清热活血补益方影响肝脏胶原代谢的分子生物学机制

目的 :从分子生物学水平研究中药复方清热活血补益方 (肝纤方 )如何影响大鼠肝脏的胶原合成及降解。方法 :运用血清药理学方法制备中药含药血清 ,将之作用于从SD大鼠肝脏分离培养的肝星状细胞 ,并测定Ⅰ型胶原含量、Ⅰ型前胶原mRNA的表达和胶原酶活性。结果 :与对照组相比 ,含药血清组Ⅰ型胶原含量降低 ,Ⅰ型前胶原mRNA的表达受到抑制 ,胶原酶的活性增加 (P <0 .0 5 )。结论 :清热活血补益方通过抑制Ⅰ型前胶原mRNA的表达来减少胶原的合成 ,通过提高胶原酶的活性来促进胶原的降解 ,这可能是其多位点抗肝纤维化的部分分子生物学机制。     

TGF-β/Smads信号通路在心力衰竭心肌纤维化中的作用及中医药干预研究现状

在心力衰竭(HF)进展过程中,转化生长因子-β(TGF-β)/Smads信号通路的异常转导是HF心肌纤维化(MF)的重要机制。TGF-β是MF的关键因子,在HF MF过程中处于过度表达状态。Smads是TGF-β下游的主要效应因子,TGF-β/Smads通路诱导肌成纤维细胞异常增殖,加重心肌细胞外基质沉积,使心脏组织抗纤维化能力减弱,在HF MF的发病机制中发挥复杂作用。中医药在防治HF MF方面具有明确抑制心肌胶原沉积、抗心肌纤维化、保护心肌和改善心脏功能等功效。TGF-β/Smads通路是中药单体、中药复方、中成药发挥HF心肌保护作用的关键通路之一。本文对近10年来中医药干预TGF-β/Smads通路治疗HF MF现有的实验研究成果进行综述,以期为HF MF的防治及新药开发提供理论依据。     

肝细胞生长因子基因转染骨髓间充质干细胞对急性心梗大鼠心肌胶原合成的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染骨髓间充质干细胞(MSCs)对急性心梗大鼠心肌胶原合成的影响.方法 通过结扎大鼠冠状动脉前降支制作SD大鼠急性心梗模型.40只SD大鼠随机分为对照组、假手术组、心梗组、MSCs组和MSCs-HGF组.所有MSCs移植前进行无血清、无氧条件培养6 h;移植后4周HE染色与苦味酸天狼猩红染色观察大鼠心肌组织胶原分布、容积分数,ELISA法测心肌组织胶原Ⅰ、Ⅲ含量.结果 HE染色结果显示心梗组心肌细胞减少,结构紊乱,可见大量增生组织;MSCs-HGF组细胞形态结构较为完整,心肌组织间隙仅见少量增生组织.苦味酸天狼猩红染色显示:心梗组有大量红染纤维,呈束状或片状;MSCs-HGF组仅可见细束状红染纤维.ELISA结果可见:与心梗组相比较,MSCs-HGF组心肌组织胶原Ⅰ、Ⅲ含量均明显减少(P＜0.05).结论 HGF基因转染MSCs可抑制急性心梗大鼠心肌胶原的合成.     

卡托普利和辛伐他汀联用在心肌纤维化中的疗效观察

心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)是病毒性心肌炎(viral mvocarditis,VM)特征性病理变化,表现为胶原的合成与降解失衡,间质中胶原沉积增多,各型胶原比例失调,心脏顺应性下降,僵硬度增加等特征,过度的心肌纤维化是病毒性心肌炎发生心律失常、心力衰竭、心脏性猝死等并发症的决定因素[1].心肌纤维化是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变,是心肌重构的主要表现之一,可致心肌僵硬度增加、心室舒张功能减退、冠状动脉储备下降,甚至引起猝死[2].     

辛伐他汀对慢性心衰大鼠心肌纤维化及TGF-β1 CTGF表达的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在慢性心衰大鼠心肌纤维化(myocard ial fibrosis,MF)发生发展中的作用,以及辛伐他汀改善慢性心衰时心室重构和MF可能的作用机制。方法30只雄性W istar大鼠随机分为三组,假手术组(sham组)8只,模型组(model组)及辛伐他汀组(simvastatin组),每组11只。采用腹主动脉缩窄法制作慢性心衰模型,喂养8周后simvastatin组大鼠予以辛伐他汀2mg/(kg.d)灌胃,model组用生理盐水灌胃。8周后检测血流动力学参数,用MASSON染色法观察左室心肌胶原形态,图像分析测量胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积(PVCA),免疫组化法检测心室肌中TGF-β1、CTGF表达。结果①CVF、PVCA在model组大鼠明显高于sham组大鼠(P<0.01);与model组比较,simvastatin组则显著降低(P<0.01)。②TGF-β1、CTGF在sham组表达较弱,model组表达增强,simvastatin组则减弱。结论辛伐他汀明显改善心室重构和MF,改善心功能,此作用可能与影响CTGF表达有关。     

