牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究牛蒡苷元及牛蒡苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法：体外培养人多巴胺神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞,加入不同浓度的牛蒡苷元及牛蒡苷预保护细胞SH-SY5Y 24 h后,加入H2O2继续共同培养24 h,采用MTT法检测细胞存活率。结果：与模型组相比,5 μmol·L-1和10 μmol·L-1的牛蒡苷元和20 μmol·L-1的牛蒡苷可提高细胞的存活率。结论：牛蒡苷及其苷元均能保护H2O2诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤,且牛蒡苷元对SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用强于牛蒡苷。     

黄豆苷元对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨黄豆苷元(daidizein)对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法用H2O2处理体外培养的PC12细胞建立细胞损伤模型,并加入daidizein预处理作为保护,显微镜下观察PC12细胞形态改变,MTT法检测活细胞数,LDH法检测细胞膜的损伤情况.结果 H2O2处理细胞24 h后,细胞形态发生明显改变,胞体变小、突起缩回,MTT吸光值减小,活细胞数减少,LDH释放量明显增加,与正常对组组比较差异有显著性(P<0.01).daidizein处理组细胞形态明显改善,MTT吸光值显著增加,LDH释放量明显降低,与H2O2处理组相比差异有显著性(P<0.01).结论 daidizein能显著抑制H2O2对PC12细胞的毒性,具有较强的神经保护作用.     

HPLC法对牛蒡子生品与炮制品中牛蒡苷、牛蒡苷元含量的测定

目的：建立对牛蒡子生品与炮制品中牛蒡苷（arctiin）、牛蒡苷元（arctigenin）同时定量的测定方法,为牛蒡子中有效成分检测的质量控制提供依据。方法：用高效液相色谱法（HPLC）测定牛蒡子生品和炮制品中牛蒡苷、牛蒡苷元含量。结果：牛蒡苷、牛蒡苷元色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,牛蒡苷1．234～6．170μg,Y=362．5666X-18．4445,r=0．9998;牛蒡苷元0．188～0．940μg,Y=85．6066X-12．8357,r=0．9999;平均回收率牛蒡苷为96．42％,相对变异偏差（RSD）为1．23％;牛蒡苷元为97．75％,RSD为0．77％。结论：HPLC测定牛蒡子中有效成分含量的精密度高,重现性及稳定性皆良好,方法简便、易行,可作为牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量的测定方法。     

牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究

[目的]观察牛蒡子苷(ARC)与牛蒡子苷元(ARG)对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响,并探讨其相关机制.[方法]采用不同浓度的ARC与ARG作用于PC3细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;瑞姬氏染色观察用药前后细胞形态变化;Annexin V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(FITC/PI)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况;Western-blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3的表达情况.[结果]ARC与ARG均能抑制PC3细胞的增殖,此抑制作用具有时间和浓度依赖性,两药物作用48 h组细胞存活率均显著低于24 h组(P＜0.01);ARC与ARG处理组的细胞形态变化表现为细胞膜回缩,细胞质减少,胞膜紧贴胞核,胞液纤维网状结构;流式细胞术检测发现:与空白对照组比较,ARC组与ARG组可显著增加Annexin V-FITC/PI双染阳性率(P＜0.05或P＜0.01),PI单染阳性率在浓度为20μmol/L和5μmol/L时也显著增加(P＜0.01),但Annexin V-FITC单染阳性率均无显著变化(P＞0.05).Western-blot分析结果显示:ARC或ARG作用细胞48 h时,可显著降低Bcl-2表达水平(P＜0.01),但对Bax和Caspase-3蛋白的表达无显著影响(P＞0.05).[结论]ARC与ARG可诱导PC3细胞发生非凋亡性死亡,其作用机制可能与诱导Bcl-2表达下调相关.     

3′-大豆苷元磺酸钠对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的：探讨3′-大豆苷元磺酸钠对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法：采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型,加入不同浓度3′-大豆苷元磺酸钠处理,采用MTT法检测PC12细胞活力（细胞成活率）,测定乳酸脱氢酶活性及测定超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。结果：3′-大豆苷元磺酸钠能提高谷氨酸损伤后PC12细胞的存活率;抑制谷氨酸损伤后导致的乳酸脱氢酶活性变化;提高超氧化物歧化酶活性并降低丙二醛含量。结论：3′-大豆苷元磺酸钠对谷氨酸引起的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

