鸟结核分枝杆菌MAV-5183蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的预测鸟结核分枝杆菌致病基因MAV-5183编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库下载MAV-5183基因编码蛋白的基因序列和氨基酸序列;采用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点、相对分子质量,以及氨基酸的组成比例、分子式、分子组成、脂肪指数;利用Phyr、SWISS-MODEL在线预测软件进行二级结构和三级结构模型预测;使用TMHMM Server2.0进行跨膜区预测;使用PortScale进行疏水性预测分析;采用SignlP5.0进行信号肽预测分析;采用IEDB在线软件进行B细胞表位以及CD4免疫原性预测分析;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线软件进行蛋白质相互作用分析。结果 MAV-5183基因编码355个氨基酸,编码蛋白为Antigen 85-C,相对分子质量为38.052 79×10^(3),等电点6.74,分子式为C_(1705)H_(2570)N_(462)_O_(504)S_(14),为不稳定的疏水性蛋白;含有跨膜区与信号肽、25个磷酸化位点(其中丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸分别有14、6、5个),三级结构较为稳定,有多种蛋白与之相互作用。结论 MAV-5183含有多个磷酸化位点和B细胞优势表位,可为MAC临床血清学诊断和疫苗研发提供理论基础。     

鸟结核分枝杆菌MAV-2753和结核分枝杆菌38ku蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的通过生物信息学在线分析软件对鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)MAV-2753蛋白和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)38ku蛋白进行预测分析。方法从BLAST获取MAV-2753和38ku蛋白的氨基酸序列;利用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点和相对分子质量,氨基酸组成及比例,分子式及脂肪指数;利用SPOMA、SWISS-MODEL在线预测软件预测蛋白的二、三级结构;使用TMHMM Server2.0预测跨膜区;使用PortScale进行疏水性预测分析;使用SignlP5.0进行信号肽预测分析;应用ISoftBerry在线分析网址进行亚细胞定位;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线分析软件进行蛋白质相互作用分析;运用NetNGIyc 1.0 Server、NetGlycate 1.0 Server进行糖基化、赖氨酸化分析预测;通过IEDB在线预测软件进行B细胞抗原表位的预测分析。结果MAV-2753基因编码蛋白为Catalase-peroxidase,分子质量单位为81ku;由748个氨基酸组成,相对等电点为4.9;正电荷残基(ArG+Lys)为73,负电荷残基(Asp+Gly)为107;脂肪系数为72.59,总平均亲水性为-0.455,预测为疏水蛋白;无跨膜区;有60个磷酸化位点。亚细胞定位于胞外。38ku蛋白由pstS1基因编码,由374个氨基酸组成,相对等电点为5.14,分子质量单位为38ku;正电荷残基(ArG+Lys)为17,负电荷残基(Asp+Gly)为26;不稳定系数为25.56,脂肪系数为86.79,总平均亲水性为0.066,预测为亲水性蛋白。该蛋白无跨膜区,有60个磷酸化位点,亚细胞定位于胞外。结论MAV-2753、38ku蛋白有着多个磷酸化、糖基化位点,表明与其他细胞间存在信号传递,蛋白空间结构稳定,有多个B细胞优势表位,可为MAC肺病与肺结核的血清学诊断、疫苗开发奠定基础。     

鸟分枝杆菌MAV-2921基因编码蛋白的生物信息学分析及其对巨噬细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的应用生物信息学软件分析鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白的结构和功能,观察其对人源THP-1巨噬细胞凋亡的影响。方法在NCBI数据库中获取鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白编码基因及其氨基酸序列信息,运用ProtParam、ProtScale、TMPred、SignalIP、SOPMA、SWISS-MODEL等在线工具对鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白进行生物信息学分析。提取全基因组DNA,进行PCR扩增、载体构建得到鸟分枝杆菌MAV-2921基因的重组表达质粒,经诱导表达和分离纯化后获得重组MAV-2921蛋白。将重组蛋白MAV-2921作用于人源THP-1巨噬细胞,ELISA法检测细胞上清液TNF-α表达量的变化,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率。结果鸟分枝杆菌MAV-2921基因全长285 bp,为编码94个氨基酸的蛋白质。该MAV-2921蛋白是稳定的亲水性蛋白,有1个跨膜区段,无信号肽;二级结构以α-螺旋为主,三级结构模型构建显示该蛋白为单体蛋白,不形成二聚体。利用大肠埃希菌表达系统制备了重组鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白,将重组MAV-2921蛋白作用于人源THP-1巨噬细胞,与对照组相比细胞上清液TNF-α含量升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白为稳定的、亲水性跨膜蛋白,对人源THP-1巨噬细胞具有促凋亡作用。     

鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白的结构和功能。方法利用UniproKB数据库、PredictProtein服务、SWISS-MODEL服务、ProtParam蛋白分析工具、Protcale、TMHMM-2.0服务和SignalP-5.0服务、ProtCompB方法和IEDB数据库等生物信息学预测软件对MAV_2043编码蛋白的二级和三级结构、理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及免疫表位进行分析预测;运用UniprotKB数据库的Blast工具对氨基酸序列进行比对,采用MEGA11软件构建进化树,进行系统进化分析。结果MAV_2043基因全长618 bp,共编码205个氨基酸。MAV_2043基因编码蛋白与鸟分枝杆菌亚种起源相同,该蛋白与结核分枝杆菌的[Cu-Zn]超氧化物歧化酶同源性较高。该蛋白为稳定的亲水性蛋白,无跨膜区、有信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞膜上,二级结构以β折叠为主;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,有两个Cu~+配体的结合空间位置。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV_2043基因编码蛋白可能为[Cu-Zn]超氧化物歧化酶,是鸟分枝杆菌中的重要毒力因子,可为鸟分枝杆菌靶向治疗提供新思路。     

结核分枝杆菌PPE32蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌PPE32基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI中获得PPE32基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析PPE32蛋白的相关生物学信息。结果 Rv1808基因全长为1 230 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白为PPE32,由409个氨基酸组成,等电点4.35,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽;有31个磷酸化位点,1个保守域;蛋白二级结构中α-螺旋占52.81%,β-折叠占8.31%,β-转角占5.62%,无规则卷曲占33.25%;有38个(得分>0.5)B细胞抗原表位和12个(得分>15)T细胞抗原表位。讨论 PPE32蛋白为亲水性蛋白,具有潜在的T、B细胞抗原表位,可作为研发结核病疫苗的候选蛋白。     

结核分枝杆菌PhoP蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌PhoP基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库获取PhoP基本的基因信息及其编码序列氨基酸信息;应用ProtParam软件预测PhoP蛋白的理化性质;利用SignalIP4.1和TMHMM分析其信号肽和跨膜区;利用在线分析Expasy工具分析蛋白二级结构,建立蛋白三级结构模型;采用Bepipred 1.0Server和SYFPEITHI分析蛋白的B细胞及T细胞抗原表位。结果 PhopP蛋白共250个氨基酸,分子式为C1226H1974N346O364S4,原子总数3 914,半衰期为30h,预测该蛋白为稳定性亲水性蛋白;二级结构中α-螺旋、β-转角、β-折叠、无规则卷曲分别占36.03%、10.58%、24.7%和27.94%,预测的B细胞、CTL细胞抗原表位分别为21个和7个;PhoP基因与天蓝色链霉菌同源性较高;其编码蛋白的相互作用蛋白为PhoR、senX3、trcS等。结论生物信息学分析PhoP为稳定蛋白,且含有潜在的B、T细胞抗原表位,是结核病诊断及治疗的潜在候选因子。     