复方中药对肝星状细胞胶原合成与降解的影响

目的观察中药复方丹参对肝星状细胞胶原合成与降解的影响.方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法观察药物对细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液Ⅰ、Ⅲ、V型胶原含量,RNA-cDNA分子杂交检测细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平.逆转录多聚酶链反应检测间质胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平.结果中药复方丹参明显抑制肝星状细胞增殖且呈剂量依赖趋势,与对照组比较,中药组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低,细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平明显降低,间质胶原酶基因表达水平明显增强,金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显受到抑制(P＜0.01).结论中药复方丹参可能通过抑制肝星状细胞的增殖,抑制胶原的异常合成,促进异常沉积胶原的降解,从而起到抗肝纤维化的作用.     

胶原代谢在肝纤维化中的作用及中药调控胶原代谢研究进展

摘 要肝纤维化以细胞外基质在肝脏中的异常蓄积为主要特征,而胶原则是细胞外基质的最主要成分。胶原在肝纤维化的发生发展过程中发挥着重要的调控作用。因此,寻找具有显著调控胶原代谢的中药,成为肝纤维化治疗的重要途径。本研究综述了胶原代谢在肝纤维化中的作用,以及中药调控胶原代谢发挥抗肝纤维化作用的研究进展。     

偏光图像法分析高血压大鼠的心肌胶原重构

目的通过改进苦味酸-天狼猩红染色心肌胶原偏光图像的分析方法，对高血压大鼠心肌胶原重构程度和药物对重构的改善效果进行评估。方法建立高血压模型大鼠，取心肌进行特异性的苦味酸-天狼猩红胶原染色，在正交偏光下采用不同角度观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的染色情况，分析偏光显微镜观察方式对胶原成像影响的物理机制并提出图像采集方式上的改进。采集图像后，用迭代阈值法获取阈值对胶原图像进行自动分割，对分割出的不同胶原成分计算形态学指标。同时考察正常组与治疗组的相应指标。结果胶原面积和容积分数等指标表明高血压大鼠心肌胶原含量明显高于正常组，Ⅰ、Ⅲ型胶原成分也明显和正常组不同。治疗组较高血压组与正常组接近。结论通过对心肌胶原进行苦味酸-天狼猩红染色，利用偏光显微镜，结合图像分析技术，选择合适的指标，能够对高血压引发的心肌胶原重构进行较为有效的量化评估。     

EGCG抑制心肌肥厚胶原生成和细胞增殖

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的抗心肌肥厚作用以及对心肌肥厚胶原生成和细胞增殖的影响。方法异丙肾上腺素(Iso)致小鼠心肌肥厚,测定心脏重量指数和血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力。腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚,测定心脏重量指数和心肌羟脯氨酸(Hp)含量,HE和VG染色观察心肌组织形态改变,增殖性核抗原(PCNA)免疫组化检测细胞增殖。结果EGCG50、100、200mg.kg-1剂量依赖的降低Iso致小鼠心肌肥厚的心脏重量指数及血清LDH、CK的漏出量。EGCG25、50、100mg.kg-1剂量依赖的降低腹主动脉缩窄致大鼠心肌肥厚的心脏重量指数和心肌Hp含量,明显改善心肌组织胶原增生和纤维化,EGCG50、100mg.kg-1明显降低细胞PCNA免疫组化阳性率。结论EGCG对大鼠和小鼠心肌肥厚模型有明显的抑制作用,该作用可能与改善肥厚心肌组织胶原增生和细胞增殖有关。     

葛根素对舒张性心力衰竭大鼠心肌僵硬度和心肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的影响

目的研究葛根素对舒张性心力衰竭(distolicheartfailure,DHF)大鼠心肌僵硬度和心肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的影响。方法 Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型,术后4周,随机分为4组(n=10),模型组,葛根素高、中、低剂量组(180、120、80mg/kg),另有假手术组10只。连续给予相应处理4周后,通过十六导生理记录仪测量所得的血流动力学指标计算大鼠心肌僵硬度常数(K),并应用免疫组化法测定心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果与模型组比较,葛根素高剂量组K值无变化(P>0.05),中剂量组K值显著低于模型组(P<0.01),低剂量组K值明显低于模型组(P<0.05)。与模型组比较,葛根素高剂量组心肌I型胶原蛋白表达明显减弱(P<0.05),心肌Ⅲ型胶原表达明显增强(P<0.05);中剂量组心肌Ⅰ型胶原蛋白表达显著减弱(P<0.01),心肌Ⅲ型胶原蛋白表达显著增强(P<0.01);低剂量组心肌I型胶原蛋白表达明显减弱(P<0.05),心肌Ⅲ型胶原表达明显增强(P<0.05)。结论葛根素中、低剂量能够降低DHF大鼠心肌僵硬度,其作用机制与心肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达有关。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响，从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸，用羟脯氨酸法测定胶原量，MTT比色法检测细胞增殖情况，SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

