VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化

目的 探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制.方法 OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响.采用溶血试验,溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用.结果 体外实验显示,VIR576能逆转HIV gp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05).溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合.结论 VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化.VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究.

Abstract：

Objective To study the mechanism underlying the inhibitory effect of the anti-HIV peptide VIR576 on antigen-specific T cell activation. Methods CCK-8 assay was used to investigate the effect of VIR576 on the proliferation of splenocytes of OVA-specific DO11.10 Tg mice in response to chicken OVA. Hemolysis test, hemolysis inhibition assay and fluorescence binding assay were used to investigate the interaction of VIR576 with the transmembrane domain (TMD) of the T cell receptor (TCR). Results VIR576 inhibited HIV glycoprotein gp41 fusion peptide-mediated antigen specific T cell activation, and VIR576 itself also inhibited splenocyte proliferation in responses to OVA (P<0.05). Hemolysis test, hemolysis inhibition assay and fluorescence binding assay demonstrated that VIR576 suppressed TCR-TMD-mediated hemolysis and competitively inhibited Rho-VIR576 binding to TCR-TMD peptide. Conclusion VIR576 is effective in suppressing the antigen-specific T cell activation via TCR and can interact with TCR-TMD. VIR576 may serve as a potent microbicide candidate to block sexual transmission of HIV due to of its inhibitory effect on both HIV entry and antigen-specific T cell activation.     

人DC与黑色素瘤细胞融合疫苗体外诱导特异性抗肿瘤CTL

目的：探讨HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2＋的树突状细胞（DC）融合后体外诱导Me-lan-A特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的作用及交叉抗原递呈的能力。方法：用PEG法将黑色素瘤细胞与DC融合,在含GM-CSF的RPMI1640完全培养基条件下继续培养24～48h,然后将融合细胞与Me-lan-A特异性T细胞共同培养,用细胞内细胞素染色法检测其诱导CTL的活性,流式细胞术分析T细胞的活化率。结果：从异体外周血分离的单核细胞在GM-CSF及IL-4条件下培养6d后,未成熟的DC能表达一定的CD80,CD83,CD86,HLA-DR和HLA-ABC等共刺激分子,而经TNF-浕,PGE-2及CD40L诱导成熟的DC,则这些分子的表达进一步上调。融合细胞体外活化Melan-A特异性T细胞的效率为16.72%&#177;4.26%,阴性对照为0.21%&#177;1.84%,阳性对照为28.60%&#177;5.67%。融合细胞活化的CTL能有效地溶解HLA-A2的黑色素瘤细胞。结论：HLA-A2-的黑色素瘤细胞与HLA-A2＋阳性的DC融合肿瘤疫苗,能在体外有效地交叉递呈MHC-I限制性肿瘤抗原,并诱导Melan-A特异性的CTL和有效地杀伤黑色素肿瘤细胞。     

血小板和T细胞活化抗原配体的初步鉴定

198 5年Ｂｕｒｎｓ等[1] 通过Ｌｅｏ Ａ1ｍＡｂ发现了一种人Ｔ细胞活化抗原ＴＬｉＳＡ1(Ｔｌｉｎｅａｇｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ 1,ＴＬｉＳＡ1)。由于该分子也高表达于血小板膜表面 ,遂于 1989年更名为血小板和Ｔ细胞活化抗原 1(ｐｌａｔｅｌｅｔａｎｄＴｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ 1,ＰＴＡ1) [2 ] ,1997年获得基因克隆[3 ] 。但到目前为止 ,ＰＴＡ1配体尚未被基因克隆 ,亦未见有关ＰＴＡ1配体的研究报道。作者拟通过ＰＴＡ1/Ｉｇ融合蛋白对ＰＴＡ1配体进行了初步的鉴定。一、材料和方法1 …     

树突状细胞的研究进展

树突状细胞参与机体的许多生理、病理过程,在免疫防御、免疫监视、免疫自稳等多方面发挥重要作用。因其具有独特的生物学性质,在肿瘤的形成和发展、感染的控制与播散、移植的排斥与耐受以及自身免疫性疾病发病等方面的作用日益受到重视,成为近年来研究的热点。现就其生物学特性及其在肿瘤、感染、移植及自身免疫病等方面的作用予以综述。     

乙型肝炎病毒核心抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞作用的靶细胞的建立

目的 建立HBcAg特异性CTL作用的靶细胞系统，为进一步研究HBV基因变异对CTL细胞毒效应的影响奠定基础。方法 采用两种质粒pXT1和EBO-plpp构建HBVC基因真核细胞表达载体并转染永生化B细胞，DNA分析和流式细胞仪检测HBVC基因在宿主细胞中的复制、表达。结果 在转染重组质粒pXT1-HBVc和EBO-plpp0-HBVc的B细胞中，均能检测到目的基因；分别有89.81%和88.51%的宿主细胞能检测到HBcAg；连续培养3周后，分别有88.30%和72.19%的宿主细胞表达HBcAg。结论 重组逆转录病毒表达载体pXT1-HBVc和EB病毒表达载体EBO-plpp-HBVc转染的永生化人外周血B细胞能有效地表达靶抗原（HBcAg),可作为较为理想的HBV特异性CTL作用的靶细胞。     

