甲基化与肺癌关系的研究

甲基化是指DNA复制后在DNA甲基转移酶的作用下,胞嘧啶环5位获得甲基而形成的,甲基化常发生于CG二核苷酸密集区,这些区域称为二核苷酸胞嘧啶(CpG)岛。DNA异常甲基化是一种遗传改变,常发生在启动子的CpG岛。某些基因甲基化与肺癌的发生密切相关,且是肺癌发生中的早期事件并可以被一些测量甲基化的方法成功检测到,这对肺癌的早期诊断有着非常重大的意义。所以,可以使DNA异常甲基化发生逆转的去甲基化药物具有光明的前途。     

RASSF1A和APC基因启动子区甲基化与前列腺癌的关系

目的研究Ras相关区域家族1A (Ras association domain family 1 isoform A,RASSF1A)及结肠腺瘤性息肉病(adenomatosis polyposis coli,APC)基因启动子区CpG甲基化及与前列腺癌(PCa)之间的关系,探索PCa早期诊断的检测方法。方法收集60例PCa和40例前列腺增生(BPH)病例的组织标本及其相关的临床指标。应用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测PCa组织及BPH组织中RASSF1A、APC基因启动子区CpG甲基化情况。结果PCa组RASSF1A、APC基因CG位点甲基化率高于BPH组(60.8% vs 14%,48.84% vs 1.19%,P＜0.05);基因甲基化率与PSA、Gleason评分、病理分期和PCa危险分期关系密切(P＜0.01);RASSF1A及APC基因甲基化联合检测用于判断PCa及BPH的敏感度和特异度是95.74%和82.9%。结论RASSF1A、APC基因启动子区甲基化与PCa发生及发展有关,其甲基化率的变化与PCa的危险分期关系密切。检测前列腺组织中相关基因甲基化状态,有望成为诊断早期PCa的一种方法。     

胰腺癌组织中人音猬因子相互作用蛋白基因CpG岛甲基化分析

目的 研究胰腺癌组织中人音猬因子相互作用蛋白(HHIP)基因CpG岛甲基化状态,探索胰腺癌早期诊断的检测方法 .方法 在30例胰腺癌(PCa组)及其癌旁组织(CAT组)和13例慢性胰腺炎(CP组)组织中,分别应用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、巢式甲基化特异性聚合酶链反应(NMSP)和基因克隆测序的方法 检测HHIP mRNA表达及其CpG岛甲基化状况.结果 PCa组的HHIP mRNA表达为2.042±1.412,显著低于CAT组的3.710±3.488及CP组的4.485±2.434(P值分别＜0.05、0.01),后两组间的差异无统计学意义(P＞0.05).PCa组的甲基化阳性率为43.3%(13/30),显著高于CP组的7.7%(1/13)及CAT组的0(P值分别＜0.05、0.01),后两组间的差异无统计学意义(P＞0.05).PCa组中多个CG位点发生甲基化,而CP组中大部分及CAT组中的CG位点未发生甲基化.结论 胰腺癌组织中HHIP基因CpG岛呈现高甲基化的状态,可能与胰腺癌的发生相关.     

DNA甲基化PCR引物的设计

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生[1]。目前,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,而理想的引物设计则是其成功的关键因素之一。国外互联网上有1个提供免费在线引物设计程序“MethPrimer”,它能够预测CpG岛,根据实验者要求设计硫化测序PCR(bisulfate-sequencing PCR,BSP)和甲基化特异性PCR(methylation-sp…     

前列腺癌组织中DNMT1的表达与GSTP1、APC甲基化状态的关系及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表达与谷胱甘肽S转移酶P1(glutathione S transferase P1,GSTP1)、结肠腺瘤性息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)甲基化状态的关系及临床意义。方法采用RT-PCR的方法检测56例前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织和10例前列腺增生(benign prostatichyperplasia,BPH)组织中DNMT1和GSTP1、APC的mRNA表达,采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)的方法检测GSTP1、APC的启动子区CpG岛甲基化状态。结果大多数PCa组织中DNMT1 mRNA高表达(在低分化癌中阳性率为90.0%),而GSTP1和APC低表达(在低分化癌中阳性率分别为23.3%和33.3%),BPH组织中DNMT1 mRNA低表达(40.0%),而GSTP1和APC高表达(分别为90.0%和80.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05);大多数PCa组织中GSTP1、APC启动子区CpG岛呈高甲基化状态(在低分化癌中阳性率分别为83.3%和73.3%),而BPH组织中呈低甲基化(阳性率分别为10.0%和20.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCa组织中GSTP1、APC失活的机制可能与DNMT1的高表达导致其启动子区CpG岛异常高甲基化有关。     

