磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

HBV共价闭合环状DNA功能化纳米颗粒制备及鉴定

目的 制备HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)功能化磁性纳米颗粒,为进一步建立富集分离和检测cccDNA方法奠定基础. 方法 通过亲和素修饰纳米颗粒表面,利用亲和素与生物素的亲和作用,将亲和素修饰的纳米颗粒与生物素标记的cccDNA特异性探针偶联,制备cccDNA功能化纳米颗粒,最后用cccDNA探针完全互补的荧光标记序列与功能化纳米颗粒反应,鉴定其特性. 结果 亲和素修饰的纳米颗粒能结合生物素最大量为1 205 ng/mg;通过与亲和素作用,生物素标记cccDNA特异性探针固定在磁性纳米微粒表面,其最大结合生物素标记探针量为3.2×10-9 mol/mg;cccDNA功能化纳米颗粒可捕获与其互补的荧光标记寡核苷酸序列,其最大捕获量为2.0×10-9mol/mg,并能通过变性释放出保持生物学活性游离的荧光标记寡核苷酸序列. 结论 成功构建的cccDNA功能化纳米微粒能有效捕获与其互补的序列,其捕获量能达到cccDNA的分离提取要求.     

DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究

目的应用纳米磁性粒子纯化质粒.方法将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子表面,利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用,通过离子交换,在细菌裂解上清液中提纯质粒.结果可以提纯出高纯度的质粒.结论在纳米磁性粒子外包裹上DEAE基团,可以提纯出高纯度的质粒.     

DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究

目的 应用纳米磁性粒子纯化质粒。方法 将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子表面，利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用，通过离子交换，在细菌裂解上清液中提纯质粒。结果 可以提纯出高纯度的质粒。结论 在纳米磁性粒子外包裹上DEAE基团，可以提纯出高纯度的质粒。     

基于核酸适体的比色技术检测肿瘤标志物血管内皮生长因子

目的 基于核酸适体和磁珠,提出一种检测肿瘤标志物血管内皮生长因子(VEGF)的比色方法.方法 核酸适体与标记脲酶的单链结合,通过生物素-亲和素的特殊识别作用固定在链霉亲和素修饰的磁珠上;待检测的肿瘤VEGF标志物与适体结合形成茎环结构,使标记脲酶的单链脱落下来;经磁分离,转移上清液,加入到含一定量尿素和酚红试剂的溶液中.利用上清液中的脲酶水解尿素产生氨,使得溶液的pH值升高,导致溶液的颜色变化,通过肉眼或紫外分光光度计分析显色结果.结果 该检测体系在最佳条件下,检测VEGF的线性范围为0.1～10 pmol/L,检测限达0.06 pmol/L.并利用此体系,检测人肺癌患者血清中的VEGF浓度,其结果与ELISA方法检测出的结果基本一致.将本方法与ELISA方法同步盲法测定10例血清样本,结果显示本方法的准确率为90％,表明其具有较高的有效性和敏感性.结论 该检测方法操作简单方便,同时具有较高的灵敏度和选择性,在临床VEGF检测中具有潜在的应用前景.     

人端粒酶亲和纯化方法的建立及其初步鉴定

建立一种亲和纯化人端粒酶的手段,方法酶切鉴定人端粒酶ＲＮＡ质粒,所切下的ｈＴＲｃＤＮＡ片段用生物素标记后与链霉亲和素琼脂糖珠耦连,用高端粒酶活性的胃肿瘤细胞提取液与之反应,利用端粒酶核糖核蛋白的特性,形成链霉亲和素琼脂糖珠－生物素标记ｈＴＲｃＤＮＡ－ｈＴＲ－端粒酶蛋白组份复合物,核酸解离液洗脱后获得亲和纯人端粒酶。     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBeAg中的比较

应用链霉亲和素和生物素系统发展成的酶连接免疫吸附测定（ELISA）改良法检测HBeAg，取得较满意效果。标记链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）时，两的重量比以（0.5-0.8):1为佳，浓度以7μg/ml为最理想；SA-HRP的反应时间以30min为适宜。本改良法与生物素亲和素ELISA（BA）法、普通ELISA法检测HBeAg的灵敏度比较。其相对灵敏度高于后二；用Abbott试剂作为标准。检测HBeAg100人份，其阳性率高于BA法和普通ELISA法，提示链霉亲和素FLISA（BSA）法可提高方法的特异性及灵敏度。     

