脐血的临床应用前景

自90年代以来。我国亦开展了脐血系列研究。其中报道较多的内容之一为脐血中造血干／祖细胞数量与类别研究。研究结果验证了脐血单个核细胞（MNC）可形成粒、巨噬细胞集落形成单位（CFU—GM）。爆增型红细胞集落形成单位（BFU—E）、巨核细胞集落形成单位（CFU—Meg）和混合型集落形成单位（CFU—MIX）。但各家实验结果不尽相同，可能与分离细胞的方法、细胞培养条件及培养时间不同有关。可以肯定：（1）脐血含有丰富的多潜能和各系干／祖细胞。（2）脐血干／祖细胞远远超过成人外周血，有的组分超过成人骨髓。（3）脐血是造血干／…     

重组人白细胞介素11对两种血小板减少症患儿骨髓巨核系祖细胞的作用

目的研究重组人白细胞介素11（recombinant human interleukin 11，rhIL-11）对慢性特发性血小板减少性紫癜（chronic idiopathic thrombocytopenic purpura，CITP）与再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）患儿骨髓巨核系祖细胞（megakaryocyte progenitor）体外生长的影响。方法收集17例CITP患儿及14例AA患儿骨髓，对照组为骨髓检查三系造血功能正常、排除血液系统疾病儿童10例。无血清培养各组骨髓单个核细胞（mononuclear cells，MNC），培养体系中包含血小板生成素（TPO）、可溶性补体结合（SCF），IL-3，rhIL-11，或TPO，SCF，IL-3。培养第14天，用流式细胞仪测定CD41^＋细胞率，CD41结合的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（alkaline phosphatase—anti—alkaline phosphatase，APAAP）桥联酶标技术鉴定半固体培养的巨核细胞集落形成单位（megakaryocyte colony forming unit，CFU—MK）和巨核细胞爆式集落形成单位（megakaryocyte burst forming unit，BFU—MK）。结果rhIL-11联合TPO等细胞因子，可促进对照组、CITP组CFU—MK和BFU—MK生成（P〈0．01），提高CD41^＋细胞率（P〈0．01）；但对AA组，CFU—MK和CD41^＋细胞率无明显的作用（P〉0．05）。结论rhIL-11联合TPO等细胞因子，可促进CITP患儿骨髓巨核系祖细胞在体外无血清培养条件下的增殖，提示rhIL-11具有治疗CITP的潜在价值，但对AA患儿的骨髓巨核系祖细胞生成并无明显的效果。     

国产rhG-CSF对骨髓细胞培养CFU-GM的影响

目的 观察国产重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)对人和小鼠骨髓细胞生长的影响。方法 将国产rhG—CSF10、50、100ng／ml分别加入已制备的人和小鼠的骨髓有核细胞。进行CFU—GM定向培养后。分别统计集落数。结果 rhG—CSF对人和小鼠骨髓来源的CFU—GM集落数均有不同程度刺激生长的活性，且呈剂量依赖关系，其作用与日本生产的惠尔血相似。结论 国产重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)有明显促进骨髓增殖的活性。     

巴戟天对脐血CD34+细胞体外扩增的影响

目的：探讨巴戟天对脐血CD34＋细胞体外扩增的影响。方法：用StemSpanTMSFEM无血清液体培养基加入不同浓度的巴戟天，进行液体扩增，计数总细胞数并检测CD34＋细胞。收获扩增后的细胞用MethoCultTMH14435半固体培养基培养，计数CFU2E、BFU2E、CFU2GM集落。结果：巴戟天具有刺激CD34＋细胞液体培养的作用。巴戟天的最佳浓度是50mg／L，Rg1最佳浓度是5mg／L，Rb1最佳浓度是5mg／L。细胞总数分别扩增20．4、24．5、24．1倍，CD34＋细胞数分别扩增4．22、5．19、4．12倍。在液体培养后仍可刺激扩增后脐血细胞集落形成，CFU2E集落形成能力分别比对照组高90．1％、70．8％、72．8％；BFU2E集落形成能力分别比对照组高53．4％、68．0％、67．0％；CFU2GM集落形成能力分别比对照组高67．0％、29．8％、39．4％。结论：巴戟天能促进造血干棚细胞增殖，并且能诱导定向分化，具有类似生长因子和协同生长因子作用。     

骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭的疗效观察

目的探讨自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者的可行性。方法入选慢性心力衰竭患者80例，分为骨髓细胞移植组（48例）和标准药物治疗组（32例），骨髓细胞移植组将骨髓单个核细胞悬液在冠状动脉造影时经导管注入冠状动脉内。标准药物治疗组仅采用常规治疗。用超声心动图、血浆脑钠肽（BNP）和单光子发射计算机断层扫描（SPECT）比较两组治疗前后心功能指标和心肌灌注缺损区面积。结果骨髓细胞移植组和标准药物治疗组治疗前LVEF分别为（42．1±5．8）％、（43．9±6．7）％，术后1年随访分别为（54．1±4．8）％、（49．8±7．7）％；治疗前BNP分别为（699±101）ng／L、（687±95）ng／L，随访分别为（305±78）ng／L、（399±89）ng／L；治疗前心肌灌注缺损面积分别为（26．8±8．6）％、（26．3±6．5）％，随访分别为（15．8±4．3）％、（20．5±7．8）％，两组随访比较差异均有统计学意义；骨髓细胞移植组术中和术后均无并发症发生。结论骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者安全可行，术后能改善心功能及心肌血流灌注。     

越橘总黄酮对人宫颈癌细胞中TRAIL及其受体表达的影响

目的研究越橘总黄酮对人宫颈癌细胞株Hela细胞中TRAIL及其受体表达的影响。方法用浓度为0、0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮处理Hela细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制作用,采用Hoechst33342／PI染色观察越橘总黄酮对Hela细胞凋亡的诱导作用,采用RT—PCR法检测不同浓度越橘总黄酮处理后的Hela细胞中TRAIL及其受体mRNA基因表达变化。结果0．025、0．25、2．5、和25μg／ml的越橘总黄酮对Hela细胞增殖的抑制率分别为22．08％、36．04％、42．10％和44．70％;0．25～25μg/ml的越橘总黄酮处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变;TRAIL和TRAIL—R2表达量明显高于空白对照组（P〈0．05）,TRAIL—R3和TRAIL—R4表达量明显低于空白对照组（P〈0．05）,而TRAIL—R1在各处理组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论越橘总黄酮诱导Hela细胞凋亡的机制可能与上调TRAIL及其受体TRAIL—R2基因的表达有关。     

TRAIL及其受体的临床研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand，TRAIL）又称为Apo2L（ligand），是Wiley1995年发现的TNF超家族成员。TRAIL最初是根据与Fas／Apol和TNF具有序列的同源性被鉴定和克隆出来的。随后又发现了TRAIL的4种新的膜结合受体：死亡受体（death receptor，DR）DR4、DR5，诱骗受体（decoy recptor）DcR1、DcR2，以及1种可溶性受体OPG。近年来。国内外关于TRAIL的研究十分活跃，几乎涉及到临床医学的各个学科。     

雷帕霉素抑制人前列腺癌细胞PC-3生长及转移的实验研究

目的观察雷帕霉素（RPM）对人前列腺癌细胞PC-3生长、周期、凋亡及转移的影响,探讨RPM抑制前列腺癌细胞生长、转移的可能机制及临床应用前景。方法体外培养前列腺癌PC-3细胞,用不同浓度的RPM（10、25ng／m1）干预PC-3细胞。采用MTT法检测RPM对于PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测PC-3细胞周期及凋亡的变化;动物体内荷瘤实验检测对PC-3侵袭转移的影响。结果RPM能显著抑制PC-3细胞生长增殖,且呈时间和浓度依赖性,在25ng／36h时抑．ml36h制率达到（42．23±0．78）％,差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞分析显示RPM能显著抑制细胞周期,使Go／G,期细胞增多（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时Go／G1期细胞达到（92．17±0．69）％,并促进肿瘤细胞的早期凋亡（P〈0．05）,在25ng／ml、36h时凋亡率达到（28．75±1.31）％;动物体内荷瘤实验较对照组差别明显,对照组肿瘤重量与转移比率明显高于RPM组[（3．41±0．28）gVS（1．19±0．23）g,100％（7／7）vs 14．29％（1／7）,P〈0．05],肿瘤增长和转移被显著抑制。结论RPM明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长及迁移,以RPM为基础的前列腺癌治疗方案可能在临床中具有良好的应用前景。     

