超氧化物歧化酶的分离与鉴定

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)已成为研究超氧阴离子自由基的重要工具。因此,本文介绍高纯度Cu,Zn-SOD的制备方法,同时也介绍锰(Mn)和铁(Fe)SOD的纯化,它们象Cu,Zn-SOD一样,作为金属酶类消除氧的毒性具有重要意义。Cu,Zn-SOD的分离可采用从有机溶剂开始的经典法或不用有机溶剂。有机溶剂不影响Cu,Zn-SOD的性质但可除去血红蛋白,是从红细胞中分离SOD的理想方法。本文介绍有机溶剂法分离红细胞SOD。对固体组织采用分机溶剂法,可同时获得Cu,Zn-SOD和Mn-SOD后者与Fe-SOD一样对有机溶剂敏感。     

动物肝脏中超氧化物歧化酶分离纯化方法

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内一类通过清除O_2,保护机体免受活性氧损害的酶类。不同动物,其SOD的含量不同,即使同一种动物,凡不同组织的SOD含量也各不相同。通常,以肝脏中SOD的含量最为丰富。所以,动物的肝脏很适于作为分离纯化SOD的原材料。早在1973年,Weisiger等就发现鸡肝中含有二种SOD。一种存在于细胞质中,为Cu,Zn-SOD,另一种存在于线粒体基质中,为Mn-SOD。同年,Marklund在牛肝中也同样发现这二种SOD的存在。从那以后,人们已经采用     

籽草SOD的分离纯化

从籽草中分离纯化的SOD比活为1855U／mg，纯化倍数约为100倍，总活力回收率22．6％，经SDS-PAGE测定，纯化的SOD纯度达电泳纯，该酶对氰化物和过氧化氢敏感，可证明其为Cu／Zn-SOD。     

转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻抗氧化作用的研究

目的研究转人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)突变基因聚球藻口服后的生物活性。方法给小鼠灌服转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻20d,然后测定小鼠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量。结果转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻可明显提高小鼠血清GSH-Px活力和全血血红蛋白CAT活性,显著提高小鼠血清和肝脏中Cu,Zn-SOD和总SOD(T-SOD)的活力,显著降低小鼠血清和肝脏的MDA含量。结论转hCu,Zn-SOD突变基因聚球藻有较强的抗氧化作用。     

影响铜锌超氧化物歧化酶活性的几个因素

影响铜锌超氧化物歧化酶(简称Cu·Zn-SOD)活性的因素很多。溶液介电常数的增加减弱了酶分子活性中心附近ε-NH3_ 对O_2_-的静电吸引力,从而导致酶活的降低。CI_-浓度对Cu·Zn-SOD有明显的抑制作用是由于CI_-引起活性部位构象的变化。H_2o_2作用于Cu·Zn-SOD造成铜锌的脱落,从而影响酶结构的稳定性,造成酶结构损伤。H_2O_2是活性氧的一种,它的存在会引起酶二级结构的改变和导致SOD肽链的“随机”断裂,继而影响SOD的活性。     

固定化金属亲和层析胶与亲和层析膜纯化rhMn-SOD和rhCu,Zn-SOD的比较研究

为比较固定化金属亲和层析膜与亲和层析胶的纯化效果,分别用固定化金属亲和层析胶Cu2 柱、Ni2 柱、固定化金属亲和层析膜Cu2 柱、Ni2 柱分离纯化rhCu,Zn-SOD、rhMn-SOD/24a、rhMn-SOD/28.结果表明,亲和胶与亲和膜分离SOD获得相似的纯化效果,纯化倍数均在3到5之间,亲和膜分离所得SOD比活略高于亲和胶,rhCu,Zn-SOD与Cu2 的亲和能力高于rhMn-SOD.固定化金属亲和层析膜色谱为基因工程产物的快速分离鉴定提供了一个简便的方法.     

物理法分离提取Cu,Zn-SOD新工艺技术的研究

研究了一种用物理法从牛血凝血块中提取Cu,Zn-SOD新工艺技术,克服了传统工艺需加抗凝剂的缺陷,运用了超滤、冻干等一些新技术,提高了成品质量;对其进行活力测定,可达5000u／mg以上,进行了稳定性分析,测定了超滤效果,并且完善了工艺路线。     

狗肝铜锌超氧化物歧化酶的纯化及理化性质鉴定

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物界的金属酶类,它催化超氧化物自由基O_2~r转变为O_2H_2O_2的歧化反应,是生物体抗氧化损伤的重要保护酶。按所含金属的不同,SOD分为,Cu,Zn-SOD,Mn-SOD,和Fe-SOD。Cu,Zn-SOD存在于需氧生物的细胞浆中,     

