非清髓性骨髓移植对移植物抗宿主病的影响

目的 探讨非清髓性预处理方案对大鼠异基因骨髓移值模型移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法 Wistar大鼠为供鼠,SD大鼠为受鼠,受鼠分两组,分别予以不同的预处理方案,A组受鼠自移植前4-1d,腹腔注射氟达拉宾(1mg/kg),移植前4h接受2Gy的全身照射;B组受鼠仅在移植当天分别接受6Gy的全身照射。各实验组受鼠均在移植当天经尾静脉输注供鼠骨髓细胞3.8×107;对照组大鼠输注等量的生理盐水,观察各组大鼠GVHD反应。结果 移植前接受氟达拉宾和2Gy全身照射预处理的大鼠生存期较长,且GVHD临床和病理评分也较低。结论 非清髓性骨髓移植预处理方案可有效预防GVHD,拓宽临床进行异基因骨髓移植的适用范围。     

非清髓单倍体相合骨髓移植后自然杀伤细胞参与急性移植物抗宿主病的免疫病理学研究

目的研究自然杀伤（natural killer,NK）细胞在非清髓单倍体相合骨髓移植中参与急性移植物抗宿主病（acute graft vs host disease,aGVHD）过程的免疫病理。方法本实验建立了以C57BL／6小鼠为供鼠、CB6F1小鼠为受鼠的急性移植物抗宿主病模型。观察小鼠发生aGVHD的症状体征,流式细胞术检测小鼠移植后嵌合率及NK细胞活化受体NKp46表达强度,免疫荧光染色观察aGVHD靶器官部位NK细胞分布。结果移植鼠aGVHD发生率80％,移植＋15d达到完全嵌合,移植＋25d左右小鼠出现体质量减轻、耸毛、弓背等典型aGVHD症状。发生aGVHD小鼠外周血NK细胞NKp46表达强度低于未发生aGVHD小鼠,受鼠肝汇管区有供鼠源NK细胞浸润。结论在非清髓单倍体相合骨髓移植中NK细胞参与了肝处移植物抗宿主病的病理反应,NK细胞活化受体NKp46表达强弱与aGVHD的发生相关,NKp46表达强度可能为aGVHD诊断提供依据。     

异种骨髓移植中移植物抗宿主病的实验研究

目的 :探讨克服异种骨髓移植间强烈的移植物抗宿主病的方法。方法 :实验分两步 :第一步 ,SD大鼠亚致死剂量 5 .5Gy全身照射后 ,4h内经尾静脉输入正常BALB/c小鼠骨髓细胞 8× 10 7。 2d后予腹腔注射Cy15 0mg/kg。诱导形成嵌合体大鼠 ,使其对BALB/c小鼠产生特异性免疫耐受。第二步 ,BALB/c小鼠接受致死剂量 9.0Gy全身照射 ,随机三分组。照射后 4h内经尾静脉注射骨髓进行移植。A组输注正常SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7;B组输注正常SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7和脾细胞 2× 10 7;C组输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞 4× 10 7和脾细胞 2× 10 7;比较GVHD发生情况。结果 :A组有 2只小鼠死于感染和放射损伤 ,所有对象均未观察到明显GVHD表现。B组平均存活时间为 (9.0± 1.3)d ,且死前均出现不同程度的典型GVHD表现 ,如皮毛脏乱、消瘦、弓背体位、腹泻 ,甚至血便等 ;肝实质内有灶性淋巴细胞及多形细胞浸润 ,并可见局灶性坏死 ;肠绒毛部分或大部分脱落 ,粘膜坏死、有大量炎性细胞浸润 ,符合GVHD病理改变。而C组除 2只小鼠分别于 18d、31d死亡外 ,余均存活超过 6 0d ,与B组有显著差异 ,且死亡率最低。结论 :有受者嵌合体的供者 ,在进行异种骨髓移植后有助于克服异种移植物抗宿主病。     

自然杀伤细胞对小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病效应的影响

目的:研究自然杀伤细胞(NK)在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法:以近交系小鼠C57BL/6(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行异基因骨髓移植,根据临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况.结果:增加1×106供鼠NK细胞的移植组中40%小鼠出现GVHD,增加2×106供鼠NK细胞的移植组中仅30%出现GVHD;与单纯异基因骨髓移植细(80%急性GVHD、20%慢性GVHD)和骨髓 T细胞组(100%急性GVHD)比较,GVHD发生率显著下降(P＜0.01),30、60和120 d存活率显著增高(P＜0.01).结论:在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GVHD效应,延长存活期.     

