续骨补肾方含药血清对成骨细胞增殖及骨形成蛋白-2,Ⅰ型胶原表达的影响

目的:探究续骨补肾方含药血清在骨折愈合过程中对成骨细胞增殖及BMP-2,Ⅰ型胶原mRNA表达的影响,进一步揭示其促进骨折愈合的具体机制,为临床推广提供实验依据。方法:分离培养大鼠成骨细胞并进行鉴定,传代备用并制备15%含药血清并分组(高、中、低剂量3个含药血清组和生理盐水组)+DMEM培养基;MTT法观察各组对成骨细胞增殖的影响;RT-PCR检测成骨细胞的Ⅰ型胶原、BMP-2 mRNA表达。结果:续骨补肾方含药血清组在24 h,48 h,72 h均可促进成骨细胞增殖,且在24 h低剂量组促进成骨细胞增殖作用最强;在72 h时,中剂量组促进成骨细胞增殖作用最强,差异有统计学意义。续骨补肾方含药血清各剂量组均可上调BMP-2,Ⅰ型胶原mRNA的表达(P0.05),且低剂量组作用最强。结论:续骨补肾方可促进成骨细胞增殖,增加BMP-2,Ⅰ型胶原mRNA的表达,促进骨折愈合,且低剂量是最佳剂量。     

补肺颗粒含药血清对哮喘气道平滑肌细胞及气道血管生成的影响研究

目的 观察中药补肺颗粒含药血清对哮喘小鼠支气管平滑肌细胞（ASMC）增殖以及气道血管生成的影响。方法 制备补肺颗粒含药血清,参照文献制备哮喘小鼠模型并分离ASMC,随机分为对照组、高剂量组和低剂量组,分别给予不含药血清、高剂量含药血清及低剂量含药血清加以培养,后测定ASMC增殖率,Western blotting测定ASMC血管内皮生长因子（VEGF）及内皮抑素（ES）的相对表达,RT-PCR检测ASMC VEGF mRNA及ES mRNA相对表达。结果 与对照组对比,高剂量组和低剂量组能显著降低ASMC增殖（P <0.01）,VEGF及内皮抑素的相对表达显著降低（P <0.05）,高剂量组的VEGF m RNA及ES mRNA的相对表达显著降低（P <0.01）。结论 补肺颗粒含药血清能有效抑制哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖,进而改善哮喘气道重塑状态。其作用机制可能与抑制VEGF及内皮抑素表达,调节气道血管生成有关。     

糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对TGF-β1、HO-1干预作用的研究

[目的]探讨糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖作用及对转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血红素氯合酶-1(HO-1)干预作用。[方法]制备小鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:空白对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、空白血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%空白血清)、糖肾方低剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%低剂量含药血清)、糖肾方高剂量血清组(30 mmol/L葡萄糖+10%高剂量含药血清)。使用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测糖肾方含药血清对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖的影响。运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肾小管上皮细胞中TGF-β1、HO-1和α-SMA蛋白的表达。[结果]高糖诱导下,肾小管上皮细胞呈成纤维细胞样的长梭形,细胞核呈梭形改变。MTT检测:与空白组比较,高糖组光度值明显增高(P0.05);与高糖组比较,高低剂量含药血清组在培养24 h后吸光度值均有下降,吸光度差异有统计学意义(P0.05),且高剂量组光度值下降强于低剂量组(P0.05)。Western blotting及RT-PCR测定实验结果显示:与空白对照组细胞对比,高糖组中TGF-β1、α-SMA含量增加;经过含药血清干预后,高糖诱导的HK-2细胞TGF-β1、α-SMA含量降低,差别有统计学意义(P0.05);糖肾方高、低剂量组血清比较,在降低TGF-β1方面,高剂量组效果较好(P0.05),在降低α-SMA方面没有统计学差异(P0.05)。HO-1在高糖诱导后含量稍升高,与空白对照组对比,差异有统计学意义(P0.05);在经过糖肾方含药血清干预后,含量升高,与高糖组对比,差异有统计学意义(P0.05),糖肾方高低剂量组血清比较,升高HO-1含量方面没有统计学差异(P0.05)。[结论]糖肾方通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和干预TGF-β1、α-SMA、HO-1相关分子的表达,可以抑制细胞外基质成分沉积,减少氧化应激反应,减轻细胞损伤,逆转上皮-间质转分化,从而抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FNmRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)中转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1)与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义(P0.05)。2)与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05)。3)与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05),糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05)。4)与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

