脂质体包裹反义核酸对调控效果和降解时间的影响

目的 观察脂质体Dotap包裹反义脱氧寡核苷酸对酪氨酸酶(TYR)的调控效果和降解时间的影响,寻找适合于临床应用的高效转染、低降解率的载体和应用方法。方法 应用DNA合成仪合成针对TYR的反义脱氧寡核苷酸,32P标记、脂质体包埋,加入黑色素细胞培养体系进行点杂交,行黑素含量、酪氨酸酶mRNA表达量检测以及降解时间的同位素液闪检测。结果 经脂质体包埋的反义脱氧寡核苷酸使细胞黑素含量由(64±2.3)pg/cell下降至(23±1.5)pg/cell,并可使基因表达水平由160%降低至82%;同位素液闪显示经脂质体包埋的反义脱氧寡核苷酸能使其半衰期由8 h延长至12 h。结论 脂质体可以明显增强反义核酸的调控效果,并可延长其作用半衰期。     

反义核酸的研究及其应用

对反义核酸的概念、作用机制及反义核酸类药物必需符合的条件等有关分子生物学研究进展进行了综述。介绍了几种人工合成的反义核酸及其应用前景,并就研究中需要解决的问题做了探讨。     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响。方法：本实验分6组，分别以脂质体介导反义寡核苷酸、无义寡核苷酸及RPMI 1640培养液作为空白的对照组，转染人乳腺癌MCF-7细胞系，采用Realtime RT-PCR，Western blot方法检测各组MCF-7细胞Survivin蛋白及mRNA的表达情况，测定转染后细胞贴壁率变化，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7细胞的生长抑制作用。结果：脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染人乳腺癌MCF-7细胞后，细胞内Survivin蛋白及mRNA表达显著降低，通过Realtime RT-PCR检测MCF-7细胞经作用后其Survivin mRNA起始拷贝数明显下降；同时细胞贴壁率降低达32．96％，细胞生长抑制率最高达73．62％，ASOND／LiP组与NODN／LiP组和LiP组差异有显著性（P＜0．05）。结论：脂质体介导转染的反义寡核苷酸可在Survivin蛋白及mRNA水平有效地降低乳腺癌MCF-7细胞内Survivin的表达，并能够有效抑制乳腺癌细胞的增殖活性，提示Survivin靶向治疗可能成为乳腺癌综合治疗的一种重要方法。     

脂质体介导ANG反义核酸对 A549 细胞作用的研究

目的：研究脂质体介导ANG反义核酸转染A549细胞后，对其中ANG蛋白表达的影响。探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性。方法：用人工合成的人ANG反义寡聚核苷酸，以脂质体为载体转染人肺癌A549细胞，研究A549细胞在基因转染后，其ANG蛋白表达的变化。结果：脂质体转染程序优化后，得到最佳转染效率，免疫组化显示细胞内ANG蛋白表达明显减少，培养基ELISA检测显示每细胞分泌的ANG蛋白量与对照组相比有显著差异。结论：ANG反义寡聚核苷酸抑制A549细胞中ANG的表达，为体内研究提供了基础。     

反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用

目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达水平,同时利用MTT和细胞计数方法监测细胞生物学活性的变化.结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡?结论RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡?     

脂质体技术促进反义核酸的细胞内摄取和抗乙肝病毒作用

脂质体技术促进反义核酸的细胞内摄取和抗乙肝病毒作用姚志强，周永兴，冯雪梅（西安唐都医院传染科西安７１００３８）关键词反义核酸；细胞内化；乙型肝炎病毒；基因治疗中图号Ｒ５１２．６脂质转染剂（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎｒｅａｇｅｎｔ，ＬＲ）是由阳离子脂质ＤＯＴ...     

hTERT基因反义核酸对8910卵巢癌细胞端粒酶活的影响

研究人类端粒酶催化亚单位基因的反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的影响。方法采用ＴＲＡＰ－ＥＬＩＳＡ检测８９１０卵巢癌细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果ｈＴＥＲＴ基义反义核酸能有核酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

包覆脂质体作为药物载体的研究进展

包覆脂质体以其优良的特性,逐渐成为药物载体领域研究的热点。本文综述了近几年出现的7类包覆脂质体作为药物载体的研究进展,讨论了不同包覆材料包覆脂质体的可行性和包覆前后脂质体载药特性的变化,介绍了包覆脂质体在药物载体领域内的应用,探讨了其独特优点,展望了其应用前景。     

粉防己碱脂质体药物含量及包封率的测定

目的:建立Tet脂质体药物含量测定及包封率测定的反相高效液相色谱法.方法:反相高效液相色谱法.采用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-乙腈-水-0.8%冰醋酸(30:15:55);进样量:20 μl;流速:1.0 ml/min;紫外检测波长:280 nm.采用葡聚糖凝胶G-50柱色谱法分离Tet脂质体和游离药物.结果:在本色谱条件下Tet与辅料及溶剂峰分离良好,Tet在2.0 mg/L～100.0 mg/L范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=3),平均回收率在100.0%～101.0%之间.日内精密度RSD及日间精密度RSD均小于2%(n=5).结论:该方法准确可靠、简便易行,可用于Tet脂质体药物含量及包封率的测定.     

