调控CIAPIN1基因表达对食管癌细胞生长及侵袭性的影响

目的 采用重组慢病毒CIAPIN1表达载体和CIAPIN1沉默载体感染食管癌EC9706细胞,观察调控CIAPIN1基因表达对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡及体外侵袭转移的影响.方法 构建CIAPIN1表达慢病毒载体和CIAPIN1 siRNA慢病毒载体,包装得到重组慢病毒;分别感染食管癌EC9706细胞,筛选得到稳定C...     

CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达及其相关性研究

目的 检测CIAPIN1基因在结肠癌组织的表达水平与结肠癌患者临床特征的相关性,研究CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性.方法 收集28例结肠癌患者手术后的癌组织及癌旁组织标本(术前未行放化疗),采用Western blot法检测28例结肠癌患者结肠癌组织、癌旁组织的CIAPIN1基因蛋白表达水平,探讨CIAPIN1基因与结肠癌发生的相关性;统计患者临床资料,分析CIAPIN1基因表达与结肠癌患者临床特征及肿瘤标志蛋白的关系.结果 Western bloting法检测28例结肠癌患者结肠癌组织CIAPIN1的表达明显低于癌旁组织,分别为17.9％与85.7％,差异有统计学意义(P＜0.01).CIAPIN1基因的表达与患者肿瘤大小、肿瘤分期呈负相关(P=0.020);CIAPIN1与结肠癌患者性别、肿瘤发生部位、CEA、CA50、CA199、CA242、CA724的表达无相关性(P＞0.05).结论 CIAPIN1在结肠癌组织的表达缺失或降低可能与结肠癌的发生密切相关,与肿瘤大小、分期呈负相关.与患者的性别、肿瘤发生部位、肿瘤标记蛋白(CEA、CA50、CA199、CA242、CA724)无相关性.     

CIAPIN1和P-gp蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨细胞因子诱导的凋亡抑制因子1(CIAPIN1)和P糖蛋白(P-gp)蛋白在胃癌组织中的表达,分析二者对胃癌诊断的临床意义.方法 回顾性分析2017年8月至2019年3月于本院行手术切除治疗的60例胃癌患者的临床资料,分析CIAPIN1、P-gp蛋白在胃癌及癌旁组织中的阳性率,分析临床分期、淋巴结转移情况对胃癌...     

RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长抑制作用的研究

目的观察RASSF1A基因对食管癌细胞EC9706生长的抑制。方法将包含RASSF1A基因的质粒转染RASSF1A表达缺失的EC9706细胞,建立稳定转染细胞系,通过MTT法检测细胞活性和增殖能力、流式细胞仪检测其对细胞周期的影响、裸鼠移植瘤实验检测转染细胞的体内成瘤特性。结果稳定表达RASSF1A的EC9706细胞较对照组细胞的RASSF1A蛋白表达增加;细胞生长速度减慢（P〈0．01）;细胞周期中G1期比例增加,S期比例减少（G1期：RASSF1A组细胞：68．53％±3．34％;空质粒组：54．25％±4．61％;未转染组：53．41％±5．60％。S期：RASSF1A组细胞：（23．19±5．04）％;空质粒组：（31．81±2．05）％;未转染组：32．09％±1．99％）（P〈0．01）;同时裸鼠致瘤能力也被抑制（P〈0．05）。结论RASSF1A基因的外源性表达能显著抑制食管癌细胞在体内外的生长,提示该基因在食管癌的发生发展中发挥重要作用。     

ET-1在食管鳞状上皮细胞癌中的表达及其对癌细胞侵袭的影响

目的 探讨内皮素-1(Endothelin 1,ET-1)对食管鳞状上皮细胞癌细胞侵袭作用的影响.方法 用Western blotting法检测75例食管鳞癌组织及配对正常食管粘膜上ET-1的蛋白表达,并用双重ET受体抑制剂Bosentan进行干预,用Matrigel体外侵袭试验显示食管癌细胞侵袭能力.结果 Western blotting法显示74.7%(56/75)的食管癌组织中有ET-1蛋白高表达;Bosentan抑制ET-1与其受体结合并降低其生物作用,显著抑制食管癌细胞的体外侵袭.结论 ET-1可增强人类食管鳞癌细胞的侵袭力.     