建立BioID-质谱联用技术筛选细胞内蛋白质相互作用

目的 通过BioID-质谱联用技术建立一种新的蛋白质相互作用的筛选系统,并采用免疫共沉淀-蛋白质印迹法验证与Yes相关蛋白1(YAP1)相互作用的蛋白质.方法 构建YAP1-BirA*融合表达质粒,将质粒转染进293T细胞后,在细胞培养基中加入50μmol/L生物素,继续培养24 h后提取细胞总蛋白质.利用YAP1特异抗体,采用蛋白质印迹法检测YAP1-BirA*融合蛋白的表达.利用HRP偶联的亲和素检测细胞内蛋白质被生物素标记的水平.通过亲和素磁珠对细胞内生物素化的蛋白质进行亲和纯化,多次洗涤去除亲和素磁珠上非特异性结合的蛋白质后对亲和素磁珠纯化的蛋白质进行溶解.取40μg总蛋白行SDS-PAGE,然后采用蛋白质银染试剂盒对凝胶中的蛋白质进行染色,确定亲和素磁珠对生物素化蛋白的纯化效果.用非标记定量质谱法鉴定生物素化的蛋白质.针对鉴定得到的蛋白质,采用蛋白质印迹法对生物素化的SMAD家族成员3(SMAD3)进行验证.通过YAP1的免疫共沉淀-蛋白质印迹法确定SMAD3能否与YAP1相互作用.结果 成功构建YAP1-BirA*融合表达质粒,该质粒在293T细胞中能够高效表达融合蛋白.在生物素存在的情况下,YAP1-BirA*融合蛋白能够利用生物素标记细胞内与YAP1-BirA*融合蛋白邻近的蛋白质.在细胞裂解后,这些在细胞内被生物素标记的蛋白质能够被偶联亲和素的磁珠纯化,经过多次洗涤,能够富集生物素标记的蛋白质.质谱鉴定显示,能够获得细胞内与YAP1在空间上相互靠近的蛋白质.免疫共沉淀-蛋白质印迹法结果证明SMAD3蛋白能与YAP1相互作用.结论 BioID-质谱联用方法是一种能用于蛋白质相互作用筛选的简单、高效技术,与免疫共沉淀-蛋白质印迹法联合使用可以成为一种新的蛋白质相互作用研究体系.     

2种聚乙二醇不饱和酸单酯共聚合包被Fe3O4制备磁性微球及其表征

目的:用两种聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法:水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单酯为单体,在正庚烷-水组成的油包水体系自由基共聚制备磁性微球;将微球表面来自PEG-1540的羟基经甲磺酸酯活化、连接乙二胺后再用活化生物素修饰。透射电镜观察其外貌;测定与碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin labeled byalkaline phosphate,AP-SAV)的特异性结合、与4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯等的非特异性结合。结果:所得Fe3O4粒径60 nm左右,生物素修饰后粒径接近200 nm。此磁性微球可从混合蛋白中选择性分离碱性磷酸酶酶标记的链亲和素,结合容量约51 ng蛋白/g磁性微球;4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯在浓度很低时同此磁性微球的结合低于检测限,在浓度高达64μmol/L时仍无显著结合。结论:用两种PEG不饱和酸酯共聚包被Fe3O4可制备表面亲水磁性微球,功能化后有特异相互作用且非特异性作用很弱,但还需提高此磁性微球功能化后的特异性结合容量。     

2种聚乙二醇不饱和酸单酯共聚合包被Fe3O4制备磁性微球及其表征

目的：用两种聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法：水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单酯为单体,在正庚烷-水组成的油包水体系自由基共聚制备磁性微球;将微球表面来自PEG-1540的羟基经甲磺酸酯活化、连接乙二胺后再用活化生物素修饰。透射电镜观察其外貌;测定与碱性磷酸酶标记链亲和素（Streptavidin labeled by alkaline phosphate,AP-SAV）的特异性结合、与4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯等的非特异性结合。结果：所得Fe3O4粒径60 nm左右,生物素修饰后粒径接近200 nm。此磁性微球可从混合蛋白中选择性分离碱性磷酸酶酶标记的链亲和素,结合容量约51 ng蛋白/g磁性微球;4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯在浓度很低时同此磁性微球的结合低于检测限,在浓度高达64 ?滋mol/L时仍无显著结合。结论：用两种PEG不饱和酸酯共聚包被Fe3O4可制备表面亲水磁性微球,功能化后有特异相互作用且非特异性作用很弱,但还需提高此磁性微球功能化后的特异性结合容量。     

