六味地黄汤对5/6肾切除大鼠肾组织中细胞外基质的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰大鼠肾组织细胞外基质的影响,探讨其防治肾间质纤维化的可能机制。方法用5/6肾切除大鼠复制慢性肾衰模型,分空白对照组、假手术组、模型组和六味地黄汤组。术后8周,检测各组肾功能指标;HE染色观察肾脏组织病理变化,Masson染色检测肾脏中胶原纤维沉积;免疫组化法检测ColⅠ、ColⅢ、FN在肾组织中的表达;Western blot法检测PDGF-A、PDGF-B在肾组织中的蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组24 h尿蛋白(P<0.01)、血尿素氮(P<0.01)和血肌酐(P<0.05)均明显降低。模型组HE和Masson染色显示大鼠肾间质纤维化明显,大量胶原纤维沉积,六味地黄汤组肾间质纤维化程度明显减轻,少量胶原纤维沉积。免疫组化法显示,与假手术组比较,模型组肾组织中ColⅠ、ColⅢ、FN蛋白水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中ColⅠ、ColⅢ、FN蛋白水平均明显降低(P<0.05)。Western blot法显示,与假手术组比较,模型组肾组织中PDGF-A、PDGF-B蛋白水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中PDGF-A、PDGF-B蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论六味地黄汤可能通过下调PDGF-A、PDGF-B表达,从而减少肾组织中细胞外基质的积聚而抑制肾间质纤维化。     

5/6肾切除大鼠残肾细胞凋亡的信号途径研究

目的 研究细胞凋亡及凋亡信号途径在5／6肾切除（SNx）中的作用及机制。方法 复制5／6肾切除大鼠模型．在1、2、4、8、12、16、26和40周，用原位末端标记法、免疫组化、RT-PCR、Western—blot分别检测细胞凋亡、caspase-3,-8,-9的mRNA和蛋白质的水平。结果 模型熏盛幽现肾小球硬化和肾间质纤维化，肾小球、肾小管和肾间质的细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0.05，P〈0．01）；caspase-3，-8，-9的mRNA和蛋白质的变化趋势一致，与对照组比较病变过程中呈波浪式上调，高峰分别在4周和40周（P〈0.05），caspase-9的增长幅度明显高于caspase-8。结论 5／6肾切除大鼠的疾病进展与肾小球、肾小管和肾间质的细胞凋亡有关，死亡量体和线粒体信号途径均参与其中．线粒体信号途径起主要作用。     

复方黄甘延缓5/6肾切除大鼠慢性肾功能衰竭

目的观察复方黄甘对5/6肾切除慢性肾衰模型大鼠的疗效,并探讨其可能的作用机制。方法用HPLC检测复方黄甘提
取物组分并定量;构建5/6肾切除大鼠慢性肾衰模型,将模型大鼠随机分为尿毒清组、科素亚组、复方黄甘低、中、高剂量组和模
型组,另加假手术组共7组,每组10只大鼠,经灌胃给药12周后用全自动生化分析仪检测Scr、BUN、Ucr及24 h UPr;对残余肾
组织进行HE和Masson染色观察病理变化;用RT-PCR和免疫组化检测肾组织FN、MCP-1、ICAM-1的表达。结果复方黄甘提
取物中主要成分及其含量为：甘草苷（0.06%）、丹皮酚（1.06%）、芦荟大黄素（0.1%）、大黄酸（0.47%）、大黄素（0.19%）、大黄酚
（0.41%）和大黄素甲醚（0.13%）;复方黄甘低、中、高剂量组Scr、BUN、Ucr、Ccr及24h UPr都显著低于模型组（P<0.05）;复方黄甘
给药组肾小球硬化和肾间质纤维化改善较为明显,且肾组织中FN、ICAM-1 mRNA表达和蛋白表达均显著低于模型组（P<
0.05）。结论复方黄甘可改善慢性肾衰模型大鼠肾功能,减轻肾小球硬化和肾间质纤维化,在一定程度上延缓慢性肾功能衰竭
的进展。
     

