双份脐血间CD34^＋细胞与CD3^＋细胞相互作用对分化增殖能力的影响

目的双份脐血移植的植入动力学机制目前尚无定论,推测双份脐血中的淋巴细胞与优势份脐血的产生相关。本实验将双份脐血的CD34^＋细胞与CD3^＋细胞混合培养,观察CD3^＋细胞对CD34^＋细胞的增殖分化有无影响。方法建立液体和半固体培养体系,将免疫磁珠分选纯化的双份脐血间的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞混合培养6d和14d。以流式细胞计数观测CD34^＋细胞培养后的分化指标（CD33,CD41,CD71）;计数集落形成单位（GM—CFU、BFU-E、GEMM—CFU）分析CD34^＋细胞的增殖情况。结果液体共培养后各份CD34^＋细胞表面分化指标的变化。脐血CD34^＋细胞分选富集的纯度为（98．70±0．72）％。3d实验组和对照组的各项分化指标无差异（P〉0．05）;6d的CD33、CD71实验组明显低于对照组,而CD41明显高于对照组（P〈0．05）。半固体共培养后CD34^＋细胞增殖能力的变化。实验组的红系集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（GM—CFU）数低于对照组（P〈0．05）,而混合细胞集落形成数（GEMM—CFU）高于对照组（P〈0．05）。结论将两份脐血的CD34^＋细胞和CD3^＋细胞体外混合培养对CD34^＋细胞的增殖分化能力有影响,推测双份脐血间的相互作用可部分地通过CD3^＋细胞介导。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增脐血巨核祖细胞的研究

本研究探讨人脐血CD34^＋细胞体外扩增的巨核祖细胞的生物学特性及其免疫原性变化，为体外扩增脐血巨核祖细胞的临床应用提供实验依据。采用Ficoll-Hapaque分离法分离人脐血单个核细胞，应用免疫磁珠法（MACS）再分离富集CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO，50ng／ml）、白介素-1]（IL—11，50ng／ml）和肝素（25U／ml）的无血清液体培养体系中培养14天。用流式细胞术检测扩增产物免疫表型（CD34^＋、CD41a^＋、CD61^＋、CD34^＋CD41a^＋及CD34^＋CD61^＋）、巨核细胞凋亡率及其表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达，并进行巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）的检测。结果显示：脐血CD34^＋细胞能够有效地向巨核细胞分化，CD41a^＋和CD61^＋细胞比例在培养第14天达到峰值，CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例在扩增第7天达到最高峰[分别为（3．41±2．80）％和（1．89±1．43）％]；CFU—Mk大集落在扩增第7天达到高峰（（20．66±32．79）倍]，小集落在扩增第10天达到高峰[（435．62±482．65）倍]；在培养7、10和14天时巨核细胞的凋亡率分别为（19．48±9．64）％、（26．87±9．03）％和（52．46±11．74）％，其中培养7天和10天的凋亡率无显著性差异（P〉0．05），培养14天的凋亡率显著高于7天和10天（P均〈0．05）；巨核细胞表面HLA Ⅰ、Ⅱ类分子的表达随着扩增天数的延长逐渐降低，其中培养0到10天阶段下降明显．结论：采用TPO＋IL 11＋肝素组合．可以有效地扩增脐血巨核祖细胞；培养7天，CFU—Mk大集落扩增倍数、CD34^＋CD41^＋和CD34^＋CD61^＋细胞比例均达高峰，这是巨核祖细胞体外扩增的较佳培养时间。     