树突状细胞亚群比例对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 探讨树突状细胞(Dendridc cell，DC)亚群比例对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法用主要组织相容性抗原(MHc)完全不合的近交系小鼠建立小鼠allo-BMT的模型，随机分为三组，分别在移植前、后和不对供鼠使用重组小鼠粒系集落刺激因子rmG-CSF，移植后均采用环孢素A(CsA) 甲氨蝶呤(MTX)方案预防aGVHD，观察三组小鼠移植前后外周血中DC亚群的比例及变化以及aGVHD的情况。结果 移植前后使用rhG-CSF均可以使DC亚群发生改变。使DC2的比例增加，移植前使用更明显；处理组移植小鼠aGVHD严重程度明显比不使用rmG-CSF组弱。移植前使用aGVHD表现最轻。结论 移植前后使用rmG-CSF可以使小鼠DC亚群比例发生改变，使DC2比例增高，并可使减轻移植小鼠aGVHD的症状。     

异种骨髓移植后1例慢性移植物抗宿主病动物模型的观察

目的 探讨异种造血嵌合体模型中慢性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）发生的特点及机制。方法 本研究对40余只异种造血嵌合体模型中出现的一只慢性GVHD实验兔行血常规、肝功、骨髓涂片检查，对其肝、肺、小肠、皮肤等脏器行常规病理、胶原纤维染色等检查，并同时用PCR测其外周血中供体细胞嵌合情况。结果 该实验兔外周全血细胞减少，PCR检查未发现供体细胞，骨髓轻度增生不良；病理结果显示其病变仍以皮肤为重但均较同种GVHD轻，其病变侵犯部位与同种GVHD无明显区别。结论 异种骨髓移植的慢性GVHD出现时间晚，较罕见，临床表现不如同种慢性GVHD典型，病变较同种GVHD轻；其病变侵犯器官与同种GVHD无明显区别。     

输血相关的移植物抗宿主病研究进展

骨髓移植中的移植物抗宿主病 (GVHD)已引起医学界的足够重视并进行了深入的研究 ,移植后输血也进行常规照射。其实输入含免疫活性淋巴细胞的血液成分而引起的输血相关性移植物抗宿主病 (TA- GVHD)表现更重 ,漏诊、误诊率高 ,治疗效果也差。因此 ,探讨 TA- GVHD发病机制、诊治及预防措施就显得尤为重要。1　历史及发病率　　早在 195 5年 ,日本学者就报道手术后输血发生红皮症的病例。随着对 GVHD的认识 ,发现此类病症与移植后GVHD的表现有所不同 ,主要是骨髓功能衰竭和全血细胞减少 ,而且治疗效果和预后都很差 ,于 1970年正式命名…     

非清髓性骨髓移植的动物实验研究

目的　建立非清髓性骨髓移植的小鼠动物模型 ,探讨非清髓预处理条件下能否实现异基因造血细胞的植活 ,探讨输入的异基因造血细胞数量和移植植活的关系。方法　以雌性C5 7BL/ 6小鼠为异基因骨髓移植的受者 ,雄性BALB/c小鼠为异基因骨髓移植的供者 ,采用非致死剂量的环磷酰胺腹腔注射 (2 0 0mg/kg)加γ射线全身照射(5Gy)为非清髓性预处理方案 ,将移植受鼠分为A、B、C 3组 ,每组 10只 ,分别给予 2× 10 7、8× 10 6和 2× 10 6个供鼠骨髓细胞 ,移植后第 36天用聚合酶链式反应检测受鼠骨髓细胞内Y染色体特异性基因检测移植物植活。结果　在移植A、B和C组中分别有 8、3和 0只小鼠检测到了异基因造血细胞的植活 ,经过统计学检验发现A组小鼠的植活比例高于其余两组。结论　非清髓的预处理条件下可以实现异基因骨髓移植的成功植入 ;加大移植物中造血前体细胞的数量有助于克服移植供、受者间主要组织相容性 (MHC)间的差异和促进移植物植活     

造血干细胞移植后的移植物抗宿主病

本院14例异基因骨髓移植中发生急性移植物抗宿主病7例(50％),其中Ⅳ级2例(14.3％)。Ⅰ～Ⅱ级5例;慢性移植物抗宿主病2例(14.3％)。9例胎肝移植中1例发生移植物抗宿主病Ⅰ级。1例自体骨髓移植后因输未经照射的异体血引起急性移植物抗宿主病。收集1988年至1991年12月国内文献报告异基因骨髓移植57例,发生急性移植物抗宿主病44例(77.19％),Ⅲ级以上12例(20.05％),慢性移植物抗宿主病14例(24.56％)。初步分析我国移植物抗宿主病的发病率与欧美早期报告近似。本文结合国内外文献报告介绍了移植物抗宿主病的防治措施。     

