小鼠β防御素2在MDCK细胞中的表达和抗流感病毒活性研究

目的探索小鼠β防御素2（mouseβ-defensin 2,mBD2）表达载体在狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney,MDCK）中的表达和抗甲型流感病毒（influenza Avirus,IAV）活性。方法将真核表达载体pcDNA3.1/mBD2利用脂质体法转染MDCK细胞,G418筛选得到稳定转染的阳性细胞,用RT-PCR方法鉴定目的基因和免疫荧光法鉴定目的蛋白在转染细胞中的表达。用TCID50测定转染细胞的抗IAV活性。用pcDNA3.1/mBD2质粒免疫小鼠,观察死亡保护率。结果 pcDNA3.1/mBD2转染MDCK细胞后在细胞中稳定表达,转染细胞的TCID50比对照组的病毒效价降低近77.98倍;重组质粒免疫小鼠后,死亡保护率为55.55%。结论 mBD2能够在MDCK细胞中稳定表达,并且在体外及体内实验中显示出抗流感病毒活性,该结果为抗流感病毒制剂研究奠定了实验基础。     

β-防御素的研究进展

生物界中各物种对致病微生物的入侵均具有效的防御机制,这除了与后天产生的适应性免疫系统有关外,还与机体产生的抗微生物多肽和蛋白(APs)密切相关,APs包括防御素、过氧化物酶、溶菌酶、磷脂酶等多种不同分子量、不同组成的多肽和蛋白,是宿主先天性防御体系的重要组成成分〔1〕。其中防御素(defensins)是近年来颇受关注的一组抗微生物多肽。防御素具广谱抗微生物活性,能有效地杀灭病毒、细菌、真菌、螺旋     

人β-防御素-2在肺部炎性疾病的研究进展

人类为抵抗外界微生物侵袭,逐步形成一套完善的天然免疫和获得性免疫系统.人防御素作为重要的天然免疫成分,近10年成为研究热点.各脏器黏膜表面分泌的β-防御素是机体主要的防御屏障.而人β-防御素-2在感染和炎症诱导下在肺部进行高水平表达,成为研究防御素和肺部感染性和非感染性疾病的临床课题.     

人β-防御素-2与肺部疾病的研究进展

人β-防御素-2(human β-defensin 2,HBD-2)是一类在肺部诱导性表达的抗菌肽,在呼吸系统的防御中发挥着重要作用.本文就HBD-2的分子结构、生物学活性、表达调控及其在呼吸系统疾病中的研究进展进行综述.     

人β防御素-1与呼吸系统疾病的研究进展

人β防御素-1(human beta-defensin 1,HBD1)是一类在人类上皮细胞内广泛表达的抗微生物肽,在呼吸系统防御中发挥重要作用.本文就HBD-1的分子结构、生物学活性、表达调控及其在呼吸系统疾病中的研究进展进行综述.     

β-防御素与呼吸系统的防御和损伤

β 防御素是近年来发现的一类广泛存在于皮肤和黏膜上皮组织中具有广谱抗微生物活性的小分子多肽 ,具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用 ,是先天性和获得性免疫系统的重要组成部分。本文主要总结与呼吸系统相关的内容 ,对 β 防御素的分布、结构、表达、生物学作用、作用机制及其临床应用前景等进行简述。     

2018-2020年克拉玛依市甲型H3N2流感病毒分子特征分析北大核心CSCD

目的了解克拉玛依市甲型H3N2流感病毒HA和NA基因特征,为防控提供科学依据。方法收集2018-2020年克拉玛依市甲型H3N2流感毒株进行HA和NA基因序列测定,运用Mega软件与疫苗株进行序列比对和分析。结果 18株毒株HA基因与A/Hong Kong/4801/2014同源性高于A/Kansas/14/2017,NA基因与A/Hong Kong/4801/2014同源性低于A/Kansas/14/2017。相对疫苗株,克拉玛依市毒株已出现氨基酸同时在2个及以上抗原决定簇发生替换;HA蛋白均发生了糖基化位点的改变;未发现与耐药相关位点突变。结论 2019-2020年克拉玛依市毒株与当年度疫苗推荐株匹配度降低且HA已发生抗原漂移,可能导致本地区H3N2毒株流行,神经氨酸酶抑制剂类药物依旧能够有效治疗流感,应加强对流感病毒HA和NA基因进行监测。     

