响. 方法 SD大鼠单侧肾切除加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,每日二黄糖肾康灌胃,8 w后流式细胞术检测细胞凋亡数目及调控因子Bax、Bcl-2、Fas、Fas-L的蛋白表达,采用Western 印迹方法检测细胞内磷酸化Akt蛋白质的表达.结果 二黄糖肾康明显减少DN大鼠肾脏皮质细胞凋亡数目,降低Bax、Fas、Fas-L的的蛋白表达,增加Bcl-2的蛋白表达,激活PI3 K/AKT信号通路.结论 二黄糖肾康能有效降低肾脏细胞凋亡,激活PI3 K/AKT信号通路.     

肿瘤相关成纤维细胞外泌体调控PI3K/AKT/mTOR信号通路影响肺癌细胞的生长和转移

目的探究肿瘤相关成纤维细胞外泌体对肺癌细胞生长和转移的影响及机制。方法取肺癌患者的癌组织和癌旁组织分离肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)和成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs),免疫荧光和Western blot鉴定CAFs和NFs中α-SMA、FSP-1、FAP、Vimentin表达,差速离心法提取CAFs和NFs细胞外泌体,利用透射电镜和Western blot鉴定外泌体,将外泌体与肺癌细胞A549共孵育后检测细胞增殖、迁移、侵袭、细胞凋亡水平,Western blot检测PI3K/AKT/mTOR信号通路激活水平。结果α-SMA、FSP-1、FAP、Vimentin高表达于CAFs;透射电镜和Western blot鉴定外泌体符合其特征;与PBS组相比,与CAFs外泌体共孵育组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.001),细胞凋亡水平显著降低(P<0.001),PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平显著增加,而与NFs外泌体共孵育后细胞增殖、迁移、侵袭以及凋亡水平无显著变化,PI3K、AKT、mTOR磷酸化水平无显著变化。结论肿瘤相关成纤维细胞外泌体能够通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,而促进肺癌细胞的生长和转移。     

基于AKT信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响

目的 基于蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨替吉奥对大肠癌细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法 体外培养大肠癌细胞株HT-29细胞,设置对照组(HT-29细胞)、20μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+20μg/ml替吉奥)、50μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+50μg/ml替吉奥)和100μg/ml替吉奥组(HT-29细胞+100μg/ml替吉奥)。CCK-8法检测HT-29细胞增殖情况;Transwell法检测HT-29细胞迁移、侵袭情况;Western印迹法检测HT-29细胞中AKT、磷酸化(p)-AKT、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、p-PI3K、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达情况。结果 与对照组相比,20、50、100μg/ml替吉奥组HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);随着替吉奥浓度升高,HT-29细胞OD450值、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K、PCNA、MMP-9蛋白表达水平...     

基于PI3K/AKT信号通路研究丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在丹酚酸B对成骨细胞骨形成的调控作用。方法 0.00、0.01、0.03、0.10、0.30、1.00 nmol/L的丹酚酸B作用MC3T3-E1细胞12、24、36 h,MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、骨钙素(OCN)mRNA表达,Western印迹检测细胞中ALP、OPN、COLⅠ、OCN及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果与0.00 nmol/L比较,0.03、0.10、0.30 nmol/L丹酚酸B组细胞活力显著提高(P0.01),ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01);而LY294002组ALP、OPN、COLⅠ及OCN蛋白及mRNA表达量下调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量下调(P0.01)。与LY294002组比较,丹酚酸B+LY294002组ALP、OPN、COLⅠ、OCN蛋白及mRNA表达量上调(P0.01),PI3K及p-AKT表达量上调(P0.01)。结论丹酚酸B通过激活PI3K/AKT信号通路促进MC3T3-E1细胞骨形成。     