结核分枝杆菌PE＿PGRS47蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的获取结核分枝杆菌(H37Rv)的pe_pgrs47基因序列以及编码蛋白PE_PGRS47的氨基酸序列,对PE_PGRS47蛋白结构以及抗原表位进行预测。方法采用ORF Finger工具对pe_pgrs47基因的开放阅读框进行分析;利用Expasy PortParam,SignalP 4.0Server,SOPMA以及SWISS-MODEL等软件和工具分析PE_PGRS47蛋白的生物信息学特征。结果结核分枝杆菌(H37Rv)的pe_pgrs47基因GC含量较高,为74.8%,预测其有5个开放阅读框;PE_PGRS47蛋白由525个氨基酸构成,pl为4.40,属于稳定、疏水性蛋白,含有两个丝氨酸磷酸化位点;二级结构中无规则卷曲结构所占比例较高,为51.05%,预测含有一个结构域,19个B细胞抗原表位,11个限制性CTL表位和16个辅助性T细胞表位。结论 PE_PGRS47蛋白含有一个保守的结构域,其结构域可能与其抑制细胞自噬的功能密切相关,预测其含有丰富的T、B细胞抗原表位,为研究PE_PGRS47蛋白的功能奠定了基础。     

结核分枝杆菌pyrF基因的生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用生物信息学软件分析预测结核分枝杆菌乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶(orotidine 5'-monophosphate decarboxylase,OMPdecase)的结构与生物学特性。方法采用ProtParam,ProtScale,TMPred,SignalP4.1,NetNGlyc1.0,Netphos3.1,SOPMA,SWISS-MODEL和STRING等生物信息学软件对结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis)H37Rv的pyrF基因及其编码蛋白OMPdecase的理化性质、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三维结构和蛋白-蛋白相互作用网络等进行预测分析。结果预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase为相对分子质量27.4×10~3的富含丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸的稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,不含信号肽,且磷酸化程度较高。α螺旋和无规卷曲为OMPdecase的主要二级结构元件,分别占51.09%和27.37%。同源建模分析显示D93-K95-D98-I99-T102位于活性中心区域内。结论生物信息学方法预测结核分枝杆菌pyrF基因编码的OMPdecase相对分子质量为27.4×10~3,为稳定疏水性膜蛋白或胞浆蛋白,其含有的保守氨基酸残基D93-K95-D98-I99-T102与该蛋白的催化活性密切相关。     

结核分枝杆菌PKnG蛋白结构与功能的生物信息学分析北大核心CSCD

目的运用生物信息学的方法分析结核分枝杆菌PKnG蛋白的结构与功能。方法从NCBI数据库获取PKnG的基因信息;使用protParam工具分析PKnG基因编码蛋白的理化性质,运用ProtScale工具分析其疏水性;运用SOPMA工具预测其二级结构,运用SWISS-MODEL工具模拟其三级结构;运用NCBI网站上的BLAST工具对PKnG蛋白的保守域进行预测,运用NetPhos 3.1Server预测其磷酸化位点;运用ABCperd服务器以及SYFPEITHI程序分别预测PKnG蛋白的B细胞和T细胞抗原表位;运用SignalP 4.1Server预测其信号肽,运用TMHMM2.0和TMpred Server对其跨膜螺旋区进行预测;运用STRING 10.5程序对其相互作用蛋白进行预测。结果预测PKnG基因编码蛋白由750个氨基酸构成,理论等电点5.52,为不稳定疏水蛋白,其二级结构以α-螺旋为主,有3个保守区域和多个磷酸化位点,有7个B细胞抗原表位和4个T细胞抗原表位,无信号肽和跨膜螺旋区,并发现数个相关作用蛋白。结论PKnG为不稳定疏水蛋白,含有T、B细胞抗原表位,具有良好的抗原性,可作为结核诊断与治疗的潜在候选因子。     

鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的生物信息学分析

目的应用生物信息学分析软件预测鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的结构和功能。方法利用在线uniprot蛋白数据库、ProtParam蛋白分析网站、在线Protcale、TMHMM(TMHMM Server V 2.0)和SignalP 5.0、Softberry和PSORTⅡServer,以及SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学预测软件对MAV-2052蛋白的理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及二级结构进行分析预测并对其三级结构进行模型构建;登录网站http://www.cbs.dtu.dk/services/netrhos/对蛋白磷酸化位点进行预测,运用uniprot蛋白数据库的Blast工具对氨基酸进行比对,采用MEGA-X软件构建进化树。结果 MAV-2052基因全长933 bp,编码310个氨基酸的蛋白质。该蛋白与鸟分枝杆菌亚型起源于同一物种,与结核分枝杆菌的半胱氨酸合酶k_1同源性较高。MAV-2052为稳定的疏水性蛋白,无跨膜区、无信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞质中,蛋白序列中存在13个丝氨酸磷酸化位点,二级结构以α-螺旋为主且有两个结构域;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,但无其他配体结合空间位置。MAV-2052蛋白为半胱氨酸合酶,属于半胱氨酸合酶/半胱氨酸β合成酶家族,是调控鸟分枝杆菌生长中的重要蛋白之一。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV-2052为半胱氨酸合成酶,是调控细菌生长的重要蛋白,可为鸟分枝杆菌的靶向治疗提供新思路。     

西安市非结核分枝杆菌感染现状调查分析北大核心CSCD

目的了解西安市结核病患者中非结核分枝杆菌感染情况。方法收集西安市胸科医院检验科分离培养的分枝杆菌临床菌株,利用两步PCR方法及PCR产物直接测序的方法进行菌种鉴定。结果经鉴定发现,收集的202株分枝杆菌中有195株为结核分枝杆菌,3株为牛结核分枝杆菌,2份为鸟分枝杆菌,1份为堪萨斯分枝杆菌,1份为灰色链霉菌,非结核分枝杆菌感染率为1.5%(3/201)。结论西安市尚存在一定比例非结核分枝杆菌感染,进一步菌种鉴定有利于临床正确诊断和合理用药治疗。     

鸟分枝杆菌MAV2928基因编码蛋白的生物信息学分析

目的运用生物信息学方法分析鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的结构与功能。方法从NCBI数据库获取MAV2928基因编码蛋白氨基酸序列;使用protParam和PortScale工具分析该基因编码PPE25-MAV蛋白的理化性质以及亲疏水性;分别运用SignaIP 4.1 Server、TMHMM Server v.2.0和PSORT Prediction工具预测PPE25-MAV蛋白的信号肽、跨膜区、亚细胞定位;采用NetPhos 3.1 Servera预测磷酸化位点,采用NCBI-Conserved domains分析蛋白的保守域结构;采用SPOMA软件在线分析PPE25MAV蛋白二级结构,使用SWISS-MODEL建立三级结构模型。运用ABCpred软件和IEDB预测蛋白的B细胞抗原表位。结果MAV2928基因全长为1266 bp,编码蛋白PPE25-MAV含有421个氨基酸,为不稳定疏水蛋白,脂肪系数为72.66,无信号肽及跨膜区,定位于细胞质中。该蛋白含有52个磷酸位点,有1个保守域结构属于PPE超家族蛋白;二级结构以无规则卷曲为主,结构较松散。预测该蛋白含有7个B细胞优势抗原表位和24个Th细胞表位。结论PPE25-MAV蛋白含有多个磷酸化位点,参与细胞信号的转导,含有7个优势B细胞抗原表位,为该蛋白作为候选疫苗抗原提供了理论基础。     

结核分枝杆菌Hrp1蛋白的生物信息学分析

目的 应用生物信息学预测分析Hrp1蛋白结构功能和生物学特性.方法 生物信息学软件ORF Finder、SO-SUI、Protpapram、ProtScale、Signal IP、Tmpred、TMHMM、NetNGlyc、NetPhos-3.1-Servera、PSORT、WoLF PSORT、TargetP-2.0...     