MACC1基因干涉对食管癌细胞Eca109体外和体内增殖的影响

目的:探讨MACC1对食管癌细胞Eca109增殖的影响。方法:利用慢病毒载体介导的小发卡RNA(shRNA)干涉食管癌细胞Eca109中MACC1的表达。利用MTT法和平板克隆试验检测MACC1对食管癌细胞增殖的影响,利用流式细胞仪检测细胞周期的变化,最后利用裸鼠成瘤试验检测MACC1对食管癌细胞体内增值的影响。结果:成功建立MACC1干涉的食管癌细胞,MTT和平板克隆结果显示MACC1基因干涉后抑制食管癌细胞的增殖,并使食管癌细胞发生G1期阻滞。体内试验进一步证实MACC1干涉后抑制食管癌细胞在体内的增值。结论:干涉MACC1基因可抑制食管癌细胞的增殖。     

ZEB1对食管癌细胞侵袭转移的影响及作用机制研究

目的 探讨E盒结合锌指蛋白1（zinc finger E-box-binding protein 1,ZEB1）对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）增殖和侵袭转移的影响和机制。 方法 选择人ESCC细胞系EC9706细胞为研究对象,采用ZEB1 shRNA对EC9706细胞进行转染,敲除ZEB1表达;采用CCK8法检测细胞活力;细胞侵袭转移能力通过划痕实验检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）技术检测转染后细胞ZEB1 mRNA表达水平;ZEB1,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）1/2,p-ERK1/2, E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平通过免疫印迹（Western blot,WB）检测。 结果 与对照组相比,敲除ZEB1的EC9706细胞系的细胞活力明显降低,并抑制了ESCC的侵袭转移能力（P＜0.05）。ZEB1表达水平降低减少了ERK1/2激活水平,促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达（P＜0.05）。 结论 下调ZEB1表达抑制ESCC细胞增殖和侵袭转移能力,其作用机制与ERK1/2激活抑制及调控E-cadherin、N-cadherin相关。     

RNA干扰分化抑制因子-1基因表达对食管鳞状细胞癌增殖与凋亡的影响

目的研究针对分化抑制因子-1的siRNA（si-Id-1）对人食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞增殖和凋亡影响的可能机制。方法阳离子脂质体法介导si-Id-1转染ESCC TE-1细胞株,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化并计算转染率,RT-PCR检测Id-1的mRNA表达水平;免疫印迹法检测Id-1的蛋白表达水平;细胞增殖实验检测转染前后TE-1细胞增殖能力变化;流式细胞术检测各组细胞的周期变化和凋亡指数。结果si-Id-1转染前后的TE-1细胞株Id-1的mRNA和蛋白表达水平有明显差异（P〈0.05）;转染后的TE-1细胞较其亲代细胞增殖能力降低,凋亡程度增强（P〈0.05）;转染后的TE-1细胞周期停滞在G0/G1期,G1期细胞数增多,S期细胞数减少（P〈0.05）。结论利用脂质体将si-Id-1转染至ESCC的TE-1细胞是切实可行的;si-Id-1可以有效沉默TE-1细胞Id-1的表达,从而抑制ESCC细胞增殖。     

反义IGF—1R基因对肝癌细胞生长的抑制作用

目的：研究反义ＩＧＦ－ＩＲ基因对肝癌细胞株７７２１细胞生长的抑制作用。方法：利用基因治疗的反义技术,通过脂质体介导将ＩＧＦ－ＩＲ正,反义基因直核表达载体导入人肝癌细胞株,ＳＭＭＣ－７７２１,经潮霉素筛选阳性克隆后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期,凋亡,ＭＴＴ法检测细胞生长及软琼脂克隆形成试验。结果：ＩＧＦ－ＩＲ反义细胞与７７２１细胞ＩＧＦ－ＩＲ正义细胞在前６ｄ生长真挚无明显变化,第７天后反义ＩＧＦ     