基于PI3K/AKT信号通路研究槲皮素对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 基于磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路研究槲皮素对宫颈癌细胞HeLa增殖和凋亡的影响。方法 以宫颈癌(HeLa)细胞为研究对象,给予不同浓度槲皮素进行培养(0、20、40、80μmol/L),分别命名为A、B、C、D组。MTT法检测HeLa增殖活力;观察HeLa细胞凋亡率;对比HeLa细胞凋亡形态;分析HeLa细胞周期改变;检测HeLa细胞PI3K/AKT蛋白表达。结果 随槲皮素浓度攀升,HeLa细胞增殖活力减弱,凋亡率增高,G0/G1期细胞比例降低,S期比例增加,PI3K、AKT蛋白表达下降,各组两两比较差异显著(P<0.05)。A组细胞形状较为规整,大小均匀,染色后呈现绿色圆形;槲皮素作用后,其形态与颜色出现改变,B组出现少量核固缩,C组细胞形态各异,出现染色质浓缩,核固缩,细胞呈新月形等,D组细胞形态发生明显的变化,凋亡细胞明显增多,染色质浓缩,细胞核碎裂呈点状或分叶状,细胞膜完整和膜泡状突起等典型的凋亡形态细胞。结论 槲皮素能够降低宫颈癌细胞的增殖活力,并诱导其凋亡,这可能是通过槲皮素抑制PI3K/AKT信号通路及相关蛋白表达来实现的。     

老年结直肠癌肝转移病人IL-18、PRL-3表达与PI3K/AKT信号通路关系探究

目的 探讨老年结直肠癌(CRC)肝转移病人IL-18、促肝再生磷酸酶蛋白(PRL-3)的表达水平与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路关系。方法 选取我院2019年6月至2021年6月100例老年CRC病人,其中肝转移病人34例,非肝转移病人66例。采用蛋白免疫印迹法检测病人癌组织及癌旁组织中IL-18、PRL-3、PI3K、AKT蛋白表达情况并进行比较分析。采用Logistic回归分析影响老年CRC肝转移的危险因素,Pearson相关系数评估肝转移病人IL-18、PRL-3表达与PI3K/AKT信号通路的关系。结果 癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K及AKT蛋白表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);肝转移病人癌组织中IL-18、PRL-3、PI3K及AKT蛋白表达水平均高于非肝转移病人(P<0.05);肝转移病人癌灶浸润深度T3～T4、低中分化、淋巴结转移比例均高于非肝转移病人(P<0.05);Logistic回归分析显示,IL-18、PRL-3、PI3K及AKT蛋白阳性表达、癌灶浸润深度T3～T4、低中分化、淋巴结转移均为老年CR...     

白皮杉醇对过氧化氢诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响与机制

目的:研究白皮杉醇(PCT)对过氧化氢(H2O2)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响以及所涉及的相关分子机制。方法:组织贴块法培养SD大鼠VSMCs并进行不同分组与处理;MTT法检测各组VSMCs的存活率;LDH、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测定各组VSMCs中LDH与SOD活力;Annexin V-PI染色检测各组VSMCs凋亡情况,Hoechst 33258染色观察各组VSMCs细胞核形态变化;Western blot检测各组VSMCs中凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、caspase-3)及PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达水平。结果:不同浓度与时间过氧化氢(H2O2)处理VSMCs后使其存活率降低,而不同浓度PCT预处理可提高细胞存活率,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。与对照组相比,H2O2组VSMCs中LDH活力升高而SOD活力下降,细胞凋亡率增加,细胞中Bax、caspase-3蛋白表达升高而Bcl-2蛋白表达下降,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS蛋白表达下降,且均呈剂量依赖关系;与H2O2组相比,PCT预处理组VSMCs LDH活力下降而SOD活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、caspase-3下降,Bcl-2蛋白表达升高,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS的蛋白表达升高,且均呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:PCT对H2O2引起的VSMCs损伤有保护作用,其机制可能是抑制LDH活力、增强SOD活力以及增强PI3K/AKT/eNOS信号通路进而阻碍VSMCs凋亡的发生。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

蛇床子素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导K562细胞凋亡和增殖抑制

目的:研究蛇床子素对人慢性髓系白血病细胞K562增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法:培养髓系白血病细胞K562,分别用不同浓度的蛇床子素处理(0、5、10、20μg/ml)。细胞培养48h后,利用MTT法检测K562细胞增殖;流式检测K562细胞凋亡;Western blot法检测PI3K、p-AKT、AKT、Bax、Bcl-2和Cleavage-Caspase3表达。结果:蛇床子素可以呈浓度依赖性的诱导K562细胞增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论:蛇床子素可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导K562细胞增殖抑制和凋亡。     