Cu、Zn—SOD的分子绘图、分子表面可及性及分子表面静电势的研究

<正> 超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,简称SOD)是一种重要的氧自由基清除剂。广泛存在于动物、植物和微生物中。它能催化超氧阴离子■歧化反应生成■近年来,国内外对它的理化性质、分子结构和生物学功能进行了广泛的研究,本文通过计算机研究了牛Cu,Zn-SOD分子绘图、分子表面可及性、分子表面静电势的一些性质。从而得到了一些有关酶结构与功能关系、催化反应机理,以及二聚体相互作用等有意义的结论。     

甘糖酯抗氧化作用的分子机制

目的探讨甘糖酯(PGMS)清除自由基抗氧化作用的分子机制。方法给大鼠ig高脂乳剂建立高脂血症模型,分成对照组、甘糖酯治疗组、甘糖酯+DDC组,治疗3周。检测血清、肝脏、脾脏和主动脉中丙二醛(MDA)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性,以及Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平。结果甘糖酯治疗组大鼠,丙二醛(MDA)含量降低,SOD,GSH-Px和CAT的活性显著升高,Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平增加;而甘糖酯和DDC联合用药治疗组,DDC抑制了甘糖酯诱导的Cu,Zn-SOD mRNA表达水平和SOD活性的升高,造成MDA含量的相应升高。结论甘糖酯通过诱导抗氧化酶SOD,GSH-Px和CAT的活性,增加Cu,Zn-SOD mRNA的表达水平,清除体内过多的氧自由基,达到抗氧化的目的。     

超氧化物歧化酶的催化作用机理

<正> 在数以千种酶中仅超氧化物歧化酶(SOD)作用的底物为自由基,即超氧化物自由基(O_2~·)或其质子化产物HO_2~·(H~++O_2HO_2·)SOD属金属酶类,有Cu,Zn-SOD,Mn-S~(oD)和Fe-SOD三种。它们都能催化O_2~·歧化为H_2O_2与O_2。SOD催化作用机理涉及到底物,酶的结构与活性部位以及酶的催化反应。现简述这三方面的研究概况与展望。一、底物在非酶反应中0_2~·或HO_2可自动歧化为H_2O_2与O_2,但其反应速率(K)随反应物为     

以硅胶和Agarose 6B为载体金属螯合亲和层析分离纯化重组人Cu,Zn—SOD

以层析硅胶Agarose 6B,制备了Cu2+螯合亲和载体,利用合成的Cu2+-IDA-硅胶亲和柱和Cu2+-IDAAgarose 6B亲和柱分离纯化了重组人Cu,Zn-SOD,并比较了这两2亲和载体的纯化效果和性能.硅胶纯化SOD的比活、纯化倍数和回收率分别为7586U/mg@protein、6.5倍和86.7%;而Agarose 6B纯化SOD的比活、纯化倍数和回收率则分别为6223/mg@protein、5.8倍和93.0%.2种亲和载体5次使用后,对SOD的纯化效果不变.     

超氧化物歧化酶及其与癌症的关系

<正> 一、概述有氧代谢的细胞中都有超氧化物歧化酶(SOD),而大多数的厌氧菌则缺乏此酶,SOD的功能是保护细胞免遭有氧代谢反应中产生的超氧自由基(?)的损伤,能催化下列反应:(?)+(?)+2H~+SOD=H_2O_2+O_2Fridovich已证实凡有氧代谢细胞均需要这种酶,到目前为止,人们已经从细菌、原生动物、藻类、霉菌、高等植物、昆虫、鱼、鸟和哺乳动物等各种生物体内分离出SOD,这些SOD至少可以分为三种类型:1.Cu、Zn-SOD,由二个分子量相同的亚基组成,结构中含有Cu和原子Zn原子,呈蓝绿色,     

SOD基因的组织结构、表达与分子克隆

超氧化物歧化酶（SOD）是一种天然的含金属抗氧化酶，它具有抗衰老、抗辐射和消炎等多种疗效。SOD包括Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD三类，其中以Cu/Zn-SOD为最重要。SOD均由核内染色体上的基因编码，这类基因既有单拷贝序列，也有多基因家庭。线粒体和叶绿体内的SOD在核内合成后，再分泌到细胞器中。多数SOD基因的表达都具有组织特异性，并受许多环境因素的诱导，有关的分子机理正在研究中，并且正在尝试SOD基因的分子克隆以及重组SOD基因在培养细胞和转基因植物中的表达。     