肿瘤抑制基因异常甲基化与胃癌的研究进展

表遗传学是研究在DNA序列没有改变的情况下,所发生的可遗传性基因表达的改变,其中DNA甲基化是研究最多、最深入的一种表遗传学表达机制。CpG岛是人类基因组中富含CpG二核苷酸的DNA序列,主要位于基因启动子区,大小约为100～1 000 bp,与约60%的编码基因相关。DNA中CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活,直接参与肿瘤的发生机制。我们简要综述了DNA甲基化在胃癌中的研究进展。     

维吾尔族妇女宫颈病变与RARβ基因启动子甲基化的关系

目的通过对宫颈癌特异性RARβ基因启动子甲基化水平研究,探讨宫颈癌发生与该基因表达的表观遗传学调控的关系。方法收集维吾尔族妇女宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)、宫颈内上皮瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎患者的新鲜组织标本56例,应用Sequenom MassARRAY甲基化DNA定量分析平台,对组织DNA的RARβ基因启动子区CpG位点进行甲基化水平定量分析。结果 RARβ基因启动子区的目的CpG片段含有16个CpG位点,通过Sequenom MassArray(质谱)对单一CpG位点的甲基化定量测试,发现CpG-6、CpG-12.13(联合位点)和CpG-14等4个CpG位点甲基化率在宫颈癌与宫颈炎组之间有显著差异(P<0.05),并且各个CpG位点的甲基化水平变化存在密切相关性(r>0.5,P<0.01)。但是,从整体CpG片段的甲基化水平角度分析,不同宫颈病变组织之间无统计学差异(P>0.05)。结论 RARβ基因启动子区CpG岛的特定CpG位点高甲基化是宫颈癌演进过程的重要标志,可能与维吾尔族宫颈癌的关系比较密切。从表观遗传学角度分析,此种甲基化引起基因转录水平下调,继而导致蛋白质表达缺失。     

子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛甲基化状况的研究

目的 :检测子宫内膜癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况 ,分析其与临床病理特征之间的关系 ,探讨FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法 :采用甲基化特异的PCR方法对亚硫酸氢盐修饰过的 35例子宫内膜癌组织、癌旁组织及患者自身外周血白细胞DNA和 2 0例非癌患者子宫内膜组织DNA的FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化状况进行分析。结果 :癌组织中FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化率为 2 5 .71 % ,癌旁组织和外周血中也存在相似的甲基化率。非癌患者的子宫内膜组织中FHIT基因的CpG岛无甲基化。癌组织与非癌患者子宫内膜组织的甲基化率之间的差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。DNA甲基化与临床病理特征之间无相关性。FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。结论 :子宫内膜癌组织中存在FHIT基因启动子区域CpG岛的甲基化 ,CpG岛的甲基化与临床病理特征之间无相关性。DNA甲基化为子宫内膜癌发生中的早期事件。癌旁组织和外周血可用于癌相关基因启动子区域CpG岛甲基化的检测     

前列腺癌组织中谷胱甘肽S-转移酶P1基因启动子区域甲基化序列分析

目的:研究前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)组织中谷胱甘肽S-转移酶P1 (glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因启动子区域CpG岛甲基化状态,探索前列腺癌早期诊断的检测方法.方法:采用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nest methylation-specific PCR,NMSP)和基因克隆测序的方法检测31例前列腺癌组织、18例前列腺增生 (benign prostatic hyperplasia,BPH) 组织和3例正常前列腺(normal prostate,NP)组织中GSTP1基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.结果:NMSP结果显示在PCa、BPH以及NP组中甲基化阳性率分别为83%、0%和0%;测序结果中PCa与BPH、NP组CG位点甲基化发生率分别为96%、34%和37%(P<0.01),BPH和NP组无统计学差异(P>0.05).联合NMSP筛查前列腺癌明显优于单纯前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)检测.结论:在前列腺癌组织中GSTP1基因启动子区域CpG岛呈现超甲基化的状态,应用NMSP方法对GSTP1基因进行甲基化检测具有高灵敏度和高特异性的特点,这有望成为新的前列腺癌早期筛选和诊断的检测方法.     