健脾消癥方对肝癌细胞PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨健脾消癥方对H22肝癌细胞凋亡、增殖及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法用不同浓度(0.5,1.0,2.0 mg/ml)的健脾消癥方处理H22细胞24、48、72 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1,Cyclin E,p21,p27表达及PI3K/AKT信号通路激活情况。结果与对照组比较,0.5,1.0,2.0 mg/ml健脾消癥方能显著提高细胞增殖抑制率,提高细胞早期及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期,下调Cyclin D1及Cyclin E表达,上调p21和p27表达,同时下调PI3K及p-AKT表达,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论健脾消癥方能显著抑制H22肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

补阳还五汤提取物灌胃对脑出血大鼠脑组织中PI3K、AKT、Caspase-3表达的影响

目的 观察补阳还五汤提取物对脑出血大鼠脑组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达的影响,探讨其对脑组织的保护作用机制。方法 将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、银杏叶片组各18只,后4组采用Rosenberg法建立脑出血大鼠模型后,分别给予生理盐水、补阳还五汤提取物、银杏叶片连续灌胃35 d。用免疫组化法检测PI3K、AKT、Caspase-3蛋白表达,TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况,干湿重法检测脑组织含水量,甲酰胺法检测血-脑脊液屏障通透性。结果 与模型组比较,补阳还五汤组、银杏叶片组PI3K、AKT蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,脑组织含水量、凋亡细胞数减少,血-脑脊液屏障通透性降低(P均<0.05)。结论 补阳还五汤提取物可能通过激活PI3K/AKT信号通路,降低血-脑脊液屏障通透性来保护脑出血大鼠脑组织。     

基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨益母草碱对缺血性脑卒中大鼠脑组织病理变化的影响

目的基于PI3K/AKT/NF-κB信号通路探讨益母草碱对缺血性脑卒中大鼠脑组织病理变化的影响。方法建立缺血性脑卒中大鼠模型,给予益母草碱,连续给药7天后,观察各组大鼠神经功能损害评分;检测大鼠脑组织中氧化应激指标含量;TTC染色法检测大鼠脑梗死面积百分比;HE染色法观察大鼠脑组织皮质区和海马区病理学变化情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定大鼠脑组织内梗死侧皮层血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子1α(Hif-1α)mRNA的表达变化;Western blot检测脑组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠的神经功能损害评分、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量、VEGF和Hif-1αmRNA表达、NF-κB蛋白表达明显升高,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、超氧化物歧化酶(SOD)含量、AKT、PI3K蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义(P0.01);与模型对照组相比,阳性对照组和益母草碱中、高剂量组大鼠的神经功能损害评分、NO、eNOS含量、VEGF和Hif-1αmRNA表达、NF-κB蛋白表达明显降低,ox-LDL、SOD含量、AKT、PI3K蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P0.01)。结论益母草碱对实验性脑损伤大鼠具有脑保护作用,可以改善脑梗死后的神经损伤,减少脑梗死体积,降低大鼠的氧化应激反应,这些效应可能是通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路实现的。     

PAX6通过PI3K/AKT信号通路抑制mESCs增殖的研究

目的探讨PAX6对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)增殖的影响及其机制。方法用过表达PAX6慢病毒重组质粒载体感染mESCs,上调mESCs中PAX6的表达;采用CCK8检测PAX6对mESCs增殖的影响;采用流式细胞仪检测PAX6对mESCs周期的影响;采用葡萄糖生化试剂盒和ATP检测试剂盒分别检测mESCs葡萄糖和ATP含量;Western blot检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-P70S6K、P70S6K、GLUT1的表达。结果慢病毒重组质粒载体感染后,PAX6过表达组mESCs较对照组PAX6表达增加,细胞增殖受到抑制,并出现G1期阻滞(二倍体含量百分率55.54±1.00%vs 41.12±0.63%,P0.05);与对照组比较,PAX6过表达减少mESCs中ATP(277.7±14.3 vs 804.4±13.4 umol/gprot,P0.05)及葡萄糖含量(2.55±0.16 vs 5.16±0.15 mmol/L,P0.05);与对照组相比,PAX6过表达组、PAX6过表达+BKM120组和BKM120组的p-PI3K,p-AKT,p-P70S6K,GLUT1蛋白表达量显著降低。结论 PAX6可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活性,减少mESCs中的ATP及葡萄糖含量,从而抑制mESCs的增殖。