脐血和骨髓来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞差异的研究

本研究探讨脐血（CB）和骨髓（BM）来源的CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞的差异。采用Ficoll—Hypaque分离法分离人CB及BM单个核细胞，免疫磁珠法制备CD34^＋细胞，在含血小板生成素（TPO）、TPO＋白介素11（IL—11）或TPO＋IL11＋肝素的无血清液体培养体系中培养14天。流式细胞术检测扩增产物（CD34^＋、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞）免疫表型、巨核细胞凋亡率及DNA含量，并以集落形成单位测定法进行粒巨-噬细胞集落形成单位（CFU—GM）、红系爆式集落形成单位（BFU—E）及巨核细胞集落形成单位（CFU—Mk）计数。结果表明：14天培养中，CB来源细胞在总细胞数、CD41a^＋及CD34^＋CD41a^＋细胞扩增倍数上均高于BM（P均〈0．05）。0天CB及BM来源CD34^＋细胞在CFU—GM、BFU—E及总的CFU—Mk的形成能力上无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源CD34^＋细胞形成的CFU—Mk以大集落为主，其数量高于BM（P〈0．05）；在培养7、10和14天，CB及BM来源细胞CFU—GM扩增倍数无显著性差异（P均〉0．05），但CB来源细胞的BFU—E及总的CFU—Mk扩增倍数均高于BM（P均〈0．05）。14天培养中CB和BM来源巨核细胞的凋亡率无显著性差异（P均〉0．05）。DNA含量检测发现，14天培养中CB来源巨核细胞始终以2N细胞为主（比例〉90％），而BM来源巨核细胞随着培养时间延长，4N、8N及以上倍体巨核细胞比例逐渐增加。结论：CB来源CD34^＋细胞体外扩增巨核祖细胞能力高于BM，它可能是巨核祖细胞体外扩增较好的来源。     

致敏的脐血源树突状细胞诱导CTL特异杀伤白血病细胞的实验研究

探讨脐血单个核细胞（MNC）诱导的树突状细胞（DC）通过负载冻融的HL-60、K562细胞抗原体外诱导产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对HL-60、K562的杀伤作用。取脐血12份,分离MNC。在MNC中加入细胞因子GM-CSF（granulocyte monocyte colony-stimulating factor）、IL-3（interleukin 3）、SCF（stemcell factor）和EPO培养4周。使用CD83、CD1a、CD11C和CDw123单克隆抗体、流式细胞仪测定培养前后脐血DC抗原变化及扩增情况。DC通过负载HL-60、K-562白血病细胞抗原致敏T淋巴细胞产生CTL^3H-TdR掺入试验测定DC免疫刺激活性,MTT法观察CTL对HL-60、K562细胞的特异性杀伤活性。结果表明：新鲜脐血CD1a^＋、CD11c^＋、CD83^＋、CDw123^＋细胞数分别为0．27×10^5／ml、5．87×10^5／ml、1．94×10^5／ml、2．73×10^5／ml。加入上述细胞因子培养的脐血MNC分化为CD1a^＋、CD11C^＋、CD83^＋、CDw123^＋DC,经培养2—4周,DC数明显增多,分别达11．02×10^5／ml、28．24×10^5／ml、10．57×10^5／ml、18．7×10^5／ml,此后逐渐减少。细胞因子诱导脐血DC具有免疫刺激活性,且DC与CBMNC细胞比例为1：40时的刺激活性最佳。冻融法得到的HL-60、K562白血病细胞抗原致敏DC诱导的CTL对HL-60、K562细胞的杀伤率分别为（42．04±8．46）％和（31．25±11．07）％,与实验组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论：加入细胞因子GM—CSF、IL-3、SCF和EPO培养2-4周的脐血MNC可分化为cD1a^＋、CD11C^＋、CD83^＋、CDw123^＋DC。冻融法得到的HL-60、K562白血病细胞抗原致敏DC,其诱导的CTL对HL-60、K562细胞具有特异的杀伤作用。脐血DC作为抗原呈递细胞在肿瘤免疫治疗上将起到重要作用。     