DNA甲基化与肿瘤的相关研究进展

表观遗传学改变是指基于非基因序列改变所致基因表达水平变化,如DNA甲基化和组蛋白修饰等。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下,将S-腺苷甲硫氨酸提供的甲基基团共价结合到CpG二核苷酸的胞嘧啶5碳位上的过程。目前CpG岛异常高甲基化所致抑癌基因转录失活以及整个基因组异常低甲基化所致原癌基因的激活,已经成为肿瘤研究中的热点问题。     

胰腺癌细胞株SPARC基因启动子区甲基化状况的研究

目的检测6种胰腺癌细胞株中SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化状况。方法以ASPC、BX-PC3、CFPAC、PANC1、SW 1990、PaTu8988等胰腺癌细胞株及正常人胚肾细胞AD293标本为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测细胞株SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化状况。结果6例胰腺癌细胞株中3例(ASPC、CFPAC-1、BxPC3)细胞株发生完全甲基化;3例(PANC-1、Patu8988、SW 1990)发生部分甲基化,正常人胚肾上皮细胞AD293未发生甲基化。结论SPARC基因启动子区5’CpG岛甲基化改变是胰腺癌SPARC基因的一种重要失活方式,SPARC基因启动子区的高甲基化是胰腺癌细胞区别于正常细胞的分子事件之一,可能在胰腺癌的发生、发展中起重要作用。检测SPARC基因高甲基化可能会成为一种新的诊断胰腺癌的肿瘤标志物。     

DNA甲基化与肿瘤研究进展

细胞癌变是一个多阶段复杂过程 ,它包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活 ,并涉及基因和基因外的多种改变。近来 ,人们发现肿瘤细胞的总体甲基化水平低于正常细胞 ,而在某些CpG岛甲基化程度增高。DNA甲基化在X染色体、基因表达及基因组印迹中[1 ] 起着重要作用。同时 ,近年来研究发现DNA甲基化的异常影响肿瘤的发生发展。1　DNA甲基化与基因表达1.1　DNA甲基化与去甲基化　DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶 (DNAmethyltransferase ,DMT)的催化下 ,以s 腺苷甲硫氨酸 (SAM)为甲基供体 ,将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲…     

甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析方法在筛查人非小细胞肺癌组织中高甲基化修饰序列的应用

目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)技术,分析胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-4)基因启动子区CpG岛的甲基化修饰与基因表达的相关性。结果获得5个经Slot Blot验证在肺癌组织中高甲基化修饰的CpG岛序列(IGFBP-4、KLK10、ADAM23、GADD45G和DUOX1)。甲基化抑制剂5-aza-2’-deoxycytidine处理NSCLC细胞可明显上调IGFBP-4基因的表达。在41例(44.6%)癌组织中检测到IGFBP-4表达水平显著低于癌旁对照组织。47例(51.1%)癌组织检测到IGFBP-4高甲基化显著高于癌旁组织的检出率(16.3%,15/92;P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与基因表达呈负相关(r=-0.396,P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与TNM分期(P=0.013)和淋巴结转移(P=0.022)相关。结论应用MCA/RDA方法筛查到5个在NSCLC组织中高甲基化修饰的CpG岛序列,并证实IGFBP-4启动子区CpG岛的高甲基化可能通过抑制基因的表达参与了NSCLC的发生。     

DNA甲基化和动脉粥样硬化研究进展

DNA甲基化是基因组一个主要遗传外修饰方式,它能够调控基因表达.最近的研究表明在动脉粥样硬化发生过程中有DNA甲基化的异常发生.在动脉粥样硬化中DNA甲基化模式的紊乱表现为基因组广泛低甲基化和某些CpG岛的异常高甲基化共存.DNA甲基化的改变及其所引起的基因表达异常可能在高同型半胱氨酸血症和衰老致动脉粥样硬化发生过程中起了重要作用.进一步研究DNA甲基化在动脉粥样硬化中的改变,可能为动脉粥样硬化的诊断和治疗提供新途径.     

乳腺癌患者肿瘤循环DNA的定量分析

目的:检测乳腺癌患者肿瘤循环DNA的含量及其p16基因5' CpG岛甲基化状态的改变. 方法:收集61例乳腺癌患者、33例乳腺良性病变患者和27例健康志愿者的血浆样本,抽提血浆循环DNA,以SYBR green I荧光染色法行DNA定量;利用半巢式甲基化特异性PCR技术,检测61例乳腺癌患者血浆循环DNA和相应癌组织p16基因5' CpG岛甲基化状态的改变. 结果:乳腺癌患者、乳腺良性病变患者、健康自愿者肿瘤循环DNA浓度分别为(65.0±45.3), (19.0±9.5)和(13.0±7.3) μg/L,乳腺癌患者血浆循环DNA浓度显著高于乳腺良性病变患者和健康自愿者,差异有统计学意义(P＜0.05). 61例乳腺癌患者血浆循环DNA和相应癌组织p16基因5' CpG岛甲基化状态的改变检出率分别为44.3%和46.2%,两者检出率无统计学差别(P＞0.05). 结论:血浆肿瘤循环DNA的定量有可能成为一种新的恶性肿瘤标志物.     