非亲缘异基因骨髓移植后并发急性移植物抗宿主病的诊治

移植物抗宿主病(ＧＶＨＤ)是异基因造血干细胞移植的主要障碍。我院近１年完成的１０例非亲缘异基因骨髓移植中 ,１例发生超急性移植物抗宿主病 (ａＧＶＨＤ) ,经抢救好转 ,现报道如下。１．供受体情况 :患者女性 ,１２岁 ,山东省临沂市学生。７年前发现血白细胞数增高 ,２年前血白细胞数升至１３０×１０９／Ｌ,当地骨髓涂片检查确诊为慢性髓细胞白血病 (ＣＭＬ)慢性期 ,予羟基脲治疗。移植前血象 :白细胞数７．５×１０９／Ｌ,血红蛋白量１０９ｇ／Ｌ,血小板数２９６×１０９／Ｌ;骨髓象 :有核细胞增多 ,粒系增生明显活跃 ,以中幼粒以下阶…     

从动物实验到临床:非清髓的异基因骨髓移植治疗自身免疫性疾病

在自体和异基因造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病中，非清髓的预处理方案是合理的、安全的途径。     

Acute graft-versus-host disease after allogeneic bone marrow transplantation.

In 25 patients receiving allogeneic bone marrow transplants methotrexate was used to prevent acute graft-versus-host disease (GVHD). Acute GVHD, grades 2 to 4, developed in only 5 (20%) of the patients. The incidence of acute GVHD in other series of recipients of bone marrow transplants has ranged from 5% to 76%. A review of the literature suggests that this variation cannot be completely accounted for by age, type of disease treated by transplantation or type of GVHD prophylaxis. However, transfusion of allogeneic lymphocytes that have not been completely inactivated by irradiation (e.g., in platelet and granulocyte preparations) and inadequate isolation-decontamination procedures may increase the probability of GVHD following bone marrow transplantation.     

雷帕霉素抑制小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病作用的初步研究

目的:探讨新型免疫抑制药物雷帕霉素(RAPA)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的抑制作用,并与传统免疫抑制药物比较作用效果。方法:用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的纯种近交系小鼠[供鼠为雄性C57BL/6 J(H-2b)鼠,受鼠为雌性BALB/c(H-2d)鼠]建立allo-BMT/aGVHD动物模型,随机分5组,第1、2和3组分别给予RAPA、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤(MTX)、RAPA加CsA加MTX联合用药作为aGVHD抑制方案,第4组为空白对照,第5组为未移植组。观察各组小鼠骨髓移植后aGVHD的出现情况。结果:移植小鼠出现典型的aGVHD症状,未用aGVHD预防方案的移植小鼠(第4组)死亡高峰在移植后第5~7天,死亡率达100%。用不同aGVHD预防方案的第1~3组小鼠aGVHD症状明显减轻,平均生存时间(MST)较第4组显著延长(分别延长3.5、1.9和6.0 d,P<0.05)。不同aGVHD预防方案的移植小鼠之间,移植后外周血常规变化差异无显著性。经用各预防方案后,移植小鼠aGVHD病理表现减轻,且RAPA、CsA和MTX联合用药组的病理分级轻于RAPA单药组或CsA加MTX标准方案组。结论:RAPA可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,对小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)有明显抑制作用,可减轻GVHD症状和病理损害程度,延长平均生存时间。     

来氟米特预防小鼠异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究

目的 评估来氟米特（LEF）对小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）术后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用.方法 以SPF级雄性C57BL/6（H-2b）为供鼠,雌性BALB/C（H-2d）为受鼠,建立allo-BMT/aGVHD动物模型,并将大鼠随机分为：A组（模型对照组）、B组（环孢菌素A组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）、C组（LEF组,剂量为10 mg·kg^-1·d^-1）,同时根据临床表现、病理组织学检查、平均生存时间评估各组aGVHD的严重程度.结果 B组和C组受鼠平均生存时间均较A组显著延长（均P〈0.01）,B组和C组间平均生存时间的差异均无统计学意义（均P〉0.05）;B组和C组受鼠的aGVHD临床表现和病理改变均较A组明显减轻.结论 LEF可有效预防小鼠allo-BMT术后出现的aGVHD,并可减轻其症状和病理损害程度,同时显著延长平均生存时间.     