健肾助孕方对着床障碍小鼠雌孕激素及子宫HOXA10表达的影响

目的:观察健肾助孕方对着床障碍小鼠血清雌孕激素浓度和子宫HOXA10表达的影响。方法:将30只孕鼠随机分为模型组3只、健肾助孕方低剂量组6只、健肾助孕方高剂量组6只、黄体酮组7只和正常对照组8只。从妊娠第1天开始,模型组、正常对照组每日给予生理盐水0.2 m L·只-1灌胃,黄体酮组皮下注射黄体酮溶液0.1 m L·只-1,健肾助孕方低剂量组、高剂量组每日灌胃0.2 m L·只-1。妊娠第4天皮下注射米非司酮诱导着床障碍小鼠模型。妊娠第8天处死小鼠,ELISA法检测血清中雌孕激素浓度,免疫组织化学法和Western blot法对子宫中HOXA10的表达和蛋白含量进行检测。结果:健肾助孕方低剂量组、高剂量组血清雌孕激素浓度较模型组明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。健肾助孕方高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的表达显著增多,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05);健肾助孕方低剂量组、高剂量组、黄体酮组子宫中HOXA10的蛋白含量明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾助孕方可以升调着床障碍小鼠血清雌孕激素水平,提高子宫中HOXA10的表达量,从而改善着床障碍小鼠的子宫内膜容受性,促进胚胎着床。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

目的探讨阳和汤含药血清对成骨细胞、破骨细胞的影响作用。方法 SD大鼠连续7 d灌胃阳和汤,腹主动脉采血,制备含药血清。分离并培养原代成骨细胞、成骨细胞株UMR106、原代破骨细胞、破骨前体细胞RAW264.7。随机分为阳和汤含药血清低剂量组、中剂量、高剂量,空白血清组,各组加入相应含药血清进行培养,分别于24、48、72h收获细胞,采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响;比色法测定破骨细胞TRAP酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24、48、72h均能提高成骨细胞的增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组在48、72h也能明显提高细胞增殖率,与空白血清组比较有显著差异;阳和汤含药血清低剂量组对破骨前体细胞RAW264.7增殖率24、48、72h均没有影响,与空白血清组比较差异均无统计学意义;阳和汤含药血清中、高剂量组破骨前体细胞RAW264.7增殖率均低于空白血清组,24、48、72h比较差异有统计学意义;阳和汤含药血清低剂量组对破骨细胞的TRAP活性24、48 h影响不大,但72h TRAP活性低于空白血清组;阳和汤含药血清中、高剂量组48、72h破骨细胞TRAP活性均显著低于空白血清组。结论阳和汤能抑制体外培养的破骨前体细胞增殖,降低破骨前体细胞TRAP活性,对成骨细胞的增殖有促进作用。     

滋肾健骨方含药血清对人骨髓间充质干细胞成骨分化中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨滋肾健骨方含药血清对老年骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法 取SD大鼠制备低、中、高剂量滋肾健骨方含药血清和空白血清。将培养第3代的老年骨质疏松症患者hBMSCs分为6组，空白组常规培养；模型组进行成骨诱导；空白血清组进行成骨诱导+空白血清培养；低剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+低剂量滋肾健骨方含药血清培养；中剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+中剂量滋肾健骨方含药血清培养；高剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+高剂量滋肾健骨方含药血清培养。CKK-8法检测细胞增殖情况，碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞分化情况，Western blot法检测细胞中转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果 与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞增殖活性和ALP活性均明显增强(P均<0.05),且中、高剂量滋肾健骨含药血清组均明显强于低剂量滋肾健骨含药血清组(P均<0.05);与模型组和空白血清组比较，各剂量滋肾健骨含药血清组细胞...     

化浊解毒方含药血清对胃癌细胞VEGF及COX-2表达的影响

目的:研究化浊解毒方对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及环氧合酶-2(COX-2)表达的调控作用。方法:以不同剂量的化浊解毒方给Wistar大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养2代后,分别用免疫组化法检测VEGF、COX-2的表达情况。结果:化浊解毒方高、中、低剂量组胃癌细胞中VEGF、COX-2的表达减弱,与对照组比较,差异均有显著性意义(P<0.01);而且高剂量组表达减弱更为明显,与低、中剂量组与较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:化浊解毒方对胃癌细胞VEGF及COX-2的表达有抑制作用。     

胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响

目的研究胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR表达的调控作用.方法以不同剂量的中药复方胃康宁制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果胃康宁高、中、低剂量组对P53、VEGF和Flt的免疫组化检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).胃康宁高、中、低剂量组对VEGF及其受体Flt、KDRmRNA表达检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01),提示与用药剂量有一定的关系.结论胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用.     