牛蒡苷元联合替吉奥对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 研究牛蒡苷元抗肿瘤的药理作用.方法 健康雄性SPF级ICR小鼠40只随机分成4组:①模型组;②80mg/kg替吉奥胶囊组;③0.5mg/kg牛蒡苷元注射液组;④80mg/kg替吉奥胶囊与0.5mg/kg牛蒡苷元注射液联合用药组.通过小鼠右腋窝皮下注射细胞数为1.0×107个/ml小鼠肝癌H22肿瘤细胞建立在体肿瘤移植模型.造模后,次日连续给药14d,称量体重,麻醉并剥离腹主动脉放血处死动物,剥出瘤块用电子天平称量瘤重,计算抑瘤率.结果 ①替吉奥胶囊与牛蒡苷元注射液联合用药组体重增加明显,生存质量明显提高;②替吉奥胶囊与牛蒡苷元注射液联合用药组抑瘤率最好.结论 替吉奥胶囊与牛蒡苷元注射液联合用药对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用效果显著.     

红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的保护作用

目的研究红景天苷（Sal）对Co Cl2诱导PC12细胞低氧损伤的影响。方法用200μM Co Cl2诱导PC12细胞致其损伤,用不同浓度的红景天苷（0.1、1、10μM）作用于PC12细胞,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;RT-q PCR法测定Arc m RNA的表达;Western blot法测定Arc蛋白的表达。结果不同浓度红景天苷能明显抑制Co Cl2诱导的PC12细胞凋亡,并能显著提高PC12细胞中Arc m RNA和蛋白表达水平。结论红景天苷对Co Cl2诱导的PC12细胞低氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与红景天苷抵抗Co Cl2诱导PC12细胞的凋亡,上调PC12细胞Arc m RNA和蛋白表达水平有关。     

红景天苷类似物对低糖低血清诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:评价红景天苷类似物对低糖低血清培养基诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法 :体外培养PC12细胞,采用低糖低血清培养基制备损伤模型。给予60μmol/L、300μmol/L、1 000μmol/L不同浓度类似物预保护24 h。经低糖低血清损伤24 h后,观察其对细胞形态和活力的影响。结果:部分红景天苷类似物能拮抗低糖低血清培养基损伤PC12细胞活力下降。结论:部分红景天苷类似物对低糖低血清诱导PC12细胞损伤具有保护作用。     

牛蒡苷对弓形虫热休克蛋白70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤的保护作用

[目的]探讨牛蒡苷(ARC)对弓形虫热休克蛋白70(T.g.HSP70)诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.[方法]将KM雌性小鼠随机分为正常组、模型组、ARC组、磺胺嘧啶钠阳性对照(PC)组.于弓形虫感染后第4d起给予药物治疗,连续5d.感染后第7d腹腔注射给予T.g.HSP70,次日末次给药4h后采集颈动脉血处死小鼠,取肝称质量,计算肝脏指数;采用比色法测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;ELISA法测定细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定血小板活化因子(PAF-AH)mRNA的表达水平.[结果]与正常组比较,模型组ALT,AST水平和肝脏指数明显升高(P<0.05,P<0.01).与模型组比较,ARC组和PC组ALT,AST水平和MDA,IL-1β,TNF-α含量及PAF-AH mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性明显升高(P<0.05).ARC组与PC组上述各项指标间差异均无统计学意义(P>0.05).[结论]ARC对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化及抑制炎症介质的产生有关.     

舒络对谷氨酸引起的PC12细胞损伤的保护作用

舒络(赤芍2g，栀子2g等)粉针剂，由南京中医药大学植物药研究与新药开发中心提供，批号：030603；尼膜同，Bayer产品，批号：030304；溴化-(4，5-二甲基-2-噻唑基)2，5-二苯基四氮唑(MTT)，Fluka产品；Dulbecco MEM(DMEM)培养基，Gibcol产品；胰蛋白酶，RNase A，华美生物工程公司产品；碘化丙锭(PI)染液，罗丹明123(Rhl23)，Sigma公司产品。     

促红细胞生成素对MPP+所致的PC12细胞线粒体氧化损伤的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导PC12细胞变性损伤的保护作用及其机制.方法 以MPP+损伤PC12 细胞作为帕金森病(PD)细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rh123)染色检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),双氯荧光黄乙酸乙酯(DCF-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)的含量,免疫印迹法检测pAkt蛋白表达.结果 ①500 μmol/L的MPP+可以导致PC12细胞的存活率下降,凋亡率增加,0.1~10 U/mL的EPO可以使PC12细胞的存活率增加,凋亡率降低,并在1 U/mL时达到最大保护效应;②MPP+导致ROS含量增加、ΔΨm降低;EPO可以抑制MPP+所致ROS和ΔΨm水平的变化;③EPO增加了Akt磷酸化水平,PI3K抑制剂LY294002拮抗了EPO的保护作用和对ROS产生的抑制作用.结论 EPO对MPP+损伤PC12细胞具有保护作用,其机制是通过PI3K/Akt通路实现的.     

枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞保护作用

目的：研究枸杞多糖对缺氧损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株PC12的保护作用。方法：采用氯化钴（CoCl2）建立PC12细胞,通过测定受损细胞给药后的活力、受损细胞LDH泄露量和受损细胞ROS生成量及线粒体膜电位,研究枸杞多糖对受损细胞的保护作用。结果：枸杞多糖能显著增加缺氧模型细胞的活力;降低细胞LDH泄漏量;增强缺氧损害细胞的SOD活性;并增加缺氧损害细胞线粒体膜电位。结论：枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。     

Protective Effects of Procyanidins on 6-OHDAinduced PC12 Cells Injury and its Mechanism Exploration

Objective：To investigate the protective effect of procyanidins （PC） on PC12 cells injured induced by 6-hydroxydopamine （6-OHDA）,and then to explore the underlying mechanism. Methods：PC12 cells were treated with 6-OHDA for 24h to establish cell injury model,PC were added in 2 h before 6-OHDA and the PI3K inhibitor LY294002 was added in 0.5 h before PC to detect the mechanism of protection. Pharmacodynamic study of PC in this model were divided into 5 groups：control group,model group （75 μmol·L-1 6-OHDA）,PC-L,M,H group （75 μmol·L-1 6-OHDA+12.5,25,50 μmol/L）;mechanism study of PC in this model were divided into 5 groups：control group,model group （75 μmol/L 6-OHDA）,PC-H group,LY group （75 μmol·L-1 6-OHDA+20 μmol/L LY294002）,PC-H+LY group （75 μmol·L-1 6-OHDA+50 μmol·L-1 PC +20 μmol·L-1 LY294002）. MTT assay was used to detect cell viability,colorimetric method was used to detection of lactate dehydrogenase （LDH） leakage,the total superoxide dismutase （SOD） activity was measured by WST-8 method,JC-1 staining was used to detect the mitochondrial membrane potential. The expression of Akt and p-Akt （Ser473） protein was assayed by Western Blot. Results：OD570 of 1.5×105/mL PC12 cells at 0.82±0.05 was in a good linear range that for the appropriate subculturing concentration;PC12 cells were treated with 6-OHDA for 24 h and its viability decreased with the increase of 6-OHDA concentration,compared with control group,6-OHDA（ 75 μmol·L-1） damaged cell 49.55±5.32% （P<0.01） for the appropriate model concentration;cells were treated with PC alone for 24 hours without signifi cant toxicity at each concentration,the cell viability was slightly increased at 50 μmol·L-1. Compared with control group, the cell viability,total SOD activity,mitochondrial membrane potential and protein of Akt Ser473 phosphorylation levels decreased in model,while the leakage rate of LDH increased. Compared with the model group,PC （12.5,25,50 μmol·L-1） treatments could improve the morphological damage of PC12 cells induced by 6-OHDA and increase the cell viability,signifi cantly reduce the leakage rate of LDH （P<0.01）,increase the activity of total SOD （P<0.01）,inhibit the decrease of mitochondrial membrane potential,and increase the expression of p-Akt protein （P<0.01）. All of these effects were antagonized by LY294002. Conclusion：Under the experimental conditions,PC has protective effect on 6-OHDA-induced PC12 cells injury,and its mechanism may be related to up-regulation of PI3K/ Akt pathway.     

