DABS-Cl柱前衍生RP-HPLC法定量测定生理样本氨基酸

目的DABS-Cl柱前衍生RP-HPLC法定量测定生理样本中的氨基酸.方法采用DABS-C1柱前衍生RP-HPLC法,在紫外436nm处测定氨基酸.结果人血清、脑脊液(CSF)和细胞培养液中的氨基酸在60min中得到良好的分离和测定.结论DABS-Cl柱前衍生RP-HPLC定量分析生理样本中的氨基酸,具有较好精准性,是一种比较方便、稳定和可靠的检测方法.     

HPLC法和氨基酸分析仪(AAA)法测定肠外营养注射液(25)中18种氨基酸的含量的比较

目的:RP-HPLC法和氨基酸分析仪(amino acid analyzer,AAA)法测定氨基酸含量的比较。方法:采用高效液相色谱仪和氨基酸分析仪测定肠外营养注射液(25)中18种氨基酸的含量。采用C18柱和异硫氰酸苯酯进行柱前衍生化,加入二硫代二丙酸作为保护剂,同时测定半胱氨酸;AAA法采用离子交换色谱柱和茚三酮柱后衍生化进行,不需加入保护剂,直接测定半胱氨酸。结果:RP-HPLC法和AAA法的重复性分别小于1.1%和3.1%,2种测定方法的相对偏差在0.19%～8.2%之间。结论:AAA法更适于肠外营养注射液(25)种18中氨基酸的测定。     

用HPLC法和氨基酸分析仪测定多维氨基酸片中18种氨基酸

目的：RP-HPLC法和氨基酸分析仪（amino acid analyzer，AAA）法测定氨基酸含量的比较。方法：采用Agilent高效液相色谱系统和日立835-50氨基酸分析仪测定多维氨基酸片中18种氨基酸的含量。RP-HPLC法采用C18柱和邻苯二甲醛柱前衍生化进行，AAA法采用离子交换色谱柱和茚三酮柱后衍生化进行。结果：HPLC法和AAA法的变异系数分别〈1．5％和3％，最小检测量分别为3pmol和30pmol。HPLC法的测定值与AAA的测定值有相关性。两种测定方法的平均相对偏差为5．74％（0．24％～9．60％）。结论：两种方法都可用于测定氨基酸，但测定结果存在差异。     

柱前衍生化RP-HPLC法测定肌肽的含量

目的建立简单、快速测定肌肽含量的方法。方法采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法。衍生化试剂:2,4-二硝基氯苯;色谱柱:DiamonsilTM C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15 mol.L-1乙酸钠缓冲溶液(体积比1∶5);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:360 nm。结果肌肽质量浓度在2.0~20.0 mg.L-1(r=0.999 4)内与其衍生化物峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为0.8%(n=9)。结论2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法可用于测定肌肽含量。     

柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量比较

摘 要 目的：比较柱前衍生高效液相色谱法（HPLC法）和柱后衍生阳离子交换色谱法（AARO法）测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量的差异。方法: HPLC法采用 C₁₈柱和2,4 二硝基氯苯（DNCB）进行柱前衍生化,加入0.1 mol·L^-1硼砂缓冲液（pH=9.1）,进行测定;AARO法采用强酸性阳离子交换色谱柱和柱后衍生化,直接测定。结果: 柱前衍生高效液相色谱法和柱后衍生阳离子交换色谱法的重复性考察,AARO法各组分RSD为0.91%～1.84%,HPLC法RSD为1.04%～1.87%。结论:柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液种 18种氨基酸,均可采用,两种方法对测定上述各氨基酸结果一致性较好, 但柱前衍生HPLC法可能易造成衍生不彻底和衍生物不稳定。     

AQC柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用

氨基酸分析是生物医药研究工作中十分重要的技术之一,大多数氨基酸和胺类化合物无吸收和荧光发射特征,进行化学衍生化是提高其分析检测灵敏度和特异性的有效手段,其中,AQC柱前衍生法是近几年广为接受的方法。本文对AQC柱前衍生法在氨基酸分析测定中的原理、影响因素及其应用情况进行综述。     

注射用尖吻蝮蛇血凝酶含量测定方法研究

目的建立能够准确反映注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法。方法采用Lowry法、Brad-ford法、RP-HPLC法及AQC柱前衍生HPLC法四种方法测定注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量并进行比较。结果Lowry法的测定结果明显高于Bradford法,Bradford法测定结果与两种液相色谱方法相当。结论 Lowry法由于赋形剂的干扰,测定结果偏高,不宜采用;柱前衍生HPLC法虽然灵敏度更高,但操作较繁琐;Bradford法和RP-HPLC法可作为注射用尖吻蝮蛇血凝酶蛋白质含量的测定方法。     

