膀胱肿瘤抗区机制的实验研究

应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的基因转移技术，将和ＭＤＲ１－ｃＤＮＡ导入ＥＪ膀胱癌细胞，经６０、１２０和２４０μｇ／Ｌ秋水仙素的逐级筛选，挑出两个耐药的克隆细胞系，分别培养在２４０μｇ／Ｌ或４８０μｇ／Ｌ秋水仙素的培养基中，命名为ＥＪ－Ｒ２４０或ＥＪ－Ｒ４８０。对照组ＥＪ膀胱癌细胞在６０μｇ／Ｌ秋水仙素的培养基中不能生存。     

膀胱肿瘤多药耐药机制的研究

肿瘤细胞对化疗药物产生耐药是肿瘤难以治愈的主要原因。本文概述了膀胱肿瘤多药耐药的几种可能机制,包括P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽(GSH)、拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)等,同时对近年来多药耐药的逆转机制作了简要的介绍。     

膀胱癌多向耐药基因P—GP170表达的研究

应用ＭＤＲ（Ａｂ－１）和Ｃ２１９单克隆抗体，免疫组化法对４２例膀胱癌ＭＤＲ１和ＭＤＲ３基因编码的Ｐ－ＧＰ１７０的表达进行了研究，结果发现，３０例膀胱初发瘤Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为７０％（２１／３０），其中８例（２７％）为强性染色，１２例（４３％）为阳性或部分阳性染色。１２例化疗后复发的肿瘤切片，Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为８３．３％，２４例Ｇ１～２肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０阳性表达率为７９％（１９／２     

膀胱肿瘤实验研究发展方向

膀胱肿瘤是我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其术后复发和进展一直是困扰临床医生的难题，也是泌尿外科研究的重要方向。虽然新的医疗设备和抗肿瘤药物层出不穷，但是并未从根本上改变膀胱癌患者的预后。近年来，生物学、免疫学、遗传学等基础学科迅速发展，积累了大量分子信息，使得我们对肿瘤的认识也逐步深入。肿瘤治疗的未来方向将是在对其分子机制充分认识的基础上进行靶向性治疗，改变肿瘤发生的遗传学本质，从根本上消除肿瘤发生发展的动力和源泉。     

p27^kip1与膀胱肿瘤

p27^kip1作为重要的CDKs抑制因子，对细胞周期进行负调控，具有抑癌作用。许多研究表明，p27^kip1是多种人类肿瘤中独立的预后因子，可作为临床诊断的标志，并在膀胱肿瘤的诊断与治疗方面也发挥作用。本文将对p27^kip1的主要功能、作用机制及其在膀胱肿瘤诊断和治疗方面的应用作一综述。     

钙通道阻断剂逆转膀胱癌细胞耐药性的实验研究

采用ＭＴＴ、ＨＰＬＣ等方法对膀胱癌耐药细胞耐药性逆转进行实验研究，以钙通道阻断剂异搏定为逆转剂。结果表明：异搏定能有效地逆转膀胱癌细胞的抗药性，主要通过抑制Ｐ－ＧＰ糖蛋白的药物外流“泵”作用，增加了细胞内长春新碱（ＶＣＲ）的蓄积。抗药逆转剂（异搏定）与化疗药物联合应用进行膀胱腔内灌注可能是治疗和预防膀胱肿瘤抗药及复发的有效手段。     

p27kipl与膀胱肿瘤

p27kip1作为重要的CDKs抑制因子,对细胞周期进行负调控,具有抑癌作用.许多研究表明,p27kip1是多种人类肿瘤中独立的预后因子,可作为临床诊断的标志,并在膀胱肿瘤的诊断与治疗方面也发挥作用.本文将对p27kip1的主要功能、作用机制及其在膀胱肿瘤诊断和治疗方面的应用作一综述.     

膀胱肿瘤染色体和多种基因突变的研究

本文阐述了膀胱肿瘤发生发展过程中 ,多种遗传学物质异常变化的特点 ,提出了膀胱肿瘤的分子生物学模型。     

原位膀胱肿瘤实验动物模型研究进展

动物实验是细胞实验和临床实验之间的重要过渡环节 ,实用的动物实验模型在肿瘤的研究中具有十分重要的作用。膀胱原位肿瘤模型由于具有独特的优越性而受到人们越来越多的青睐 ,其制作方法近来也有了明显的改进 ,本文就目前原位模型的研究进展作一综述。1　诱导模型自从 1 937年Hueper首次报道用 β 萘胺成功诱导狗的膀胱癌模型以来 ,已经发现了许多能诱导膀胱癌的化学物质 ,但多数致癌剂的效果均不令人满意 ,因为诱导时间太长、肿瘤发生率低和器官特异性差限制了其广泛应用。目前较理想的致癌剂仍只有三种 :N [4 ( 5 Nitro 2 furyl) 2 …     