重组人β-防御素3对多耐药细菌的抑菌活性分析

目的研究重组人β-防御素3(rhBD-3)对临床多耐药菌株(铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌)的抗菌活性。方法采用比浊法测定不同浓度rhBD-3下4种细菌液OD值,确定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),并与对照组比较。结果 rhBD-3对所测菌株菌均有抑菌活性,在一定的浓度范围内,rhBD-3的浓度增高抑菌活性增强。rhBD-3的MIC、MBC与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。结论 rhBD-3对临床多耐药细菌具有显著的抑菌活性,给解决临床细菌耐药带来新希望。     

小鼠β防御素1与甲型流感病毒M2e融合基因表达及其免疫特性研究

目的构建mBD1与M2e融合基因的真核表达载体,并检测其在MDCK细胞中的表达情况,初步探讨其免疫特性。方法利用PCR方法分别扩增mBD1与M2e基因片段,再通过重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)将mBD1与M2e通过一段多肽接头Gly4Ser连接为融合基因mBD1-M2e。将该融合基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+)获得重组质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,用脂质体转染MDCK细胞,通过免疫荧光、RT-PCR产物序列分析检测融合蛋白表达情况,最后采用MTT法检测mBD1-M2e融合蛋白刺激淋巴细胞增殖能力。结果经鉴定后证实构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD1-M2e正确,该重组质粒能在MDCK细胞中稳定表达,该细胞培养上清液能刺激淋巴细胞增殖。结论本研究成功构建mBD1-M2e融合基因的真核表达质粒,并证实其融合蛋白能在MDCK细胞中稳定表达,这一结果为进一步研究新型高效通用的流感病毒核酸疫苗奠定了坚实的基础。     

人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫

细菌耐药现象日益严重 ,如何降低耐药菌产生和怎样治疗耐药菌感染是一个世界性难题。近 10年来人们发现了 β 防御素 ,它具有广谱抗微生物作用 ,除了极个别病原体对其天然耐药外 ,未发现获得性耐药菌 ,下面主要对人 β 防御素 1、β 防御素 2、β 防御素 3的分子结构、生物学活性、基因表达调控、β 防御素在下呼吸道抗感染中的作用及展望进行综述。     

从β-防御素-2探讨中医药抗幽门螺杆菌的思路

1β-防御素-2(human β-denfensin-2,HBD-2)概述 防御素(defensins)是近年来发现的一组富含半胱氨酸阳离子的小分子抗菌多肽,分子量为3.5～4.0 kD,含29～34个氨基酸,在结构上具有相应的保守序列(Cys)和相似紧密的空间构型;在功能上也有相似的共性,可激活参与天然免疫和获得性免疫的宿主细胞,诱导参与炎症预激的细胞因子,具有广泛的抗微生物活性.防御素按结构分为α-防御素和β-防御素,α-防御素主要由中性粒细胞和小肠潘氏细胞产生,而β-防御素广泛表达于多种器官的上皮细胞和黏膜下腺体.     

β-防御素与呼吸系统的防御和损伤

β-防御素是近年来发现的一类广泛存在于皮肤和黏膜上皮组织中具有广谱抗微生物活性的小分子多肽，具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用，是先天性和获得性免疫系统的重要组成部分。本文主要总结与呼吸系统相关的内容，对β-防御素的分布、结构、表达、生物学作用、作用机制及其临床应用前景等进行简述。     

β-防御素-2在感染性疾病中应用的研究进展

人体β--防御素-2（human-β-defensin-2,HBD12）是一种可诱生型小分子抗菌肽。近年来的研究表明,HBD-2不仅对普通病原微生物具有抗菌作用,还对目前日益增多的多重耐药菌具有一定的抗菌优势。HBD-2在感染、炎症中的特性使其在某些疾病的发生、发展与转归过程中起到一定的预后评估作用,并具有某种生物标记物的潜在价值。     

β-防御素-2与Toll样受体关系的研究进展

β-防御素-2是固有免疫应答的重要组成成分,是-类可诱导性的抗菌肽,抗菌谱广,对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、分枝杆菌、非典型病原体和包膜病毒都具有-定的抵抗作用。关于β防御素-2的生成机制虽然尚未完全阐明,但大量研究表明与上皮细胞表达的Toll样受体密切相关,本文就β防御素-2与Toll样受体关系的研究进展作一综述。     