异硫氰酸苯酯柱前衍生化RP-HPLC法测定人血浆中10种氨基酸的浓度

目的:建立一种异硫氰酸苯酯柱前衍生化反相高效液相色谱同时测定人血浆中10种氨基酸的方法。方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,Venusil-AA柱为分析柱,柱温40℃,采用二元梯度洗脱,254 nm波长处检测。结果:氨基酸血浆浓度在15.6~250μmol/L时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸血浆浓度的线性相关系数,均大于0.99;10种氨基酸的加样回收率在96.3%~103.4%;日间和日内变异系数均在4.8%以下。应用该方法对小儿血浆中氨基酸含量进行了测定,取得了满意的结果。结论:该法简便、稳定,并且分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测。     

反相高效液相色谱结合柱前衍生化法测定人血清中L-门冬酰胺

目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)快速准确测定人血清中L-门冬酰胺(L-ASN)。方法:用已耗竭L-ASN的人血清为空白生物基质建立标准曲线,邻苯二甲醛在线柱前衍生样品,ZORBAX Eclipse AAA柱(4.6 mm×150 mm,5μm)分离衍生化产物。采用内标法根据荧光响应值定量分析。结果:L-ASN与内标高丝氨酸的衍生物均在16 min内出峰,在2～100μmol.L-1的范围内方法线性关系良好(r>0.999),最低定量限为2μmol.L-1,日内与日间精密度(RSD)均小于12.9%,回收率在96.9%～108.3%之间,平均提取回收率为58.2%,血清中L-ASN-80℃冻存四周保持稳定。结论:建立了RP-HPLC结合柱前衍生化测定人血清中L-ASN的方法,并应用于临床血清样品中L-ASN的定量测定。     

RP-HPLC法同时测定骨瓜提取物注射剂中15种氨基酸的含量

目的建立1种同时测定骨瓜提取物注射剂中15种氨基酸含量的RP-HPLC法。方法以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂对样品中15种氨基酸进行衍生化,采用Ocean C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为水-乙腈(体积比1∶4),流动相B为浓度0.1 mol·L-1乙酸钠-乙腈(体积比97∶3),梯度洗脱,流速为1.0 m L·min-1,柱温为25℃,检测波长为254 nm,进样量为10μL。用内标法计算15种氨基酸的含量。结果 15种氨基酸质量浓度在1.24~160.72 mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.997 7~1.000 0),15种氨基酸的平均加样回收率在97.7~102.4%内,加样回收率的RSD值在1.7%~3.3%内。结论该方法准确、可靠、灵敏,可以用于同时测定骨瓜提取物注射剂中15种氨基酸的含量。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定人血清中游离氨基酸

目的:建立柱前衍生反相高效液相色谱法测定人血清中游离氨基酸含量的方法。方法:血清样品以甲醇沉淀蛋白质后,用异硫氰酸苯酯柱前衍生化,以正亮氨酸为内标。色谱柱为Venusil-AA氨基酸分析柱,检测波长为254 nm,流动相为乙腈-0.05%醋酸钠溶液,梯度洗脱。结果:人血清中17种氨基酸在15.6~500μmol/L的范围内浓度与峰面积比之间线性关系良好,方法的平均回收率在90%~110%之间,RSD≤5%。结论:方法灵敏、准确、快速,其测定的结果可为临床对相关疾病的诊断提供参考依据。     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸

目的用柱前衍生-反相高效液相色谱法测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。方法采用二硝基氯苯(DNCB)为衍生试剂进行衍生,Waters Novapak C8(3.9 mm×150 mm,4μm)色谱柱分离,以乙腈-乙酸钠水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长360 nm,在65 min内,测定各氨基酸含量。结果回收率为97.5%~103.5%,RSD为0.7%~3.0%。结论DNCB柱前衍生-反相高效液相色谱法可测定转移因子胶囊中游离氨基酸的含量。     

Quantitation of free amino acids in plasma and muscle samples in healthy subjects and uremic patients by high-performance liquid chromatography and fluorescence detection

An automatic on-line high-performance liquid chromatographic (HPLC) method is developed to quantitate free amino acids in the biological samples. The method is based on pre-column derivatization of amino acids with orthophthalaldehyde (OPA) in presence of 2-mercaptoethanol (2-ME). The derivatized amino acids were separated on a 5 micron C18 column using a multi-step gradient with two solvents and the detection was made at Eex = 340 nm and Eem = 450 nm. The results were highly reproducible with a relative standard deviation (RSD) between 0.5-2% for all amino acids. Each chromatographic run was completed within 40 min to separate 24 amino acids. The optimized method was applied to evaluate the levels of free amino acids in plasma and muscle samples of eight healthy subjects and 13 uremic patients under fasting conditions.     

