器官移植病人外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达与移植器官功能和活组织病理学改变时相比较

目的系统比较移植后外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相与病理改变时相间的差别,探讨外周血淋巴细胞免疫活性变化与移植器官排斥反应时间进程间的关系。方法分别通过对临床4例肾移植、4例心脏移植和1例单肺移植病人的观察,利用病理学、流式细胞术等技术,系统比较了移植器官功能改变时相、移植器官的病理改变时相、外周血淋巴细胞表面蛋白分子表达时相的时间进程的差别和先后顺序。结果 (1)9例器官移植病人中有4例在发生急性排斥反应,免疫抑制剂不能完全阻断脏器移植排斥反应的发生;(2)肾移植术后早期,对外周血淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8和TCR表达水平的监测可以帮助发现和判断急性排斥反应的时间进程,并可较准确地监测抗排冲击的疗效,减少免疫药物冲击疗程的盲目性;(3)心脏移植排斥反应病人淋巴细胞HLA-DR分子于移植后24～72 h期间出现高于没有排斥反应病人的表达高峰,比活组织检查诊断排斥反应时间提前5～7 d;(4)9例病人24 h内平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、CD8、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等负调表达,淋巴细胞活性被一过性抑制;(5)9例病人24～48 h期间,平均淋巴细胞表面蛋白分子CD3、CD4、HLA-DR、ICAM-I、MHC-Ⅱ、TCR等正调表达。结论外周血淋巴细胞表面蛋白分子的测定对临床急性排斥反应的早期发现和时间进程的监测、抗排斥反应药物治疗效果的判断与监测具有一定的指导意义。     

抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠脑组织CD4~+、CD8~+T淋巴细胞表达的影响

目的:探讨抑肽酶在细胞免疫应答的干预下对脑缺血再灌注后继发性脑损伤的保护作用。方法:105只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑肽酶组(n=35),采用大鼠大脑中动脉闭塞法制作局灶性脑缺血再灌注模型。抑肽酶组在大鼠脑缺血前24h及再灌注即刻、24h、4d、6d、8d、10d、12d、14d分别尾静脉给予抑肽酶,其余组给予生理盐水。应用免疫组织化学方法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间段CD4+、CD8+T淋巴细胞的浸润情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠在缺血再灌注损伤后各时间点脑组织内CD4+、CD8+T淋巴细胞计数均明显增加,10d达高峰;与模型组比较,抑肽酶组大鼠脑组织内CD4+、CD8+T淋巴细胞计数在缺血再灌注损伤后各时间点均更低(P<0.05),8d达高峰。结论:抑肽酶可能通过抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞在缺血再灌注损伤后脑组织内的浸润而减少细胞免疫应答介导的神经元凋亡,从而减轻脑组织继发性损伤。     

EAE大鼠模型的构建及外周血淋巴细胞中多种炎症因子表达的意义

目的 构建实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠模型,探讨炎症因子在EAE发病过程中的作用及意义.方法 采用髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下来构建EAE模型,苏木素-伊红(HE)染色观察不同发病阶段EAE大鼠模型脊髓组织形态学改变,同时利用逆转录PCR(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测不同发病阶段大鼠外周血淋巴细胞中IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA和蛋白表达.结果 成功建立了EAE大鼠模型,随着EAE大鼠病情的加重,实验组IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ的mRNA量和蛋白表达量较对照组逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4和IL-10的mRNA量和蛋白表达量逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),当大鼠症状缓解后两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 通过髓鞘碱性蛋白加完全弗氏佐剂,按体质量多点注入大鼠背部皮下的方法能很好地构建EAE模型,同时外周血淋巴细胞中多种炎症因子的表达与EAE大鼠模型的发病密切相关.     