基于SCL-90量表评价养生健身方干预亚健康状态的临床研究

目的:基于SCL-90量表评价养生健身方干预亚健康状态的临床疗效。方法:观察组60例,其中中药观察组30例,采用养生健身方干预,模拟剂观察组30例,采用模拟剂干预;对照组60例,不进行任何药物干预。首先应用Logistic回归分析和判别分析获取特征性指标,再将获得的特征性指标用于临床疗效评价。结果:应用Logistic回归分析及判别分析,最终筛选出8项高区分度的指标,包括X17(发抖)、X29(感到孤独)、X37(感到人们对您不友好,不喜欢您)、X49(一阵阵发冷或发热)、X59(想到死亡的事)、X75(单独一人时神经很紧张)、X76(别人对您的成绩没有做出恰当的评价)、X83(害怕会在公共场合晕倒)。最后采用以上8种特征性指标对养生健身方进行疗效评价,发现与模拟剂比较,养生健身方可以显著改善亚健康状态人群的以上8项特征性指标,差异有统计学意义(P0.01);其总有效率分别为73.33%、66.67%、66.67%、70.00%、70.00%、80.00%、90.00%、76.67%,远优于模拟剂,差异有统计学意义(P0.01)。结论:养生健身方可以显著改善亚健康状态人群的以上8项特征性指标,为临床应用养生健身方论治亚健康状态提供了可靠的证据支持。     

糖痹康对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察糖痹康大鼠含药血清对高糖造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:以CCK-8法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响;根据实验结果选择葡萄糖浓度为5.55mmol/L组为正常组,葡萄糖浓度为25mmol/L组做为模型组。然后制备正常组,弥可保组,糖痹康组的大鼠含药血清,将含药血清作用于高糖损伤的人脐静脉内皮细胞,分为正常组、高糖模型组、高糖弥可保组、高糖糖痹康低、中、高剂量组,并通过测定培养液中丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)含量与超氧化物歧化酶(SOD)活力,探讨糖痹康对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果:与高糖模型组比较,糖痹康含药血清能减少细胞MDA、LDH释放量,提高SOD活力及NO含量。结论:糖痹康对高糖损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用,间接的起到对周围神经的保护作用。     

芪芎健肾颗粒对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的疗效研究

【目的】验证中药芪芎健肾颗粒对大鼠系膜增生性肾炎的治疗作用。[方法】建立大鼠系膜增生性肾炎模型,观察大鼠24h尿蛋白定量、肾功能和肾脏病理形态学的改变。【结果]芪芎健肾颗粒低剂量组、芪芎健肾颗粒高剂量组与模型组比较,可降低尿蛋白（pro）、血肌酐（CR）、尿素氮（BUN）的含量,抑制系膜细胞增生和系膜基质增多。【结论】芪芎健肾颗粒对系膜增生性肾小球肾炎有治疗作用。     

芪芎健肾颗粒治疗IgA肾病大鼠的实验研究

[目的]观察芪芎健肾颗粒对IgA肾病(IgAN)大鼠的治疗作用。[方法]建立IgAN大鼠模型,观察芪芎健肾颗粒对大鼠尿红细胞(URBC)计数、24 h尿蛋白定量(24 h Upr)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)和肾脏病理形态学的影响。[结果]芪芎健肾颗粒高剂量组(芪高组)与模型组比较,可有效降低URBC计数、24 h Upr、SCr、BUN(P<0.05),抑制肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多,减少肾小球系膜区IgA的沉积。其中,芪高组在降低24 h Upr、SCr及改善肾脏病理损害方面疗效优于肾炎康复片组(对照组)(P<0.05),但在降低URBC计数、BUN方面与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]芪芎健肾颗粒能有效降低IgAN血尿、蛋白尿,改善肾功能,并有延缓肾小球病理进展的作用,是防治IgAN的有效方剂。     