表面标志物Cripto-1表达对食管癌干细胞生长的作用机制研究

目的:探讨表面标志物Cripto-1(CR-1)的表达对食管癌干细胞生长的作用机制.方法:自食管癌Eca109细胞中分选Eca109干细胞,提取正常食管上皮细胞HEEC和Eca109细胞、Eca109干细胞总蛋白,采用Western-blot法检测CR-1表达水平;构建CR-1基因沉默载体CNE2/CR-1 -及过表达载体CNE1/CR-1 +,利用脂质体转染法将CNE2/CR-1 -和CNE1/CR-1 +分别转染进Eca109干细胞中,并设对照组,采用RT-PCR法检测CR-1表达;MTT法检测对照组、CNE2/CR-1 -组、CNE1/CR-1 +组Eca109干细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组Eca109干细胞凋亡情况;Western-blot法检测各组细胞Akt、p-Akt蛋白表达情况.结果:Eca109细胞及Eca109干细胞中CR-1表达均明显高于HEEC(P<0.01).RT-PCR结果显示,CNE2/CR-1 -组CR-1表达水平明显低于对照组,CNE1/CR-1 +组明显高于对照组(P<0.01).MTT结果显示,CNE2/CR-1 -组细胞增殖明显低于对照组,CNE1/CR-1 +组明显高于对照组(P<0.01).流式细胞仪检测显示,CNE2/CR-1 -组细胞凋亡率明显高于对照组, CNE1/CR-1 +组细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.01).Western-blot结果显示,CNE2/CR-1 -组p-Akt蛋白表达明显低于对照组,CNE1/CR-1 +组p-Akt蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);而Akt蛋白表达未出现明显变化(P>0.05).结论:CR-1作为潜在的食管癌干细胞标记物,可能通过PI3K/Akt信号通路调控食管癌干细胞的增殖与凋亡.     

沉默线粒体核糖体蛋白L35基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响

目的：探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35（MRPL35）基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法：选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35 mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为shMRPL35组和shCtrl组,分别加入沉默靶基因带有嘌呤霉素抗性的si-RNA慢病毒和带有嘌呤霉素抗性的阴性对照si-RNA慢病毒进行感染,建立稳定沉默MRPL35基因的食管癌细胞系,实时定量PCR及Western blotting法检测各组细胞中MRPL35基因沉默效率,采用CCK-8法检测各组细胞生长曲线,Annexin Ⅴ-PE/7AAD双染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：3种食管癌细胞均表达MRPL35基因,3种细胞中MRPL35 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。实时定量PCR法和Western blotting法检测,shMRPL35组TE-1细胞中MRPL35 mRNA和蛋白表达水平明显低于shCtrl组（P<0.05）。与shCtrl组比较,shMRPL35组TE-1细胞生长速度明显降低（P<0.05）,凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：沉默MRPL35基因可抑制食管癌细胞TE-1增殖,并通过凋亡途径发挥作用。     

环状RNA-VANGL1对胃癌细胞增殖和凋亡的作用及机制研究

目的 探讨环状RNA-VANGL1(circ_VANGL1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其中的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测circ_VANGL1在胃癌组织和细胞中的表达水平,并分析circ_VANGL1与患者临床病理因素如年龄、性别、肿瘤体积、病理分型、分期、淋巴结转移之间的相关性。构建携带circ_VANGL1全长序列的慢病毒（Lenti-circ_VANGL1）和携带circ_VANGL1 shRNA的慢病毒（Lenti-circ_VANGL1-shRNA）分别转染胃癌细胞株（NCI-N87和HGC-27）。CCK-8实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞的增殖变化。Annexin Ⅴ/PI实验检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞凋亡的变化。JC-1法检测circ_VANGL1表达上调或下调后NCI-N87和HGC-27细胞线粒体势能变化。Western印迹法检测Fas、FADD、bax、bcl-2、细胞色素C以及Caspase-3活性片段的蛋白表达变化。结果 circ_VANGL1在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤体积、分期和淋巴结转移显著正相关。Lenti-circ_VANGL1可以上调NCI-N87和HGC-27细胞内circ_VANGL1表达并促进细胞增殖;Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以下调circ_VANGL1表达并诱导细胞凋亡。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以导致细胞线粒体膜势能降低。Lenti-circ_VANGL1-shRNA可以促进Fas细胞表面死亡受体（Fas cell surface death receptor, Fas）、Fas相关蛋白死亡结构域(Fas associated via death domain, FADD)、bax（BCL2 associated X）、胞质细胞色素C（cytoplasmic cytochrome C）以及Caspase-3活性片段表达增高,降低bcl-2和线粒体细胞色素C蛋白表达。miRDB软件显示circ_VANGL1存在12个潜在的靶miRNAs,其中miR-605-3p、miR-377-5p、miR-4468以及miR-5008-5p等4个miRNAs的表达在circ_VANGL1表达下调后显著增高。结论 circ_VANGL1在胃癌中表达异常增高,参与调控胃癌细胞的增值和凋亡,在胃癌发生发展过程中发挥重要作用。     