不同剂量TPO对小鼠骨髓MSC增殖的影响

为了探讨不同剂量血小板生成素（TPO）对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）增殖的影响，将20只昆明小鼠（35±5g）随机分为低、中、高3个剂量实验组与对照组：给实验组分别腹腔注射TPO25、50和100μg／kg，而给对照组腹腔注射生理盐水0．1ml／g，每日1次，连用5日：每组分别于最后1次注射后12小时收集小鼠骨髓，计数骨髓有核细胞数（BMNC），以10^6／cm^2接种、培养并计数原代成纤维样细胞集落形成单位（CFU—F），同时对其进行成骨、成脂肪诱导分化，用流式细胞术检测BMNC中CD90^＋、CD105^＋、CD34^＋细胞比例并鉴定CFU—F的表型。结果显示：与对照组相比，实验组所获得的BMNC、CD90^＋、CD105^＋、CD34^＋细胞比例和CFU—F集落数明显增加（P〈0．05）。3个剂量中以50μg/kgTPO组增加最明显，但50μg/kg组的CFU—F集落数与100μg/kgTPO组的CFU—F集落数相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。CFU—F样MSC具有成骨、成脂肪分化的能力。结论：TPO促进BMNC数、CD90^＋、CD105^＋细胞数和CFU—F集落数增多，即促进骨髓MSC的增殖，但是TPO促进骨髓MSC增殖的作用不随剂号的增加而增加．     

间充质干细胞对脐血CD34^＋细胞扩增及其细胞特性变化的影响

本研究探讨脐带间充质干细胞（MSC）对CD34^＋细胞（HSPC）体外扩增的支持作用及对CD34^＋细胞表面标志、归巢黏附分子、集落形成能力等干细胞特征变化的影响。用免疫磁珠法从新鲜分离的脐血单个核细胞分离CD34^＋造血干祖细胞（HSPC）；用MSC饲养层（feeder）制备经^137Cs照射的间充质干细胞饲养细胞（MSC feeder cells）。将CD34^＋细胞接种在不同的培养体系中，实验分为3组：HSPC＋CK组为培养液中加入细胞因子组合（SCF、FL和TPO），HSPC＋MSC组为CD34^＋细胞接种在MSC feeder上，HSPC＋MSC＋CK组同时加入细胞因子组合及MSC饲养细胞。培养后4、7、10、14天计数有核细胞总数（MNC），计算细胞扩增情况；用流式细胞术检测不同处理组间CD34^＋细胞及亚群免疫表型、归巢黏附分子和集落形成能力。结果表明：在2周的培养时间里，3组MNC和CD34^＋细胞均明显增加，MNC扩增数依次HSPC＋MSC＋CK组〉HSPC＋CK组〉HSPC＋MSC组。体外扩增10天内HSPC＋MSC＋CK组MNC得到大量的扩增，同时CD34^＋细胞的扩增亦较高。培养4天3组细胞CD34^＋比例较0天有明显下降（P〈0．01）；扩增后CD34^＋细胞比例：HSPC＋MSC组〉HSPC＋MSC＋CK组〉HSPC＋CK组（P〈0．01）；各组CD34^＋细胞亚型细胞比例有所不同，HSPC＋CK组4天时CD34^＋CD38^-细胞有一过性升高（62．71％），之后迅速降低，7天时为0．05％；HSPC＋MSC组7天时CD34^＋CD38^-细胞比例为18．92％，与HSPC＋CK组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。从集落形成分析结果看出：MSC、细胞因子混合组扩增后细胞集落形成能力在不同时间点均维持在较高水平。结论：脐血CD34^＋细胞在体外短期培养（〈7天）下，MSC和细胞因子联合应用能同时使CD34^＋细胞得到明显的扩增并维持造血干祖细胞的生物学特征。     