斑秃患者皮损处T淋巴细胞表型的研究及Fas的表达

目的　研究斑秃患者皮损处浸润T淋巴细胞的表型及Fas的表达情况。方法　应用免疫组织化学技术检测斑秃患者皮损处CD4和CD8T淋巴细胞及Fas的表达。结果　CD4和CD8:活动期和稳定期斑秃患者皮损处无论是毛囊周围还是血管周围CD4T淋巴细胞浸润数量均明显多于CD8T淋巴细胞 (P <0 .0 5 ) ;斑秃活动期的CD4和CD8T淋巴细胞浸润数量与稳定期和对照组相比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。Fas :与对照组相比较 ,斑秃患者皮损处毛囊角质形成细胞Fas的表达例数较多 (P <0 .0 5 )。结论　斑秃患者皮损处浸润T淋巴细胞以CD4T细胞占优势 ;Fas在斑秃皮损处毛囊角质形成细胞异常表达。     

腹泻大鼠结肠水通道蛋白4表达与分布的研究

目的检测水通道蛋白4(AQP4)在腹泻大鼠结肠的表达和分布,探讨AQP4与肠道水代谢紊乱性疾病的关系。方法用20%的甘露醇灌胃制备大鼠渗透性腹泻模型,采用免疫组织化学方法对各组大鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4进行定位、定量分析。结果①腹泻组和对照组大鼠升、降结肠黏膜都有AQP4表达,且升结肠表达量高于降结肠;②腹泻组大鼠升、降结肠黏膜AQP4表达均较对照组减少(P<0.01),9h时腹泻最严重,AQP4蛋白减少亦最显著(P<0.01);③AQP4主要表达于细胞膜,胞质仅有少量表达。结论①AQP4在升结肠表达高于降结肠,这与肠腔内水分主要是在近段吸收相一致;②腹泻状态下大鼠结肠黏膜AQP4表达下调,导致结肠对肠腔内水分的吸收减少,引起大便稀薄,含水量增加形成腹泻;③AQP4主要表达于细胞膜上,这与其功能密切相关。     

多器官功能障碍综合征患者T淋巴细胞亚群的临床意义

目的:观察多器官功能障碍综合征(MODS)患者T淋巴细胞亚群变化并探讨其临床意义。方法:以MODS患者40例(年龄40岁～86岁)和非MODS患者40例(年龄27岁～82岁)为研究对象,采用流式细胞仪FACSCalibuv(美国BD公司)定量测定外周血CD3+T细胞(CD3阳性淋巴细胞)、CD4+T细胞(CD4阳性淋巴细胞)和CD8+T细胞(CD8阳性淋巴细胞)的百分比及CD4+T/CD8+T值。结果:相比非MODS患者,MODS组CD3+T、CD4+T、CD8+T的百分比及CD4+T/CD8+T值均降低(P<0.01)。与MODS存活组相比,死亡组患者CD4+T的百分比和CD4+T/CD8+T值降低(P<0.05或P<0.01),而CD3+T和CD8+T百分比的差异没有统计学意义(P>0.05)。结论:MODS患者存在细胞免疫功能损害,死亡组MODS患者损害更为严重。外周血T淋巴细胞亚群检测对MODS患者免疫功能评价和判断预后具有重要的临床意义。     

腹泻状态下大鼠结肠水通道蛋白4表达的研究

目的检测腹泻后不同时间点大鼠升结肠和降结肠黏膜水通道蛋白4(AQP4)表达情况,探讨AQP4与结肠水转运的相关性。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分别对腹泻后3、9、15h时大鼠升、降结肠黏膜细胞AQP4 mRNA和AQP4蛋白表达进行定量分析。结果①正常对照组和腹泻组大鼠升、降结肠均有AQP4 mRNA和蛋白表达,且升结肠表达量明显高于降结肠(P<0.01);②腹泻各组升、降结肠AQP4 mRNA和蛋白表达量均较对照组减少(P<0.01),9h时减少最明显(P<0.01);③AQP4表达量随腹泻程度变化而变化,提示AQP4可能参与了结肠水代谢过程。结论腹泻状态下大鼠结肠黏膜AQP4表达下调,导致结肠对肠腔内水分的吸收减少,大便含水量增加形成腹泻,提示AQP4在结肠水代谢中具有重要意义。     