5/6肾切除大鼠肾组织时钟基因的表达

目的 研究5/6肾切除大鼠肾时钟基因per2、bmal1及时钟输出基因dbp 的表达节律.方法 SPF级雄性Wistar大鼠,随机分为模型组和假手术组.造模次日置于12 h∶12 h明暗交替的环境饲养.第12周分别在7AM(ZT0),11AM(ZT4),3PM(ZT8),7PM(ZT12),11PM(ZT16),3AM(ZT20)各时间点两组各处死5只大鼠.Real-time PCR法检测肾bmal1、per2、dbp mRNA表达.结果 假手术对照组与模型组per2在ZT8时为谷值点(T),在ZT16~ZT20达到峰值(P),模型组per2的峰值提前4 h,两组P/T分别为2.49、2.47;模型组与假手术组肾bmal1 mRNA 表达的近日节律相似:于ZT4时为峰值点、ZT20为谷值点,但假手术组则自峰值点迅速下降,于ZT12~ZT20在谷值波动.模型组与假手术组dbp mRNA表达趋势相反:假手术组在ZT4及ZT20为谷值点,其余各时间点表达水平均较高,模型组dbp mRNA表达峰值点在ZT16,其余各时间点均在较低水平波动.结论肾组织中时钟基因per2、bmal1及时钟输出基因dbp mRNA的表达呈近日节律,慢性肾衰时该节律发生变化.     

复方鳖甲软肝片对5/6肾切除大鼠肾组织FN表达的影响

目的:探讨复方鳖甲软肝片对5 / 6肾切除(5 / 6nephrectomize,5 / 6NT)大鼠肾组织纤维粘连蛋白(fi bronectin ,FN)表达的影响。方法:选用SD雄性大鼠,建立5 / 6NT大鼠肾纤维化模型。随机分为8组,正常组、假手术组、模型组、苯那普利组、尿毒清组和复方鳖甲软肝片低、中、高剂量组。采用免疫组织化学方法,以苯那普利、尿毒清为实验对照,检测复方鳖甲软肝片对肾组织FN表达的影响。结果:模型组肾组织FN强阳性表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现大量棕黄色颗粒;苯那普利组、尿毒清组FN中等量表达,在系膜基质和肾小管基底膜出现中等量棕黄色颗粒;复方鳖甲软肝片低、中、高剂量组肾组织FN轻度表达明显少于模型组,在系膜基质和肾小管基底膜出现少量棕黄色颗粒,并呈剂量依赖关系。结论:复方鳖甲软肝片抑制5 / 6NT大鼠肾组织FN的表达,可能是该方减缓肾小球硬化和肾纤维化发展的作用机制之一。     

5/6肾切除大鼠肾脏病理学动态变化

目的探讨5／6肾切除(5／6NT)大鼠肾脏病理形态学动态变化。方法通过5／6NT大鼠在不同的时间段对肾组织标本进行光镜及电镜检查，观察肾脏病理动态变化情况。结果5／6NT大鼠肾脏病理变化为：第2周，肾小球增大，系膜细胞轻度增生，肾小管扩张；第8周，系膜重度增生，肾间质炎细胞浸润和增宽；第12周出现局灶节段性硬化的肾小球，肾问质轻度纤维化；第40周时，大部分肾小球纤维化、硬化，肾间质重度纤维化。结论5／6肾切除模型符合人类肾纤维化的病理改变，是研究慢性肾衰竭、肾纤维化的理想动物模型。     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察六味地黄汤对5/6肾切除大鼠残肾基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织型抑制物基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响,探讨六味地黄汤保护肾功能,延缓肾损害的作用机制。方法按照随机数字表法将72只SD雄性大鼠分为5组:正常组、假手术组、模型组、依那普利组、六味地黄汤组。模型组、依那普利组、六味地黄汤组采用5/6肾切除术诱导大鼠肾衰模型,假手术组同期手术,但不损伤肾脏。造模术后3 d,对大鼠进行灌胃干预,灌胃第8周后处死大鼠,观察残肾组织形态学变化并用免疫组织化学分析法检测大鼠肾脏MMP-2,TIMP-2的表达情况。结果 (1)通过大鼠生物形态学观察、5/6肾切除大鼠残肾组织细胞形态学的改变,与模型组相比,使用六味地黄汤、依那普利灌胃可减轻大鼠肾间质损害及纤维化程度;(2)免疫组化半定量分析显示六味地黄汤组肾皮质的MMP-2表达高于模型组(P<0.05),TIMP-2表达弱于模型组(P<0.05)。结论六味地黄汤可能通过上调MMP-2的表达、下调TIMP-2的表达,促进细胞外基质成分降解,从而减少细胞外基质的积聚,减轻炎症反应和纤维化程度,达到防止肾间质纤维化、保护肾脏的作用。     