人重组粒细胞集落刺激因子动员后采集骨髓对健康供者外周血采集物成份的影响

本研究探讨健康供者体内应用人重组粒细胞集落刺激因子（G—CSF）后采集骨髓对外周血采集物成份的影响。62例健康供者皮下注射rhG—CSF5μg/（kg·d），连用5天，其中31例供者在第4、5天分别采集骨髓和外周血采集物（A组）；另31例供者于第4、5天均单采集外周血单个核细胞（B组）。应用流式细胞术检测两组供者外周血采集物中的淋巴细胞、CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的数量。结果显示，A组供者每微升外周血采集物中单个核细胞中CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD14^＋、CD34^＋细胞以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞的中位含量分别1．56×10^5μ1、8．56×10^4μl、6．12×10^4μl、3．38×10^4μl、2．27×10^4μl、3．83×10^4μl、744μl及3588μl，与B组的1．40×10^5μl、7．34×10^4μ1、5．32×10^4l、3．06×10^4μl、1．83×10^4μl、3．21×10^4μl、554μl及3120μl的差异无统计学意义（p〉0．05）；A组外周血采集物中CD4^＋细胞与CD8^＋细胞的比值[1．52（0．54—2．87）]、单核细胞与CD3^＋细胞的比值[0．57（0．15—1．64）]以及CD3^＋CD4^-CD8^-T细胞与CD3^＋细胞[0．064（0．018—0．673）]的比值与B组[1．68（0．31—3．35）]、[0．59（0．18—1．25）]、[0．063（0．021—0．136）]的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：健康供者体内应用rhG—CSF后采集骨髓对外周血采集物成份无影响，对rhG—CSF动员的同一健康供者可单独采集骨髓、外周血采集物或同时采集两种采集物以满足临床移植的需要。     

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133^＋（UCB—CD133^＋）细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统（MACS）分选UCB—CD133^＋细胞，将纯化的UCB—CD133^＋细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞，在培养第7、10和14天进行细胞计数，流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化，并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位（CFU—MK）培养。结果表明：培养至第7天时，UCB—CD133^＋细胞扩增效果最佳，扩增了8、2-1-2．2倍；培养至第14天，细胞总数扩增了116倍；培养至10天时，平均1个CD133^＋细胞所产生的CD133^＋CD41^＋和CD34^＋CD41^＋细胞数最多，分剐为2．5±0．9和2．6±0.5个，所产生的CD41^＋细胞为20．3±5、9个；扩增前后的UCB—CD133^＋细胞均能形成CFU—MK，扩增第10天的UCB—CD133^＋细胞所形成的CFU—MK总数最多，CFU—MK扩增倍数为59．5±11．8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示，扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态，未见血小板形成。结论：UCB—CD133^＋细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力，培养第10天扩增效能最佳。     

Notch配体δ-1对IL-6/sIL-6R融合蛋白诱导红系祖细胞分化成熟的影响

目的 探讨Notch配体δ-1在红系造血细胞分化过程中对可溶性IL-6受体（sIL-6R）生物效应的影响。方法 用CD34免疫磁珠和FACS Vantage流式细胞仪筛选脐血单个核细胞中的CD34^＋CD38^-细胞；将CD34^＋CD38^-细胞用含SCF、Flt3L、TPO和IL-3四种生长因子组合（4GFs）的培养基培养7d，然后用CD36免疫磁珠分离CD36^＋红系祖细胞，用流式细胞术检测IL-6R和血型糖蛋白（GPA）的表达，并分选CD36^＋GPA—IL-6R^＋和CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞，将这两种表型的细胞分别进行集落分析；将CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞用含有4GFs、4GFs＋IL-6或4GFs＋IL-6／sIL-6R融合蛋白（FP6）培养基并在加与不加Notch配体δ-1的情况下培养14d，并对CD36^＋GPA^high成熟红细胞进行计数。结果 CD36^＋GPA^＋细胞中IL-6R^-细胞占95％；CD36^＋GPA^-细胞可分为IL-6R^＋和IL-6R^-两部分，分别占46％和54％；IL-6R^＋细胞形成的粒-单核细胞集落形成单位（CFU—GM）数为2．1±1．8，IL-6R^-细胞形成的红系祖细胞爆式集落形成单位（BFU—E）数为58．2±18．1，明显高于IL-6R^＋细胞形成的CFU—GM数（P〈0．05）；在含有FP6的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（1．400±0．180）×10^6；在含FP6和Notch配体δ-1的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（2．460±0．190）×10^6，明显高于单独含有FP6的培养体系（P〈0．05）。结论 Notch配体δ-1可增强IL-6-红系细胞分化过程中sIL-6R所介导的生物学效应。     