荧光染料CM—DiI标记大鼠骨髓间充质干细胞的体外实验

目的探讨荧光染料CM—DiI标记大鼠骨髓间充质干细胞的效果及其对细胞活力、增殖能力、凋亡等生物学特性的影响。方法用梯度离心加贴壁培养法获取、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞。取第4代MSCs,分为实验组和对照组,用浓度为6μmol／L的CM—DiI对实验组MSCs进行标记。用台盼蓝染色检测细胞的活力,CCK-8法检测细胞增殖能力,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡。细胞标记后用倒置相差荧光显微镜动态观察不同子代MSCs的阳性标记率、荧光衰减情况及细胞生长、形态变化。结果CM—DiI标记后的MSCs发橙红色荧光,高倍镜下显示细胞上有密集排列明亮荧光颗粒。CM—DiI标记后1d、4d、8d、16d、24d细胞标记阳性率分别为100％、（85．2±4．9）％、（42．3±5．1）％、（17．6±3．6）％、（4．4±1．3）％,细胞标记阳性率和荧光强度随传代次数和培养时间的增加而呈显著进行性下降。标记细胞的大小、形态、活力、增殖能力、细胞凋亡与未标记细胞相比无明显差异。结论CM—DiI标记骨髓间充质干细胞简便、有效,对其生物学特性无明显影响,可用于MSCs的短期示踪。     

白血病骨髓基质细胞黏附对Jurkat细胞周期及调控的影响

目的观察白血病骨髓基质细胞-Jurkat细胞共培养模型中Jurkat细胞的化疗敏感性,探讨基质细胞黏附对Jurkat细胞周期及其调控蛋白表达的影响。方法常规分离、培养骨髓基质细胞,Jurkat细胞与^60Co照射的基质细胞层黏附培养,构建基质细胞-Jurkat细胞共培养模型,扫描电镜观察,通过MTT法测定Jurkat细胞DNR的IC50,流式细胞仪检测Jurkat细胞周期分布,Westernblot检测黏附培养4、24和48h Jurkat细胞周期调控蛋白cyclin A、cyclin E及p27的表达。结果悬浮培养Jurkat细胞的IC50为0．45μmol／L,而白血病基质细胞及正常基质细胞黏附组IC50分别为2．30μmol／L和1．78μmol／L。Jurkat细胞与基质细胞黏附培养24h,Go—G1期细胞的比例明显升高（48．74％±8．77％）,与悬浮对照组（27．83％±1．86％）比较差异有统计学意义P〈0．01,G2-M期细胞比例明显降低为2．01％±1．17％,与悬浮对照组（20．33％±1．84％）比较差异有统计学意义P〈0．01;Western Blot检测发现cyclin A、cyclin E的表达在Jurkat细胞黏附培养4h时即有所下调,24h和48h尤为明显,而p27的表达则出现上调,以48h最为明显。结论白血病基质细胞黏附能介导白血病细胞耐药,其机制可能与白血病细胞周期改变有关。     

骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭的疗效观察

目的 探讨自体骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者的可行性.方法 人选慢性心力衰竭患者80例,分为骨髓细胞移植组(48例)和标准药物治疗组(32例).骨髓细胞移植组将骨髓单个核细胞悬液在冠状动脉造影时经导管注入冠状动脉内.标准药物治疗组仅采用常规治疗.用超声心动图、血浆脑钠肽(BNP)和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)比较两组治疗前后心功能指标和心肌灌注缺损区面积.结果 骨髓细胞移植组和标准药物治疗组治疗前LVEF分别为(42.1±5.8)%、(43.9±6.7)%,术后1年随访分别为(54.1±4.8)%、(49.8±7.7)%;治疗前BNP分别为(699±101)ng/L、(687±95)ng/L,随访分别为(305±78)ng/L、(3994-89)ng/L;治疗前心肌灌注缺损面积分别为(26.8±8.6)%、(26.3±6.5)%,随访分别为(15.8±4.3)%、(20.5±7.8)%,两组随访比较差异均有统计学意义;骨髓细胞移植组术中和术后均无并发症发生.结论 骨髓单个核细胞移植治疗慢性心力衰竭患者安全可行,术后能改善心功能及心肌血流灌注.     