超氧化物歧化酶脂质体制备方法包封率的比较

目的 :研究超氧化物酶 ( SOD)脂质体最佳制备方法 ,为进一步研究 SOD脂质体防病、抗衰老的药理作用打下基础。方法 :采用冻融法、逆相蒸发法、钙融合法、逆相蒸发法与钙融合法联合法 ,分别制备 SOD脂质体 ,并对 4种方法的包封率进行了比较。结果 :逆相蒸发法与钙融合法联合制备 SOD脂质体法包封率最大。结论 :逆相蒸发法与钙融合法联合法为最佳制备 SOD脂质体的方法     

高效液相色谱法测定苯妥英钠脂质体包封率

[目的]建立高效液相色谱法测定苯妥英钠脂质体包封率.[方法]采用反向高效液相色谱法,色谱柱为SHIM-PACKVP-ODSC18柱(150 mm × 4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水-磷酸(80∶20∶0.4);流速:1 ml/min;检测波长:240 nm;柱温30℃.[结果]苯妥英钠浓度在2.5～80μg/ml之间线性良好,方法回收率为101.14％～106.98％,日间和日内精密度均小于5％(n=5),测定的苯妥英钠脂质体的包封率为25.46±0.27％(n=3).[结论]建立的测定方法灵敏、准确、重现性好.     

麻醉时间效率管理对手术室管理效益的影响分析

目的观察麻醉时间效率管理对手术室管理效益的影响分析。方法选取我院2008年1月～2011年1月间的手术室全部资料进行归纳整理分析,观察手术管理方面的现存问题,探讨麻醉时间效率管理对手术室管理效益的影响。结果通过观察发现剖宫产术管理前麻醉时间为（0．17±0．07）h,管理后为（0．13±0．03）h;阑尾切除术管理前（0．22±0．08）h,管理后（0．17±0．04）h;胆囊切除术管理前（0．24±0．17）h,管理后（0．17±0．12）h;输尿管结石管理前（0．25±0．35）h,管理后（0．16±0．28）h;经尿道前列腺切除管理前（0．16±0．04）h,管理后（0．13±0．02）h：管理后麻醉时间明显缩短,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在手术室中应用麻醉时间效率管理后能够有效地缩短患者的住院时间,缩短麻醉时间,提高手术质量,减少医疗纠纷的发生,值得广泛推广。     

自制多聚胺阳离子脂质体转染效率及细胞毒性的评价

目的: 评估制备的多聚胺阳离子脂质体转染哺乳动物细胞的转染效率及细胞毒性. 方法: 多聚胺阳离子脂质TC-Chol与中性磷脂DOPE以3: 1摩尔比,制备多聚胺阳离子脂质体,通过转染以增强型绿色荧光蛋白为报告基因的质粒PIRES2-EGFP入HeLa细胞, Hep2细胞,倒置荧光显微镜下检测转染细胞的报告基因表达,通过MTT法,检测细胞存活分数,并以Lipofectamine2000为对照,评价制备阳离子脂质体转染效率及细胞毒性. 结果: 多聚胺阳离子脂质体转染效率略低于Lipofectamine 2000,但细胞毒性较低,为一种相对高效低毒的阳离子脂质体. 结论: 多聚胺阳离子脂质体为一种相对高效低毒的阳离子脂质体,在基因转染和基因治疗方面具有较广阔的前景.     

PCM修饰脂质体的制备及心肌靶向性初步评价

目的 制备心肌特异性靶向肽PCM修饰的载增强绿色荧光蛋白表达质粒(pEGFP)的脂质体(PCM-LIP),并初步考察其心肌靶向性.方法 采用薄膜分散-超声法,以PCM为配体,DOTAP为阳离子脂质材料制备脂质体,PCM-LIP与pEGFP室温孵育制备载质粒的脂质体.对PCM连接方法进行优化,测定PCM的连接率,并考察脂质体的载药能力、形态、粒径分布、电位及其在磷酸盐缓冲液(PBS)中的稳定性.通过倒置荧光显微镜和流式细胞术考察脂质体转染心肌细胞H9c2的效果,表征其心肌靶向性,筛选PCM的最佳用量.结果 PCM通过插入法连接,用量为脂质的3％,与pEGFP孵育后的PCM-LIP呈圆球形,粒径为(261.9±2.2)nm,zeta电位在为(-5.0±0.6)mV,在PBS中具有良好的稳定性,其对心肌细胞的转染效率高于未修饰的脂质体(P＜0.05).结论 PCM可提高脂质体对心肌细胞的转染效率,PCM-LIP具有良好的心肌细胞靶向性.     

脂质体包裹鼠疫菌VW-aEV76paris株家兔免疫血清的体外杀菌作用研究

观察消除了４５ＭＤ质粒的巴黎ＥＶ７６菌株的家兔免疫血清的体外杀菌作用。方法家兔行背部皮下注射免疫；Ｆ１抗体滴度用间接血凝试验标定；体外杀菌试验采用平板活菌计数。