CD4、CD8分子在被动吸烟诱导的肺气肿大鼠中的表达及意义

目的探讨CD4、CD8分子在被动吸烟诱导的肺气肿大鼠中的表达及意义。方法 26只大鼠随机分为2组：正常对照组、肺气肿组。单纯吸烟法建立肺气肿模型,熏烟暴露共计74d。以酶联免疫吸附法（ELISA）测定2组血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的CD4、CD8分子、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-8（IL-8）的浓度。肺组织切片行苏木素-伊红染色观察形态学改变,并定量测定肺平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN）。结果 （1）肺气肿组血清CD4含量、CD4/CD8较正常对照组降低（P〈0.05）;但其BALF中CD4分子含量、CD4/CD8和正常对照组比较,差异无显著意义（P〉0.05）。（2）肺气肿组血清及BALF中TNF-α、IL-8浓度较正常对照组增加（P〈0.05）。（3）肺气肿组MLI比正常对照组增高,MAN比正常对照组降低（P〈0.05）。（4）血清CD4分子和IL-8浓度呈负相关（r=-0.59,P〈0.05）,但和TNF-α浓度无明显相关（r=-0.26,P〉0.05）;血清CD4/CD8和TNF-α、IL-8浓度呈负相关（r分别为-0.51,-0.60,P〈0.05）。结论吸烟肺气肿大鼠可出现全身免疫功能降低,易诱发血清中炎症因子浓度升高。     

脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化

目的在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质。方法PCR扩增HlrgcDNA编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导。表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化。结果经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%。表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯。加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞。结论在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础。     

晚期非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞表面程序性死亡蛋白1表达及与临床特征的相关性

目的 探讨晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CD8+T淋巴细胞表面程序性死亡蛋白1(PD-1)表达情况,分析其与临床病理因素的相关性。方法 选取攀枝花市中心医院80例晚期NSCLC患者作为观察组,同期40例肺部良性疾病患者作为对照组。比较观察组和对照组及观察组不同临床特征患者CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率,分析CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率与临床特征的相关性,并将观察组根据治疗方案不同分为A组（化疗）、B组（化疗联合免疫治疗）,各40例,对比2组疗效、不同疗效组治疗前后患者CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率、肿瘤相关物质[肿瘤相关物质群（TSGF）、糖类抗原125(CA125)、胸苷激酶（TK1）]水平,分析CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率与肿瘤相关物质相关性,随访1年,统计中位生存期（MST）,对比不同生存期患者CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率及其对生存期的预测价值。结果 观察组CD8+T细胞表面PD-1表达率高于对照组（P<0.05）;CD8+T淋巴细胞表面PD-1表达率与淋巴结转移、远处转移正相关（P<0.05）;B组治疗总有效率（90%）...     