基于免疫信息学技术的结核分枝杆菌多表位疫苗构建北大核心CSCD

目的筛选具有抗原表位可能性的结核分枝杆菌高活性结合肽(HABPs),构建基于HABPs的多表位疫苗。方法通过免疫信息学方法预测HABPs的保护性抗原可能性、细胞毒性、致敏性及潜在B细胞和T细胞表位;将筛选出的HABPs与佐剂霍乱毒素B亚单位连接,构建多表位疫苗,并对其二级结构和理化性质进行分析;采用I-TASSER服务器进行多表位疫苗三级结构同源建模,优化的模型质量通过PROCHECK、ERRAT及ProSA-web软件进行验证;使用PatchDock软件进行多表位疫苗与TLR-4的分子对接;对疫苗进行密码子优化、在线克隆和免疫模拟。结果共筛选出32条HABPs序列,构建的多表位疫苗包含881个氨基酸残基,二级结构由43.93%的α螺旋、13.62%的β折叠和42.45%的无规则卷曲组成,不稳定性指数(Ⅱ)、脂肪族指数和亲水性平均值分别为45.34、84.09和-0.009,表明该疫苗具有灵活、稳定的球形构象和亲水结构。Ramachandran图中位于核心区域和允许区的氨基酸比例大于90%,ERRAT评估整体质量因子值为74.39,Z值为-5.94,表明3D模型的质量整体较好。分子对接结果表明疫苗可与TLR-4稳定相互作用。经过密码子优化的疫苗可在大肠埃希菌中高效表达。免疫模拟显示,当反复暴露于多表位疫苗抗原时,机体的B细胞和T细胞免疫反应均得到增强。此外,多表位疫苗还可诱导高水平细胞因子的分泌。结论利用免疫信息学工具构建的基于HABPs的多表位疫苗含有B、T细胞表位,有望同时激发机体体液免疫和细胞免疫,具有良好应用前景,但其实际免疫效果还需进一步证实。     

结核病黏膜疫苗的研究进展北大核心CSCD

呼吸道黏膜免疫是机体抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的第一道防线,是重要的抗MTB感染的保护性免疫,如何通过黏膜免疫,诱导黏膜免疫系统产生抗MTB感染的特异性免疫,是目前结核病疫苗研究的新方向。本文基于近年来结核病黏膜疫苗的研究,总结了不同类型疫苗的特点、黏膜免疫后的免疫学特性和免疫保护效果,展望了未来结核病黏膜疫苗的研究方向,希望能够对研发更加高效的结核病黏膜疫苗有所启示。     

结核分枝杆菌T7噬菌体展示基因组DNA文库的构建与鉴定北大核心CSCD

目的利用T7噬菌体作为载体,构建结核分枝杆菌的基因组DNA文库。方法提取MTB的基因组DNA,用EcoR I和Hind III进行双酶切,以对基因组DNA进行片段化,并在其末端加上定向的EcoR I和Hind III黏性末端,用DNA片段纯化分离柱除去小于200bp的片段和多余接头。将DNA片段与T7 10-3b噬菌体连接,经包装蛋白进行包装后转入BLT5403宿主菌以构建T7噬菌体展示基因组DNA文库,并检测文库的滴度和随机性。结果成功提取到较高质量的MTB基因组DNA;构建的T7噬菌体展示基因组DNA文库的滴度约为6×106 pfu/cm3;用PCR检测结果表明,在随机挑取的16个噬菌斑中,其重组率为100%,且插入片段都介于250~2 000bp左右。结论成功构建了MTB T7噬菌体展示基因组DNA文库,为从基因组范围筛选MTB的优势抗原奠定了前期实验基础。     

结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究

目的 分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法 通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果 Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4⁺和CD8⁺T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论 Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。     

结核分枝杆菌Rv0824c基因编码蛋白的生物信息学分析

目的 采用生物信息学方法分析结核分枝杆菌的Rv0824c基因及其编码的DesA1蛋白结构和功能。方法 自NCBI网站获取Rv0824c基因及DesA1蛋白的基本信息;使用Protparam、ProtScale和ProtCompB预测DesA1蛋白的理化性质、亲疏水性和亚细胞定位;使用SignalP Server v.4.0、TMHMM Server v.2.0、NetNGlyc 1.0 server和NetPhos Server v.3.1预测DesA1蛋白的信号肽、跨膜结构、糖基化及磷酸化位点;使用SOPMA和SWISS MODEL预测DesA1蛋白的二级结构并构建该蛋白的三级结构模型;使用ABCpred和SYFPEITHI预测DesA1蛋白的抗原表位;使用MEGA软件构建系统发育树;使用STRING数据库预测DesA1的相互作用蛋白及相关功能。结果 Rv0824c基因全长1 017 bp,编码的DesA1蛋白氨基酸数为338,分子式为C₁₇₂₃H₂₆₉₄N₄₉₀O₅₀₃S₁₄     

