以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针在肺癌检测中的应用

目的探讨以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针在肺癌检测中的应用。方法制备以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针。以肺癌A-549细胞作为实验组,宫颈癌Ca Ski、Si Ha和C33-A细胞作为对照组,分别应用0.1×10~(-6)、1×10~(-6)、10×10~(-6)mol·L~(-1)的荧光探针对肺癌A-549细胞及宫颈癌Ca Ski、Si Ha和C33-A细胞进行识别,荧光显微镜下观察以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针对2组细胞的识别能力。结果探针浓度为10×10~(-6)mol·L~(-1)时,A-549细胞和Ca Ski细胞中均观察到强荧光信号,C33A和Si Ha细胞中几乎观察不到荧光信号;探针浓度为1×10~(-6)mol·L~(-1)时,A-549细胞中可观察到强的荧光信号,C33A中可观察到较弱的荧光信号,Ca Ski和Si Ha细胞中几乎观察不到荧光信号;探针浓度为0.1×10~(-6)mol·L~(-1)时,A-549细胞中可观察到强的荧光信号,Ca Ski、C33A和Si Ha细胞中几乎观察不到荧光信号。结论以埃罗替尼为靶向基团的荧光探针可特异性识别肺癌A-549细胞。     

小鼠主动脉血管平滑肌细胞分离培养及鉴定

目的建立体外分离培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的技术方法并观察其生长特征。方法比较组织贴块法及酶联合消化法原代分离小鼠主动脉来源的VSMC,利用倒置显微镜观察细胞生长情况;苏木精-伊红(HE)染色观察细胞形态及免疫荧光染色法鉴定细胞;台盼蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法分别测定主动脉VSMC传代细胞的成活率、生长、增殖特征;观察不同血清含量对主动脉VSMC生长的影响。结果组织贴块法培养的细胞6 d后,细胞从组织块边缘长出,14 d后生长迅速可传代;酶联合消化法分离培养的细胞3 d后,细胞呈梭形生长,7～8 d后生长迅速可传代;第2代细胞在显微镜下观察可见呈典型"峰-谷"状生长;2种方法获得的细胞行免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性,细胞成活率均为96%;细胞生长曲线近似"S"形,MTT法显示细胞生长第3～5天光密度值变化较明显;用含体积分数20%血清的杜尔伯科改良伊格尔培养基高糖培养液培养的细胞出现明显对数期。结论本研究建立了高效分离和培养主动脉VSMC的2种方法,细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白,为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型。     

人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用

目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.     

迷迭香酸对MPP~+导致MES 23.5细胞损伤保护作用

目的观察迷迭香酸对1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP+)所致MES 23.5细胞损伤的保护作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测方法,观察不同浓度的迷迭香酸对MPP+处理的MES 23.5细胞的保护作用。结果 10-9~10-6mol/L的迷迭香酸对MES 23.5细胞无毒性作用(F=0.581,P>0.05)。200μmol/L的MPP+可使细胞存活率降低(F=44.863,P<0.01),而应用10-9~10-6mol/L的迷迭香酸预孵育细胞后,能明显提高细胞的存活率(P<0.01)。结论迷迭香酸能拮抗MPP+对MES 23.5细胞的毒性作用,具有一定的神经保护作用。     

吐温-80合并温热对人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化

目的　研究吐温 - 80合并温热对BT - 32 5人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT - 32 5细胞的分化诱导效应。方法应用免疫细胞化学等方法 ,观察BT - 32 5细胞经吐温 - 80合并 4 1℃温热作用后 (2 4小时 )胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)基因的表达 ;并通过克隆形成率及测定细胞生长曲线等方法观察细胞恶性增殖能力。结果　 (1)BT - 32 5细胞经吐温 - 80合并温热作用后 ,出现明显的分化特征 :胞体显著增大 ,贴壁明显 ,细胞突起增多 ,与周围细胞接触 ,且有接触抑制现象 ;GFAP的含量明显增加 ;(2 )克隆形成率显示合并作用后克隆形成数减少 ,与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　吐温 - 80合并 4 1℃温热作用可显著抑制BT - 32 5细胞恶性增殖 ,并有促进GFAP表达的效应 ,显示吐温 - 80合并温热对BT - 32 5细胞的分化有诱导效应     

4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)在K562肿瘤细胞凋亡中的作用

目的研究不同浓度4-邻氨基酚-4'去甲表鬼臼酯(ODE)对肿瘤细胞生长的影响,探讨ODE诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用MTT法测定ODE对K562细胞生长的抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学方法检测K562细胞中Bcl-2/Bax比率变化。结果 (1)不同浓度ODE对K562细胞生长有抑制作用,随ODE浓度的增加及作用时间的延长细胞生长抑制率增高(P0.05);(2)透射电镜观察可见凋亡细胞发生;(3)凋亡细胞中Bcl-2灰度较正常细胞染色的灰度低,Bax在凋亡细胞中的灰度较正常细胞高。结论 ODE能够显著抑制K562细胞的生长,其抑制作用随浓度的增加及时间的延长而增强,通过形态学可观察到凋亡细胞的产生,其诱导凋亡可能是通过改变凋亡基因而发挥作用的。     