nNOS/NO对5/6肾切除大鼠肾小球硬化的影响

目的:本研究观察5/6肾切除大鼠肾组织nNOS、NO表达的变化,探讨nNOS、NO对肾小球硬化的影响。方法:48只健康雄性SD大鼠随机分为2组,模型组(M组,n=24):行5/6肾切除术;假手术组(S组,n=24):手术方式同模型组,仅行麻醉暴露双肾,剥除肾包膜,不做手术切除。分别于实验第4、8、12周每组各随机抽取4只大鼠处死,观察不同时间点以下指标:(1)血清尿素氮、肌酐和24h尿蛋白定量;(2)HE、Masson染色光镜下观察肾脏组织形态改变,并进行肾小球硬化半定量分析;(3)免疫组化方法检测肾组织神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达;(4)比色法检测血清NO的浓度。结果:(1)与同期假手术组相比,模型组大鼠血清尿素氮、肌酐及24h尿蛋白均显著升高(P<0.01),提示手术成功;(2)与同期假手术组相比,模型组大鼠肾小球硬化指数均升高(P<0.05);(3)免疫组化提示nNOS主要定位在肾皮质的致密斑,5/6肾切除组大鼠nNOS水平呈持续性下降,手术后4周起模型组nNOS表达与假手术组的差异有统计学意义,模型组nNOS水平与肾小球硬化提示存在直线负相关(P<0.05);(4)5/6肾切除后NO水平呈持续下降趋势,与假手术组的差异有统计学意义,模型组血清NO水平与肾小球硬化提示存在直线负相关(P<0.05)。结论:5/6肾切除后伴随肾小球硬化的进展存在nNOS、NO表达的减少,提示nNOS/NO途径参与了肾小球硬化病变的过程。     

温阳活血方延缓5/6肾切除大鼠肾功能衰竭的实验研究

目的:探讨温阳活血方对5/6肾切除大鼠肾功能衰竭的干预作用。方法:选用120只SD雄性大鼠,建立5/6肾切除大鼠模型。随机分为5组:假手术组、模型组、温阳活血方组、科素亚组、温阳活血方+科素亚组。分别在给药后4、8、12周,每组随机选取8只大鼠处死,观察肾组织病理变化,检测肾功能指标。结果:肾脏病理显示,模型组肾小球硬化,肾小管萎缩或消失,肾间质伴有一定程度的纤维化。3个治疗组病理改变有不同程度的好转,温阳活血方组和温阳活血方+科素亚组肾小球硬化程度轻于科素亚组。与假手术组比较,模型组尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血清胱抑素C(Cys-C)和24h尿蛋白、尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(尿NAG)明显均明显升高(P<0.01,P<0.05);3个治疗组BUN、Scr、Cys-C和24h尿蛋白、尿NAG明显低于模型组(P<0.01)。结论:温阳活血方对慢性肾衰竭大鼠肾功能有一定的保护作用,能降低慢性肾功能衰竭大鼠的Scr、BUN、Cys-C和24h尿蛋白、尿NAG水平。     

用改良的5/6肾切除法制作的大鼠慢性肾衰竭模型

目的:改进5/6肾切除大鼠慢性肾衰竭动物模型的手术方法。方法:游离肾动脉夹闭其中1～2个分支30秒,解除夹闭,根据缺血范围选择性切除左肾上、下极及左肾外侧缘约2/3肾组织。1周后切除右肾。结果:5/6肾切除后的大鼠出现尿蛋白增多、血清肌酐、尿素氮升高、内生肌酐清除率下降;肾脏病理检查出现肾小球硬化、肾小管萎缩、间质纤维化。结论:用改良的5/6肾切除法成功制作了大鼠慢性肾衰竭动物模型。     

大鼠5／6肾切除慢性肾衰竭模型的制作

目的：制作大鼠5／6肾切除建立慢性肾衰竭模型。方法：大鼠5／6大部分肾切除诱发慢性肾衰竭,测定血清中肌酐、尿素氮的含量,取肾组织进行Masson染色,评价模型的制作效果。结果：5／6肾切除后大鼠血清中尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、血肌酐（se-rum creatinine,SCR）的含量明显增高,肾脏病理 Masson 染色组织学检查发现肾小球节段性硬化、肾小管萎缩、肾间质节段性纤维化。结论：成功建立大鼠5／6肾切除慢性肾衰竭模型,血液生化指标及形态学符合肾衰竭病理生理特点。     

温脾汤对5/6肾切除大鼠残余肾脏影响的实验研究

目的　观察温脾汤对大鼠血清肌酐、尿素氮及 2 4h尿蛋白的影响。方法　采用 5 / 6肾切除方法制作大鼠肾纤维化模型 ,以PASM染色方法观察大鼠组织形态学变化 ,并应用图像分析技术对病理染色结果进行分析。结果　温脾汤能够显著降低 5 / 6肾切除大鼠的血清肌酐 (P <0 0 5 )、尿素氮 (P <0 0 1)水平及 2 4h尿蛋白 (P <0 0 1) ,降低肾重体重比 ,抑制残余肾脏的代偿性肥大 ,减轻肾小球硬化及肾间质纤维化程度。结论　温脾汤可降低肾重体重比 ,抑制残余肾脏的代偿性肥大 ,减轻肾小球硬化及肾间质纤维化程度 ,具有保护肾脏的功能     