RasGRF1在结直肠癌细胞中的表达及其对癌细胞生物学行为的影响

目的 探究RasGRF1在结直肠癌细胞中的表达及对癌细胞生物学功能的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同结直肠癌细胞系DiFi、SNU175、HT-29、HCT-15细胞中RasGRF1mRNA;体外培养人结肠癌细胞,随机分为si-RasGRF1-NC组（阴性对照）、si-RasGRF1组（沉默RasGRF1表达）、NG组（空白对照）。采用qRT-PCR检测各组RasGRF1 mRNA,CCK-8法检测细胞存活情况,AnnexinV/PITC双染法检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞PI3K/Akt通路蛋白。结果 DiFi细胞中RasGRF1 mRNA相对表达量最高（P <0.05）,选择DiFi细胞进行后续实验。si-RasGRF1组光密度值低于NG组、si-RasGRF1-NC组（P <0.05）。si-RasGRF1组细胞凋亡率高于NG组和si-RasGRF1-NC组（P <0.05）。si-RasGRF1组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量低于NG组和si-RasGRF1-NC组（P <...     

Ebp1的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究降低Ebp1的基因表达水平对乳腺癌细胞T47D野生型增殖能力和侵袭能力的影响。方法:转染并筛选Ebp1降表达的单克隆细胞株clone1,clone2,clone3,阴性对照组命名为control。应用小干扰RNA技术降低Ebp1的表达,采用Western blotting技术检测Ebp1蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验观察其对T47D野生型细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;采用Matrigel侵袭实验研究其对细胞侵袭能力的影响。结果:Western blotting检测表明siRNA干扰后T47D野生型细胞中Ebp1的蛋白表达水平明显下降,且与亲本和control组细胞比较,Ebp1降表达的细胞克隆的增殖能力和侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:Ebp1表达下降可以明显促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,提示Ebp1可能是乳腺癌增殖和侵袭的抑制性因子。     

Ebp1的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究降低Ebp1的基因表达水平对乳腺癌细胞T47D野生型增殖能力和侵袭能力的影响。方法:转染并筛选Ebp1降表达的单克隆细胞株clone1,clone2,clone3,阴性对照组命名为control。应用小干扰RNA技术降低Ebp1的表达,采用Western blotting技术检测Ebp1蛋白水平的变化,噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成实验观察其对T47D野生型细胞增殖能力和克隆形成能力的影响;采用Matrigel侵袭实验研究其对细胞侵袭能力的影响。结果:Western blotting检测表明siRNA干扰后T47D野生型细胞中Ebp1的蛋白表达水平明显下降,且与亲本和control组细胞比较,Ebp1降表达的细胞克隆的增殖能力和侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:Ebp1表达下降可以明显促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力,提示Ebp1可能是乳腺癌增殖和侵袭的抑制性因子。     

芍药苷通过抑制Notch-1信号通路影响肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡

摘要 目的 探讨芍药苷对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法 使用不同浓度芍药苷（0、25、50、75、100、150 μmol/L）处理人肝癌细胞系HepG2,采用CCK-8 法检测细胞增殖活性。根据芍药苷浓度将HepG2细胞株分为四组：空白对照组（0 μmol/L）、低剂量组（25 μmol/ L）、中剂量组（50 μmol/L）和高剂量组（75 μmol/L）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell 法细胞侵袭迁移能力,Western blot法测定细胞表达Notch-1和Hes-1的水平变化情况。结果 使用不同浓度（0、25、50、75、100、150 μmol/L）芍药苷处理HepG2 细胞24 h后,细胞增殖活性呈剂量依赖性降低[（100.00）％、（83.34±8.06）%、（74.46±7.34）%、（63.59±2.51）%、（55.93±4.05）%、（39.99±6.06）%,P＜0.05]。当根据不同芍药苷处理浓度（0、25、50、75 μmol/L）处理HepG2 细胞24 h后,细胞穿膜数逐渐降低[（85.33±5.51）;（64.33±5.13）;（49.67±3.51）;（30.00±2.00）,P＜0.05];细胞凋亡率逐渐升高[（2.43±0.93）%;（13.37±2.57）%;（22.64±2.19）%;（28.53±1.37）%,P＜0.05];Notch-1蛋白表达水平逐渐降低[（1.13±0.15）;（0.75±0.05）;（0.55±0.06）;（0.39±0.04）,P＜0.05];Hes-1蛋白表达水平也逐渐降低[（0.80±0.07）;（0.55±0.07）;（0.38±0.04）;（0.17±0.03）,P＜0.05]。结论 芍药苷呈剂量依赖性抑制肝癌细胞HepG2增殖、侵袭,并可促进细胞发生凋亡,其机制可能与Notch-1 信号通路相关。