血管紧张素Ⅱ对脐血CD34+细胞体外分化为巨核细胞的影响

为了探讨血管紧张素Ⅱ对脐血CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞的影响，采用免疫磁珠法（MACS）分选8例健康产妇足月顺产胎儿脐血中的CD34^＋细胞，在舍血小板生成素（TPO50ng／ml）、白介素-3（IL-310ng／ml）、干细胞刺激因子（SCF50ng／l）的无血清培养液中添加浓度分别为50、100、1000μg／ml的血管紧张素Ⅱ作为实验组；同时以未添加血管紧张素Ⅱ的基础培养液作为对照组，培养14天后观察结果。细胞计数仪计数单个核细胞数（MNC）；流式细胞仪计数培养体系中的CD41^＋细胞数、血小板数，及分析细胞周期；利用CD41单克隆抗体免疫荧光染色观察培养体系中的细胞情况。结果表明：与对照组比较，实验组单个核细胞数无明显改变（P〉0．05）；而CD41^＋细胞和血小板数量有明显的增加（P〈0.05）；细胞周期分析显示，实验组的4倍体细胞增加，并存在明显的凋亡（P〈0．05）；荧光显微镜下观察对照组和实验组均可见大小不一的CD41^＋细胞。结论：血管紧张素Ⅱ可以促进脐血中CD34^＋细胞诱导分化为巨核细胞，并能促进巨核细胞产生血小板。     

体外共培养双份脐血CD34^＋细胞对各自归巢相关分子表达的影响

本研究探讨脐血CD34^＋细胞体外混合培养对彼此归巢相关分子表达的影响。从正常人骨髓中分离扩增间充质干细胞，富集传代，加速器照射（12Gy）后作为滋养层细胞，将免疫磁珠分选纯化的两份脐血CD34^＋细胞混合接种到其表面（其中1份CD34^＋细胞用CFSE标记），观察各自归巢相关分子（黏附分子）表达的变化。结果表明，脐血CD34^＋细胞分选富集的纯度为（98．25±0．93）％，实验组在共培养6天后，两份脐血CD34^＋细胞的比例分别降为（60．4±6．32）％和（60．2±5．12）％，但与对照组比较无统计学差异；实验组各份CD34^＋细胞的CD44，CD62L，CD184以及CD26的阳性率较培养前均无显著变化。而CD162表达显著下降。CD54在培养3天后有所上升，但培养6天后下降至培养前水平，与对照组比较无统计学差异。结论：将两份脐血的CD34^＋细胞体外混合培养对彼此归巢相关分子并无明显影响     

两种第三方细胞联合单倍体相合造血干细胞移植治疗慢性再生障碍性贫血1例

本研究观察脐带间充质千细胞（mesenchymalstemcell,MSC）和单倍体相合脐血细胞作为第三方细胞联合单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗慢性再生障碍性贫血的安全性和疗效。患者为女性,12岁,诊断为慢性再生障碍性贫血11年,供者为其母亲,单倍体相合,移植物为经粒细胞集落刺激因子（granulocytecolony-stimulatingfactor,G-CSF）动员的骨髓以及外周血追血干细胞。同时加入分离、扩增的hUC-MSC及患者胞弟HLA单倍体相合脐血细胞作为第三方细胞联合移植。移植物抗宿主病（graft-versus-hostdisease,GVHD）预防采用环孢菌素A＋ATG＋霉酚酸酯＋短程甲氨喋呤＋CD25单克隆抗体。结果表明：输注供者的MNC总数和CD34细胞数分别为7．92×10^8／L和3．78×10^6／L,中性粒细胞大于0．5×10^9／L和血小板大于20×10^9／L的时间分别为12d和14d,35d嵌合体94％,无严重并发症出现。结论：从初步结果看来,联合两种第三方细胞的单倍体相合异基因造血干细胞移植治疗CAA安全、疗效令人满意。     