3/4肾切除并异丙肾皮下注射致慢性心衰合并肾衰模型的制备

目的:研究大鼠3/4肾切除并异丙肾上腺素(ISO)皮下注射致慢性心衰合并肾衰模型的制备.方法:雄性SD大鼠经“两次手术切除法”行3/4肾切除,1周后分成2组,分别皮下注射ISO(70 mg/kg或100 mg/kg,分2次,间隔24 h),对照组给予假手术并注射生理盐水,4周后比较各组大鼠存活率、心衰及肾衰情况.试剂盒法测定血清肌酐、尿素氮,Bradford法测定24 h尿蛋白量,左心室插管术测定左室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)及左室压力最大上升及下降速率(±dp/dtmax).称重法测定心脏重量参数.切片HE染色观测心肌病理情况.结果:对照组大鼠无死亡,大小剂量模型存活率分别为73％、87％,与对照组相比,大小剂量模型组大鼠血清各项指标、尿蛋白明显升高,LVSP下降,LVDP和LVEDP均上升,心脏重量参数比升高,提示左室舒张和收缩功能损伤,发生左室心衰和左室心肌肥厚重构.且大剂量组与小剂量组比较心肾功能差异有统计学意义.结论:3/4肾切除并ISO(100 mg/kg)皮下注射较ISO(70 mg/kg)皮下注射,更易同时诱发大鼠左室心衰及肾衰.     

苯那普利对FSGS大鼠肾组织细胞外基质影响

目的探讨苯那普利对局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)大鼠肾组织细胞外基质(ECM)的影响。方法建立单侧肾切除合并阿霉素静脉双次注射大鼠FSGS模型,经苯那普利进行灌胃治疗8周,然后采用半定量病理分析苯那普利对肾组织ECM影响,以及生化检测尿蛋白、血脂、肾功能变化。结果FSGS大鼠经苯那普利治疗后,肾组织ECM积聚减少(P<0.01),血脂、肌酐、尿素氮和尿蛋白较模型组降低(P<0.05-0.01)。结论苯那普利可以抑制肾组织ECM积聚,改善肾功能,防治肾纤维化。     

第一届地中海区域ICLAS论坛

目的建立有大量蛋白尿的慢性肾衰动物模型。方法先用5/6肾切除法制作慢性肾功能衰竭的大鼠模型,成功后再分别给予不同蛋白质含量饲料喂养2月,制作有大量蛋白尿的慢性肾衰动物模型。结果正常组大鼠的血肌酐、24 h尿蛋白定量显著低于不同蛋白质含量饲料喂养的模型大鼠(P<0.05),普通饲料+40%蛋白质饲料喂养的模型大鼠血肌酐、24 h尿蛋白定量显著高于普通饲料+20%蛋白质饲料组及普通饲料组,肾脏病理学观察显示:40%高蛋白质饲料组病理改变较其余各组严重,间质纤维化及肾小球硬化程度均较严重,有大量蛋白质管型。结论通过给予5/6肾切除大鼠不同蛋白含量饲料,可以建立有大量蛋白质尿的慢性肾衰动物模型,为临床研究蛋白尿加重慢性肾衰的机制提供了一种新型的实验动物模型。     

抗纤灵冲剂对5/6肾切除大鼠尿微量蛋白干预作用

目的:探讨5/6肾切除大鼠尿微量蛋白的改变以及抗纤灵冲剂干预作用。方法:将40只SD大鼠中30只行5/6肾切除,造模成功后分为正常组、模型组、抗纤灵组、氯沙坦组。药物干预12周后分批处死,留取血液及24小时尿液,检测肾功能(尿素氮、肌酐)以及尿转铁蛋白(TRF)、α1微球蛋白(α1-MG)、β2微球蛋白(β2-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)以及24小时尿蛋白定量。结果:抗纤灵组及氯沙坦组较模型组肌酐、尿素氮有所下降,降低α1-MG、β2-MG、NAG、TRF。结论:抗纤灵冲剂可明显改善5/6肾切除大鼠的肾功能,在降低尿微量蛋白方面与氯沙坦等效,可能是抗纤灵冲剂通过改善肾小球通透性,加强肾小管的重吸收来降低各种蛋白尿。