膀胱肿瘤的治疗

膀胱肿瘤是泌尿系统是常见的肿瘤，多年来人们一直在不断改进诊断和治疗方法，传统的手术治疗得到不断改进，各种腔内治疗方法也很普及。作为重要治疗措施的化学治疗，免疫治疗得到了发展，其中治疗的研究为今后膀胱癌的治疗开辟了新途径。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

膀胱癌多药耐药基因产物的表达及临床意义

目的探讨膀胱癌组织的多药耐药基因（mdr－1）产物P-糖蛋白（P-GP）的表达情况。方法应用LSAB免疫组化技术研究25例初发膀胱癌及16例复发膀胱癌的P－GP阳性表达。结果初发膀胱癌P－GP阳性表达率48％,复发膀胱癌P-GP阳性表达率87.5％,复发性膀胱癌P－GP阳性表达率明显高于初发肿瘤（P＜0.05）。不同病理分级、临床分期间的P－GP阳性表达率无显著性差异（P＞005）。结论膀胱癌的P－GP阳性表达水平与肿瘤病理分级及临床分期无关。复发性膀胱癌有较高的P－GP表达是由于肿瘤接触化疗药物后,mdr－1基因扩增所致。P－GP的过度表达可能是膀胱癌腔内化疗失败的重要原因之一。     

线粒体促凋亡蛋白促进化疗药物诱导膀胱癌细胞凋亡的分子学机理研究

目的　探讨线粒体促凋亡蛋白 (Smac)促进化疗药物诱导膀胱癌细胞凋亡的分子学机理。　方法　脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T2 4细胞 3d后 ,低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动 ,MTT比色分析检测癌细胞生长活性 ,流式细胞术检测细胞凋亡 ;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac、XIAP、caspase 3的表达。　结果　各组癌细胞在低剂量丝裂霉素诱导下均出现凋亡 ,0 .0 5mg/ml、0 .0 0 5mg/ml丝裂霉素处理的T2 4细胞凋亡率分别为 18.84 %、10 .72 % ,转染Smac后经 0 .0 5mg/ml、0 .0 0 5mg/ml丝裂霉素处理的T2 4细胞凋亡率分别为 33.5 2 %、2 6 .2 4 % ,差异有显著性意义 (P1<0 .0 5、P2 <0 .0 1) ;同组凋亡相关基因XIAP表达下降、caspase 3表达上调 ,其表达差异均有统计学意义 (P <0 .0 5 )。　结论　Smac在癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡 ,其作用机理是通过抑制凋亡抑制蛋白IAPs ,解除了对凋亡下游效应半胱氨酸蛋白酶caspase的抑制活性。     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

核转录因子NF-κB及黏蛋白MUC1参与膀胱癌耐药机理的研究

目的探讨核转录因子NF-κB及上皮特异性黏蛋白MUC1基因及蛋白参与膀胱癌细胞耐药形成的机理。方法免疫组织化学SP法检测NF-κB p65和MUC1蛋白在BIU-87、T-24及耐药株BIU-87／A细胞中的表达。原位杂交技术检测NF-κB p65的mRNA在3种细胞质中的表达。流式细胞仪检测3种细胞在阿霉素、长春新碱、顺铂3种化疗药物作用48h后的凋亡率。结果NF—κB p65蛋白在BIU-87、T-24细胞质中均有阳性表达，细胞核几乎无表达，在BIU-87／A耐药株的胞质、胞核中均有阳性表达。3组细胞平均吸光度值差异无统计学意义（P〉0．05）。MUC1在BIU-87、T-24细胞膜、胞质中均有弱阳性表达，在BIU-87／A的胞膜、胞质中均有强阳性表达，两者平均吸光度值差异有统计学意义（P〈0．01）。3种细胞中NF-κB p65 mRNA表达均在胞质，核无表达，且3组细胞平均吸光度值差异无统计学意义（P〉0．05）。3种细胞自发凋亡率分别为1．15％、1，40％、0．90％，3种化疗药物作用48h后，BIU-87细胞凋亡率分别为45．69％、47．70％、44．50％，T-24细胞凋亡率分别为43．79％、46．17％、44．50％，用药前后差异有统计学意义（P〈0．01）。两种细胞之间及3种化疗药之间差异无统计学意义（P〉0．05）。BIU-87／A在阿霉素、长春新碱作用48h后的凋亡率分别为19．88％、21．41％，用药前后差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NF-κB是膀胱癌细胞BIU-87／A耐药形成的中心环节，BIU-87／A耐药形成中NF-κB过度活化导致MUC1高表达可能是另一途径。     

