恶性疟原虫FCC1／HN株185 kDa和8241kDa保护性抗原的超微结构定位

用LR White树脂低温包埋感染人恶性疟原虫FCC1／HN株的红细胞，用保护性单克隆抗体F6－D3和F6－C2并结合蛋白A－胶体金探针免疫标记恶性疟原虫红内期185kDa和82／41kDa蛋白。结果表明单克隆抗体F6－D3识别的185kDa蛋白定位于游离的和细胞内的裂殖子表面以及未成熟裂殖体的细胞质、质膜及带虫泡膜。而单克隆抗体F6－C2识别的81／41kDa蛋白则定位于未成熟裂殖体及成熟殖子的棒状体中。从超微结构上表明185kDa和82／41kDa保护性抗原分别为恶性疟原虫FCC1／HN株的裂殖子表面抗原和裂殖子棒状体抗原。     

恶性疟原虫AMA-1多态性及其在疫苗研制中的意义

恶性疟原虫裂殖子顶端膜抗原1(AMA-1)是一种主要的无性血液期疟疾疫苗候选抗 原。本文简述了AMA-1的生物学特性、结构及其在裂殖子入侵过程中的作用,对AMA-1的多态 性特点和分布规律以及近期在疟疾复合多价疫苗研制中的应用情况进行了综合分析。     

疟原虫裂殖子顶端膜抗原研究进展

疟原虫裂殖子顶端膜抗原１（Ａｐｉｃａｌｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ１,ＡＭＡ－１）存在于疟原虫裂殖子顶端复合体中,在裂殖体成熟破裂时,被迅速散布到裂殖子整个表面［１～３］。一旦裂殖子钻入红细胞形成环状体后,ＡＭＡ－１即不复检出,推测其与裂殖子入侵红...     

约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

对恶性疟原虫FCC1/HN分离株AMA-1序列变异的见解

恶性疟原虫FCC1/HN分离株 (FCC1/HN )是 1977年 6月由北京生物制品研究所在海南省昌江县采集并建立体外培养 ,现已被我国多个研究室体外传代培养、广泛使用。本文通过FCC1/HN裂殖子顶端膜抗原 (AMA 1)序列变异 ,讨论其存在的不同克隆问题。1　恶性疟原虫AMA 1第 1区域序列FCC1/HN的AMA 1第 1区域第 1种序列引自文献 [1](本文称为FCC1 )。用PCR 克隆测序法测序 :提取FCC1/HN染色体DNA ,PCR扩增AMA 1第 1区域的DNA片段 ,克隆入测序质粒 ,转化大肠埃希菌 ,挑选 3个有插入片段的阳性菌落进行测序。FCC1/HN分离株AMA 1第…     

恶性疟原虫红内期145／102kDa抗原的超微结构定位

用LR White低温包埋法及胶体金标记免疫电镜细胞化学技术对保护性单克隆抗体M26-32识别的体外培养的恶性疟原虫FCC1/HN株红内期145/102 kDa抗原进行超微结构定位研究。发现金颗粒主要定位在该株原虫红内期环状体、滋养体、裂殖体及裂殖子的细胞质中;一些金颗粒则定位于原虫表面的复合膜或散布在感染红细胞的细胞质中。表明145/102kDa抗原是恶性疟原虫FCC1/HN株红内期各无性发育阶段的共同细胞质抗原,其一部分可途经原虫表面的复合膜而被转运到感染红细胞的细胞质。     

恶性疟原虫海南株AMA-1、Pfs230基因的序列分析

目的　测定恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株裂殖子顶端膜抗原 1(AMA - 1)基因和Pfs2 30基因序列 ,并分别进行序列分析。方法　根据AMA - 1基因已知序列合成一对引物 ,用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增AMA - 1基因 ,构建真核表达重组质粒 pcDNA3 -AMA - 1。根据Pfs2 30基因已知序列合成七对引物 ,分 7段从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pfs2 30基因 ,并分别将扩增片段插入pMD - 18T测序载体。用双脱氧链末端终止法测定克隆的AMA -1、Pfs2 30基因序列 ,应用DNAstar软件辅助进行序列分析和同源性比较。结果　PCR扩增得到恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1和Pfs2 30基因片段。恶性疟原虫FCC1/HN株AMA - 1基因全长 186 9bp ,无内含子 ,编码 6 2 2个氨基酸残基 ,不存在氨基酸重复序列 ,相对分子量约 72 0 4 5kDa ;Pfs2 30基因全长 94 35bp ,无内含子 ,编码 314 4个氨基酸残基 ,分子量为36 4 36kDa。恶性疟原虫FCC1/HN株与FC2 7、7G8、CAMP、FCR3、Thai -Tn、3D7、FVO、KF1916、CMP1、HB3、K1和V1株AMA - 1的同源性在 94 9%以上 ,各株间有 5 3个位置相同的氨基酸残基替代位点 ,并且发生替代的氨基酸残基具二态性。FCC1/HN株分别比 3D7、7G8株Pfs2 30抗原多 9、10个氨基酸残基 ,三个分离株有 2 8个氨基酸替换     