β-防御素-2在不同月龄大鼠肺组织表达研究

目的研究老龄(18~20月)和青年(2~3月)大鼠肺组织表达β-防御素-2(β-defensin-2,BD-2)的量有无差别。方法老年和青年健康Wistar大鼠各10只,采用逆转录-多聚酶链反应方法检测肺组织BD-2基因表达水平;HE染色切片来了解肺组织的情况。结果老龄大鼠肺组织BD-2基因表达水平为0·208±0·138,青年为0·351±0·206,2组差别无显著性(P>0·05)。HE染色切片老年大鼠肺组织可见肺泡断裂、肺间隔增厚、酸性细胞渗出等改变,而青年大鼠没有上述改变。结论基因水平上青年大鼠肺组织BD-2稍高于老龄大鼠,但无统计学意义,提示老年人易患呼吸道感染与BD-2的表达可能无关,但仍需进一步的研究。     

β-防御素2与病原疫苗及其免疫效应的关联性研究

目的 研究病原菌疫苗及其免疫反应与大鼠β-防御素2蛋白(rBD-2)表达的关系,探讨β-防御素2人为诱导的方法及其在疫苗免疫防御中的作用.方法 使用两种疫苗(23价肺炎链球菌多糖疫苗、B型流感嗜血杆菌结合疫苗)分别滴入大鼠肺内,Westernblotting法检测肺组织rBD-2蛋白含量;选择作用显著的疫苗滴入鼠肺,不同时间检测肺组织rBD-2蛋白含量,ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、和IL-10蛋白含量.结果 两组疫苗作用大鼠后肺组织中rBD-2蛋白均明显上升,B型流感嗜血杆菌结合疫苗的作用更明显;B型流感嗜血杆菌结合疫苗作用后21d,rBD-2随时间逐渐升高,血清细胞因子含量均呈先升高、后降低的趋势,与对照组比较差异显著.结论 病原菌疫苗可明显上调大鼠肺组织rBD-2的表达,rBD-2与疫苗引起的免疫反应存在关联,在疫苗的免疫防御效应中有一定作用.     

β-防御素-2mRNA在大鼠肺炎中的表达及与白介素17F的关系

目的 探讨β-防御素-2 mRNA在大鼠肺炎中的表达及与白介素17F(IL-17F)的关系.方法 50只健康SPF级雄性SD大鼠随机分为肺炎组和对照组,气管直接滴入菌液法复制肺炎模型,每组分为5小组,分别于接种后4 h、12 h、1 d、3 d、5 d分批处死动物,剖胸取出肺组织,左上肺组织匀浆菌落计数,右中肺组织实时...     

人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫

细菌耐药现象日益严重，如何降低耐药菌产生和怎样治疗耐药菌感染是一个世界性难题。近10年来人们发现了β-防御素，它具有广谱抗微生物作用，除了极个别病原体对其天然耐药外，未发现获得性耐药菌，下面主要对人β-防御素1、β-防御素2、β-防御素3的分子结构、生物学活性、基因表达调控、β-防御素在下呼吸道抗感染中的作用及展望进行综述。     

小鼠β-防御素2对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探究小鼠β-防御素(mBD)2对结肠癌细胞SW480细胞增殖、凋亡作用及可能作用机制,为结肠癌的临床治疗提供新思路。方法体外培养SW480细胞,转染mBD2重组质粒分为空白组(Control组)、阴性转染组(NC组)、mBD2转染组,CCK8法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测细胞克隆形成数目情况;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期情况;Western印迹法检测凋亡有关蛋白Bax、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、Bcl-2蛋白表达情况。结果随着细胞培养时间延长,mBD2转染组细胞增殖抑制率逐渐升高,在同一时间点,与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞增殖抑制率显著升高(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞克隆形成数目均降低,mBD2转染组细胞凋亡率显著升高(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞G1期DNA量均显著升高(P0.05)。3组G2期、S期DNA量无明显变化(P0.05)。与Control、NC组相比,mBD2转染组细胞中Bax、活化caspase3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P0.05)。结论 mBD2可能通过使细胞阻滞于G1期,上调凋亡蛋白表达,进而抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,发挥抗肿瘤作用。