结核分枝杆菌基因组变异及其耐药调查北大核心CSCD

目的调查结核分枝杆菌基因组变异及耐药情况,分析其耐药机制,以指导临床治疗。方法收集511例结核病患者痰液标本,进行结核分枝杆菌检查及鉴定。采用比例法进行药物敏感性试验;采用PCR扩增gyrA、katG、rpoB、rpsL基因,分析基因变异情况。结果共分离144株结核分枝杆菌,其对氧氟沙星、异烟肼、利福平、链霉素的耐药率分别为60.42%、52.78%、43.75%、36.81%。其中对氧氟沙星、异烟肼、利福平、链霉素低耐和高耐药率分别为36.11%和24.31%、33.33%和19.44%、13.19%和30.56%、4.86%和31.94%,药物低耐率与高耐率之间差异无统计学意义(P>0.05)。72株发生gyrA基因变异,基因突变率为82.76%。其中Asp→Gly在94位点突变39株(44.83%),Ala→Val在90位点突变21株(24.14%),Asp→Ala在94位点突变12株(13.79%)。另15株(17.24%)未发生基因变异。53株发生katG基因变异,基因突变率为69.74%。其中Ser→Thr在315位点突变43株(56.58%),Gly→Ser在299位点突变8株(10.53%),Ser→Gly在315位点突变2株(2.63%)。另23株(30.26%)未发生变异。49株发生rpoB基因变异,基因突变率为77.78%。其中Ser→Leu在521位点突变34株(53.97%),His→Leu在526位点突变13株(20.63%),Leu→Pro在533位点突变2株(3.17%)。另14株(22.22%)未发生变异。41株发生rpsL基因变异,基因突变率为77.36%。其中Lys→Arg在43位点突变37株(69.81%),Lys→Arg在88位点突变4株(7.55%)。另12株(22.64%)未发生变异。结论 gyrA、katG、rpoB、rpsL基因变异可能是导致结核分枝杆菌耐药性逐年增高的主要原因,应给予重视。     

结核分枝杆菌H37Ra感染对小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响北大核心CSCD

目的探讨结核分枝杆菌H37Ra菌株(H37Ra)感染对BALB/c小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响。方法建立H37Ra菌株BALB/c小鼠感染模型,设生理盐水(NS)处理小鼠作为对照组。在感染早期(4周)和晚期(8周)分别取小鼠脾脏细胞及淋巴结细胞,或培养后的细胞,经荧光抗体染色后采用流式细胞术对不同感染时期小鼠的T细胞表型进行检测分析。结果实验组小鼠感染H37Ra 4周时与对照组比较,脾脏总T细胞(CD3^+)、CD4^+T细胞百分率(CD3^+CD4^+CD8^-)降低((43.03±5.57)%,t=5.804,P=0.000;(47.76±6.22)%,t=2.327,P=0.042),CD8^+T细胞百分率(CD3^+CD4^-CD8^+)增高((47.72±4.39)%,t=-3.698,P=0.004);与感染4周时比较,感染8周时脾脏总T细胞、CD4^+T细胞百分率增高((68.23±4.38)%,t=-8.712,P=0.000;(57.89±4.93)%,t=-3.125,P=0.011),CD8^+T细胞百分率降低((39.23±3.80)%,t=3.585,P=0.005),且晚期时恢复至正常。H37Ra感染4周和8周时与对照组比较,H37Ra感染对小鼠淋巴结总T细胞(CD90.2^+)及T细胞亚群(CD4^+T细胞及CD8^+T细胞)分布无显著影响(P>0.05)。H37Ra感染晚期,与对照组比较,IFN-γ表达升高(加培养液而无TB-PPD组:(7.50±1.60)%,t=-4.173,P=0.002;加入PPD组:(6.80±1.36)%,t=-5.014,P=0.001)。结论 H37Ra感染可影响T淋巴细胞及亚群的分布,并出现Th1反应而未见明显Th2反应,促进了机体的抗结核感染作用。