抗原特异性细胞毒性T细胞在病毒感染性疾病中的作用

抗原特异性细胞毒性T细胞（Cytotoxic T lymphocyte，CTL）是特异性细胞免疫应答的主要效应细胞，在机体控制病毒感染及清除病毒过程中起主导作用，其水平和功能与病毒的转归及抗病毒疗效密切相关。近年来抗原特异性CTL在病毒感染性疾病中的作用已成为研究的热点。     

HSP65-MUC1／HSP65抗体免疫复合物对人树突状细胞的活化作用

目的：探讨免疫复合物能否诱导树突状细胞的活化与成熟。 方法：用免疫复合物刺激来自人外周血经细胞因子IL-4和GM-CSF诱导的未成熟的树突状细胞, 观察免疫复合物对未成熟树突状细胞的活化与成熟的影响。 结果：HSP65-MUC1/HSP65免疫复合物与HSP65-MUC1抗原或HSP65抗体相比较,能够显著地活化树突状细胞,使其表面的协同刺激分子CD86的表达显著上调,为激活细胞毒性T淋巴细胞提供第二信号,这一结果说明免疫复合物具有交叉递呈的作用;同时,加入免疫复合物的树突状细胞培养上清中IL-6和TNFα分泌量明显增加。结论： 免疫复合物能够诱导树突状细胞的活化与成熟,免疫复合物具有交叉递呈的作用。     

CD28抗体协同表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞刺激自身T细胞增殖和活化

目的 探讨表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的甲状腺细胞如何发挥抗原递呈功能.方法 分离表达MHCⅡ类分子的转基因鼠和对照小鼠的甲状腺细胞,免疫磁珠方法分离其自身T细胞,在体外共同培养,并加入抗CD28抗体.免疫荧光染色,流式细胞分析检测T细胞的增殖和活化.ELISA方法检测培养上清的细胞因子浓度.结果 单纯表达MHC Ⅱ类分子的转基因小鼠甲状腺细胞不能刺激自身T细胞的增殖和活化,然而当加入抗CD28抗体后,表达MHC Ⅱ类分子的甲状腺细胞能刺激自身T细胞的增殖、活化及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)的分泌,而T细胞对野生型小鼠的甲状腺细胞无反应.结论 加入协同刺激信号后,表达MHCⅡ类分子的甲状腺细胞也可刺激T细胞增殖活化及分泌细胞因子,具有递呈抗原的能力.     

树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应

目的 :研究树突状细胞 (dendriticcell,DC)激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的特异性杀伤效应。方法 :从人外周血中分离出外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcell,PBMC) ,在GM -CSF和IL - 4的作用下培养 7天诱导出DC ,然后PBMC或DC为刺激细胞在体外诱导出HBsAg特异性CTL ;在调节好一定浓度靶细胞 (人肝癌细胞系HepG2及人肺腺癌细胞系A5 4 9)中加入效应细胞 (DC或PBMC) ,4 8h后瑞氏染色计数残存细胞数 ,计算杀伤率。结果 :DC激活的CTL对HepG2 杀伤率为 71.6 % ,而PBMC(APC ,非T细胞 )激活的CTL杀伤率为 4 3.8% ,两者有显著性差异 ,P <0 .0 1。此外 ,DC诱导的肝癌细胞抗原特异性CTL对肺癌细胞的杀伤率仅为 2 3%。结论 :DC诱导的CTL比PBMC高效 ,而且具有较高的特异性。     

长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 nef特异性CD8+ T细胞应答的初步研究

目的　探讨我国HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的特点及其免疫保护作用。方法以长期不进展组 (LTNP) 7例和艾滋病组 9例为研究对象 ,以覆盖HIV 1nef全长的 2 6个重叠肽段组成的 3个肽段库作为刺激原 ,用IFN ELISPOT方法检测LTNP组与艾滋病组患者HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答 ,并测定其CD4 T细胞、CD8 T细胞和病毒载量 ,观察两组间HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的差异及其与CD4 T细胞和病毒载量的相关性。结果　LTNP组和艾滋病组HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度分别为 4 0 4± 334和 5 9± 12 1SFC/ 10 6外周血单个核细胞 (PBMC) ,LTNP组显著高于艾滋病组 ;HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度与CD4 T细胞计数呈正相关 ,但与病毒载量没有显著的相关性。结论　HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答在艾滋病发病中具有一定的保护作用 ,欧美流行株与我国流行株之间具有免疫交叉反应性     