比较早期和晚期骨髓单个核细胞移植对猪急性心肌梗死后左室重构的影响

目的对比观察猪急性心肌梗死后早期（1周）和延期（3个月）进行的骨髓单个核细胞移植对心肌梗死后左室重构的影响。方法前降支球囊封堵法成功建立15头猪急性心肌梗死模型,随机均分为对照组、早期移植组和延期移植组。造模1周后急性移植组行自体骨髓单个核细胞移植,对照组注射1640培养基10ml作为对照;造模3个月后延期移植组行自体骨髓单个核细胞移植,造模后1周、造模后3个月、造模后6个月各组分别行心脏超声和SPECT检测,超声检查分析左室舒张末期内径,SPECT分析左室舒张末期容积、射血分数。结果造模6个月后延期移植组的LVd值[（54．20±3．70）mm]低于对照组[（63．20±5．63）mm],但高于早期移植组[（47．40±1．14）mm];EDV值[（163．00±6．96）ml]低于对照组[（209．40±18．69）ml],但高于早期移植组[135．40±4．93）ml];EF值（O．25±0．02）高于对昭组（0．19±0．02）,但低于早期移植组（0．37±0．02）。结论猪急性心梗3月后骨髓干细胞移植的有效抑制左室重构的进一步恶化,但其疗效不如早期移植组。     

牛膝精对辐照小鼠粒-单系造血功能的影响

目的 探讨牛膝精(Extract of Achynanthis Bidentatae,ABE)对辐照小鼠粒-单系造血功能的影响及作用机制。方法 采用造血祖细胞体外培养和体内扩散盒植入技术,观察牛膝精对辐照小鼠外周血白细胞(white blood cell,WBC)、骨髓有核细胞(bone marrow cell,BMC)及其分裂指数和骨髓粒-单系造血祖细胞(colony forming unit-granulocyte/macrophage,CFU-GM)的影响。结果 辐照用药组(50mg/l、100mg/l、200mg/l)的WBC、BMC总数均较辐照对照组(0mg/l)明显提高,体内培养的CFU-GM产率也明显高于辐照对照组,而体外培养未显示刺激活性。结论 牛膝精可刺激体内粒-单系造血祖细胞的分化与增植。对骨髓具有保护作用。     

肝炎肝硬化患者血常规和骨髓祖细胞造血功能的改变

目的观察肝炎肝硬化患者骨髓祖细胞造血功能和血液常规的变化,为对该类患者采用新的临床治疗措施提供理论依据。方法随机选择26例病毒性肝炎肝硬化患者作为试验组（代偿期、失代偿期肝硬化患者各13例）：随机选择13例本院健康体检者作为对照组。对2组观察对象进行骨髓晚期红系祖细胞（CFU．E）、粒一单系祖细胞（CFU—GM）及成纤维祖细胞（CFU．F）体外培养,观察2组间三系的变化及外周血象、血浆白蛋白变化。结果失代偿期肝炎肝硬化患者的血红蛋白、白细胞、血小板白蛋白水平、白球比均明显低于健康对照组和代偿期肝炎肝硬化组的水平（P〈0．01）;而球蛋白水平则明显高于健康对照组和代偿期肝炎肝硬化组的水平（P〈O．01）。代偿期及失代偿期肝炎肝硬化患者CFU．E、CFU—GM、CFU．F集落生长不良率分别为76．9％、30．8％、38．5％及92．3％、59．2％、84．6％．明显高于对照组三系祖细胞集落生长不良率（0％、0％、0％）,2组间差异有显著性（P〈0．01）。结论与健康对照组比较．肝炎肝硬化患者骨髓祖细胞造血功能明显异常。     