不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响

为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化，将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天，在0天，7天检测有核细胞数，CD34^＋细胞数及CD34^＋CXCR4^＋，CD34^＋CD49d^＋的细胞数和集落形成单位（CFU）数．根据不同细胞因子组合实验分组为：对照组；SF组（SCF＋FL）；SFT组（SCF＋FL＋TPO）和SFT6组（SCF＋FL＋TP0＋IL-6）。结果表明，和对照组相比，SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增，加入TPO后即SCF／FL／TPO组合能有效的扩增脐血细胞，但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生（P〉0．05）；SF，SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34^＋细胞CD49d，CXCR4的表达，但3组之间差异无显著性（P〉0．05）。结论：SF组合可协同扩增人造血细胞，但协同作用较弱；TPO在脐血造血干／祖细胞体外扩增中起重要调节作用，而IL-6作用不显著；SCF／FL／TPO 3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增，而且可上调脐血造血细胞CD49d，CXCR4表达。     

CD271及CD133用于阳性分选富集骨髓间充质干细胞的比较

本研究旨在通过对CD271（低亲和性神经生长因子受体，low affinity nerve growth factor receptor，LNG—FR）及CD133免疫磁珠阳性分选富集骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的比较，选出一种相对理想的从骨髓中富集间充质干细胞的免疫磁珠分选方法。采用免疫磁珠的方法得到骨髓单个核细胞中的CD271^＋细胞及CD133^＋细胞；将得到的细胞分别进行培养，14天后计数成纤维细胞集落形成单位（colony forming unit—fibro—blast，CFU—F）；对每个传代细胞进行计数，绘制细胞增殖曲线；取两种方法得到的细胞培养至3代以后，流式细胞术检测细胞表面抗原，通过细胞形态及免疫化学染色鉴定比较成骨及成脂肪定向诱导分化。结果表明：CD271阳性分选纯度为（89．50±0．98）％，CD133阳性分选纯度为（88．03±3．06）％；1×10^4个CD271^＋细胞培养后产生的CFU—F数目是1×10^4个CD133^＋细胞培养后形成CFU—F数目的2倍，CD271^-细胞培养后无CFU—F形成，而CD133^-细胞培养后可形成少量的CFU—F；两种方法得到的细胞培养至第3代后表型基本一致，即CD34^-、CD14^-、CD45^-、CD90^＋、CD29^＋、CD44^＋、CD105^＋、CD73^＋；CD271^＋细胞的增殖能力比CD133^＋细胞的高出3倍，而且具有更强的成骨、成脂肪分化潜能。结论：虽然CD271及CD133阳性分选都可以得到间充质干细胞，但相比之下，CD271阳性分选得到的间充质干细胞有更强的增殖和分化能力，因而CD271阳性分选是一种相对理想的从骨髓中富集阃充质干细胞的免疫磁珠分选方法。     

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨影外周血混合采集物中CD34^＋细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF5μg／（kg·d）,连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34^＋细胞数量。结果表明：rhG—CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为（1．15±0．60）×10^9／L;骨髓和外周血采集物中的CD34^＋细胞总量分别是（5．854±2．93）×10^7和（1．33±0．77）×10^8;骨髓和外周血混合采集物的CD34^＋细胞总量是（1．92±0．86）×10^8。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数（×10^9／L）与骨髓采集物中CD34^＋细胞的总量（相关系数：r=0．265,P=0．027）、外周血采集物中CD34^＋细胞总量（r=0．340,P=0．004）以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量（r=0．398,P：0．001）均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34^＋细胞的总量均呈正相关关系（P值分别为0．027、0．004和0．001）。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34^＋细胞总量预测的敏感性是71％,特异性是70％（P=0．007）。结论：rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34^＋细胞总量即采集效果。     