方药离合今论

通过对方剂配伍规律的研究,阐述了配伍在遣药组方及方中药性发挥中的重要作用,指出如配伍得当,可选择发挥方中之药的某一药性,可使方剂直达病位,亦可解毒增效,体现了方药离合之妙。     

运用JCI管理标准 加强病案质量管理

病案书写质量的管理是医院质量管理中的一项重要内容。运用《JCI管理标准》,加强病案内涵质量监控,促使医院建立完善规范的病案质量保证体系,促进持续医疗质量改进。可使病案质量更加趋于完善,从而减少医疗操作过程中潜在的危险,缓解医患纠纷,构建和谐的医患关系。更好地适应新形势下的医疗体制改革与国际竞争。     

社区中老年人群颈动脉粥样硬化与血浆致动脉粥样硬化指数的关系及其危险因素研究

目的 探究社区中老年人群血浆致动脉粥样硬化指数(atherogenic index of plasma,AIP)与颈动脉粥样硬化(carotid arteriosclerosis,CAS)之间的关系,同时研究颈动脉粥样硬化的各项危险因素。 方法 收集来本社区卫生服务中心进行体检的中老年人群(年龄>45岁)835例,纳入研究者576例,收集经颈动脉彩色多普勒超声检查诊断为颈动脉粥样硬化者(CAS)者255例作为病例组,无CAS者321例作为对照组。对2组受试者进行血脂检查、肝功能、肾功能、血糖、血压、腹部B超等常规检查。同时问卷调查记录研究对象的一般健康情况并统计分析。 结果 CAS组在BMI、血压、空腹血糖、尿酸等指标上与对照组比较差异有统计学意义,CAS组的AIP指数明显高于正常对照组。通过对18种因素调查,其中7种因素差异有统计学意义(均P<0.05),分别为脂肪肝史(OR=2.337)、高脂血症史(OR=4.572)、BMI指数>24 kg/m2(OR=2.801)、糖尿病史(OR=11.133)、每日进食蔬菜量≤500 g (OR=3.095)、高血压史(OR=3.421)、经常运动(OR=0.076),其中经常运动为其保护因素。 结论 在社区中老年人群中,AIP与CAS密切相关,AIP可有效预测动脉粥样硬化的情况。颈动脉粥样硬化同时与高血压、糖尿病、BMI、生活方式等都息息相关。      

英语词义与语境的关系及词义教学的方法

词汇是语言的建筑材料，词汇教学是英语教学的重要内容之一。而词义教学是词汇教学的核心。传统的词汇教学往往简单罗列词义。强调词的字面意义。而忽视词在实际使用中的意义。主要通过翻译和对比的方法进行。难以达到理想的效果。为了探讨更有效的词义教学方法。采取讨论词义理解与语境的关系。及以语境理论和深层认知优势为指导的情景法和推断法进行词义教学，认为词义的理解与语境密切相关，依据语境才能正确理解和掌握词义。语境理论指导下的情景法和推断法发挥了深层认知的优势。是词汇教学的有效方法。     

喂养方式与婴儿贫血因素分析及对策

目的为更进一步了解引起小儿贫血的相关因素，实施积极有效措施防治小儿贫血，保障婴儿的健康成长。方法根据来我院进行系统保健的6个月-3周岁婴儿1322名，其中母乳喂养1180名，人工喂养47名，混合喂养95名，贫血患病率进行分析。结果母乳喂养组贫血患病率为55．08％，明显低于人工喂养组贫血患病率78．72％。和混合喂养组贫血患病率77．89％。及时常添加辅食组贫血患病率41．98％，又明显低于及时不常添加辅食组贫血患病率59．59％。和不添加辅食组贫血患病率78．46％，差异有显著意义。结论不同喂养方式和能否及时常添加辅食，对小儿贫血有着不同影响，因此，在保健过程采取相应对策，对预防小儿贫血将取得积极作用。     

骨科固定及植入器材的应用与发展

介绍了常用骨科固定及植入器材,并对其发展历史、作用及特点作简要概述.     

病案与医患之间的法律关系

目的明确病案是有关病人健康情况的文件资料,是法定的医学文件。方法强调医务人员在病案形成过程中应负的法律责任。其中患者和家属具有依法提供可靠信息的义务。讨论当医患发生矛盾时,病案将作为评议、处理或判明责任的重要依据,可以保障医务人员和患者的合法权益不受侵犯。结论病案的收集、整理、保存都需要法律依据;病案的安全需要法律支持;病案的利用需要法律保证。