CTL的免疫识别

免疫识别是机体免疫系统产生特异性免疫的基础 ,通过对抗原的特异性识别 ,激发机体产生免疫应答 ,最终由效应细胞和 /或效应分子 (Ａｂ)清除病原体或“异己”物质。对特异性抗原的大量研究 ,并由此研制的疫苗在预防、控制多种传染性疾病方面起到重要作用。近年来 ,细胞毒性Ｔ细胞 (ＣＴＬ)引起人们的重视 ,发现人类面临的多种难以攻克的疾病 ,如肿瘤、ＡＩＤｓ、乙型肝炎等 ,ＣＴＬ扮演着关键角色。现就ＣＴＬ免疫识别方面的问题作一综述。1　ＣＴＬ免疫识别的结构基础　　ＣＴＬ仅能识别表达于抗原提呈细胞 (ＡＰＣｓ)表面并与ＭＨＣⅠ类分…     

肾母细胞瘤免疫治疗中的细胞毒T淋巴细胞效应

目的 用肾母细胞瘤WT1基因一段序列(WT1y)构建于真核表达质粒pCDNA3.1(+),通过小鼠和体外细胞模型初步研究所激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应.方法 WT1基因一段序列,含HLA-A~*2402锚定残基的9个氨基酸.构建重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/WT1y.免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测体液免疫反应;分离脾淋巴细胞,FCM检测脾淋巴细胞中CD4/CD8.结果 重组质粒测序鉴定,与GenBank中登录的序列完全一致;免疫组小鼠T淋巴细胞增殖及CTL活性均明显优于对照组(p0.01);体外具有较强溶解靶细胞的功能.结论 WT1基因的DNA疫苗具有很强的CTL效应,为小儿肾母细胞瘤的治疗提供了新的思路.

Abstract：

Objective To construct the eukaryotic expression vector harboring Wilms'tumor gene(WT1y)and assess the cytotoxic T lymphocyte (CTL)response specific to the DNA vaccine of WT1y product in Balb/c mice and in vitro cultured cells.Methods Synthesized WT1y gene (321 bp including HLA-A*2402 anchoring residue)was cloned into the eukaryotic vector to construct the plasmid pCDNA3.1(+)/WT1y.WT1-specific antibody was detected in mouse serun'l by ELISA,and T lymphocyte proliferation was detected by flow cytometry.The CTL response was detected by co-culture of the murine spleen cells with the tumor cells.Results The recombinant ptasmid was confirmed using DNA sequencing.WT1-specific antibodies were detected in the seruml of immunized mice,which showed significantly greater T lymphocyte proliferation than the control group (P<0.01).The CTLs resulted in specific lysis of WT1-expressing murine tumor cells.Conclusion Using HBVC as the vector for WT1y gene,wenave obtained the virus-like particles that induce high cellular immune response,which shed light on a new approach for treatment of Wilms'tumor.     

妊娠期特异性beta1糖蛋白9HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定

目的:鉴定来自食管癌细胞中特异性高表达的妊娠期特异性betal糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位.方法:首先运用RT-PCR方法检测PSG9 mRNA在食管癌细胞EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况.然后通过Bimas和syfpeithi预测,再结合NetCTL 1.2...     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

CTL活性检测与监测

在肿瘤及病毒性疾病的研究、治疗中 ,体液免疫并不能彻底消除肿瘤细胞及细胞内感染病毒 ,只有细胞介导的免疫反应 ,特别是细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ＣｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ,ＣＴＬ)介导的细胞免疫反应才能发挥最根本的作用。发展上述疾病的特异性疗法和诱发针对病毒感染细胞与肿瘤细胞表面特异性抗原的细胞免疫应答 ,特别是ＣＴＬ介导的细胞毒作用 ,是克服目前病毒性疾病的常规治疗方法不能消除宿主细胞内病毒感染 ,以至使感染迁延、慢性化甚至向肿瘤恶性分化发展 ,以及肿瘤治疗缺乏特异性、损伤大、毒副作用大、疗效不够满…     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞（PBMC）诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10：1及20：1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55．9％土22．0％、90．2％＋24．8％,均高于其他3组（p,0．05）。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。     

蛋白糖基化与细胞毒性T淋巴细胞应答

糖基化是已知的蛋白最重要的翻译后修饰。已知的蛋白糖基化有多种类型 ,其中最常见的是发生在天冬酰胺 (Ａｓ ｐａｒａｇｉｎｅ ,Ａｓｎ)的Ｎ 糖基化 (Ｎ ｌｉｎｋｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ)和发生在丝氨酸 (Ｓｅｒｉｎｅ ,Ｓｅｒ)和苏氨酸 (Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ,Ｔｈｒ)的Ｏ 糖基化 (Ｏ ｌｉｎｋｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ)。糖蛋白中糖基的结构大小不一 ,少者仅一个单糖 ,稍复杂的寡糖链可由 12～ 15个单糖残基衍生物组成 ,甚至可多达 2 0～ 30个单糖残基。糖链的结构类型与其在肽链上共价连接的氨基酸种类有关。蛋白 (肽 )糖…