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的：建立一个德定可靠的异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT）急性移植物抗宿主病（acute graft-vetsus-host disease,aGVHD）动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法：以雄性C57BL／6（H-2b）为供鼠,雌性BALB／C（H-2d）为受鼠,受鼠致死性全身照射（total body irradiation,TBI）（8.0Gy）预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75％的小鼠长期存活（〉30d）。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内（8-15d）观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论：建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。     

Pulmonary disease following allogeneic bone marrow transplantation

Bone marrow transplantation is the treatment of choice of many haematological disorders but its success is limited by two major complications, graft-versus-host disease (GVHD) and pulmonary disorders. Of the first 31 patients transplanted at St. James’s Hospital (1984–1986) 16 (52%) had a successful outcome. Of the 15 patients who died, two died of GVHD and one of recurrent leukaemia. All others had severe pulmonary disease either causing death directly (9 cases) or contributing to death from toxic encephalopathy, carditis or recurrent leukaemia (1 case each). The principal forms of pulmonary disease were cytomegalovirus pneumonitis (4 cases), acute haemorrhagic pulmonary oedema (4 cases) and Pneumocystis carinii pneumonia (2 cases). There were single cases of staphylococcal pneumonia and idiopathic pulmonary fibrosis. Aspergillus was a second pathogen in two cases. Pulmonary damage due to conditioning chemoradiotherapy and to GVHD probably underlies this high incidence of pulmonary disease. T-cell depletion to limit the incidence of GVHD together with increased prophylaxis against CMV and Pneumocystis carinii will probably substantially reduce these complications in the near future.     

Graft-versus-leukemia effects from donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation in mice

Background Nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantation has been used since the 1990s as a new hematological stem cell transplantation strategy for treating hematological diseases. The purpose of this study was to explore the graft-versus-leukemia (GVL) effects of donor lymphocyte infusions (DLIs) after nonmyeloablative allogeneic bone marrow transplantations, while assessing the declines in treatment-associated morbidity, mortality, and graft-versus-host disease (GVHD).Methods A total of 615 (H-2k) mice were injected with L615 tumor cells and received 500 cGy (60Coγ-ray) irradiation three days later, followed by an allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT). The allo-grafts consisted of 3×10（7） bone marrow cells and 1×10（7） spleen cells from BALB/C (H-2d) donor mice. Two days after the allo-BMT, the recipient mice were given 200 mg/kg of cyclophosphamide. Subsequently, recipient mice were infused with either donor spleen cells ［2×10（7）］ on day 14 or 21, or donor spleen cells ［5×10（7）］ pretreated with hydrocortisone and cyclosporin A (CsA) in vitro on day 14 post-BMT.Results The median survival time of mice that received DLI on day 21 and pretreated DLI on day 14 post-BMT was longer than that of controls and the day 14 DLI group (P&lt;0.01). No evidence of severe GVHD was observed in the day 21 DLI group nor in the day 14 treated DLI group. Mixed chimerism was confirmed in the day 14 DLI group, the day 14 treated DLI group, and the day 21 DLI group on the thirteenth day post-transplantation; full donor chimerism was observed two weeks after DLI.Conclusion Donor lymphocyte infusion after nonmyeloablative bone marrow transplantation may reduce transplantation-associated morbidity and mortality while strengthening graft-versus-leukemia effects.     

骨化三醇及复方丹参对大鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

目的 观察骨化三醇及丹参对异基因骨髓移植(Allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 以雄性SD大鼠为供鼠,雌性Wistar大鼠为受鼠,受体大鼠随机分成A、B、C、D组,移植当天所有受鼠均接受8.5Gy的全身照射(TBI),于照射后4～6h,A组,为骨髓细胞与脾细胞1:1.5联合输注组:输注供鼠的骨髓细胞2×108个/kg+脾细胞3×108个/kg,即GVHD模型组.B、C、D组除建立GVHD模型外,B组为骨化三醇组;C组为中药制剂复方丹参组;D组为骨化三醇和中药制剂复方丹参联合组.观察各组大鼠生存期及有无aGVHD的临床及病理表现.结果 A、B、C、D组大鼠均于50d观察期内死亡,并有aGVHD的临床及病理表现,但是B、C、D组大鼠aGVHD的发病时间较A纽延迟,临床aGVHD评分亦较A组大鼠低(P<0.05),平均生存时间较A组大鼠明显延长(P<0.05),病理表现较A组大鼠轻.结论 骨髓细胞与脾细胞混合榆注可以引起明显的aGVHD,骨化三醇及丹参能够减轻Allo-BMT后aGVHD的发生.