缺血性心肌病患者血清胶原含量测定及喹那普利干预作用

目的:观察缺血性心肌病(ICM)发展过程血清Ⅰ型前胶原(procollgen Ⅰ,PCI),Ⅲ型胶原(PCⅢ)含量的变化与临床意义及药物干预效果;探讨喹那普利能否抑制ICM胶原的合成,以阻抑ICM的心肌纤维化.方法:采用放免方法测定12例正常对照及46例ICM患者应用喹那普利治疗6周前后心肌纤维化指标:血清Ⅰ型胶原的前胶原氨基末端肽(PINP)和Ⅲ型胶原的前胶原氨基末端肽(PⅢNP)含量,超声心动图检测舒张末期左室内径(LVED),室间隔厚度(IVST),左室后壁厚度(LVPWT),计算左室重量(LVMW)及左室重量指数(LVMI).结果:①ICM患者血清PINP、PⅢNP含量显著增高,并随心功能等级增加而有升高趋势(P＜0.01).②喹那普利治疗后PINP、PⅢNP含量显著下降,Ⅰ/Ⅲ较前降低(P＜0.01).③治疗后LVEF、二尖瓣血流舒张早期流速(VE)和心房收缩期流速(VA)比值VE/VA升高,LVMI降低,PⅠNP、PⅢNP与LVMI呈正相关(r=0.561,P＜0.01;r=0.316,P＜0.05),与VE/VA呈负相关,与LVEF无明显相关性(P＞0.05).结论:ICM患者血清PⅠNP、PⅡNP含量升高,并随心功能等级增加而有升高趋势.喹那普利可以抑制PCⅠ、PCⅢ合成,从而减轻左室重量,改善心室舒张功能,阻抑ICM心肌纤维化.     

慢性饮酒对大鼠左心室心肌胶原含量及舒张功能的影响

目的:检测慢性饮酒大鼠左心室心肌胶原含量的变化和舒张功能的损害,并探讨两者的相关关系.方法:雄性8周龄Wistar大鼠24只,随机分为乙醇组和对照组,每组12只.喂养16周后,超声心动图和组织多普勒成像(tissue Doppler imaging,TDI)检测左心室舒张功能,羟脯氨酸测试试剂盒测定心肌羟脯氨酸含量,RT-PCR方法检测心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原mRNA的表达.结果:乙醇组与对照组比较,多普勒二尖瓣E峰峰值降低(P＜0.01)、等容舒张时间(IVRT)延长(P＜0.01);TDI二尖瓣内环舒张早期峰速度Ea降低(P＜0.05),舒张晚期峰速度Aa增高(P＜0.01),乙醇组的Ea/Aa比值＜1,而对照组＞1(P＜0.01).乙醇组的羟脯氨酸含量、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达水平及Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值都高于对照组(P＜0.01).心肌羟脯氨酸含量、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA表达水平及Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值都与IVRT呈正相关(P＜0.05),与Ea/Aa比值呈负相关(P＜0.01).结论:乙醇喂养大鼠16周后左心室心肌胶原合成增加,舒张功能减低,二者呈正相关.     

桑黄预防大鼠肝纤维化作用的实验研究

目的：研究桑黄对肝纤维化的预防作用。方法：采用四氯化碳诱发大鼠肝损伤，辅以高脂，低蛋白复合饲料和一定浓度乙醇饮料，复制肝纤维化模型。用桑黄进行预防，观察其对血清中生化指标的胶原成分的影响。结果：桑黄能提高肝损伤大鼠的蛋白质合成能力，显著降低血清氨基酸转移水平和胶原成分含量，病理组织学观察显示，预防组肝纤维变性减轻，肝脏纤维增生减少。结论：桑黄能减轻肝细胞损伤，预防四氯化碳致大鼠肝纤维化的发生与发展。     