恶性疟原虫AMA-1基因多态性研究进展

疟原虫裂殖子顶端膜抗原1(AMA-1)在裂殖子晚期破裂前大量合成抗原物质,在裂殖子黏附、入侵红细胞过程中起到重要作用。近期的研究主要通过对其进行分子生物学及免疫学进行的研究,表明AMA-1可作为疟原虫的重要疫苗候选抗原之一。本文介绍恶性疟原虫AMA-1的分子结构、基因多态性的研究进展,着重分析一些有重要功能的区域片段,基因家族的分类以及造成多态性的原因,为进一步对AMA-1基因多态性研究提供参考。     

约氏疟原虫红内期抗原定位的免疫电镜研究

应用LR White低温包埋法并结合胶体金标记免疫电镜细胞化学技术对保护性单克隆抗体M26-32识别的约氏疟原虫红内期抗原进行了超微结构定位。结果表明与单克隆抗体M26-32发生特异性免疫反应的抗原主要定位于早期滋养体、晚期滋养体、裂殖体和裂殖子的细胞质,为无性期不同发育阶段的共同抗原;在滋养体发育过程中该抗原有所增加,一部分可通过原虫的胞吐作用运出并定位于邻近虫体的感染红细胞细胞质。     

重组表达的恶性疟原虫顶端膜抗原1片段诱导小鼠保护性抗体应答

目的分析恶性疟原虫顶端膜抗原(apicalmembraneantigen1,AMA1)主要结构域在诱导保护性抗体应答中的作用,为正确选择疫苗应用片段提供依据。方法PCR扩增编码P.fAMA1相应结构域的基因序列,构建pET原核表达载体,用纯化重组蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA测定抗体效价,用免疫荧光和免疫印迹分析抗体的特异性,用小鼠免疫血清进行疟原虫体外生长抑制实验。结果成功表达并纯化了代表AMA1不同结构域的重组抗原片段,包括完整的胞外域片段E、结构域Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ,免疫小鼠后分别诱导出不同滴度的IgG抗体,免疫血清可特异地识别天然AMA1抗原,重组蛋白E和Ⅰ+Ⅱ免疫血清可明显抑制疟原虫的体外生长。结论AMA1胞外结构域的完整性是构成保护性抗体表位的重要基础,保护性抗体表位主要分布在结构域Ⅰ中。     

恶性疟原虫红内期裂殖子疫苗候选抗原PF83的变异分析

本文分别在基因水平和氨基酸水平对四株恶性疟原虫红内期裂殖子抗原PF83的变异进行了分析,以确定PF83是否有可能作为恶性疟原虫红内期裂殖子疫苗的抗原成分。     

疟原虫裂殖子抗原分析

疟疾是严重危害人类健康的疾病,疟疾疫苗是很有效的防治手段。研制疟疾疫苗,首先要对疟原虫抗原进行分析、鉴定。疟原虫裂殖子直接暴露于机体免疫系统,对裂殖子保护性抗原的分析、鉴定是疟疾疫苗研制的关键部分。随着免疫学和分子生物学技术的发展,已对许多疟原虫裂殖子保护性抗原进行了分子水平的研究,取得了可喜的进展,特别是对gp195、83KDa、75KDa等主要裂殖子表面抗原进行了核苷酸序列分析和免疫保护作用的研究,为疟疾疫苗的研制提供了基础。     

鼠伯氏疟原虫裂殖子、红内期全虫抗原主动免疫的保护作用

体内外疟原虫获得性免疫作用机理研究表明,保护性抗体并不影响细胞内原虫,而只影响裂殖子释放至血浆中的这一生活史阶段,并且免疫血清可凝集游离裂殖子,阻止裂殖子与悬浮红细胞受体相结合。因此,有必要对鼠伯氏疟原虫(Plasmodium berghei)裂殖子、红内期全虫可溶性抗原主动免疫的保护作用进行实验观察。我们于1990年12月～1991年3月进行了此工作,结果报告如下。一、材料与方法 (一)实验动物和疟原虫NIH小白鼠为实验动物,系本所饲养.引自中国预防医学科学院寄生虫病研究所的伯氏疟原虫ANKA株为实验原虫。 (二)裂殖子抗原感染血加3～5倍量磷酸缓冲     