5,7-DMF对MDA-MB-453细胞凋亡和14-3-3σ基因表达的影响

目的:研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)诱导人乳腺癌MDA-MB-453细胞凋亡作用及机制.方法:体外培养乳腺癌MDA-MB-453细胞.MTT法测定细胞活力;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)观察14-3-3σ基因甲基化状态;逆转录聚合酶链反应(RT-P...     

骨巨细胞瘤中多核巨细胞与其它类型多核细胞的对比观察

通过电镜观察、细胞化学、间接免疫荧光和免疫组织化学方法,对12例骨巨细胞瘤中多核巨细胞(MGC)进行观察,并与破骨细胞(OC)、炎性(异物)巨细胞对比。结果表明四种细胞极为相似,均具有酸性磷酸酶、过氧化物酶、α-1-抗胰蛋白酶、α-1-1抗糜蛋白酶等,这些物质被认为是巨噬细胞标志,提示MGC起源与巨噬细胞有关,并为MGC与OC来自同一祖先提供一定证据。     

新型番荔枝酰胺衍生物FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞的保护作用

目的 评价番荔枝酰胺衍生物FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 在去血清培养的星形胶质细胞模型上,以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞存活率,Hochest 33342染色观察细胞核形态变化,荧光比色法检测细胞内活性氧簇(ROS)生成.酶联免疫...     

醋酸铅对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白、抑制素和转铁蛋白mRNA表达的影响

目的：观察醋酸铅对体外培养大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白(ABP)、转铁蛋白(Tf)和抑制素(INH)mRNA表达水平的影响。方法：体外培养大鼠睾丸支持细胞,分离纯化经鉴定后,分别给予不同浓度(0、10-8、10-7、10-6和10-5moL/L)的醋酸铅处理,培养24 h后采用MTT法测定细胞活性,采用RT-PCR检...     

BrdU 体外标记移植许旺细胞在构建人工神经中的应用

目的 探讨5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU) 在人工神经移植体中许旺细胞的体外标记情况,为观察组织工程化人工神经中许旺细胞的转归提供方法.方法 取胎兔许旺细胞培养后(2×10 6/ml)微注入法植入2cm长去细胞神经桥接体,在含BrdU的培养液(25 mg/ml)培养1周后, 抗BrdU单克隆抗体免疫组化ABC法染色,观察许旺细胞的标记和在神经桥接体中的分布.结果 在神经桥接体中有染色阳性细胞,细胞分布均匀.结论 BrdU可作为许旺细胞移植的标记物,观察其在体外神经桥接体中的迁徙、分布,为探讨组织工程化人工神经中许旺细胞的转归奠定基础.     

呼吸道合胞病毒M2-1基因表达对人肺腺癌PAa细胞生物学特性的影响

目的观察呼吸道合胞病毒(RSV)M2-1基因的表达对人肺腺癌PAa细胞生物学特性的影响。方法①采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线和不同浓度丝裂霉素(MMC)作用下细胞的存活率;②采用流式细胞仪(FCM)、DNA凝胶电泳、透射电镜技术观察细胞凋亡。结果PAa/M2-1、PAa细胞的倍增时间分别为2.79和3.24d,PAa/M2-1细胞较PAa细胞生长速度快。不同浓度MMC作用下,转染后PAa/M2-1细胞的存活率均明显低于PAa细胞;PAa细胞和PAa/M2-1细胞的凋亡发生率分别为0.58%和5.6%;DNA凝胶电泳PAa/M2-1细胞可见清晰的DNA梯状条带;透射电镜观察到PAa/M2-1有凋亡细胞。结论M2-1基因的表达可促进PAa细胞生长,对不同浓度丝裂霉素表现为敏感性增加,并有自发性凋亡发生,以上结果为进一步研究RSV与肺癌的关系提供了有力证据。     