五味子醇甲抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究

目的 研究五味子醇甲(Schizandrin，SCH)的神经保护作用并探索其作用机制。方法 以PC12细胞为模型细胞，采用四氮唑(MTT)比色法检测6-羟基多巴胺(6—0HDA)对PC12细胞活性的影响；采用放射免疫法测定PC12细胞对培养液中^3H—D，L-谷氨酸的摄取；采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞外液中谷氨酸的浓度。结果 6—OHDA能抑制PC12细胞摄取谷氨酸，提高胞外谷氨酸的浓度，降低细胞的存活率；SCH能增强PC12细胞对谷氨酸的摄取，降低胞外谷氨酸的浓度，并拮抗6-OHDA对PC12细胞摄取谷氨酸的抑制作用和对细胞存活率的影响。结论 SCH对PC12细胞有保护作用，其保护作用机制可能与增强谷氨酸转运体(Glutamate transporters，GluTs)的功能有关     

姜酚肟对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

 【目的】探讨姜酚肟对谷氨酸(glutamate, Glu)诱导PC12细胞损伤的保护作用。【方法】体外培养PC12细胞，建立谷氨酸诱导PC12细胞损伤的模型；采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术和Hoechst 33258 DNA 染色法检测细胞凋亡。【结果】经5 mmol/L的谷氨酸处理24 h后，PC12细胞活力比对照组降低，仅为对照组的58.3﹪。在一定浓度范围内，姜酚肟能保护PC12 细胞免受谷氨酸(5 mmol/L)的影响，但较高浓度时对细胞有一定的毒性。经不同浓度姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25 μg/mL)预处理后，细胞活力明显提高，其保护作用随浓度降低而升高，当浓度为6.25 μg/mL时效果最好，使PC12细胞的存活率达到75.2﹪（P<0.01），浓度为3.125 μg/mL 时，细胞存活率降为70.2﹪(P<0.01)。谷氨酸(5 mmol/L)能诱导PC12细胞凋亡，处理24 h 后细胞凋亡率为20.1﹪, 经姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25 μg/ml )预处理后，细胞凋亡率明显降低，分别为3.5﹪(P<0.01), 2.8﹪(P<0.01), 9.6﹪(P<0.01), 17.7﹪(P<0.05)。【结论】谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡，较低浓度的姜酚肟能有效保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤，其中6.25 μg/ml的姜酚肟效果最好。     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究丹酚酸B（Salvianolic acid B,Sal B）对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1-100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达。结论在0.1-100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关。     

黄连解毒汤对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤的保护作用

[目的]观察黄连解毒汤(huanglian-jian-du-tang,HJDT)对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤的保护作用.[方法]建立体外糖氧剥夺(oxygenglucose deprivation,OGD)和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型,分别给予不同浓度的HJDT,以四甲基偶氮唑盐(MTT)和乳酸脱氢酶(LDH)法观察HJDT对细胞损伤的保护作用.采用双侧颈总动脉阻断30min建立C57BL/6小鼠全脑缺血模型,术前7d开始灌服HJDT(1、2、4、8 g·kg-1)至术后3d,采用新奇事物探究实验检测小鼠学习记忆能力,采用Nissl染色检测海马神经元存活的情况.[结果]OGD 4 h复灌2h后,HJDT可显著增加PC12细胞活性,显著减少LDH释放(P＜0.01);谷氨酸处理24 h后,HJDT能显著增加PC12细胞活性,减少LDH释放(P＜0.05).HJDT(4 g·kg-1)能显著提高全脑缺血小鼠对新物体的分辨比,(2、4 g·kg-1)可显著提高小鼠海马CA1区的神经元密度.[结论]HJDT对PC12细胞和小鼠全脑缺血损伤具有保护作用.     

MCI-186对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究MCI-86对PC12细胞凋亡的影响.方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色及荧光显微镜形态学观察,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果:MCI-186可有效地改善凋亡引起的PC12细胞形态学变化,提高细胞存活率,1×10-5 mol/L MCI-186可减小亚二倍体峰的峰面积,使凋亡细胞比率(1.99)小于损伤对照组细胞(6.45).结论:MCI-186可能作用于细胞凋亡过程,通过清除活性氧,对神经细胞凋亡具有抑制作用.     

环维黄杨星-D对6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞死亡率的影响

目的:研究环维黄杨星-D (CVB-D)的神经保护作用,研究CBV-D对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞存活率的影响.方法:以PC12细胞为模型细胞,采用四氮唑(MTT)比色法检测6-OHDA对PC12细胞活性的影响;采用放射免疫法测定PC12细胞对培养液中[3H]-D,L-谷氨酸的摄取;采用HPLC法测定细胞外液中谷氨酸的浓度.结果:6-OHDA能抑制PC12细胞摄取谷氨酸,提高胞外谷氨酸的浓度,降低细胞的存活率;CVB-D能拮抗6-OHDA对PC12细胞摄取谷氨酸的抑制作用和对细胞存活率的影响.结论:CVB-D对PC12细胞有保护作用,其保护作用机制可能与增强谷氨酸转运体的功能有关.