阿霉素加环孢素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发

目的 探讨膀胱癌术后复发率。方法 应用阿霉素加环孢素化疗方案行膀胱腔内灌注化疗预防复发;同时采用免疫组织化学方法检测初发膀胱癌组织４２例标本Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）和多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）的表达。结果 ４２例患者应阿霉素和环孢素联合腔内灌注化疗,平均观察２０．４个月。随访期间未复发３８例;４例复发,复发率为９．５２％,病理分级与前次相同。初发膀胱癌中,ＭＲＰ总阳性率为３８．１％,Ｐ－ｇｐ总阳性率为４０．４％。结论 环孢素与细胞毒制剂联合化疗,能不增加毒副作用的同时,增加化疗效果,抑制耐药性的形成,降低复发率,具有广泛的临床应用前景。     

人膀胱癌细胞耐药株多基因蛋白表达的意义

为研究膀胱肿瘤细胞耐药机制，使用药物浓度递增的方法，分别采用阿霉素（ＡＤＭ）或足叶乙甙（ＶＰ１６）建立了人膀胱癌耐药细胞株ＢＩＵ８７／Ａ和ＢＩＵ８７／Ｖ，并进行了耐药倍数分析。ＢＩＵ８７／Ａ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为５７４、５９４；ＢＩＵ８７／Ｖ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为６５、５４。采用免疫组化的方法分析Ｐ５３、ｂｃｌ２蛋白和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在细胞中的表达，结果显示ＢＩＵ８７三种蛋白均阴性，而ＢＩＵ８７／Ａ、ＢＩＵ８７／Ｖ的三种蛋白均阳性，且ＢＩＵ８７／Ａ的表达量均多于ＢＩＵ８７／Ｖ。结果说明突变型Ｐ５３蛋白、ｂｃｌ２蛋白和Ｐｇｐ表达在细胞耐药机制中可能起重要作用     

MDM2、p53基因在膀胱癌中的表达及其临床价值

目的　探讨癌基因ＭＤＭ２ 和抑癌基因ｐ５３ 在膀胱癌中的表达及其临床价值。　方法　采用免疫组织化学方法对２３ 例膀胱癌标本进行检测。　结果　ＭＤＭ２ 、ｐ５３ 基因蛋白在肿瘤中阳性表达为３９ ％ 和４８ ％ ,与肿瘤分级分期,肿瘤复发性相关,两者异常表达呈负相关（ｒ＝ － ０ ．２ ９４６ ,Ｐ＜０ ．０５）。两者在癌旁组织中亦有一定表达率。　结论　ＭＤＭ２ 、ｐ５３ 基因的异常表达是膀胱癌中的基因事件,与膀胱癌发生发展密切相关,可作为临床判断肿瘤进展及可能预后的瘤标。     

ras癌基因点突变与膀胱癌关系的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析的方法，检测２４例石蜡包埋的膀胱癌组织中１５例Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子的点突变呈阳性（６２．５％），提示Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子的点突变随膀胱癌的级别、期别升高，可作为判断肿瘤恶性程度、进展和预后的监测指标。     

膀胱癌mdr-1 mRNA表达水平及临床意义

目的探讨浅表性膀胱癌ＭＭＣ和ＢＣＧ／ＭＭＣ膀胱灌注疗效与ｍｄｒ１表达的相关性。方法应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）技术,追踪检测７１例膀胱癌治疗前后的ｍｄｒ１表达量。结果用ＭＭＣ灌注者其复发肿瘤ｍｄｒ１表达明显增加,而用ＢＣＧ／ＭＭＣ灌注则无明显增加;ＭＭＣ组复发率４２％,复发中位时间１４．５个月;而ＢＣＧ／ＭＭＣ组复发率为２４％,复发中位时间３０．５个月。结论ＭＭＣ可诱导膀胱癌产生ＭＤＲ;ＢＣＧ／ＭＭＣ疗效明显优于ＭＭＣ,尤其对ｍｄｒ１阳性表达病例,且延缓癌细胞ＭＤＲ增加。