磁力搅拌悬浮培养大规模扩增脐血造血祖细胞

为了利用磁力搅拌悬浮培养装置大规模体外扩增脐血造血祖细胞，从脐血分离单个核细胞，以无血清培养基stemspan添加干细胞因子、FLT-3配基及血小板生成素为培养体系进行培养。先研究磁场（25和50mT）对静态扩增培养的造血祖细胞生长和集落形成能力的影响，再研究磁力搅拌悬浮大规模培养对造血细胞总数扩增、造血集落形成和表面分子标志表达变化。结果表明，在0，25和50mT磁场组和磁转子组，细胞总数扩增倍数和造血集落形成数在各组间均无明显区别（P〉0．05）。经过7天的扩增培养，磁力搅拌悬浮大规模培养细胞总数扩增倍数为2．8±0．45，高于静态培养细胞总数扩增倍数（2．1±0．48）（P〈0．01）；磁力搅拌悬浮培养组形成的红系集落数（1983．5±582．6）、粒-巨噬细胞集落数（186．4±62．7）明显高于静态培养形成的相应的造血集落数（分别为1396．2±425．7和136．5±40．8）（P均〈0．05）：磁力搅拌悬浮扩增后造血干细胞（CD34^＋、CD34^＋／CD38^-或CD133^＋）比例分别为（0.9±0．34）％、（0．7±0．21）％和（1．1±0．35）％，低于静态培养的干细胞比例[分别为（1．4±0．35）％、（1．2±0．34）％和（1．6±0．68％）]（P均〈0．05）；但是，归巢相关分子CD184和CD62L高于静态扩增培养．．结论：磁力搅拌悬浮装置可能有利于脐血造血祖细胞规模扩增，本研究结果还有待于动物实验及临床移植试验进一步验证.     

人骨髓基质细胞支持脐血造血细胞扩增后脐血归巢相关特性变化的研究

目的探讨人骨髓基质细胞（HBMSC）联合细胞因子对脐血（CB）单个核细胞（MNC）体外培养后造血细胞归巢相关特性的变化以评价HBMSC及细胞因子支持的体外扩增对脐血归巢相关功能的影响。方法将从新鲜CB标本中分离出的MNC分别接种于已建立的无血清培养体系：A组：对照组；B组：单用HBMSC支持；C组：单用细胞因子支持；D组：细胞因子和HBMSC联合支持。分别在0d（d0）、10d（d10）及14d（d14）用流式细胞仪检测CD34^＋CXCR4细胞、CD34^＋VLA-4^＋细胞的变化情况。结果①在体外培养过程中，各时间点D组CD34^＋CXCR4^＋细胞扩增倍数均高于A、B、C组（P〈0.05）；②B、C和D组与A组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBMSC联合外源性细胞因子对脐血MNC进行体外培养，能有效扩增具归巢能力的造血干祖细胞数目。     

异基因造血干细胞移植CD34^＋CD61^＋巨核系前体细胞与血小板植入的相关分析

本研究通过定量测定G—CSF动员后外周血及骨髓采集物的CD34^＋CD61^＋细胞，以探索巨核前体细胞CD34^＋CD61^＋亚群输注量与异基因外周血和／或骨髓移植后血小板恢复时间的相关性。24例不同血液病患者接受HLA全相合同胞、非血缘供者或单倍体相合同胞造血干细胞移植。20例可评估的患者依移植方法不同分为HLA全相合组和单倍体相合组，HLA全相合组采用PBSC移植方案，单倍体相合组采用PBSC＋BM联合移植方案，对外周血干细胞和骨髓样本CD34^＋CD61^＋亚群通过流式细胞仪立即测定或隔夜保存后测定。结果表明，单倍体相合组输注CD34^＋、CD34^＋CD61^、CD34^-CD61^＋细胞数中位值分别为6．24×10^6／kg（1．53—20．48）、66．19×10^4／k（8．16—493．83）、34．38×10^6／kg（14．71—109．16）；HLA全相合组中位值分别为4．88×10^6／kg（1．00—8．24）、14．16×10^4／kg（11．63—96．87）和13．50×10^6／kg（1．74—35．61）。中性粒细胞计数（ANC）〉0．5×10^9／L和血小板计数〉20×10^9／L的中位时间，单倍体相合组分别为18．5（11．00—29．00）和16．5（9．00—35．00）天；HLA全相合组为14．5（9．00—24．00）和10．5（6．00—37．00）天，血小板的植入时间在两组差别无显著性，中性粒细胞植入时间在HLA全相合组和单倍体相合组差异有显著性（p=0．048），对于两组中CD34^＋细胞量〉2×10^6／kg的受者血小板的植入时间分析，两组差别有显著性（p=0．006）。CD34^＋CD61^＋亚群与血小板植入的相关性明显优越于CD34^＋细胞，可评估20例（r=-0．449p=0．047CD34^＋细胞群），单倍体相合组12例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．768p=0．004），HLA相同纽8例CD34^＋CD61^＋亚群（r=-0．747p=0．033），CD34^＋CD61^＋亚群与血小板的植入时间呈负相关关系，输注CD34^＋CD61^＋亚群细胞量大，血小板的植入时间缩短。结论     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者T细胞亚群及其数量与功能的研究