20（R）-人参皂苷Rg 3对人乳腺癌细胞自噬作用的影响

目的：观察20(R)-人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞（MCF-7）自噬作用的影响,并探讨20(R)-人参皂苷Rg3诱导MCF-7自噬作用的最佳剂量。方法人乳腺癌细胞株分为20(R)-人参皂苷Rg3实验组及空白对照组。采用MTT法观察20(R)-人参皂苷Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并依据计算出的IC50值确定20(R)-人参皂苷Rg3的有效浓度。结果当20(R)-人参皂苷Rg3浓度在37.5～600.0mg/L时,MCF-7细胞的生长抑制率最高,并随其浓度的增加而增大,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察到细胞所含自噬泡明显增多,说明20(R)-人参皂苷Rg 3可诱导乳腺癌细胞自噬。蛋白质印迹法检测结果显示：LC 3蛋白,特别是LC 3-I 的表达量与细胞自噬程度呈正相关,随着20(R)-人参皂苷Rg 3干预浓度的增大,LC3-I和LC3-I蛋白表达量亦明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论20(R)-人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖,且呈现良好的剂量、时间依赖性;20(R)-人参皂苷Rg 3有诱导MCF-7细胞自噬作用。     

ITP患者治疗前后Breg Treg构成及其相关细胞因子浓度变化和意义分析

目的:探讨免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后调节性B细胞(Breg)、调节性T细胞(Treg)及其相关细胞因子水平及意义。方法:选取2018年12月至2022年1月在我院治疗的ITP患者103例作为观察组，同时选取健康志愿者103例作为对照组，检测两组Breg细胞、Treg细胞、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、可溶性程序性死亡1(sPD-1)和可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)差异，同时分析观察组治疗前后Breg细胞、Treg细胞等差异。结果:观察组Breg细胞、Treg细胞、TGF-β、IL-10和IL-4分别为(4.46±1.01)%、(5.11±1.03)%、(2203.19±225.51)pg/mL、(4.06±0.93)pg/mL和(298.32±55.62)pg/mL,明显低于对照组(P<0.05),IL-17和sPD-1分别为(12.01±2.28)pg/mL和(110.32±19.20)pg/mL,明显高于对照组(P<0.05)。观察组和对照组sPD-L1比...     

六味地黄汤含药血清对CoCl2诱导HK-2细胞后E-cadherin、α-SMA表达的影响

目的 观察六味地黄汤含药血清对CoCl2缺氧后HK-2细胞中的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的影响.方法 体外培养HK-2细胞,分为3组...     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

目的 研究黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn - 50)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用.方法 用不同浓度的EVn - 50处理体外培养的HT-29细胞;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl -2和Bax蛋白表达.结果 EVn - 50...     

5-氟尿嘧啶对外阴尖锐湿疣细胞超微结构影响的实验研究

目的 观察5-氟尿嘧啶对外阴尖锐湿疣(CA)细胞超微结构影响.方法 10例CA病人,用5-氟尿嘧啶治疗进行治疗,采用电子显微镜超薄切片法,观察治疗前后CA细胞的超微结构有无改变.结果 通过对比发现,用5-氟尿嘧啶治疗后CA细胞的超微结构发生改变,出现细胞凋亡.结论 5-氟尿嘧啶对外阴CA细胞超微结构有影响,并有诱导作用.     

鼠尾草酸联合1,25-二羟基维生素D3对NB4细胞的影响

目的 研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)与1,25-二羟基维生素D3[1,25( OH)2D3]联合应用对NB4细胞生长及凋亡、分化的诱导作用.方法 通过四氮唑蓝(MTT)法观察细胞的生长,光学显微镜观察细胞形态,应用流式细胞仪测定细胞周期、凋亡率及CD14的表达,观察联合应用鼠尾草酸与低浓度1,25(O...     

应用量子点纳米探针研究丹酚酸B与肿瘤细胞间的直接作用

目的 应用量子点纳米荧光探针示踪中药有效成分与细胞之间的直接作用,为该技术成为一种研究平台提供实验依据.方法 丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)经1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3(3-dimethylamino propyl)-carbodiimide,EDC]活化,以巯基乙胺(mercaptoethylamine,ME)为连接荆,与水溶性量子点(quantum dots,QDs)进行共价连接,将获得的QDs-SAB与肺腺癌细胞(SPCA-1)和肝癌细胞(7721)进行培育,通过QDs荧光直接观察SAB与细胞的结合情况,进而根据细胞形态观察、MTT和DNA电泳结果考察SAB是否对这些细胞有作用.结果 QDs可清晰地示踪SAB与SPCA-1和7721细胞之间结合情况,通过常规方法首次证实了SAB对这两种细胞有增殖抑制作用.结论 应用量子点纳米荧光探针直观发现中药有效成分与细胞之间的作用是可行的.     

新型维甲酸衍生物体外诱导白血病细胞分化

目的 观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基依曲替酸酯(ATPA)对白血病NB4细胞株生长和分化的影响.方法 ATPA作用于NB4细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,检测细胞的生长抑制率;硝基四唑氮蓝(NBT)还原实验法分析细胞的分化指标;流式细胞术检测细胞表面分化抗原及细胞周期的变化情况.结果 ATPA呈...