体外培养法观察铅对未成年小鼠造血干/祖细胞生长的影响

目的:为防治儿童铅中毒提供实验室研究资料,探讨醋酸铅对体外培养的小鼠骨髓造血祖细胞的影响。方法:将不同浓度的醋酸铅作用于体外培养的骨髓粒系造血祖细胞(CFU-GM)和红系造血细胞(BFU-E),观察CFU-GM和BFU-E细胞的集落数变化。结果:醋酸铅可明显抑制骨髓CFU-GM和BFU-E的生长,与对照组比较差异显著(P<0.05),且随浓度增加抑制作用增强,呈明显的剂量-效应关系;进行等级相关分析,相关系数分别为rs=-0.969(P=0.000)和rs=-0.983(P=0.000)。结论:醋酸铅可明显抑制体外培养的骨髓CFU-GM和BFU-E的生长。     

Low incidence of peripheral blood haematopoietic stem cells in patients with anorexia nervosa

Myeloid (CFU-GM) and erythroid (BFU-E) stem cells were determined in the peripheral blood (PB) from 13 female patients with severe malnutrition due to anorexia nervosa (AN). When compared to age-matched female controls, PB CFU-GM as well as BFU-E were significantly decreased in number. The reduction of the stem cell compartment indicated a more pronounced haematopoietic abnormality than was hitherto conferred from PB cell counts in AN. The clinical relevance of our finding remains to be established.     

雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究

目的观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对去势后抵抗性前列腺癌（Castration—Resistant Prostate Cancer,CRPC）PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析。方法MTY比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用;Annexin—V／PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化。结果什L抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为18．3ng／ml和13．5ng／ml,与24h组相比,48h组低浓度（5ng／ml,t=1．47,P〉0．05）和高浓度（160ng／ml,t=0．91,P〉0．05）差异无统计学意义。而10ng／ml（t=3．26,P〈0．05）、20ng／ml（t=4．21,P〈0．05）、40．g／ml（t=4．09,P〈0．05）、80ng／ml（t=2．91,P〈0．05）差异有统计学意义。Annexin-v／PI检测经18．3ng／ml,I’PL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24h组Anexin—V阳性／PI阴性表达率分别为（5．42±2．21）％（t=3．52,P〈0．05）、（13．51±3．37）％（t=6．53,P〈0．01）、（29．3±4．53）％（t=8．74,P〈0．01）差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR显示经18．3ng／ml TPL处理后,BAX、HG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变。结论TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色。     

大豆异黄酮对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用

目的研究大豆异黄酮(SI)对辐射小鼠骨髓细胞的防护作用,为SI应用于抗电离辐射药物和功能食品的研究提供依据。方法24只雄性昆明小鼠,随机分为正常对照组、辐射对照组和辐射补充0.5%SI组,喂养2周后,后两者给予4.0Gyγ射线照射。照射后7d处死小鼠,分离双侧股骨,观察骨髓细胞(BMC)形成细胞集落的能力。体外实验取正常组小鼠的股骨,制成BMC单细胞悬液,4.0Gyγ射线照射,测定BMC的细胞周期和3H-TdR掺入量。结果辐射使小鼠BMC的粒-巨细胞集落形成单位(CFU-GM)和成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)明显减少,辐射补充SI组BMC的CFU-GM〔(26.0±6.9)个/105BMC〕和CFU-F〔(23.4±8.6)个/106BMC〕明显高于辐射对照组〔相应为(17.3±4.4)个/105BMC和(15.6±4.9)个/106BMC)(P0.05)〕。体外实验结果表明,辐射使细胞周期的G0-G1期细胞数量明显增加,S和G2-M期细胞明显减少,细胞的3H-TdR掺入量明显减少;补充SI组与辐射对照组相比,G0-G1期细胞数量明显减少(P0.05),S和G2-M期的细胞数明显增加(P0.05),细胞的3H-TdR掺入量明显增加(P0.05)。结论大豆异黄酮对小鼠骨髓细胞辐射损伤有一定的防护作用。