三七中十八种游离氨基酸的柱前衍生化-HPLC法测定

建立了柱前衍生化-HPLC法同时测定三七中的18种游离氨基酸.以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂,采用C18色谱柱,以乙腈-0.05 mol/L乙酸钠缓冲液为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm.结果显示三七根中的游离氨基酸以精氨酸、丙氨酸和脯氨酸为主,约占18种游离氨基酸总量的80%.18种氨基酸的平均回收率为96.5%～103.4%,RSD均小于3%.     

口服水解蛋白的成分分析

目的 分析口服水解蛋白的组成成分及分子量分布范围.方法 通过PITC柱前衍生法对口服水解蛋白的游离氨基酸含量进行测定,并通过质谱扫描及凝胶色谱方法测定分子量分布范围,分析口服水解蛋白的组成成分.结果 口服水解蛋白分子量范围在100～300 Da左右,口服水解蛋白含有18种氨基酸,其中8种为人体必需氨基酸,人体必需氨基酸含量占游离氨基酸总和的56.1％.口服水解蛋白的短肽含量与游离氨基酸含量比值为1.08.结论 本实验分析了口服水解蛋白的组成成分,口服水解蛋白是无脂,主要以短肽、混合氨基酸为主,含有少量糖类及矿物质的高蛋白营养补充剂.     

AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为2...     

HPLC法测定L-肌肽中的游离氨基酸的含量

目的采用柱前衍生高效液相色谱法对L-肌肽原料药中的游离氨基酸进行测定。方法采用异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)柱前衍生高效液相色谱法,使L-肌肽中游离的β-丙氨酸和L-组氨酸衍生物达到完全分离,并测定其含量。色谱柱为DiamonsilTM C18(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠溶液(体积比为13∶87),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为254 nm,柱温为35℃。结果HPLC法测定β-丙氨酸和L-组氨酸的线性范围分别为2.01～20.10 mg.L-1(r=0.999 7)和2.00～20.00 mg.L-1(r=0.999 3);平均回收率分别为110.6%和98.2%。结论HPLC法无需专业的氨基酸分析仪,可用于L-肌肽中游离氨基酸的检查。     

柱前衍生化HPLC-荧光检测法测定高血压患者尿液中22种游离氨基酸的浓度

目的:建立以柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定高血压患者尿液中22种氨基酸浓度的方法。方法:衍生化试剂为洗丹脱磺,流酰速氯为,色1.0谱m柱L·为mKinr-o1m,发asi射lC波18,长流为动5相08为nm甲,醇激与发3波0长mm为o3l·3L0-n1m醋,酸柱钠温缓为冲室溶温液,(进p样H量7.2为)-5甲0μ醇L-。四结氢果呋:2喃2(种84氨:1基5酸:1)检,测进浓行度梯度分别在5～200μmol·L-1范围内线性关系良好(r>0.9900);平均回收率为86.1%～109.0%;进样精密度RSD为0.84%～3.1%(n=6)。结论:本方法可同时测定22种氨基酸的浓度。     

蜣螂中氨基酸的测定

目的测定蜣螂中总氨基酸和游离氨基酸的含量。方法采用氨基酸分析仪测定。结果蜣螂中游离氨基酸的含量为2.07%,总氨基酸为40.58%,其中8种必需氨基酸的含量占总氨基酸含量的35.87%,谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸的含量较高,共占总氨基酸含量的29.55%。结论蜣螂的游离氨基酸含量远低于总氨基酸。     

反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定大青叶中氨基酸的含量

目的:建立以反相高效液相色谱法测定大青叶中精氨酸和脯氨酸含量的方法。方法:采用2,4—二硝基氟苯柱前衍生化,将氨基酸在碱性条件下衍生后直接进样测定;色谱柱为KromasilC18,流动相为醋酸钠缓冲溶液(pH=6.4)-乙腈(850∶150),检测波长为360nm,外标法计算含量。结果:精氨酸和脯氨酸进样量分别在0.627μg～5.016μg(r=0.9996)、0.874μg～7.000μg(r=0.9995)范围内线性关系良好;平均回收率均为98.2%(RSD=2.3%、2.2%)。结论:本法简便、准确、可靠,适用于大青叶中氨基酸的含量测定。