本研究探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者T细胞免疫状态及GPI^＋T细胞、GPI—T细胞的数量与功能。采用流式细胞术检测22例PNH患者及18名正常对照T细胞亚群、Th细胞亚群、GPI^＋T细胞、GPI—T细胞分别在CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞群中的比例及其CD69的表达。结果显示,PNH患者CD4^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（47．7670±13．91139）％]较正常对照组[（54．9592±7．11678）％]降低,CD8^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（52．2767±13．90395）％]较正常对照组[（45．2418±6．75306）％]升高,差异均有显著性（P〈0．05）;CD4^＋／CD8^＋比值倒置,以PNH．AA患者最为明显（0．77763±0．409153）,与正常对照组（1．26356±0．348878）相比,差异有显著性（P〈0．05）。PNH患者Th1细胞比例[（16．9136±6．78899）％]较对照组[（4．4600±1．81879）％]升高,差异有显著性（P〈0．05）,PNH—AA患者Th1细胞比例变化[（22．8000±5．45244）％]较发作性PNH患者[（12．0083±2．20770）％]曼为显著,Th2细胞比例[（4．75824±．98441）％]较正常对照组[（3．7960±1．13810）％]无明显变化。PNH患者体内存在一群GPI—T细胞,其占CD8^＋T细胞的（14．67974-11．96718）％,占CD4^＋T细胞的（3．92414-2．46263）％,其占CD8^＋T细胞的比例较占CD4^＋T细胞的比例升高更为明显。PNH患者CD8^＋GPl^＋T细胞[（17．67881±8．562493）％]、CD8^＋GPI—T细胞[（15．86575±7．279743）％]、CD4^＋GPI^＋T细胞（4．65431±1．984378）％]、CD4^＋GPI—T细胞[（4．93181±1．730001）％]c1969的表达均高于正常对照组[CD8^＋T细胞（4．68038±1．216645）％,CD4^＋T细胞（1．77339±0．645259）％],差异有显著性（P〈0．05）,GPI^＋T细胞CD69的表达与GPI—T细胞相比,差异并无显著性。结论：PNH患者存在T细胞免疫功能亢进,其可能是造成骨髓衰竭的原因,但与T淋巴细胞组分中含有PNH克隆可能无关。     

FLAG巩固治疗急性髓系白血病对自体外周血造血干细胞动员的影响

本研究探讨以大剂量阿糖胞苷（Ara—C）联合氟达拉滨（Flud）和粒细胞集落刺激因子（G—CSF）即FLAG方案巩固治疗急性髓系白血病（AML）对自体造血干细胞动员的影响。对15例AML患者在诱导缓解后采用FLAG方案巩固治疗（氟达拉滨,50mg／d,第1-5天;Ara—C2g／（m^2·d）,第1—5天;G—CSF300μg／d,皮下注射,化疗前1天至中性粒细胞〉1．0×10^9／L）。15例中男10例,女5例,中位年龄36（14—51）岁,13例为初发AML,2例为复发难治AML。12例FLAG观固2个疗程,3例巩固3个疗程。动员方案为：9例为FLAG,6例大剂量足叶乙甙（VP16）＋G—CSF。结果表明：15例患者中11例（73．3％）被证实有足够的造血干细胞（CD34’细胞〉2．0×10^6／kg）,CD34细胞中位数为3．52×10^6／kg[（2．2—4．6）×10^6／kg]。在4例仅采集到足够的单个核细胞（MNC）,而CD34^＋细胞含量却较低。结论：2个疗程的FLAG巩固治疗对AML患者的造血干细胞影响不明显,毒副作用不明显且不影响自体外周血造血干细胞的动员。