血浆 Periostin蛋白、嗜铬粒蛋白 A、可溶性 Sema 4D水平与扩张型心肌病慢性心力衰竭病人心功能分级和心室重构的相关性分析

目的 探讨扩张型心肌病(DCM)慢性心力衰竭(CHF)病人血浆中Periostin蛋白、嗜铬粒蛋白A(chromaffin grain pro-tein A,Cg A)、可溶性Sema 4D(sSema 4D)水平与心功能分级和心室重构的关系.方法 选择在2017年10月至2019年9月期间正定县人民医院收治的154例DCM CHF病人,根据Weber心功能分级标准将受试者分为心功能轻度损害组(n=70),心功能中至重度损害组(n=84),正常对照组(n=50).收集三组的临床资料,检测心功能及左室重构相关指标;酶联免疫吸附测定检测各组血浆Periostin蛋白、Cg A、sSema 4D水平,并进行相关性分析.结果 心功能越差,血清Periostin蛋白、Cg A、sSema 4D水平逐渐增高,左心室舒张末内径(LVEDD)、左室舒张末期内径(LVESD)、左心房内径(LAD)、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平逐渐增高,对照组Periostin蛋白、Cg A、sSema 4D、LVEDD、LVESD、LAD、NT-proBNP、TGF-β1分别为(75.49±8.71)ng/L、(62.25±6.32)μg/L、(427.25±82.19)ng/L、(49.25±4.62)mm、(27.75±5.87)mm、(45.22±5.74)mm、(1125.82±33.27)ng/L、(8.87±4.36)μg/L,心功能轻度损害组分别为(88.04±15.76)ng/L、(146.12±11.17)μg/L、(707.01±81.36)ng/L、(52.12±3.14)mm、(33.01±4.67)mm、(35.72±4.22)mm、(3872.31±621.4)ng/L、(44.17±5.34)μg/L,心功能中至重度损害组分别为(112.64±11.92)ng/L、(366.62±28.22)μg/L、(1087.51±81.27)ng/L、(57.74±4.83)mm、(37.01±7.33)mm、(49.79±4.72)mm、(7891.40±917.62)ng/L、(64.29±8.72)μg/L,各组比较差异有统计学意义(P<0.05);Periostin蛋白、Cg A、sSema 4D与LVEDD、LVESD、LAD、NT-proBNP、TGF-β1等和心室重构指标均呈正相关(均P<0.05);logistic回归分析显示,血清高水平Periostin蛋白、Cg A、TGF-β1以及高血压、冠心病是左室重构发生的危险因素(OR>1,P<0.05),血清低水平sSema 4D是左室重构发生的保护因素(OR<1,P<0.05).结论 DCM CHF病人血浆Periostin蛋白、Cg A、sSema 4D水平与心功能水平和心室重构关系密切,可能为DCM病人心衰的诊断、治疗及预后提供新的指导方向.     

Increased apoptotic efficacy of lonidamine plus arsenic trioxide combination in human leukemia cells. Reactive oxygen species generation and defensive protein kinase (MEK/ERK, Akt/mTOR) modulation

Lonidamine is a safe, clinically useful anti-tumor drug, but its efficacy is generally low when used in monotherapy. We here demonstrate that lonidamine efficaciously cooperates with the anti-leukemic agent arsenic trioxide (ATO, Trisenox™) to induce apoptosis in HL-60 and other human leukemia cell lines, with low toxicity in non-tumor peripheral blood lymphocytes. Apoptosis induction by lonidamine/ATO involves mitochondrial dysfunction, as indicated by early mitochondrial permeability transition pore opening and late mitochondrial transmembrane potential dissipation, as well as activation of the intrinsic apoptotic pathway, as indicated by Bcl-X_L and Mcl-1 down-regulation, Bax translocation to mitochondria, cytochrome c and Omi/HtrA2 release to the cytosol, XIAP down-regulation, and caspase-9 and -3 cleavage/activation, with secondary (Bcl-2-inhibitable) activation of the caspase-8/Bid axis. Lonidamine stimulates reactive oxygen species production, and lonidamine/ATO toxicity is attenuated by antioxidants. Lonidamine/ATO stimulates JNK phosphorylation/activation, and apoptosis is attenuated by the JNK inhibitor SP600125. In addition, lonidamine elicits ERK and Akt/mTOR pathway activation, as indicated by increased ERK, Akt, p70S6K and rpS6 phosphorylation, and these effects are reduced by co-treatment with ATO. Importantly, co-treatment with MEK/ERK inhibitor (U0126) and PI3K/Akt (LY294002) or mTOR (rapamycin) inhibitors, instead of ATO, also potentiates lonidamine-provoked apoptosis. These results indicate that: (i) lonidamine efficacy is restrained by drug-provoked activation of MEK/ERK and Akt/mTOR defensive pathways, which therefore represent potential therapeutic targets. (ii) Co-treatment with ATO efficaciously potentiates lonidamine toxicity via defensive pathway inhibition and JNK activation. And (iii) conversely, the pro-oxidant action of lonidamine potentiates the apoptotic efficacy of ATO as an anti-leukemic agent.