体外培养恶性疟原虫培基中RESA的初步研究

培养恶性疟原虫培基的上清与不同稀释度的环状体感染红细胞表面抗原(RESA)抗体阳性的10份云南恶性疟患者血样共育,取上清进行RESA-IFA。结果显示,所有血样的RESA抗体滴度均有不同程度的下降.培基经加热处理后,并不影响其抑制活性。表明体外培养恶性疟原虫培基中存在可溶性RESA,且对热稳定。用不同程度的裂殖子可溶性抗原和O型红细胞影抗原与RESA抗体阳性的血样共育,再进行RESA-IFA。裂殖子抗原在浓度为3.1μg/ml时产生完全抑制。相反,O型红细胞影抗原在浓度比裂殖子抗原高约30倍时,才产生抑制。表明RESA源于裂殖子。     

夏氏疟原虫裂殖子表面蛋白和表面抗原的鉴定

裂殖子提取液已成功地作为猴和鼠的免疫原,另外,已发现与裂殖子表面组分起反应的抗体能阻碍诺氏疟原虫裂殖子侵入红细胞或在体外抑制恶性疟原虫红内期发育。这表明在抵抗疟原虫的保护性免疫中有裂殖子表面抗原的参与。作者为了解夏氏疟原虫裂殖子膜的抗原成分,通过碘标记技术,用~(125)I标记夏氏疟原虫活裂殖子表面膜蛋白及总的裂殖子蛋白,然后与正常或免疫鼠血清反应,反应前后均通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果:     

子孢子抗原的新结构

疟疾疫苗的研究已集中到感染裂殖体的红细胞或游离裂殖子的抗原上,这些抗原能导致产生阻断红细胞期原虫发育的抗体或者集中在子孢子的抗原上,这一抗原可引起产生阻止原虫进入肝细胞的抗体。最近的研究表明,与裂殖子和感染裂殖体红细胞表面分子量约为200,000的蛋白质起反应的抗体能阻断红细胞内原虫的裂体增殖。用DNA重组技术,对编码大的抗原性复杂的多肽基进行克隆虽是困难的,但已有人做到了这点。 Cochrane等(1980)用少量减毒的子孢子进行免疫,能得到对以后攻击的保护免疫力。这种免疫力,有种的而不是株的特异性,     

疟原虫抗原的分析

疟疾是一种严重危害人类健康的疾病。来自疟疾流行区及动物实验的结果都证明感染疟原虫后机体可以产生一定的保护性免疫,说明疟原虫有保护性抗原,并且有了制备疟原虫疫苗的可能性。为了控制疟疾制备有效的疫苗,很多科学家对多种疟原虫的抗原进行分析,筛选保护性抗原。并对抗原的结构、理化性质、合成、加工和代谢进行了研究。在疟疾生活史中,子孢子、配子体、裂殖子和感染红细胞都直接暴露于宿主的免疫系统,这是疟原虫生活史中的薄弱环节。因此,抗原分析工作也集中于子孢子、裂殖子、感染红细胞和配子上。近年来,由于单克隆抗体     

伯氏疟原虫抗原免疫鼠攻击感染后存活时间的观察

近年来,疟原虫疫苗研究进展较快。Mitchell等报导了诺氏疟原虫裂殖子加弗氏佐剂疫苗,具有保护恒河猴抵抗致死感染的免疫作用。恶性疟原虫裂殖子疫苗则能使免疫夜猴产生种特异性的获得性免疫力。而有关伯氏疟原虫的免疫保护作用研究尚少。本文旨在用伯氏疟原虫的不同抗原加不完全或完全佐剂免疫小白鼠,比较观察其受攻击感染后的存活情况,以了解伯氏疟的免疫保护作用。 材料与方法 NIH小白鼠为实验动物,新鲜裂殖子抗原(M_2)的制备按李氏静止通气悬浮培养法培养、收集和纯化。冰冻裂殖子抗原(FM_2)按上述裂殖子抗原方法收集纯化后,冰冻备用,     

用裂殖子免疫接种抗诺氏疟原虫感染试验

疟疾获得性免疫机理的研究指出,保护性抗体对细胞内原虫无作用,但可阻止裂殖子释放入血浆后的发展。有人观察到免疫血清可凝集游离的裂殖子,并且阻止其附着于易感宿主红细胞的接受点。这说明裂殖子抗原在疟疾特异性免疫中的重要作用。本文报告用裂殖子作疫苗对猴进行免疫接种抗诺氏疟原虫感染的应用。实验用猴为恒河猴(Macaca mulatta)及克拉猴(M.fascicularis)。诺氏疟原虫分W株和Nuri株(N株),又根据裂殖体感染细胞凝集(SICA)试验区分为不同的系别。免疫接     

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白3的限制序列多态性

恶性疟原虫裂殖子表面抗原的多态性曾在有关寄生虫多样性和种群动力学中进行过研究。裂殖子表面抗原(MSP)MSP1和MSP2已因其大小和序列的多态性而成为研究对象。为了利用另一独立的多态性标记物作种群研究,作者检测了裂殖子相关的分泌性多态抗原(MSP3)的多态程度。MSP3具有免疫学方面的重要性,通过对其多样性的分析,对它可能作为抗恶性疟的候选疫苗的价