重组人Cu·Zn-SOD工程菌发酵工艺的研究

人Cu.Zn-SOD是一种重要的氧自由基清除剂,传统工艺是从动物血中提取得到,受原料来源的限制.从人胎肝中提取了hCu.Zn-SODcDNA构建了基因工程菌,同时对其表达产物的条件进行研究,着重探索了接种量、接种时机、pH、溶氧等因素,并优化了发酵条件.通过在5L全自动发酵罐上研究重组菌BL21的培养条件,确定了最适条件为:接种量2%,溶氧水平≥40%,初始pH6.5,培养过程中用3mol/LHCl调节pH在7.5.在此条件下,发酵最高水平达到酶活950U/ml,比活1400U/mg.     

牛血Cu,Zn-SOD提取中除血红蛋白不同方法的比较研究

对牛血Cu,Zn-SOD提取中除血红蛋白的3种不同方法进行了比较研究,其中铜盐沉淀加热变性法处理效果较为理想。     

玉米SOD的分离纯化与部分性质研究

目的建立1种高效而简单的玉米SOD分离纯化方法。方法采用初步提取、40%~80%硫酸铵分级沉淀、Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱处理的方法从玉米中提取SOD。结果获得了比活为1.18×104U/mg的SOD-A组分,活力回收率为11.7%;纯化后的SOD-A组分经PAGE和SDS-PAGE均为一条带;等电聚焦结果表明该组分的等电点为7.2;经鉴定,该组分属于Cu/Zn-SOD。稳定性研究表明,该组分对热、酸碱及常见变性剂(如尿素)的稳定性较好。结论利用Cu2+螯合亲和色谱和DEAE-纤维素离子交换色谱相结合的方法可以纯化得到高比活、稳定性好的玉米SOD-A组分。     

应用TL PAG—IEF方法测定人红细胞超氧化物歧化酶（SOD）同工酶

本文应用T%=7% C%=3.7%簿层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（Thin-Layer polyacrylamide Gel-Isoelectric Focusing,TL PAG-IEF)技术电泳分离人红细胞溶血液和/或人红细胞SOD抽提液，使用了一种自行设计的SOD同工酶染色装置行特异性的SOD同工酶染色。可将人红细胞SOD分为11条同工酶带。又根据酶带的pI、酶带理化性质、酶带特征和失活情况，分为三组同工酶。其中A组SOD同工酶为Cu、Zn-SOD,有三条（pI为4.50、4.65、4.77)，B组SOD同工酶有三条（pI为4.87、4.95、5.10），C组SOD同工酶有五条（pI为5.48、5.75、5.83、6.52、8.45)，B、C两组SOD同工酶既非Cu、Zn-SOD，又非Mn-SOD。其中C组SOD同工酶特别容易失活。B、C两组SOD同工酶的生理功用及临床意义尚不清楚。     

酵母SOD分离纯化及其酶学性质的研究

目的发酵培养Y12 酵母菌分离制备酵母SOD并研究其部分酶学性质。方法用已筛选出的一株Y12 酵母菌对其在优化培养条件下发酵培养得到湿菌体 ,破壁抽提得SOD粗酶液 ,采用硫铵盐析、丙酮沉淀、SephadexG 10 0凝胶过滤和QAE SephadexA 5 0离子交换柱层析 ,分离得到酵母SOD并测定其部分酶学性质。结果Y12 酵母菌SOD产量达 12 6 3u·g-1湿菌体 ,分离得到酵母SOD ,该酶属Cu、Zn SOD ,比活力为 10 73 5u·mg-1,活力回收率为 5 4 1% ,紫外吸收峰在2 5 7 2nm ,分子质量为 32 4 5 6u ,亚基分子质量为 16 2 2 7u。结论此酵母SOD与文献中报道的动物血红细胞Cu、Zn SOD基本相近。     

重组人铜锌SOD的部分理化性质研究

对rhCu，Zn-SOD进行SDS-PAGE测定该SOD的亚基分子质量为19ku，该酶对热稳定，在pH5左右的活力最高，对乙腈、EDTA等抑制剂敏感，但是对SDS、尿素等变性剂表现出很好的稳定性。对该酶进行光谱分析表明，在265nm和673nm具有吸收峰，原子吸收光谱分析表明每分子SOD含有2个铜原子和2个锌原子，ESR表明铜原子价态为2价。可认为该重组酶与天然Cu，Zn-SOD在理化性质和结构上基本相同。