表观遗传学甲基化的方法在无创性产前诊断中的应用

正表观遗传是指DNA序列不发生变化但基因表达却发生了可遗传的改变,即基因型未发生变化而表型却发生了改变,且这种改变在发育和细胞增殖过程中能稳定传递。DNA甲基化是最常见的表观遗传修饰方式,DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核昔酸5'端的胞嘧啶转变为5'甲基胞嘧啶,它并不改变基因序列,而是通     

DNA甲基化与抑郁症的相关研究

DNA甲基化指DNA序列不发生变化但基因表达却发生可遗传的改变,DNA异常甲基化常发生在基因启动子区的CpG岛.目前对于DNA甲基化与抑郁症的相关性研究被很多学者所重视.但国内对其研究甚少,本文就DNA甲基化与抑郁症的相关研究作一综述.抑郁症是指由各种原因引起以抑郁为主要症状的一组情感性障碍或心境障碍,抑郁是不愉快的心境体验[1].世界卫生组织（WHO）估计,全球大约有3.4亿人患抑郁症,目前抑郁症已经成为世界第四大疾病[2],抑郁症严重威胁着人类的健康.关于抑郁症发病的病因,普遍认为是由于遗传、心理、社会环境等多种因素共同作用引发的,尤其是对于抑郁症具有较高的遗传倾向性这一点已经得到众多研究的证实[3-4].近年来越来越多的研究方向指向表观遗传学方面,有研究表明DNA甲基化是其他表观遗传学现象建立和维持的基础[5],有关DNA甲基化与抑郁症的相关研究并不多,但可能存在某些关联.     

人胰腺癌细胞株HHIP基因甲基化状态检测和分析

目的:探讨人胰腺癌细胞株HHIP表达与其甲基化的关系,为胰腺癌发生机制的研究提供新的信息。方法:以人胰腺癌细胞株 BxPC-3、CFPAC-1、PANC-1、AsPC-1和PaTu8988s为研究对象,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学染色(S-P)法检测去甲基化制剂——DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR) 处理前后各胰腺癌细胞株HHIP mRNA/蛋白表达的变化,用甲基化特异性 PCR(MSP)结合测序检测HHIP基因CpG岛甲基化状态。结果:5-Aza-CdR处理前,胰腺癌细胞株BxPC-3、CFPAC-1、PANC-1、AsPC-1和PaTu8988s无HHIP mRNA/蛋白表达;经5-Aza-CdR处理后,HHIP mRNA/蛋白重新表达。MSP结合测序显示上述胰腺癌细胞株HHIP基因CpG岛存在高甲基化。结论:人胰腺癌细胞株HHIP表达抑制与其基因CpG岛高甲基化相关。HHIP 基因CpG岛高甲基化可能在胰腺癌的发生、发展中起一定作用。     

DNA甲基化修饰在甲状腺癌中的研究进展

甲状腺癌是常见的内分泌系统恶性肿瘤,目前的研究发现甲状腺癌的发生与基因突变和表观遗传学改变有关.DNA甲基化是重要的表观遗传修饰之一,在调节甲状腺癌的进展中发挥着关键作用.随着表观遗传学研究的不断深入,DNA甲基化有望被开发为甲状腺癌诊断、预后和治疗应用方面的临床生物标志物.现对近年来DNA甲基化在甲状腺癌中的研究进展...     

急性ST段抬高心肌梗死患者LDLR基因启动子区的甲基化修饰

目的分析急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因启动子区CpG岛甲基化修饰程度。方法选择经急诊确诊的STEMI患者48例(STEMI组),立即抽取静脉血查血脂和保存用于DNA提取;以健康人群36例为对照组,亚硫酸氢盐修饰后测序检测其LDLR基因启动子区甲基化程度。结果STEMI组患者血清低密度脂蛋白(LDL)水平较对照组升高,在LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)片段中所包含的7个CG位点均无发生甲基化。结论 STEMI患者血清LDL水平改变与LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)的甲基化修饰无关。