丹参对自发性高血压大鼠心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原的影响

目的：了解丹参对自发性高血压大鼠（SHR）心肌纤维化的阻遏作用。方法：实验用WKY大鼠做阴性对照，SHR大鼠分为SHR对照组和丹参治疗组。药物组经灌胃12周后，观察左心室重量指数（LVMI）；采用免疫组织化学方法观察左室心肌中的Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。结果：SHR组LVMI、Ⅰ型和Ⅲ型胶原较WKY组显升高（P＜0．05），而丹参治疗组各指标均较SHR对照组明显下降（P＜0．05）。结论：丹参具有预防和逆转自发性高血压大鼠心肌纤维化作用。     

不同病因慢性心力衰竭心肌纤维化研究

目的：探讨慢性心力衰竭的心肌纤维化及干预治疗。方法：采用放射免疫分析法，测定76例慢性心力衰竭（心衰）患者（冠心病组31例，风湿性心脏病组23例，扩张型心肌病组22例）血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、Ⅰ型前胶原氨端肽原（PⅠNP）、Ⅲ型前胶原氨端肽原（PⅢNP）含量。并与20例健康对照组进行比较。结果：风心病组、扩张型心肌病组AngⅡ含量显著高于正常对照组。各心衰组血浆ALD和PⅠNP含量均显著高于正常对照组。风心病组、扩张型心肌病组PⅢNP含量显著高于正常对照组。扩张型心肌病组Ⅰ／Ⅲ型胶原比值显著高于正常对照组。结论：慢性心力衰竭患者胶原合成增加，血中AngⅡ、ALD在胶原沉积过程中具有重要作用。不同病因心衰患者均应给予抗纤维化治疗。     

促红细胞生成素对肝硬化大鼠心肌TGF-β1及ColⅠ基因表达的影响

目的观察肝硬化对大鼠心肌转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及胶原Ⅰ(collagenⅠ,ColⅠ)基因表达的影响及促红细胞生成素的干预作用。方法清洁级SD大鼠36只,随机分为3组:正常对照组、肝硬化组及EPO干预组。在体测定各组心脏血流动力学指标,测血清乳酸脱氢酶(LDH)及肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,Masson染色法观察各组大鼠心肌胶原形成情况,RTPCR法检测各组心肌TGF-β1、ColⅠmRNA基因表达的变化。结果与正常对照组相比,肝硬化组大鼠左心室收缩和舒张功能下降,心肌酶增高,心肌胶原沉积明显增加,心肌TGF-β1及ColⅠ基因表达升高。与肝硬化组相比,EPO干预组大鼠心室收缩和舒张功能提高,心肌酶指标降低,心肌胶原沉积改善,心肌TGF-β1及ColⅠ基因表达降低。结论肝硬化能引起大鼠心肌结构和功能的改变,促进心肌间质纤维化的发生;EPO对肝硬化大鼠心肌损伤有一定的保护作用。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1(P27)蛋白的表达。结果:(1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFBG0/G1期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β1的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论:Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

甲心安煎剂对甲状腺素性心脏肥大大鼠心肌胶原含量的影响

目的 探讨甲心安煎剂治疗甲状腺素性心脏肥大的机制。方法将清洁级SD大鼠40只分为4组，即正常组、模型组、甲心安高剂量和低剂量治疗组各10只。正常组与模型组每日灌服纯化水2 mL，高剂量组每日灌服甲心安原液(含生药4 g·mL^-1)，低剂量组灌服甲心安稀释液(将原液加纯化水稀释至含生药2 g·mL^-1)，连续给药10 d。实验第11天取标本检测指标。结果模型组左心室重量及与体重之比均高于正常组(P＜0.01)，心肌胶原含量及 Ⅰ/Ⅲ 胶原比例均较正常组高(P＜0.01)。与之相反，经过甲心安煎剂干预后，治疗组无论低剂量或高剂量，其上述指标均较模型组低(P＜0.01)。结论甲心安煎剂能改善甲状腺素引起的心肌肥厚，降低重构心肌中的胶原含量，并调整优化心肌中 Ⅰ/Ⅲ 胶原比例。     

平肝胶囊对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨平肝胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞外基质(ECM)内胶原蛋白的影响及其意义。方法 50只14周龄雄性SHR随机分为5组,每组各10只,分别予以平肝胶囊高剂量、中剂量、低剂量、苯磺酸左旋氨氯地平片和生理盐水灌胃,同时选同周龄的雄性Wistar-Kyoto大鼠(WKY)各10只作为对照。给药10周后采用Masson染色法观察大鼠心肌细胞大小及心肌胶原分布情况。结果 SHR空白组心肌胶原大量沉积;平肝胶囊高剂量组的胶原沉积情况与苯磺酸左旋氨氯地平片组较为接近,且与WKY组相似。结论平肝胶囊具有改善高血压大鼠心肌组织内胶原沉积的作用,对防止高血压病心室结构的改变有重要意义。