健脾化痰方对胃癌细胞PD-L1表达的影响

目的:探讨健脾化痰方对胃癌细胞PD-L1表达的影响,初步探讨其干预肿瘤免疫逃逸的机制。方法:40只大鼠随机分为生理盐水对照组及健脾化痰方高、中、低剂量组,每组10只,采用灌胃方法,制备不同浓度含药血清。各组含药血清处理胃癌细胞(SGC-7901)24 h。采用流式表面标记技术检测SGC-7901细胞上PD-L1的表达,采用免疫荧光染色法进行验证。结果:与对照组比较,健脾化痰方低、中、高浓度含药血清处理的胃癌细胞SGC-7901,24 h后PD-L1表达明显下降,平均荧光强度表达量明显降低,P<0.01,且程剂量依赖型,免疫荧光染色法可进一步验证其结果。结论:健脾化痰方含药血清能降低胃癌细胞SGC-7901中PD-L1表达,且程剂量依赖型,其可能通过这一机制干预肿瘤的免疫逃逸,起到抗肿瘤作用。     

自拟益气健肾汤联合腹膜透析治疗慢性肾功能衰竭68例疗效观察

目的：观察并评价自拟益气健肾汤联合腹膜透析对慢性肾功能衰竭的疗效。方法：符合标准的135例入选患者随机分为治疗组和对照组两组,采用两种方法进行治疗。结果：两组患者治疗后血清肌酐均明显下降,两组比较差异有统计学意义。结论：自拟益气健肾汤联合腹膜透析对慢性肾功能衰竭的疗效较好,值得临床应用。     

调肝益气通络方药物血清对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的:通过观察调肝益气通络方对大鼠间充质干细胞增殖能力的影响,从而评价该方的促增殖能力。方法:腹腔注射"CCl4-橄榄油"混悬液制备Wistar小写大鼠(35只)肝纤维化模型;其中30只灌胃给予调肝益气通络方(低、中、高3个剂量)1个月,制备含药血清;另外5只用于MSC细胞的分离与培养;用含药血清诱导MSC向肝细胞的分化连续7 d;在各检测点进行形态学观察及通过MTT对细胞增殖情况进行评价。结果:各浓度含药血清在加入1⁷ d后,其细胞数量均比常规培养组增多,并同用药剂量呈正比,浓度越大细胞数量越多,细胞数随着时间的推移而不断增大。结论:调肝益气通络方对大鼠骨髓里的间充质肝细胞的增殖能力具有显著的促进作用。     

补肾活血复方含药血清对MSCs增殖和骨向分化影响的时效及量效研究

目的:筛选补肾活血复方含药血清促SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和骨向分化最佳取血时间和浓度。方法:10月龄SD雌性大鼠30只,随机分为补肾活血复方低(11.6 g/kg)、中(34.8 g/kg)、高(104.4 g/kg)剂量组,每组10只。灌胃1次/d,连续12 d。分别于末次灌胃后的0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 h取血,分离血清,然后将上述复方含药血清分别用不同添加浓度干预3月龄SD大鼠MSCs,以MTT法检测细胞增殖情况,以碱性磷酸酶(ALP)确定各组MSCs骨向分化情况。结果:补肾活血复方含药血清促MSCs增殖以复方低剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%的添加浓度为佳;促MSCs骨向分化以复方高剂量灌胃12 d,末次灌胃1 h后取血,25%～30%的添加浓度为佳。结论:补肾活血复方含药血清能促进SD大鼠MSCs增殖及骨向分化。     

复方浙贝药物血清影响K562/A02细胞积聚外排功能和细胞凋亡研究

目的 观察复方浙贝药物血清对K562/A02细胞积聚外排功能和细胞凋亡的影响。方法 Wistar 雄性大鼠40只, 分为空白对照组（血清组）、含阿霉素（ADR）血清组及含复方浙贝颗粒高［8 g/（kg·d）］、中［4 g/（kg·d）］、低［2 g/（kg·d）］剂量血清组。用流式细胞仪定量检测不同时间药物血清干预后的K562/A02细胞内ADR和罗丹明123（Rh123）浓度;Annexin V/PI双染法检测K562/A02细胞早期凋亡率。结果 复方浙贝药物血清不同剂量组均能减缓K562/A02细胞内ADR和Rh123荧光下降速度,其中高剂量组作用最明显,中剂量组次之,低剂量组较弱;K562/A02细胞早期凋亡率依次为：中剂量组24.60％、高剂量组11.21％、低剂量组5.71％、空白组1.40％。结论 复方浙贝颗粒体外能够抑制K562/A02细胞对药物的外排功能,并能够诱导细胞凋亡。